CN107163140A - 一种羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，该方法包括以下步骤：抗原准备：选用人肌红蛋白抗原，注射前以弗氏佐剂进行乳化得抗原乳剂；第一次注射后14天进行第二次注射；第二次注射后12天进行第三次注射；第三次注射后10天进行第四次注射；第四次注射后8天进行第五次注射；第五次注射后8天进行第六次注射；第六次注射后8 天进行第七次注射；血清效价检测：注射后8‑10 天采血，分离血清，检测其双扩效价；以上每次免疫注射部位均在动物体上选取24个部位点进行注射。采用本发明方法，成本低，过程简单，不仅能稳定生产抗体，并且产生抗体速度快，抗体水平高，抗原用量小。使生物科技在动物抗体制备方面规模化生产成为可能。
Description
技术领域
本发明属于生物工程领域，具体涉及一种羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法。
背景技术
肌红蛋白(Myoglobin,Mb)是一种氧结合血红素蛋白，主要分布于心肌和骨骼肌组织。
抗血清为含有某一类具有特异免疫功能的抗体分子的血清，一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。一种抗原能否引起抗体生成反应，一方面取决于抗原分子表面有无抗原决定簇（Antigenic determinant），另一方面取决于机体的免疫状态，当具备以上两个条件后，抗体生成将遵循抗体生成的一般规律——初次反应和再次反应。抗原的种类繁多，包括天然的蛋白质抗原和细胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等，不同的抗原免疫动物具有不同的特殊性。一般完全抗原免疫动物需加用佐剂，尤其在使用可溶性抗原时，以期得到高效价的抗血清；合成性抗原和基因工程抗原等半抗原物质需先通过人工的方法与蛋白质载体连接后再与佐剂混合免疫动物，方可获得理想的免疫效果。使用佐剂后可增加抗原的免疫原性和延长抗原在机体内存留的时间，从而改变了抗原原有的免疫原性。
动物免疫系统是动物在种系发生和个体发育过程中逐渐进化和完善起来的，是机体执行免疫功能的组织机构，是产生免疫应答的物质基础。动物免疫系统是由免疫器官、免疫细胞和免疫分子组成的。
目前，将人肌红蛋白（MB）抗原与佐剂乳化后，按一定的程序免疫动物，可在动物血清中产生抗人的MB抗体。虽然目前的生产方法都可以产生一定量的抗体，但是抗体产生速度慢，水平较低，且抗原用量高。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种能提高抗体效价的羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法。
为达到上述目的，本发明是通过以下的技术方案来实现的。
一种羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，该方法包括以下步骤：
（1）抗原准备：选用人肌红蛋白抗原，注射前以弗氏佐剂进行乳化得抗原乳剂；
（2）第一次注射：使用上述抗原乳剂对羊进行注射；免疫注射部位均在动物体上选取22个部位点进行注射；
（3）第二次注射：第一次注射后14天进行第二次注射；
（4）第三次注射：第二次注射后12天进行第三次注射；
（5）第四次注射：第三次注射后10天进行第四次注射；
（6）第五次注射：第四次注射后8天进行第五次注射；
（7）第六次注射：第五次注射后8天进行第六次注射；
（8）第七次注射：第六次注射后8 天进行第七次注射；
（9）血清效价检测：最后一次注射后8-10 天采血，分离血清，检测其双扩效价。
作为本发明的进一步改进，第一次注射前乳化用的弗氏佐剂为完全弗氏佐剂，第二次、第三次、第四次、第五次、第六次、第七次注射前乳化用的弗氏佐剂为不完全弗氏佐剂。
作为本发明的进一步改进，所述22个部位点分别为：后足窝各1点、颌下淋巴结左右各1点、腋窝周围左右各2点、股淋巴结周围各3点、背部脊柱左右两侧各4点。
作为本发明的进一步改进，从第二次免疫开始至第七次免疫，注射部位均为20个部位点。
作为本发明的进一步改进，所述20个部位点分别为：颌下淋巴结左右各1点、腋窝周围左右各2点、股淋巴结周围各3点、背部脊柱左右两侧各4点。
有益效果：与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，成本低，过程简单，不仅能稳定生产抗体，并且产生抗体速度快，抗体水平高，抗原用量小。能克服各羊只之间的个体差异，抗体效价整齐划一，能为IVD行业提供稳定的的原料：使生物科技在动物抗体制备方面规模化生产成为可能。
具体实施方式
下面结合实例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1：一种羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，该方法包括以下步骤：
（1）抗原准备：选用人肌红蛋白抗原，注射前以弗氏佐剂进行乳化得抗原乳剂；
（2）第一次注射：取2.5mg 人肌红蛋白抗原，用PBS 或生理盐水稀释至5ml，再加入5ml完全弗氏佐剂制成抗原乳剂，使用此抗原乳剂对羊进行注射；第一次注射的剂量为每只羊0.5mg 抗原，每一针剂量平均分配。注射部位在动物体上选取22个部位点进行注射。22个部位点分别为：后足窝各1点、颌下淋巴结左右各1点、腋窝周围左右各2点、股淋巴结周围各3点、背部脊柱左右两侧各4点。
（3）第二次注射：第一次注射后14天进行第二次注射；取5.0mg 人肌红蛋白抗原，用PBS 或生理盐水稀释至5ml，再加入5ml 不完全弗氏佐剂制成抗原乳剂，使用此抗原乳剂对羊进行注射，第二次注射的剂量为每只羊1.0mg 抗原，每一针剂量平均分配。
（4）第三次注射：第二次注射后12天进行第三次注射；，取10.0mg 人肌红蛋白抗原，用PBS 或生理盐水稀释至5ml，再加入5ml 不完全弗氏佐剂制成抗原乳剂，使用此抗原乳剂对羊进行注射。
（5）第四次注射：第三次注射后10天进行第四次注射；取10.0mg 人肌红蛋白抗原，用PBS 或生理盐水稀释至5ml，再加入5ml 不完全弗氏佐剂制成抗原乳剂；使用此抗原乳剂对羊进行注射。
（6）第五次注射：第四次注射后8天进行第五次注射；取10.0mg 人肌红蛋白抗原，用PBS 或生理盐水稀释至5ml，再加入5ml 不完全弗氏佐剂制成抗原乳剂；使用此抗原乳剂对羊进行注射。
（7）第六次注射：第五次注射后8天进行第六次注射；取10.0mg 人肌红蛋白抗原，用PBS 或生理盐水稀释至5ml，再加入5ml 不完全弗氏佐剂制成抗原乳剂；使用此抗原乳剂对羊进行注射。
（8）第七次注射：第六次注射后8 天进行第七次注射；取10.0mg 人肌红蛋白抗原，用PBS 或生理盐水稀释至5ml，再加入5ml 不完全弗氏佐剂制成抗原乳剂；使用此抗原乳剂对羊进行注射。
以上从第二次免疫开始至第七次免疫，注射部位均为20个部位点，20个部位点分别为：颌下淋巴结左右各1点、腋窝周围左右各2点、股淋巴结周围各3点、背部脊柱左右两侧各4点。
（9）血清效价检测：最后一次注射后8-10 天采血，分离血清，检测其双扩效价；
第三次、第四次、第五次、第六次、第七次注射的剂量均为每只羊2.0mg 抗原，每一针剂量平均分配。
下面通过表1来进一步阐述的有益效果。
表1:采用本发明制备出羊抗人肌红蛋白抗血清产品效价表
| 免疫方法 | 产品 | 统计时间段 | 批次/数量 | 产品效价（双扩） |
| 传统方法 | MB | 2012年11月至2013年12月 | 2/10 | 1:8 |
| 本发明 | MB | 2013年12月至2015年2月 | 2/10 | 1:16 |
由表1可知，采用本发明可以使MB免疫效价提高2倍以上。
本发明按照上述实施例进行了说明，应当理解，上述实施例不以任何形式限定本发明，凡采用等同替换或等效变换方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，该方法包括以下步骤：
（1）抗原准备：选用人肌红蛋白抗原，注射前以弗氏佐剂进行乳化得抗原乳剂；
（2）第一次注射：使用上述抗原乳剂对羊进行注射；免疫注射部位均在动物体上选取22个部位点进行注射；
（3）第二次注射：第一次注射后14天进行第二次注射；
（4）第三次注射：第二次注射后12天进行第三次注射；
（5）第四次注射：第三次注射后10天进行第四次注射；
（6）第五次注射：第四次注射后8天进行第五次注射；
（7）第六次注射：第五次注射后8天进行第六次注射；
（8）第七次注射：第六次注射后8 天进行第七次注射；
（9）血清效价检测：最后一次注射后8-10 天采血，分离血清，检测其双扩效价。
2.根据权利要求1 所述的羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，其特征在于，所述第一次注射前乳化用的弗氏佐剂为完全弗氏佐剂，第二次、第三次、第四次、第五次、第六次、第七次注射前乳化用的弗氏佐剂为不完全弗氏佐剂。
3.根据权利要求1 所述的羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，其特征在于，所述22个部位点分别为：后足窝各1点、颌下淋巴结左右各1点、腋窝周围左右各2点、股淋巴结周围各3点、背部脊柱左右两侧各4点。
4.根据权利要求1 所述的羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，其特征在于，从第二次免疫开始至第七次免疫，注射部位均为20个部位点。
5.根据权利要求4 所述的羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，其特征在于，所述所述20个部位点分别为：颌下淋巴结左右各1点、腋窝周围左右各2点、股淋巴结周围各3点、背部脊柱左右两侧各4点。
6.根据权利要求1 所述的羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，其特征在于，所述血清效价检测的方法为双扩免疫法。
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