CN105061599A - 一种生产羊抗人胱抑素c蛋白抗血清的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，包括以下步骤：(1)抗原准备；(2)第一次注射；(3)第二次注射；(4)第三次注射；(5)第四次注射；(6)第五次注射；(7)第六次注射；(8)第七次注射；(9)第八次注射；(10)取血清；(11)血清效价检测：取上述抗血清，检测效价。相对于现有技术，本发明生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，成本低，过程简单，不仅能稳定生产抗体，并且产生抗体速度快，抗体水平高，抗原用量小。
Description
技术领域
本发明涉及一种生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，属于抗血清制备技术领域。
背景技术
小分子抗原指分子量在4KD-10KD之间，大于150KD为大分子抗原，胱抑素C(Cys-C)分子量较小为13KD，其表面面积相应较小，接触免疫细胞的机率少，且结合不牢固，其免疫原性不强；抗体产生还与分子结构有关，越复杂免疫原性越强，反之亦然；影响优质抗体产生还有很多因素。
目前，将人胱抑素C蛋白抗原与佐剂乳化后，按一定的程序免疫动物，可在动物血清中产生抗人的胱抑素C蛋白抗体。虽然目前的生产方法都可以产生一定量的抗体，但是抗体产生速度慢，水平较低，且抗原用量高。
发明内容
发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供了一种生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法。
技术方案：为实现上述目的，本发明提供了一种生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，包括以下步骤：
(1)抗原准备：选用人胱抑素C蛋白抗原、用无菌PBS和弗氏佐剂制成免疫原乳剂，备用；
(2)第一次注射：使用上述免疫原乳剂对羊进行注射，注射部位为左右足底2点、左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，总共12个注射点，平均注射；
(3)第二次注射：第一次注射后15天进行第二次注射，注射部位为左右腹股沟淋巴结内2点、左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计12个注射点，平均注射；
(4)第三次注射：第二次注射后9-11天进行第三次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；
(5)第四次注射：第三次注射后9-11天进行第四次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；
(6)第五次注射：第四次注射后9-11天进行第五次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；
(7)第六次注射：第五次注射后9-11天进行第六次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；
(8)第七次注射：第六次注射后9-11天进行第七次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；
(9)第八次注射：第七次注射后9-11天进行第八次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；
(10)取血清：第八次注射五天后对免疫的羊静脉采血，血液放入38.5℃水箱中1小时，待血清充分析出，经离心沉淀分离出抗血清，放至2～8℃冰箱保存；
(11)血清效价检测：取上述抗血清，检测效价。
作为优选，所述第一次注射前乳化用的弗氏佐剂为完全弗氏佐剂。
作为另一种优选，所述第二次、第三次、第四次、第五次、第六次、第七次和第八次注射前乳化用的弗氏佐剂为不完全弗氏佐剂。
作为另一种优选，所述第一次注射的剂量为每只羊0.25mg人胱抑素C蛋白抗原。
作为另一种优选，所述第二次注射的剂量为每只羊0.5mg人胱抑素C蛋白抗原。
作为另一种优选，所述第三次、第四次、第五次、第六次、第七次和第八次注射的剂量为每只羊1mg人胱抑素C蛋白抗原。
作为另一种优选，所述血清效价检测的方法为琼扩方法。
作为另一种优选，所述羊为土山羊。
本发明中羊可以选择土山羊、湖羊和杂交羊，优选土山羊；所述土山羊为长江三角洲白山羊；所述湖羊为太湖流域的一种产羔皮的多胎绵羊品种；所述杂交羊为波尔山羊为父本，土山羊为母本的杂交第一代羊。
本发明中弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分，可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体，引起淋巴结的肿大，加强对抗原的抗体反应。
此外，本发明通过特定抗原剂量、免疫时间、注射部位和注射次数，对羊进行免疫，最终得到较高的抗体水平。本发明重点是开始三次免疫中每只羊注射的抗原剂量成倍增加，以逐渐增强抗原对机体的刺激。
有益效果：相对于现有技术，本发明生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，成本低，过程简单，不仅能稳定生产抗体，并且产生抗体速度快，抗体水平高，抗原用量小。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作更进一步的说明。
实施例1
选择5只成年健康土山羊，进行下列步骤：
(1)材料准备：选用人胱抑素C蛋白抗原、无菌PBS、完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂备用；
(2)第一次注射：将1.25mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右足底2点、左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，总共12个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原0.25mg，平均注射；
(3)第二次注射：第一次注射后15天进行第二次注射，将2.5mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟淋巴结内2点、左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计12个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原0.5mg，平均注射；
(4)第三次注射：第二次注射后9天进行第三次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(5)第四次注射：第三次注射后9天进行第四次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(6)第五次注射：第四次注射后9天进行第五次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(7)第六次注射：第五次注射后9天进行第六次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(8)第七次注射：第六次注射后9天进行第七次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(9)第八次注射：第七次注射后9天进行第八次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(10)取血清：第八次注射五天后对免疫的羊静脉采血，血液放入38.5℃水箱中1小时，待血清充分析出，经离心沉淀分离出抗血清，放至2～8℃冰箱保存；
(11)血清效价检测：取上述抗血清，检测效价。
所述血清效价检测的方法为双扩免疫法。
实施例2
选择5只成年健康土山羊，进行下列步骤：
(1)材料准备：选用人胱抑素C蛋白抗原、无菌PBS、完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂备用；
(2)第一次注射：将1.25mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右足底2点、左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，总共12个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原0.25mg，平均注射；
(3)第二次注射：第一次注射后15天进行第二次注射，将2.5mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟淋巴结内2点、左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计12个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原0.5mg，平均注射；
(4)第三次注射：第二次注射后11天进行第三次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(5)第四次注射：第三次注射后11天进行第四次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(6)第五次注射：第四次注射后11天进行第五次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(7)第六次注射：第五次注射后11天进行第六次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(8)第七次注射：第六次注射后11天进行第七次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(9)第八次注射：第七次注射后11天进行第八次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(10)取血清：第八次注射五天后对免疫的羊静脉采血，血液放入38.5℃水箱中1小时，待血清充分析出，经离心沉淀分离出抗血清，放至2～8℃冰箱保存；
(11)血清效价检测：取上述抗血清，检测效价。
所述血清效价检测的方法为双扩免疫法。
实施例3
选择5只成年健康土山羊，进行下列步骤：
(1)材料准备：选用人胱抑素C蛋白抗原、无菌PBS、完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂备用；
(2)第一次注射：将1.25mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右足底2点、左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，总共12个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原0.25mg，平均注射；
(3)第二次注射：第一次注射后15天进行第二次注射，将2.5mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟淋巴结内2点、左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计12个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原0.5mg，平均注射；
(4)第三次注射：第二次注射后10天进行第三次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(5)第四次注射：第三次注射后10天进行第四次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(6)第五次注射：第四次注射后10天进行第五次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(7)第六次注射：第五次注射后10天进行第六次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(8)第七次注射：第六次注射后10天进行第七次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(9)第八次注射：第七次注射后10天进行第八次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(10)取血清：第八次注射五天后对免疫的羊静脉采血，血液放入38.5℃水箱中1小时，待血清充分析出，经离心沉淀分离出抗血清，放至2～8℃冰箱保存；
(11)血清效价检测：取上述抗血清，检测效价。
所述血清效价检测的方法为双扩免疫法。
实施例4
选择5只成年健康湖羊，其他所有方法同实施例3。
实施例5
选择5只成年健康杂交羊，其他所有方法同实施例3。
实施例6(对照组)
选择5只成年健康土山羊，进行下列步骤：
(1)材料准备：选用人胱抑素C蛋白抗原、无菌PBS、完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂备用；
(2)第一次注射：将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，总共10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(3)第二次注射：第一次注射后15天进行第二次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(4)第三次注射：第二次注射后10天进行第三次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(5)第四次注射：第三次注射后10天进行第四次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(6)第五次注射：第四次注射后10天进行第五次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(7)第六次注射：第五次注射后10天进行第六次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(8)第七次注射：第六次注射后10天进行第七次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(9)第八次注射：第七次注射后10天进行第八次注射，将5.0mg人胱抑素C蛋白抗原用无菌PBS稀释至10ml，再用10ml不完全弗氏佐剂制成免疫原乳剂，对羊进行注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，每只羊注射剂量为4ml含抗原1.0mg，平均注射；
(10)取血清：第八次注射五天后对免疫的羊静脉采血，血液放入38.5℃水箱中1小时，待血清充分析出，经离心沉淀分离出抗血清，放至2～8℃冰箱保存；
(11)血清效价检测：取上述抗血清，检测效价。
所述血清效价检测的方法为双扩免疫法。
实验例血清效价检测方法及结果
采用双扩免疫法对所得抗血清进行效价测定
1、配制琼脂：称取1.2g琼脂粉，加入100ml生理盐水中，水浴加热溶解后，以115℃灭菌10分钟；
灭菌结束后，取出琼脂溶液，冷却至70℃左右，用吸管吸取琼脂液，加入干净的平皿中，每块平皿16ml，待冷却后收起平皿，放于2～8℃冰箱中保存，可保存2周；
用前在平皿上用梅花打孔器打孔，中间孔加入抗原，外周孔加稀释后的待检血清。
2、样品血清稀释：取出96孔细胞培养板或血凝板，在每孔中加入25μl生理盐水或PBS；
在每行的第1列孔中加入25μl样品血清，从第1孔向后倍比稀释至第10孔。
3、加样检测：取出打好梅花孔的琼脂平皿，在外周孔中按顺序加入倍比稀释的样品血清，每孔约加20μl，以孔加满为宜；
在梅花孔的中央孔中加入抗原；将加好样的琼脂平皿放入湿盒中，置37℃12～24小时；
4、血清效价评定：
观察外周孔与中央孔沉淀线出现位置，计算样品血清的效价。
各组效价测定结果见表1
对照组按照本发明实施例6方法，其每次免疫的抗原剂量均为每只羊1.0mg，每次注射部位均为左右腹股沟、颈部两侧、背部皮下，不进行足底和淋巴结内注射；
实施例1组、2组、3组、4组和5组分别按照本发明实施例1、2、3、4和5组方法进行免疫注射。
按以上方法检测各组最终所得抗血清的效价，结果见表1.
表1各组所得抗血清的双扩效价
由上表1结果可得，对照组所得的抗血清，仅有一只效价可达1:8，其他的均为1:4；而实施例1、2、3组的效价均可以达到1:16以上；实施例5组的效价最低为8，有两只为16；实施例4组的效价最低为4，也有两只的效价达到8。
因此，本发明三个实施例组的效价都要优于对照组，而在三个实施例组中，实施例3组的效价最高，所以，用土山羊生产抗血清的效果最好，所得抗体水平在对照组的基础进一步大大提高，而每只羊使用的抗原量减少1.25mg(15.6％)。
Claims (8)
1.一种生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)抗原准备：选用人胱抑素C蛋白抗原、用无菌PBS和弗氏佐剂制成免疫原乳剂，备用；
(2)第一次注射：使用上述免疫原乳剂对羊进行注射，注射部位为左右足底2点、左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，总共12个注射点，平均注射；
(3)第二次注射：第一次注射后15天进行第二次注射，注射部位为左右腹股沟淋巴结内2点、左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计12个注射点，平均注射；
(4)第三次注射：第二次注射后9-11天进行第三次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；
(5)第四次注射：第三次注射后9-11天进行第四次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；
(6)第五次注射：第四次注射后9-11天进行第五次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；
(7)第六次注射：第五次注射后9-11天进行第六次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；
(8)第七次注射：第六次注射后9-11天进行第七次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；
(9)第八次注射：第七次注射后9-11天进行第八次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；
(10)取血清：第八次注射五天后对免疫的羊静脉采血，血液放入38.5℃水箱中1小时，待血清充分析出，经离心沉淀分离出抗血清，放至2～8℃冰箱保存；
(11)血清效价检测：取上述抗血清，检测效价。
2.根据权利要求1所述的生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，其特征在于，所述第一次注射前乳化用的弗氏佐剂为完全弗氏佐剂。
3.根据权利要求1所述的生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，其特征在于，所述第二次、第三次、第四次、第五次、第六次、第七次和第八次注射前乳化用的弗氏佐剂为不完全弗氏佐剂。
4.根据权利要求1所述的生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，其特征在于，所述第一次注射的剂量为每只羊0.25mg人胱抑素C蛋白抗原。
5.根据权利要求1所述的生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，其特征在于，所述第二次注射的剂量为每只羊0.5mg人胱抑素C蛋白抗原。
6.根据权利要求1所述的生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，其特征在于，所述第三次、第四次、第五次、第六次、第七次和第八次注射的剂量为每只羊1mg人胱抑素C蛋白抗原。
7.根据权利要求1所述的生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，其特征在于，所述血清效价检测的方法为双扩免疫法。
8.根据权利要求1所述的生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，其特征在于，所述羊为土山羊。
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