CN107155895B - 一种用于培养金花葵愈伤组织增殖的培养基及其培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体来说是一种用于培养金花葵愈伤组织增殖的培养基及其培养方法，其配方为：MS基础培养基、6‑苄氨基嘌呤0.5‑1.5mg/L、萘乙酸0.1‑1mg/L、2，4二氯苯氧乙酸0.5‑2mg/L、蔗糖30g/L和植物琼脂7‑8g/L。本发明的目的是提供一种用于培养金花葵愈伤组织增殖的培养基及其培养方法，专门适用于金花葵愈伤组织培养，愈伤组织培养基的筛选为下一步进行大规模的悬浮细胞培养奠定基础。

Description

一种用于培养金花葵愈伤组织增殖的培养基及其培养方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，具体来说是一种用于培养金花葵愈伤组织增殖的培养基及其培养方法。
背景技术
金花葵(hibiseu manihot L.)，又名菜芙蓉，是一种生长在深山崖隙间的野生濒危稀有花卉。明朝宪宗成化年间顺德府志记载：顺德府有特产植物金花葵。因国内现代文献资料均无从查找，其在1984年全国农业资源普查时被确认已灭绝。然而2003年8月，全国各地陆续报道发现金花葵的踪迹，经多位专家确认，金花葵是野芙蓉三个种群中的一个种群，具有很高的经济价值。
金花葵植株中富含金丝桃苷、槲皮素-3-洋槐糖苷、槲皮素-3-葡萄糖苷、槲皮素和杨梅素5种活性黄酮单体，是植物界中天然黄酮含量较高的品种。其总黄酮含量比目前黄酮生产广为应用的原料银杏、大豆等高数十倍。金花葵总黄酮具有清热、利湿、消炎、解毒、镇痛等功效，对人体急性心肌缺血、脑缺氧损伤具有保护作用；金花葵总黄酮可以降低急性心肌梗塞的梗塞面积，对心肌损伤有一定保护作用。愈伤组织增殖培养基的筛选为下一步进行大规模的悬浮细胞培养奠定基础。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于培养金花葵愈伤组织增殖的培养基及其培养方法，专门适用于金花葵愈伤组织增殖培养。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种用于培养金花葵愈伤组织的增殖培养基，其配方为：MS基础培养基、6-苄氨基嘌呤0.5-1.5mg/L、萘乙酸0.1-1mg/L、2，4二氯苯氧乙酸0.5-2mg/L、蔗糖30g/L和植物琼脂7-8g/L。
进一步的，培养基的pH5.8-6.0。
本发明还提供一种利用上述培养基增殖培养金花葵愈伤组织的方法，步骤包括：
(1)将未开放的花蕾在洗衣粉水中漂洗10-15min后，在流水下冲洗20-30min，在超净工作台上用70％-75％的无水乙醇消毒30-45s，然后用2％NaClO消毒8-10min,再用无菌水冲洗5-6次，备用；
(2)初代愈伤组织诱导：将消毒好的花蕾用镊子和刀将花瓣分离出来，接种于添加6-苄基腺嘌呤0.5mg/L+萘乙酸0.5mg/L+2，4二氯苯氧乙酸1.5mg/L+30g/L蔗糖+8g/L琼脂的MS培养基中，光强1500～2000Lx，每日光照时数12～14h，25±2℃培养20d，诱导出初代愈伤组织；
(3)继代培养：将培养20d的初代愈伤组织切成大小为0.25g的小块，接入MS基础培养基、6-苄氨基嘌呤0.5-1.5mg/L、萘乙酸0.1-1mg/L、2，4二氯苯氧乙酸0.5-2mg/L、蔗糖30g/L和植物琼脂7-8g/L中培养15d。
本发明中，MS培养基作为本技术方案的基本培养基，为本领域技术人员的公知常识，所含有的组分及含量如表1：
表1 MS培养基的配方
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种增殖培养金花葵愈伤组织的方法，具体按照下列步骤进行：
A、将未开放的花蕾在洗衣粉水中漂洗10-15min后，在流水下冲洗20-30min，在超净工作台上用70％-75％的无水乙醇消毒30-45s，然后用2％NaClO消毒8-10min,再用无菌水冲洗5-6次，备用；
B、初代愈伤组织诱导：将消毒好的花蕾用镊子和刀将花瓣分离出来，接种于添加6-苄基腺嘌呤0.5mg/L+萘乙酸0.5mg/L+2，4二氯苯氧乙酸1.5mg/L的MS培养基中，光强1500～2000Lx，每日光照时数12～14h，25±2℃培养20d，诱导出初代愈伤组织。
C、将培养20d的初代愈伤组织切成大小平均为0.25g的小块，接入表2正交旋转组合试验设计的培养基中进行继代培养，每个处理接种5瓶，每瓶4块，每个处理总计20块，总质量为5g，即初始鲜重为5g。接种15d以后，将愈伤组织取出进行鲜重的称量即为最终鲜重，以净增鲜重(即最终鲜重-初始鲜重)为指标进行培养基的筛选。
表1正交旋转组合试验设计方案及结果
通过上述试验可以确定，用于培养金花葵愈伤组织增殖的培养基的配方为：MS基础培养基、6-苄氨基嘌呤0.5-1.5mg/L、萘乙酸0.1-1mg/L、2，4二氯苯氧乙酸0.5-2mg/L、蔗糖30g/L和植物琼脂7-8g/L，培养基的pH5.8-6.0。
实施例2
一种用于培养金花葵愈伤组织的增殖培养基，其配方为：MS基础培养基、6-苄氨基嘌呤1.3mg/L、萘乙酸0.82mg/L、2，4二氯苯氧乙酸1.7mg/L、蔗糖30g/L和植物琼脂7g/L，培养基的pH5.8。
利用该培养基增殖培养金花葵愈伤组织的方法，具体按照下列步骤进行：
(1)将未开放的花蕾在洗衣粉水中漂洗10min后，在流水下冲洗30min，在超净工作台上用75％的无水乙醇消毒30s，然后用2％NaClO消毒10min,再用无菌水冲洗5次，备用；
(2)初代愈伤组织诱导：将消毒好的花蕾用镊子和刀将花瓣分离出来，接种于添加6-苄基腺嘌呤1.3mg/L+萘乙酸0.82mg/L+2，4二氯苯氧乙酸1.7mg/L+30g/L蔗糖+8g/L琼脂的MS培养基中，光强1500Lx，每日光照时数14h，25±2℃培养20d，诱导出初代愈伤组织；
(3)继代培养：将培养20d的初代愈伤组织切成大小为0.25g的小块，接入MS基础培养基、6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L、2，4二氯苯氧乙酸0.5mg/L、蔗糖30g/L和植物琼脂7g/L中培养15d，结果净增鲜重为15.59g。
实施例3
一种用于培养金花葵愈伤组织的增殖培养基，其配方为：MS基础培养基、6-苄氨基嘌呤1.0mg/L、萘乙酸0.55mg/L、2，4二氯苯氧乙酸0.5mg/L、蔗糖30g/L和植物琼脂8g/L，培养基的pH5.8。
一种利用上述培养基增殖培养金花葵愈伤组织的方法，步骤包括：
(1)将未开放的花蕾在洗衣粉水中漂洗15min后，在流水下冲洗20min，在超净工作台上用75％的无水乙醇消毒45s，然后用2％NaClO消毒8min,再用无菌水冲洗6次，备用；
(2)初代愈伤组织诱导：将消毒好的花蕾用镊子和刀将花瓣分离出来，接种于添加6-苄基腺嘌呤0.5mg/L+萘乙酸0.5mg/L+2，4二氯苯氧乙酸1.5mg/L+30g/L蔗糖+8g/L琼脂的MS培养基中，光强2000Lx，每日光照时数12h，27℃培养20d，诱导出初代愈伤组织；
(3)继代培养：将培养20d的初代愈伤组织切成大小为0.25g的小块，接入MS基础培养基、6-苄氨基嘌呤1.0mg/L、萘乙酸0.55mg/L、2，4二氯苯氧乙酸0.5mg/L、蔗糖30g/L和植物琼脂8g/L中培养15d得到愈伤组织，结果净增鲜重为36.84g。
实施例4
一种用于培养金花葵愈伤组织的增殖培养基，其配方为：MS基础培养基、6-苄氨基嘌呤0.7mg/L、萘乙酸0.28mg/L、2，4二氯苯氧乙酸0.8mg/L、蔗糖30g/L和植物琼脂7.5g/L,培养基的pH5.9。
一种利用上述培养基增殖培养金花葵愈伤组织的方法，步骤包括：
(1)将未开放的花蕾在洗衣粉水中漂洗12min后，在流水下冲洗25min，在超净工作台上用73％的无水乙醇消毒40s，然后用2％NaClO消毒9min,再用无菌水冲洗6次，备用；
(2)初代愈伤组织诱导：将消毒好的花蕾用镊子和刀将花瓣分离出来，接种于添加6-苄基腺嘌呤0.5mg/L+萘乙酸0.5mg/L+2，4二氯苯氧乙酸1.5mg/L+30g/L蔗糖+8g/L琼脂的MS培养基中，光强1750Lx，每日光照时数13h，23℃培养20天，诱导出初代愈伤组织；
(3)继代培养：将培养20d的初代愈伤组织切成大小为0.25g的小块，接入MS基础培养基、6-苄氨基嘌呤0.7mg/L、萘乙酸0.28mg/L、2，4二氯苯氧乙酸0.8mg/L、蔗糖30g/L和植物琼脂7.5g/L中培养15d，得到愈伤组织，结果净增鲜重为24.78g。

Claims (2)

1.一种培育金花葵愈伤组织的方法，其特征在于，所述培养方法步骤为：
(1)将未开放的花蕾在洗衣粉水中漂洗10-15min后，在流水下冲洗20-30min，在超净工作台上用70％-75％的无水乙醇消毒30-45s，然后用2％NaClO消毒8-10min,再用无菌水冲洗5-6次，备用；
(2)初代愈伤组织诱导：将消毒好的花蕾用镊子和刀将花瓣分离出来，接种于添加6-苄基腺嘌呤0.5mg/L+萘乙酸0.5mg/L+2，4二氯苯氧乙酸1.5mg/L+30g/L蔗糖+8g/L琼脂的MS培养基中，光强1500～2000Lx，每日光照时数12～14h，25±2℃培养20d，诱导出初代愈伤组织；
(3)继代培养：将培养20d的初代愈伤组织切成大小为0.25g的小块，接入MS基础培养基、6-苄氨基嘌呤0.5-1.5mg/L、萘乙酸0.1-1mg/L、2，4二氯苯氧乙酸0.5-2mg/L、蔗糖30g/L和植物琼脂7-8g/L中培养15d。
2.根据权利要求1所述培育金花葵愈伤组织的方法，其特征在于，培养基的pH5.8-6.0。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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外源激素配比对药用植物锁阳愈伤组织诱导的影响;郎多勇等;《时珍国医国药》;20121231;第23卷(第10期);第2463-2465页
黄秋葵愈伤组织培养及再生体系建立的研究;夏鸿飞等;《辽宁师范大学学报（自然科学版）》;20130630;第36卷(第2期);第255-259页

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