CN107132356B - 一种检测膀胱癌的胶体金试纸卡及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种检测膀胱癌的胶体金试纸卡及其制备方法，该试纸卡包括底板及依次粘贴在底板上的样品垫、胶体金垫、层析垫、吸样垫；所述层析垫的两端分别搭接有胶体金垫、吸样垫，所述胶体金垫的另一端插入样品垫中；所述胶体金垫上包被有由胶体金与兔抗APOA1多克隆抗体结合而成的金标抗体复合物；所述层析垫上包被有抗APOA1单克隆抗体和抗APOA1多克隆抗体的二抗。本发明可以实现对膀胱癌的检测，快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好，而且结果判断直观可靠、容易被基层单位人员掌握，同时也方便病人对病情的自我监测，减少病人有创性检查。为膀胱癌的诊断提供可靠的依据，有望成为诊断膀胱癌的新方法。

Description

一种检测膀胱癌的胶体金试纸卡及其制备方法
技术领域
本发明属生物技术领域，涉及一种检测膀胱癌的胶体金试纸卡及其制备方法。
背景技术
目前膀胱癌的诊断，尤其是治疗后复发的监测，主要以尿脱落细胞检查和膀胱镜活检为主，但尿脱落细胞检查受影响因素多，阳性率低；膀胱镜虽然是最可靠的诊断方法，但属于侵入性操作，有一定的创伤和并发症，不易被病人接受。APOA1蛋白(Apolipoprotein1)是近年来发现的新膀胱癌标记物。研究表明APOA1蛋白作为膀胱癌的诊断指标，灵敏度为94.6％，特异度为92.0％。目前，尿液中APOA1蛋白的临床检测主要采用ELISA方法检测，ELISA试剂盒为不同厂家生产，缺乏标准化；且步骤繁琐，结果易受操作者技术水平等影响；操作者需具备一定的分子生物学技能，不易在基层医院展开；且必须应用酶标仪等特殊仪器，因此病人无法在家中对自己的病情进行监测。
纳米胶体金免疫层析方法(Gold immunochromatography assay,GICA)是20世纪90年代兴起的一种将胶体金免疫技术和色谱层析技术相结合的固相膜免疫分析方法。其原理是将特异的抗原或抗体先固定于硝酸纤维膜的某一区带，该干燥的硝酸纤维膜一端浸入样品(如尿液、血液、唾液等)后，由于毛细管作用，样品会带着胶金垫上的金标抗体或抗原沿着硝酸纤维膜向前移动，当移动到固定有抗原或抗体的区域时，体系中发生抗原与抗体特异性结合反应，这一反应使胶体金在这一带聚集而显示出紫红色，从而实现特异性的免疫诊断。
发明内容
本发明目的是提供一种检测膀胱癌的胶体金试纸卡及其制备方法。本发明检测膀胱癌的胶体金试纸卡检测周期短、流程简单、适合自测、结果准确。
本发明技术方案如下
一种检测膀胱癌的胶体金试纸卡，包括底板及依次粘贴在底板上的样品垫、胶体金垫、层析垫、吸样垫；所述层析垫的两端分别搭接有胶体金垫、吸样垫，所述胶体金垫的另一端插入样品垫中；所述胶体金垫上包被有由胶体金与兔抗APOA1多克隆抗体结合而成的金标抗体复合物，所述胶体金垫的材料可为玻璃纤维膜或聚酯膜；所述层析垫上包被有抗APOA1单克隆抗体(检测用)和抗APOA1多克隆抗体的二抗(质控用)，所述层析垫的材料可为硝酸纤维素膜。
进一步地，所述胶体金垫上包被的所述金标抗体复合物的浓度为10-50ug/ml，优选30ug/ml。可将所述金标抗体复合物喷涂于所述胶体金垫上制成。
进一步地，所述胶体金垫的宽度优选为1cm。
进一步地，所述层析垫上包被的抗APOA1的单克隆抗体(检测用)和抗APOA1多克隆抗体的二抗(质控用)的浓度为分别50-500ug/ml和0.5-2ug/ml；优选分别为100ug/ml和1mg/ml。
进一步地，所述层析垫上包被的抗APOA1的单克隆抗体(检测用)和抗APOA1多克隆抗体的二抗(质控用)分别形成相互平行且与所述试纸卡长轴方向垂直的检测线和质控线；进一步地，所述检测线设置在更靠近所述样品垫的一侧，即所述检测线位于所述样品垫和所述质控线之间。
进一步地，所述检测线采用的是小鼠抗APOA1单克隆抗体；和/或，所述质控线是羊抗APOA1多克隆抗体的二抗。
进一步地，所述检测线检测的阈值为尿中APOA1的浓度。
所述质控线显色，表示试纸卡有效，反之表示试纸卡无效；所述检测线和质控线均显色，表示检测结果阳性，即受试者新发或复发膀胱癌；所述检测线不显色，而所述质控线显色，表示表示检测结果阴性。
进一步地，所述底板的材料可为PVC(聚氯乙烯)。
进一步地，所述样品垫的材料可为吸水性玻璃纤维。
进一步地，所述吸样垫的材料可为吸水纸或吸水性玻璃纤维。
将所述样品垫、胶体金垫、层析膜、吸样垫依次粘贴至底板上即可组装成试纸卡。
本发明所述检测膀胱癌的胶体金试纸卡的诊断标本为尿液。
本发明还包括含有上述检测膀胱癌的胶体金试纸卡的试剂盒。进一步地，所述试剂盒中还可包括比色卡、胶体金定量读数仪等中的一种或几种。
本发明还提供上述检测膀胱癌的胶体金试纸卡的制备方法，包括
1)胶体金垫的制备
a.金垫的预处理
将金垫用金垫缓冲液浸泡(至少10-15分钟)后，烘干，备用；
所述金垫缓冲液：硼酸盐缓冲液+2％BSA+3％蔗糖+0.6M NaCl+0.2％Tween 20；
所述硼酸盐缓冲液:0.1Mol/L的H3BO4+0.0025Mol/L的Na2B4O7·10H2O，pH＝9；
所述2％BSA用PBS配制，BSA即牛血清白蛋白。
b.胶体金溶液的制备
向HAuCl4中加入柠檬酸三钠，煮沸，冷却至室温后加入碳酸钾制成胶体金溶液；
进一步地，所述胶体金溶液的粒径为30-40nm；
进一步地，事先对容器进行硅化处理，即将容器浸泡于5％二氯甲基硅烷的氯仿溶液中10分钟，再用三蒸水进行冲洗，放入烘箱烘干。
具体地，胶体金溶液的制备方法包括：取100ml的0.01％的HAuCl4水溶液，煮沸(至少10分钟)，搅拌下加入一定量的1％柠檬酸三钠水溶液；继续加热煮沸(至少15min)，至颜色由淡黄色转变成灰色、并继续转变成黑色，最后稳定呈现红色，冷却至室温后用水补足至原体积(100ml)，加入2ml碳酸钾溶液(浓度1％,pH＝8.2)。
c.边搅拌胶体金溶液边向其中加入(逐滴快速滴加)兔抗APOA1多克隆抗体，混匀后加入NaCl溶液(例如浓度10％NaCl溶液)，静置(例如2小时)后向其中加入(逐滴)洗液I搅拌(至少15分钟)；离心(例如4℃条件下12000rpm离心30分钟)，弃上清；加入洗液II，离心；弃上清；再加入洗液II，离心，弃上清；用步骤a所述金垫缓冲液进行重悬，制得的金标抗体复合物；可于低温(例如4℃)、避光保存，备用；
所述洗液I：1％BSA+0.1％PEG；
所述洗液II：硼酸盐缓冲液+1％BSA；
所述硼酸盐缓冲液:0.1Mol/L的H3BO4+0.0025Mol/L的Na2B4O7·10H2O，pH＝9；
将制得的金标抗体复合物加至预处理后的金垫上，干燥，制得胶体金垫；
2)层析垫的制备
将抗APOA1单克隆抗体和抗APOA1多克隆抗体的二抗分别配制成适当浓度的溶液后包被至层析垫上，干燥(避光)；
3)试纸卡的组装：将所述样品垫、胶体金垫、层析膜、吸样垫依次粘贴至底板上；所述层析垫的两端分别搭接有胶体金垫、吸样垫，所述胶体金垫的另一端插入样品垫中。
进一步地，将所述样品垫事先进行预处理，即将样品垫用样品缓冲液浸泡(至少10-15分钟)后，烘干，备用；
所述样品缓冲液：上述金垫缓冲液+1％PEG(聚乙二醇)。
有益效果
本发明可以实现对膀胱癌的检测，具有快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好、操作简便、无需任何仪器设备的特点，而且结果判断直观可靠、容易被基层单位人员掌握，同时也方便病人对病情的自我监测，减少病人有创性检查。为膀胱癌的诊断提供可靠的依据，有望成为诊断膀胱癌的新方法。
附图说明
图1：实施例1检测膀胱癌的胶体金试纸卡的结构示意图；
图2：实施例1检测膀胱癌的胶体金试纸卡的纵切面结构示意图；
图3：实施例1检测膀胱癌的胶体金试纸卡的检测结果阳性示意图；
图4：实施例1检测膀胱癌的胶体金试纸卡的检测结果阴性示意图；
图5：实施例1检测膀胱癌的胶体金试纸卡的失效示意图；
图6：对比例11检测膀胱癌的胶体金试纸卡的纵切面结构示意图；
图7：对比例9检测结果示意图；
图中：底板1、样品垫2、胶体金垫3、层析垫(硝酸纤维膜)4、吸样垫(吸水纸)5、检测线6、质控线7。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
其中，兔抗APOA1多克隆抗体Anti-Apolipoprotein A 1抗体(ab64308)abcam；小鼠抗APOA1单克隆抗体Anti-Apolipoprotein A 1抗体[1409](ab20918)abcam。
实施例1
1.检测膀胱癌的胶体金试纸卡的制备
如图1和图2所示，2，该试纸卡包括底板1、样品垫2、胶体金垫3、层析垫(硝酸纤维膜)4、吸样垫(吸水纸或吸水板)5。所述底板1是PVC材质的底板。样品垫2由吸水性玻璃纤维制成。胶体金垫3是将金标抗体复合物喷涂于玻璃纤维膜制成，其宽度为1cm，喷涂浓度为30ug/ml。层析垫(硝酸纤维膜)4上距离胶体金垫0.5cm处，喷涂有抗APOA1单克隆抗体构成的检测区6(形成检测线)，喷涂浓度为100ug/ml。距离检测区(检测线)6靠近吸样垫的一侧1cm处，喷涂有抗APOA1多克隆抗体的二抗构成的质控区7(形成质控线)，喷涂浓度为1mg/ml。将上述样品垫2、胶体金垫3、层析垫(硝酸纤维膜)4、吸样垫(吸水纸)5依次相互部分叠加组装在底板1上即可制成检测膀胱癌的胶体金试纸卡；其中，所述层析垫4的两端分别搭接有胶体金垫3、吸样垫5，所述胶体金垫3的另一端插入样品垫2中。
2.检测膀胱癌的胶体金试纸卡的具体使用方法
取一到两滴的待检尿液样本加入到样品垫，3-5分钟后观察结果。
3.检测结果的判断
阳性结果：如图3所示，检测区6出现紫红色条带，质控区7也出现紫红色条带，则表明此患者出现新发或复发膀胱癌。
阴性结果：如图4所示，检测区6未出现紫红色条带，质控区7出现紫红色条带。
无效结果：如图5所示，检测区6未出现紫红色条带，质控区7未出现紫红色条带。
4.检测原理
以膀胱癌标志物APOA1为被检测物，利用抗原抗体反应原理，以及胶体金免疫层析技术探测人体尿液中存在的APOA1蛋白。当将被测样品尿液加入试纸条的加样一端后，尿液会在吸水性材料的毛细管作用下在试纸条上移动，分别经过胶体金垫、检测区。经过胶体金垫时，金标抗体会溶解与尿液中存在的APOA1抗原结合成金标抗原抗体复合物。在检测区中存在两处用抗体处理过区域，分别为检测线和控制线。在尿液完全经过检测区后，如果检测线显色，控制线显色，则证明被测尿液中含有APOA1蛋白，进而可以判断检膀胱癌测结果为阳性；如果检测线不显色，控制线显色，则证明被测尿液中不含有APOA1蛋白，进而可以判断膀胱癌检测结果为阴性；如果控制线没有显色，则证明试纸失效，本次测试没有可信的结果。
实施例2
检测膀胱癌的胶体金试纸卡的制备方法，包括：
1)胶体金垫的制备
a.金垫的预处理
将金垫(材料为玻璃纤维膜或聚酯膜)剪成1cm*12cm大小，用金垫缓冲液浸泡10-15分钟后，烘干，备用；
所述金垫缓冲液：硼酸盐缓冲液+2％BSA+3％蔗糖+0.6M NaCl+0.2％Tween 20；
所述硼酸盐缓冲液:0.1Mol/L的H3BO4+0.0025Mol/L的Na2B4O7·10H2O，pH＝9；
所述2％BSA用PBS配制，BSA即牛血清白蛋白。
研究发现，添加蔗糖能够有效地减缓金标抗体滞留问题。
b.胶体金溶液的制备
事先对容器进行硅化处理，即将容器浸泡于5％二氯甲基硅烷的氯仿溶液中10分钟，再用三蒸水进行冲洗，放入烘箱烘干。
将HAuCl4加水配置成0.01％溶液，取100ml加热至沸腾状态保持10分钟，搅动同时加入一定量的1％柠檬酸钠水溶液。继续加热并沸腾15min，此时颜色由淡黄色转变成灰色，并继续转变成黑色，最后稳定呈现红色。冷却至室温后用水恢复原体积(100ml)。加入2ml碳酸钾溶液(浓度1％,pH＝8.2)，制成胶体金溶液。所述胶体金溶液的粒径为30-40nm；
c.边搅拌胶体金溶液边向其中逐滴快速滴加兔抗APOA1多克隆抗体，混匀后加入0.05ml浓度10％的NaCl溶液，静置2小时后向其中逐滴加入洗液I搅拌15分钟；离心(4℃条件下12000rpm离心30分钟，下同)，弃上清；加入洗液II，离心；弃上清；再加入洗液II，离心，弃上清；用步骤a所述金垫缓冲液进行重悬，制得的金标抗体复合物；可于低温(4℃)、避光保存，备用；
所述洗液I：1％BSA+0.1％PEG；PEG即聚乙二醇；
所述洗液II：硼酸盐缓冲液+1％BSA；
所述硼酸盐缓冲液:0.1Mol/L的H3BO4+0.0025Mol/L的Na2B4O7·10H2O，pH＝9；
吸取制得的金标抗体复合物200ul滴加至预处理后的金垫上，干燥，制得胶体金垫；
2)层析垫的制备
将小鼠抗APOA1单克隆抗体和羊抗APOA1多克隆抗体的二抗分别配制成浓度100ug/ml、1mg/ml溶液后包被至层析垫上，干燥(避光)，分别作为检测线和质控线；
3)试纸卡的组装：
将所述样品垫事先进行预处理，即将样品垫用样品缓冲液浸泡10-15分钟后，烘干，备用；所述样品缓冲液：上述金垫缓冲液+1％PEG(聚乙二醇)。
将经预处理的所述样品垫、胶体金垫、层析膜(硝酸纤维膜)、吸样垫依次粘贴至底板上；所述层析垫的两端分别搭接有胶体金垫、吸样垫，所述胶体金垫的另一端插入样品垫中。
实施例3
检测膀胱癌的胶体金试纸卡的制备方法，与实施例2的区别仅在于，将检测线和质控线替换为以点形式呈现，具体实现方法如下：
a.分别将质控线抗体(羊抗APOA1多克隆抗体的二抗)以及检测线抗体(小鼠抗APOA1单克隆抗体)配置成浓度1mg/ml、100ug/ml；
b.将抗体液以移液枪吸取0.3ul，滴加到NC膜(硝酸纤维膜)上
c.放置使其干燥，避光干燥4℃保存。
对比例1
检测膀胱癌的胶体金试纸卡的制备方法，与实施例2的区别仅在于，金标抗体浓度分别为0、5、15、25ug/ml。结果表明：金标抗体浓度为5ug/ml的变色，而为15ug/ml是没有变色中最低浓度者，因此15ug/ml的标记浓度为最优浓度。
对比例2
检测膀胱癌的胶体金试纸卡的制备方法，与实施例2的区别仅在于，预处理金垫所用的缓冲液为：1％BSA+0.1％Tween-20以含有0.05％Tween-20的PBS缓冲液溶解后加入1％甘油；
结果表明：金标抗体滞留严重。
对比例3
检测膀胱癌的胶体金试纸卡的制备方法，与实施例2的区别仅在于，金垫不进行预处理。
结果表明：金标抗体滞留严重。
对比例4
检测膀胱癌的胶体金试纸卡的制备方法，与实施例2的区别仅在于，
检测线所用抗体标记(兔抗人APOA1多抗)的浓度分别为500ug/ml、100ug/ml、50ug/ml；
质控线所用抗体标记(羊抗鼠IgG)的浓度分别为0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml；
结果表明：检测线抗体标记使用100ug/ml浓度，质控线抗体标记使用1mg/ml浓度为最佳。
对比例5
检测膀胱癌的胶体金试纸卡的制备方法，与实施例2的区别仅在于，胶体金垫的制备步骤c中所用的硼酸盐缓冲液浓度为0.005Mol/L，pH＝9。
结果表明：与实施例2相比，胶体金颗粒滞留严重。
对比例6
检测膀胱癌的胶体金试纸卡的制备方法，与实施例2的区别仅在于，胶体金垫的制备步骤c中NaCl溶液的加入量为0.1ml。
结果表明：与实施例2相比，胶体金颗粒滞留严重。
对比例7
检测膀胱癌的胶体金试纸卡的制备方法，与实施例2的区别仅在于，胶体金垫的制备步骤c中不对胶体金溶液进行搅拌且抗体加入速度过快。
结果表明：本方法会导致胶体金标记成功比例下降，容易形成胶体金聚集。
对比例8
检测膀胱癌的胶体金试纸卡的制备方法，与实施例2的区别仅在于，胶体金垫的制备步骤c中向胶体金溶液中加完抗体并静置后，再进行如下操作：
加10％BSA使终浓度达到0.5％，搅拌15分钟；2)加5％PEG-20000始终浓度达到0.1％，搅拌15分钟；9000rpm，4℃条件下离心1小时；弃去上清，加入硼酸盐缓冲液重复离心两次；用硼酸缓冲液重悬，4℃、避光保存。
结果表明：改变了离心时间以及洗液成分后通过测定光吸收值确定实施例2中的条件下更能有效地进行抗体与胶体金之间的标记。
对比例9
检测膀胱癌的胶体金试纸卡的制备方法，与实施例3的区别仅在于，层析垫的制备过程中，小鼠抗APOA1单克隆抗体的浓度分别为500ug/ml、100ug/ml以及50ug/ml。
结果表明：浓度100ug/ml的检测准确度最高，结果见图7(其中TestLine指检测线)。
对比例10
检测膀胱癌的胶体金试纸卡的制备方法，与实施例2的区别仅在于，层析垫的制备过程中，羊抗APOA1多克隆抗体的二抗的浓度分别为0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml。
结果表明：浓度1mg/ml的检测准确度最高。
对比例11
检测膀胱癌的胶体金试纸卡的制备方法，与实施例2的区别仅在于，试纸卡组装方式不同。本对比例采用传统组装方式，如图6所示，以底板1为最底层，在其中间段放置(粘附)层析膜(硝酸纤维膜、NC膜)4，在NC膜4右侧上方搭接吸样垫(吸水纸或吸水板)5，在NC膜4左侧先以胶体金垫3覆盖部分NC膜4再将样品垫2覆盖部分胶体金垫3；即将经预处理的所述样品垫、胶体金垫、层析膜、吸样垫依次粘贴至底板上；所述层析垫的两端分别搭接有吸样垫、胶体金垫，所述胶体金的另一端搭接有样品垫。
结果表明：胶体金仍然容易滞留在胶体金垫上。而实施例2的组装方式能够更有效的避免胶体金滞留在胶体金垫上，且让金标抗体能够更快速有效地藉由层析作用向层析膜上的检测区域移动。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (7)

1.一种检测膀胱癌的胶体金试纸卡，其特征在于，包括底板及依次粘贴在底板上的样品垫、胶体金垫、层析垫、吸样垫；所述层析垫的两端分别搭接有胶体金垫、吸样垫，所述胶体金垫的另一端插入样品垫中；所述胶体金垫上包被有由胶体金与兔抗APOA1多克隆抗体结合而成的金标抗体复合物；所述层析垫上包被有小鼠抗APOA1单克隆抗体和羊抗APOA1多克隆抗体的二抗；
所述胶体金垫上包被的所述金标抗体复合物的浓度为10-50ug/ml；
所述层析垫上包被的抗APOA1的单克隆抗体和抗APOA1多克隆抗体的二抗的浓度为分别50-500ug/ml和0.5-2ug/ml；
所述胶体金垫的材料为玻璃纤维膜或聚酯膜；
所述胶体金垫的制备方法包括：
a. 金垫的预处理
将金垫用金垫缓冲液浸泡后，烘干，备用；
所述金垫缓冲液：硼酸盐缓冲液+2%BSA+3%蔗糖+0.6M NaCl+0.2%Tween 20；
所述硼酸盐缓冲液：0.1Mol/L 的H3BO4+0.0025Mol/L的Na2B4O7·10H2O，pH=9；
所述2%BSA用PBS配制；
b. 胶体金溶液的制备
将HAuCl4加水配置成0.01%溶液，取100ml加热至沸腾状态保持10分钟，搅动同时加入一定量的1%柠檬酸钠水溶液；继续加热并沸腾15min，此时颜色由淡黄色转变成灰色，并继续转变成黑色，最后稳定呈现红色；冷却至室温后用水恢复原体积100ml；加入2ml的碳酸钾溶液，制成胶体金溶液；所述碳酸钾溶液的浓度为1%, pH=8.2；所述胶体金溶液的粒径为30-40nm；
c. 边搅拌胶体金溶液边向其中逐滴快速滴加兔抗APOA1多克隆抗体，混匀后加入0.05ml浓度10%的NaCl溶液，静置2小时后向其中逐滴加入洗液I搅拌15分钟；离心，弃上清；加入洗液II，离心；弃上清；再加入洗液II，离心，弃上清；用步骤a所述金垫缓冲液进行重悬，制得的金标抗体复合物；于低温、避光保存，备用；
所述离心为4℃条件下12000rpm离心30分钟；
所述洗液I：1%BSA+0.1%PEG；PEG即聚乙二醇；
所述洗液II：硼酸盐缓冲液+1%BSA；
所述硼酸盐缓冲液: 0.1Mol/L 的 H3BO4+0.0025Mol/L的Na2B4O7·10H2O ，pH=9；
吸取制得的金标抗体复合物滴加至预处理后的金垫上，干燥，制得胶体金垫。
2.根据权利要求1所述的检测膀胱癌的胶体金试纸卡，其特征在于，所述胶体金垫上包被的所述金标抗体复合物的浓度为30ug/ml；
和/或，所述层析垫上包被的抗APOA1的单克隆抗体和抗APOA1多克隆抗体的二抗的浓度分别为100ug/ml和1mg/ml。
3.根据权利要求1或2所述的检测膀胱癌的胶体金试纸卡，其特征在于，所述层析垫上包被的抗APOA1的单克隆抗体和抗APOA1多克隆抗体的二抗分别形成相互平行且与所述试纸卡长轴方向垂直的检测线和质控线；所述检测线位于所述样品垫和所述质控线之间。
4.根据权利要求1或2所述的检测膀胱癌的胶体金试纸卡，其特征在于，所述样品垫的材料为吸水性玻璃纤维；和/或，
所述层析垫的材料为硝酸纤维素膜；和/或，
所述吸样垫的材料为吸水纸或吸水性玻璃纤维；
所述底板的材料为PVC。
5.权利要求1-4任一项所述检测膀胱癌的胶体金试纸卡的制备方法，其特征在于，包括：
1）胶体金垫的制备
a. 金垫的预处理
将金垫用金垫缓冲液浸泡后，烘干，备用；
所述金垫缓冲液：硼酸盐缓冲液+2%BSA+3%蔗糖+0.6M NaCl+0.2%Tween 20；
所述硼酸盐缓冲液: 0.1Mol/L 的 H3BO4+0.0025Mol/L的Na2B4O7·10H2O ，pH=9；
所述2%BSA用PBS配制；
b. 胶体金溶液的制备
将HAuCl4加水配置成0.01%溶液，取100ml加热至沸腾状态保持10分钟，搅动同时加入一定量的1%柠檬酸钠水溶液；继续加热并沸腾15min，此时颜色由淡黄色转变成灰色，并继续转变成黑色，最后稳定呈现红色；冷却至室温后用水恢复原体积100ml；加入2ml的碳酸钾溶液，制成胶体金溶液；所述碳酸钾溶液的浓度为1%, pH=8.2；所述胶体金溶液的粒径为30-40nm；
c. 边搅拌胶体金溶液边向其中逐滴快速滴加兔抗APOA1多克隆抗体，混匀后加入0.05ml浓度10%的NaCl溶液，静置2小时后向其中逐滴加入洗液I搅拌15分钟；离心，弃上清；加入洗液II，离心；弃上清；再加入洗液II，离心，弃上清；用步骤a所述金垫缓冲液进行重悬，制得的金标抗体复合物；于低温、避光保存，备用；
所述离心为4℃条件下12000rpm离心30分钟；所述洗液I：1%BSA+0.1%PEG；
所述洗液II：硼酸盐缓冲液+1%BSA；
所述硼酸盐缓冲液: 0.1Mol/L 的 H3BO4+0.0025Mol/L的Na2B4O7·10H2O ，pH=9；
将制得的金标抗体复合物加至预处理后的金垫上，干燥，制得胶体金垫；
2）层析垫的制备
将抗APOA1单克隆抗体和抗APOA1多克隆抗体的二抗分别配制成适当浓度的溶液后包被至层析垫上，干燥；
3）试纸卡的组装：将所述样品垫、胶体金垫、层析膜、吸样垫依次粘贴至底板上。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，还包括将所述样品垫事先进行预处理，即将样品垫用样品缓冲液浸泡后，烘干，备用；
所述样品缓冲液：所述金垫缓冲液+1%PEG。
7.含有权利要求1-4任一项所述检测膀胱癌的胶体金试纸卡或权利要求5或6所述方法制备的检测膀胱癌的胶体金试纸卡的试剂盒。
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