CN107115343A - 一种大鼠肺细胞纤维化模型 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种大鼠肺细胞纤维化模型，对于给药组采用加样枪通过鼻腔给药的方式给于药品，所述药品中含有胺碘酮和盐酸萘甲唑啉，利用胺碘酮作为诱导剂建立大鼠肺纤维化模型，然后通过高分辨率CT观察，羟脯酸含量测定，本发明的大鼠肺细胞纤维化模型，采用无创鼻腔给药注入胺碘酮构建肺纤维化动物模型，其操作方便，成功率高，在给药过程中对大鼠损伤小，减少气管切开等对大鼠造成的外源性损伤，在给药过程中大鼠死亡率小，且能够保证药物完全进入气管内。

Description

一种大鼠肺细胞纤维化模型
技术领域
本发明涉及医学领域，更具体的说是涉及一种大鼠肺细胞纤维化模型。
背景技术
胺碘酮又称乙胺碘呋酮，是含碘苯丙呋喃衍生物，作为Ⅲ类抗心律失常药物广泛应用于临床，主要用于治疗室性心律失常和心房颤动。其副作用主要表现为肺毒性、甲状腺毒性、心脏毒性、消化系统毒性等，其中肺毒性反应最为严重，其发生率在1％-10％，肺毒性主要表现为肺纤维化，因临床缺乏有效治疗措施，其死亡率高达33％，严重影响人民生命健康。但胺碘酮在抗心律失常方面疗效确切、稳定，目前尚无其他类似药物替代，在临床上应用仍十分广泛。因此，阐明胺碘酮诱导肺纤维化机制对降低其药物毒副作用，逆转或延缓肺纤维化进程、改善患者预后、提高生存率有重要的临床意义。目前其发病机制尚不清楚，无有效的治疗方法，肺纤维化动物模型是研究疾病发生发展和新型药物必不可少的实验手段，在严格控制各种条件下，利用动物模型，我们可以观察肺纤维化的发生、发展和疾病转归以及这些不同改变在形态学、影像学和分子生物学上的表现等规律。因此，建立一种简便、成熟而稳定的符合胺碘酮诱导肺纤维化发病过程的动物模型，对深入研究肺纤维化发病机制、开发先进的治疗方法具有极其重要的意义。
现有的构建肺纤维化动物模型的方法有很多，主要包括：气管切开术、气管插管、额镜引导灌注、腹腔注射、鼻腔给药、静脉滴注化学药物法和口咽部给药法，造模方法有很多，但是各自存在缺点，比如气管切开对标本鼠的外源性创伤大操作繁杂，对相关实验室数据的影响较大，且实施操作耗费时间。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种大鼠肺细胞纤维化模型，操作方便，在给药过程对大鼠损伤小。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：一种大鼠肺细胞纤维化模型，建立方法如下：将大鼠进行称重，随机分为给药组和对照组，腹腔注射麻药进行麻醉，将其放于笼中，让其自然晕倒，对于给药组采用加样枪通过鼻腔给药的方式给于药品，所述药品中含有胺碘酮和盐酸萘甲唑啉，给药的过程中观察小鼠的呼吸情况，给药结束，让大鼠继续生长20-30天；对于对照组采用加样枪通过鼻腔给药的方式给于等体积0.9％氯化钠注射液，给样的过程中观察小鼠的呼吸情况，给样结束，让大鼠继续生长20-30天；然后给药组和对照组用戊巴比妥钠麻醉处死大鼠,迅速开胸,取出肺脏,部分用于制作组织切片,部分速冻于液氮备作羟脯氨酸含量测定。
作为本发明的进一步改进，所述药品中胺碘酮和盐酸萘甲唑啉浓度分别为3-5mg/ml和0.03-0.06mg/ml。
作为本发明的进一步改进，所述药品中含有浓度为5-10μM的1-磷酸鞘氨醇和1-5μM的激动剂SEW2871。
作为本发明的进一步改进，所述胺碘酮的给药量为3-5mg/kg体重。
作为本发明的进一步改进，所述采用加样枪通过鼻腔给药的方式给于药品具体步骤如下：将大鼠脖颈处毛发剔除，准备一个口部边沿带弹性紧固带的透明塑料袋，将所述透明塑料袋套在大鼠头部，使所述透明塑料袋口部边沿的弹性紧固带套设在大鼠脖颈处，在透明塑料袋上设置两个洞，其中一个洞中插入导气管，所述导气管另一端连接有三通阀，所述三通阀一端和抽气泵相连，还有一端和吹气泵相连，另一个洞中插入软质导药管，所述导药管一端和加样枪的针头相连，另一端和大鼠一侧鼻孔相连，所述导气管和导药管外侧壁与透明塑料袋相接处无缝贴合；在大鼠晕倒后，使大鼠呈仰卧位状以弹力固定夹将其四肢分别固定于鼠板上；给药步骤如下，首先打开抽气泵和吹气泵，操作者一手控制三通阀，另一手控制注射器，注射器内装定量药品，先让抽气泵和导气管相通将透明塑料袋中空气抽出，保持3-5s，迅速切换三通阀使吹气泵和导气管相连，与此同时，迅速推注药品100-200μl进入鼻腔内，使药物随大鼠吸气时的气流充分进入支气管内，推注完毕后，保持5-10s，重复上述给药步骤若干次，解除鼠四肢弹力固定夹将鼠放回鼠笼内待复苏，然后置于恒温大鼠房饲养。
作为本发明的进一步改进，所述加样枪的加样速度为15-30μL/min。
作为本发明的进一步改进，鼻腔给药后将小鼠直立旋转2-3min，利用体位及重力作用，尽量使药液在两侧肺内均匀分布。
作为本发明的进一步改进，鼻腔给药时把鼠板竖起与桌面成70-80°夹角，然后向右倾斜与桌面成60-70°夹角，将药品吹入单侧肺中。
本发明的大鼠肺细胞纤维化模型，采用无创鼻腔给药注入胺碘酮构建肺纤维化大鼠模型，其操作方便，成功率高，在给药过程对大鼠损伤小，减少气管切开等对大鼠造成的外源性损伤，在给药过程大鼠死亡率小，且能够保证药物完全进入气管内。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明做进一步的详述。
实施例1
一种大鼠肺细胞纤维化模型，建立方法如下：将大鼠进行称重，腹腔注射麻药进行麻醉，将其放于笼中，让其自然晕倒，对于给药组采用加样枪通过鼻腔给药的方式给于药品，所述药品中含有浓度分别为3mg/ml和0.03mg/ml的胺碘酮和盐酸萘甲唑啉，所述胺碘酮的给药量为3mg/kg体重，将大鼠脖颈处毛发剔除，准备一个口部边沿带弹性紧固带的透明塑料袋，将所述透明塑料袋套在大鼠头部，使所述透明塑料袋口部边沿的弹性紧固带套设在大鼠脖颈处，在透明塑料袋上设置两个洞，其中一个洞中插入导气管，所述导气管另一端连接有三通阀，所述三通阀一端和抽气泵相连，还有一端和吹气泵相连，另一个洞中插入软质导药管，所述导药管一端和加样枪的针头相连，另一端和大鼠一侧鼻孔相连，所述导气管和导药管外侧壁与透明塑料袋相接处无缝贴合；在大鼠晕倒后，使大鼠呈仰卧位状以弹力固定夹将其四肢分别固定于鼠板上，把鼠板竖起与桌面成70°夹角，然后向右倾斜与桌面成60°夹角，首先打开抽气泵和吹气泵，操作者一手控制三通阀，另一手控制注射器，注射器内装定量药品，先让抽气泵和导气管相通将透明塑料袋中空气抽出，保持3s，迅速切换三通阀使吹气泵和导气管相连，与此同时，迅速推注药品100μl进入鼻腔内，所述加样枪的加样速度为15μL/min，使药物随大鼠吸气时的气流充分进入支气管内，然后吹入单侧肺中，推注完毕后，保持5s，重复上述给药步骤3次，解除鼠四肢弹力固定夹将鼠放回鼠笼内待复苏，给药的过程中不时观察小鼠的呼吸情况，给药结束，让大鼠继续生长20天，然后置于恒温大鼠房饲养；然后用戊巴比妥钠麻醉处死大鼠,迅速开胸,取出肺脏,部分用于制作组织切片,部分速冻于液氮备作羟脯氨酸含量测定。
实施例2
一种大鼠肺细胞纤维化模型，建立方法如下：将大鼠进行称重，腹腔注射麻药进行麻醉，将其放于笼中，让其自然晕倒，对于给药组采用加样枪通过鼻腔给药的方式给于药品，所述药品中含有浓度分别为4mg/ml和0.04mg/ml的胺碘酮和盐酸萘甲唑啉，所述胺碘酮的给药量为4mg/kg体重，将大鼠脖颈处毛发剔除，准备一个口部边沿带弹性紧固带的透明塑料袋，将所述透明塑料袋套在大鼠头部，使所述透明塑料袋口部边沿的弹性紧固带套设在大鼠脖颈处，在透明塑料袋上设置两个洞，其中一个洞中插入导气管，所述导气管另一端连接有三通阀，所述三通阀一端和抽气泵相连，还有一端和吹气泵相连，另一个洞中插入软质导药管，所述导药管一端和加样枪的针头相连，另一端和大鼠一侧鼻孔相连，所述导气管和导药管外侧壁与透明塑料袋相接处无缝贴合；在大鼠晕倒后，使大鼠呈仰卧位状以弹力固定夹将其四肢分别固定于鼠板上，把鼠板竖起与桌面成75°夹角，然后向右倾斜与桌面成65°夹角，首先打开抽气泵和吹气泵，操作者一手控制三通阀，另一手控制注射器，注射器内装定量药品，先让抽气泵和导气管相通将透明塑料袋中空气抽出，保持4s，迅速切换三通阀使吹气泵和导气管相连，与此同时，迅速推注药品150μl进入鼻腔内，所述加样枪的加样速度为20μL/min，使药物随大鼠吸气时的气流充分进入支气管内，然后吹入单侧肺中，推注完毕后，保持6s，重复上述给药步骤3次，解除鼠四肢弹力固定夹将鼠放回鼠笼内待复苏，给药的过程中不时观察小鼠的呼吸情况，给药结束，让大鼠继续生长28天，然后置于恒温大鼠房饲养；然后用戊巴比妥钠麻醉处死大鼠,迅速开胸,取出肺脏,部分用于制作组织切片,部分速冻于液氮备作羟脯氨酸含量测定。
实施例3
一种大鼠肺细胞纤维化模型，建立方法如下：将大鼠进行称重，腹腔注射麻药进行麻醉，将其放于笼中，让其自然晕倒，对于给药组采用加样枪通过鼻腔给药的方式给于药品，所述药品中含有浓度分别为5mg/ml和0.06mg/ml的胺碘酮和盐酸萘甲唑啉，所述胺碘酮的给药量为5mg/kg体重，将大鼠脖颈处毛发剔除，准备一个口部边沿带弹性紧固带的透明塑料袋，将所述透明塑料袋套在大鼠头部，使所述透明塑料袋口部边沿的弹性紧固带套设在大鼠脖颈处，在透明塑料袋上设置两个洞，其中一个洞中插入导气管，所述导气管另一端连接有三通阀，所述三通阀一端和抽气泵相连，还有一端和吹气泵相连，另一个洞中插入软质导药管，所述导药管一端和加样枪的针头相连，另一端和大鼠一侧鼻孔相连，所述导气管和导药管外侧壁与透明塑料袋相接处无缝贴合；在大鼠晕倒后，使大鼠呈仰卧位状以弹力固定夹将其四肢分别固定于鼠板上，把鼠板竖起与桌面成80°夹角，然后向右倾斜与桌面成70°夹角，首先打开抽气泵和吹气泵，操作者一手控制三通阀，另一手控制注射器，注射器内装定量药品，先让抽气泵和导气管相通将透明塑料袋中空气抽出，保持5s，迅速切换三通阀使吹气泵和导气管相连，与此同时，迅速推注药品200μl进入鼻腔内，所述加样枪的加样速度为30μL/min，使药物随大鼠吸气时的气流充分进入支气管内，然后吹入单侧肺中，推注完毕后，保持10s，重复上述给药步骤4次，解除鼠四肢弹力固定夹将鼠放回鼠笼内待复苏，给药的过程中不时观察小鼠的呼吸情况，给药结束，让大鼠继续生长30天，然后置于恒温大鼠房饲养；然后用戊巴比妥钠麻醉处死大鼠,迅速开胸,取出肺脏,部分用于制作组织切片,部分速冻于液氮备作羟脯氨酸含量测定。
实施例4
一种大鼠肺细胞纤维化模型，建立方法如下：将大鼠进行称重，腹腔注射麻药进行麻醉，将其放于笼中，让其自然晕倒，对于给药组采用加样枪通过鼻腔给药的方式给于药品，所述药品中含有浓度分别为3mg/ml和0.03mg/ml的胺碘酮和盐酸萘甲唑啉，所述胺碘酮的给药量为3mg/kg体重，将大鼠脖颈处毛发剔除，准备一个口部边沿带弹性紧固带的透明塑料袋，将所述透明塑料袋套在大鼠头部，使所述透明塑料袋口部边沿的弹性紧固带套设在大鼠脖颈处，在透明塑料袋上设置两个洞，其中一个洞中插入导气管，所述导气管另一端连接有三通阀，所述三通阀一端和抽气泵相连，还有一端和吹气泵相连，另一个洞中插入软质导药管，所述导药管一端和加样枪的针头相连，另一端和大鼠一侧鼻孔相连，所述导气管和导药管外侧壁与透明塑料袋相接处无缝贴合；在大鼠晕倒后，使大鼠呈仰卧位状以弹力固定夹将其四肢分别固定于鼠板上，首先打开抽气泵和吹气泵，操作者一手控制三通阀，另一手控制注射器，注射器内装定量药品，先让抽气泵和导气管相通将透明塑料袋中空气抽出，保持4s，迅速切换三通阀使吹气泵和导气管相连，与此同时，迅速推注药品100μl进入鼻腔内，所述加样枪的加样速度为15μL/min，使药物随大鼠吸气时的气流充分进入支气管内，推注完毕后，保持5s，重复上述给药步骤5次，将小鼠直立旋转2min，利用体位及重力作用，尽量使药液在两侧肺内均匀分布，解除鼠四肢弹力固定夹将鼠放回鼠笼内待复苏，给药的过程中不时观察小鼠的呼吸情况，给药结束，让大鼠继续生长20天，然后置于恒温大鼠房饲养；然后用戊巴比妥钠麻醉处死大鼠,迅速开胸,取出肺脏,部分用于制作组织切片,部分速冻于液氮备作羟脯氨酸含量测定。
实施例5
一种大鼠肺细胞纤维化模型，建立方法如下：将大鼠进行称重，腹腔注射麻药进行麻醉，将其放于笼中，让其自然晕倒，对于给药组采用加样枪通过鼻腔给药的方式给于药品，所述药品中含有浓度分别为4mg/ml和0.04mg/ml的胺碘酮和盐酸萘甲唑啉，所述胺碘酮的给药量为4mg/kg体重，将大鼠脖颈处毛发剔除，准备一个口部边沿带弹性紧固带的透明塑料袋，将所述透明塑料袋套在大鼠头部，使所述透明塑料袋口部边沿的弹性紧固带套设在大鼠脖颈处，在透明塑料袋上设置两个洞，其中一个洞中插入导气管，所述导气管另一端连接有三通阀，所述三通阀一端和抽气泵相连，还有一端和吹气泵相连，另一个洞中插入软质导药管，所述导药管一端和加样枪的针头相连，另一端和大鼠一侧鼻孔相连，所述导气管和导药管外侧壁与透明塑料袋相接处无缝贴合；在大鼠晕倒后，使大鼠呈仰卧位状以弹力固定夹将其四肢分别固定于鼠板上，首先打开抽气泵和吹气泵，操作者一手控制三通阀，另一手控制注射器，注射器内装定量药品，先让抽气泵和导气管相通将透明塑料袋中空气抽出，保持4s，迅速切换三通阀使吹气泵和导气管相连，与此同时，迅速推注药品150μl进入鼻腔内，所述加样枪的加样速度为20μL/min，使药物随大鼠吸气时的气流充分进入支气管内，然后吹入单侧肺中，推注完毕后，保持8s，重复上述给药步骤5次，将小鼠直立旋转3min，利用体位及重力作用，尽量使药液在两侧肺内均匀分布，解除鼠四肢弹力固定夹将鼠放回鼠笼内待复苏，给药的过程中不时观察小鼠的呼吸情况，给药结束，让大鼠继续生长28天，然后置于恒温大鼠房饲养；然后用戊巴比妥钠麻醉处死大鼠,迅速开胸,取出肺脏,部分用于制作组织切片,部分速冻于液氮备作羟脯氨酸含量测定。
实施例6
一种大鼠肺细胞纤维化模型，建立方法如下：将大鼠进行称重，腹腔注射麻药进行麻醉，将其放于笼中，让其自然晕倒，对于给药组采用加样枪通过鼻腔给药的方式给于药品，所述药品中含有浓度分别为5mg/ml和0.06mg/ml的胺碘酮和盐酸萘甲唑啉，所述胺碘酮的给药量为5mg/kg体重，将大鼠脖颈处毛发剔除，准备一个口部边沿带弹性紧固带的透明塑料袋，将所述透明塑料袋套在大鼠头部，使所述透明塑料袋口部边沿的弹性紧固带套设在大鼠脖颈处，在透明塑料袋上设置两个洞，其中一个洞中插入导气管，所述导气管另一端连接有三通阀，所述三通阀一端和抽气泵相连，还有一端和吹气泵相连，另一个洞中插入软质导药管，所述导药管一端和加样枪的针头相连，另一端和大鼠一侧鼻孔相连，所述导气管和导药管外侧壁与透明塑料袋相接处无缝贴合；在大鼠晕倒后，使大鼠呈仰卧位状以弹力固定夹将其四肢分别固定于鼠板上，首先打开抽气泵和吹气泵，操作者一手控制三通阀，另一手控制注射器，注射器内装定量药品，先让抽气泵和导气管相通将透明塑料袋中空气抽出，保持5s，迅速切换三通阀使吹气泵和导气管相连，与此同时，迅速推注药品200μl进入鼻腔内，所述加样枪的加样速度为30μL/min，使药物随大鼠吸气时的气流充分进入支气管内，然后吹入单侧肺中，推注完毕后，保持10s，重复上述给药步骤4次，将小鼠直立旋转3min，利用体位及重力作用，尽量使药液在两侧肺内均匀分布，解除鼠四肢弹力固定夹将鼠放回鼠笼内待复苏，给药的过程中不时观察小鼠的呼吸情况，给药结束，让大鼠继续生长30天，然后置于恒温大鼠房饲养；然后用戊巴比妥钠麻醉处死大鼠,迅速开胸,取出肺脏,部分用于制作组织切片,部分速冻于液氮备作羟脯氨酸含量测定。
实施例7
一种大鼠肺细胞纤维化模型，建立方法如下：将大鼠进行称重，腹腔注射麻药进行麻醉，将其放于笼中，让其自然晕倒，对于给药组采用加样枪通过鼻腔给药的方式给于药品，所述药品中含有浓度分别为5mg/ml和0.06mg/ml的胺碘酮和盐酸萘甲唑啉，以及浓度为5μM的1-磷酸鞘氨醇和1μM的激动剂SEW2871，所述胺碘酮的给药量为5mg/kg体重，将大鼠脖颈处毛发剔除，准备一个口部边沿带弹性紧固带的透明塑料袋，将所述透明塑料袋套在大鼠头部，使所述透明塑料袋口部边沿的弹性紧固带套设在大鼠脖颈处，在透明塑料袋上设置两个洞，其中一个洞中插入导气管，所述导气管另一端连接有三通阀，所述三通阀一端和抽气泵相连，还有一端和吹气泵相连，另一个洞中插入软质导药管，所述导药管一端和加样枪的针头相连，另一端和大鼠一侧鼻孔相连，所述导气管和导药管外侧壁与透明塑料袋相接处无缝贴合；在大鼠晕倒后，使大鼠呈仰卧位状以弹力固定夹将其四肢分别固定于鼠板上，首先打开抽气泵和吹气泵，操作者一手控制三通阀，另一手控制注射器，注射器内装定量药品，先让抽气泵和导气管相通将透明塑料袋中空气抽出，保持5s，迅速切换三通阀使吹气泵和导气管相连，与此同时，迅速推注药品200μl进入鼻腔内，所述加样枪的加样速度为30μL/min，使药物随大鼠吸气时的气流充分进入支气管内，然后吹入单侧肺中，推注完毕后，保持10s，重复上述给药步骤3次，将小鼠直立旋转3min，利用体位及重力作用，尽量使药液在两侧肺内均匀分布，解除鼠四肢弹力固定夹将鼠放回鼠笼内待复苏，给药的过程中不时观察小鼠的呼吸情况，给药结束，让大鼠继续生长30天，然后置于恒温大鼠房饲养；然后用戊巴比妥钠麻醉处死大鼠,迅速开胸,取出肺脏,部分用于制作组织切片,部分速冻于液氮备作羟脯氨酸含量测定。
实施例8
一种大鼠肺细胞纤维化模型，建立方法如下：将大鼠进行称重，腹腔注射麻药进行麻醉，将其放于笼中，让其自然晕倒，对于给药组采用加样枪通过鼻腔给药的方式给于药品，所述药品中含有浓度分别为5mg/ml和0.06mg/ml的胺碘酮和盐酸萘甲唑啉，以及浓度为8μM的1-磷酸鞘氨醇和4μM的激动剂SEW2871，所述胺碘酮的给药量为5mg/kg体重，将大鼠脖颈处毛发剔除，准备一个口部边沿带弹性紧固带的透明塑料袋，将所述透明塑料袋套在大鼠头部，使所述透明塑料袋口部边沿的弹性紧固带套设在大鼠脖颈处，在透明塑料袋上设置两个洞，其中一个洞中插入导气管，所述导气管另一端连接有三通阀，所述三通阀一端和抽气泵相连，还有一端和吹气泵相连，另一个洞中插入软质导药管，所述导药管一端和加样枪的针头相连，另一端和大鼠一侧鼻孔相连，所述导气管和导药管外侧壁与透明塑料袋相接处无缝贴合；在大鼠晕倒后，使大鼠呈仰卧位状以弹力固定夹将其四肢分别固定于鼠板上，首先打开抽气泵和吹气泵，操作者一手控制三通阀，另一手控制注射器，注射器内装定量药品，先让抽气泵和导气管相通将透明塑料袋中空气抽出，保持5s，迅速切换三通阀使吹气泵和导气管相连，与此同时，迅速推注药品200μl进入鼻腔内，所述加样枪的加样速度为30μL/min，使药物随大鼠吸气时的气流充分进入支气管内，然后吹入单侧肺中，推注完毕后，保持10s，重复上述给药步骤3次，将小鼠直立旋转3min，利用体位及重力作用，尽量使药液在两侧肺内均匀分布，解除鼠四肢弹力固定夹将鼠放回鼠笼内待复苏，给药的过程中不时观察小鼠的呼吸情况，给药结束，让大鼠继续生长30天，然后置于恒温大鼠房饲养；然后用戊巴比妥钠麻醉处死大鼠,迅速开胸,取出肺脏,部分用于制作组织切片,部分速冻于液氮备作羟脯氨酸含量测定。
实施例9
一种大鼠肺细胞纤维化模型，建立方法如下：将大鼠进行称重，腹腔注射麻药进行麻醉，将其放于笼中，让其自然晕倒，对于给药组采用加样枪通过鼻腔给药的方式给于药品，所述药品中含有浓度分别为5mg/ml和0.06mg/ml的胺碘酮和盐酸萘甲唑啉，以及浓度为10μM的1-磷酸鞘氨醇和5μM的激动剂SEW2871，所述胺碘酮的给药量为5mg/kg体重，将大鼠脖颈处毛发剔除，准备一个口部边沿带弹性紧固带的透明塑料袋，将所述透明塑料袋套在大鼠头部，使所述透明塑料袋口部边沿的弹性紧固带套设在大鼠脖颈处，在透明塑料袋上设置两个洞，其中一个洞中插入导气管，所述导气管另一端连接有三通阀，所述三通阀一端和抽气泵相连，还有一端和吹气泵相连，另一个洞中插入软质导药管，所述导药管一端和加样枪的针头相连，另一端和大鼠一侧鼻孔相连，所述导气管和导药管外侧壁与透明塑料袋相接处无缝贴合；在大鼠晕倒后，使大鼠呈仰卧位状以弹力固定夹将其四肢分别固定于鼠板上，首先打开抽气泵和吹气泵，操作者一手控制三通阀，另一手控制注射器，注射器内装定量药品，先让抽气泵和导气管相通将透明塑料袋中空气抽出，保持5s，迅速切换三通阀使吹气泵和导气管相连，与此同时，迅速推注药品200μl进入鼻腔内，所述加样枪的加样速度为30μL/min，使药物随大鼠吸气时的气流充分进入支气管内，然后吹入单侧肺中，推注完毕后，保持10s，重复上述给药步骤4次，将小鼠直立旋转3min，利用体位及重力作用，尽量使药液在两侧肺内均匀分布，解除鼠四肢弹力固定夹将鼠放回鼠笼内待复苏，给药的过程中不时观察小鼠的呼吸情况，给药结束，让大鼠继续生长30天，然后置于恒温大鼠房饲养；然后用戊巴比妥钠麻醉处死大鼠,迅速开胸,取出肺脏,部分用于制作组织切片,部分速冻于液氮备作羟脯氨酸含量测定。
对照组
将大鼠进行称重，腹腔注射麻药进行麻醉，将其放于笼中，让其自然晕倒，对于对照组采用加样枪通过鼻腔给药的方式给于和实施例6中药品等体积的0.9％氯化钠注射液，将大鼠脖颈处毛发剔除，准备一个口部边沿带弹性紧固带的透明塑料袋，将所述透明塑料袋套在大鼠头部，使所述透明塑料袋口部边沿的弹性紧固带套设在大鼠脖颈处，在透明塑料袋上设置两个洞，其中一个洞中插入导气管，所述导气管另一端连接有三通阀，所述三通阀一端和抽气泵相连，还有一端和吹气泵相连，另一个洞中插入软质导药管，所述导药管一端和加样枪的针头相连，另一端和大鼠一侧鼻孔相连，所述导气管和导药管外侧壁与透明塑料袋相接处无缝贴合；在大鼠晕倒后，使大鼠呈仰卧位状以弹力固定夹将其四肢分别固定于鼠板上，首先打开抽气泵和吹气泵，操作者一手控制三通阀，另一手控制注射器，注射器内装定量氯化钠注射液，先让抽气泵和导气管相通将透明塑料袋中空气抽出，保持5s，迅速切换三通阀使吹气泵和导气管相连，与此同时，迅速推注氯化钠注射液200μl进入鼻腔内，所述加样枪的加样速度为30μL/min，使氯化钠注射液随大鼠吸气时的气流充分进入支气管内，然后吹入单侧肺中，推注完毕后，保持10s，重复上述给样步骤4次，将小鼠直立旋转3min，利用体位及重力作用，尽量使氯化钠注射液在两侧肺内均匀分布，解除鼠四肢弹力固定夹将鼠放回鼠笼内待复苏，给样的过程中不时观察小鼠的呼吸情况，给样结束，让大鼠继续生长30天，然后置于恒温大鼠房饲养；然后用戊巴比妥钠麻醉处死大鼠,迅速开胸,取出肺脏,部分用于制作组织切片,部分速冻于液氮备作羟脯氨酸含量测定。
CT扫描
将实施例1-3和对照组处理过的两组大鼠饲养28天后进行CT观察记录肺部变化。用3％戊巴比妥0.3ml/100g腹腔注射进行麻醉，然后通过高分辨率CT进行扫描观察肺部变化，最佳的扫描条件：层厚0.67mm，120KV，300mAs，扫描结果显示：对照组和实施例1-3组右肺的CT图，肺部无明显异常；而实施例1-3组的CT图，左肺部内有蜂窝状阴影和磨玻璃影，具有典型的肺纤维化特征。
将实施例4-6和对照组处理过的两组大鼠饲养28天后进行CT观察记录肺部变化。用3％戊巴比妥0.3ml/100g腹腔注射进行麻醉，然后通过高分辨率CT进行扫描观察肺部变化，最佳的扫描条件：层厚0.67mm，120KV，300mAs，扫描结果显示：对照组的CT图，肺部无明显异常；而实施例4-6组的CT图，肺部内有蜂窝状阴影和磨玻璃影，具有典型的肺纤维化特征。
病理切片鉴定(HE染色)
将实施例1-3和对照组处理过的两组大鼠饲养28天后，脱臼处死大鼠，取下大鼠两侧肺部组织，一部分放进10％福尔马林固定液固定进行病理鉴定，一部分发到超低温冰箱保存进行羟脯氨酸含量测定。结果显示：对照组肺部和实施例1-3组的大鼠右肺部：肺泡大小均匀，肺泡分布均匀，肺泡内未见炎症细胞侵润和成纤维细胞增生，而实施例1-3组的大鼠左肺部明显可见融合形成较大的肺泡或肺泡结构消失，有大量的成纤维细胞和纤维组织增生，炎性细胞侵润明显，具有明显纤维化症状。
将实施例4-6和对照组处理过的两组大鼠饲养28天后，脱臼处死大鼠，取下大鼠两侧肺部组织，一部分放进10％福尔马林固定液固定进行病理鉴定，一部分发到超低温冰箱保存进行羟脯氨酸含量测定。结果显示：对照组肺部：肺泡大小均匀，肺泡分布均匀，肺泡内未见炎症细胞侵润和成纤维细胞增生，而实施例4-6组的大鼠肺部明显可见融合形成较大的肺泡或肺泡结构消失，有大量的成纤维细胞和纤维组织增生，炎性细胞侵润明显，具有明显纤维化症状。
羟脯氨酸含量测定
羟脯氨酸是胶原纤维中特有的一类氨基酸，测定肺部羟脯氨酸含量可以换算出胶原蛋白的含量，以判断肺纤维化程度，按羟脯氨酸检测试剂盒说明书方法测定培养基中羟脯氨酸含量，在酶标仪540nm处测定A值，样品中羟脯氨酸质量浓度(mg/L培养基)＝测定管A值×标准管浓度/标准液A值。
从上表数据可知通过在鼻腔给药时把鼠板竖起与桌面成70-80°夹角，然后向右倾斜与桌面成60-70°夹角，将药品吹入单侧肺中，为实现在同一个体上评价药物治疗肺纤维化的同时对正常肺部的毒性研究，肺纤维化和正常肺部组织基因表达谱分析、肺部代偿性增生的诱导机制等提供可靠的大鼠实验模型。
从上标数据可以看出在药品中加入浓度为5-10μM的1-磷酸鞘氨醇和1-5μM的激动剂SEW2871，能够有效促进胺碘酮致肺纤维化进程。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种大鼠肺细胞纤维化模型，其特征在于：建立方法如下：将大鼠进行称重，随机分为给药组和对照组，腹腔注射麻药进行麻醉，将其放于笼中，让其自然晕倒，对于给药组采用加样枪通过鼻腔给药的方式给于药品，所述药品中含有胺碘酮和盐酸萘甲唑啉，给药的过程中观察小鼠的呼吸情况，给药结束，让大鼠继续生长20-30天；对于对照组采用加样枪通过鼻腔给药的方式给于等体积0.9％氯化钠注射液，给样的过程中观察小鼠的呼吸情况，给样结束，让大鼠继续生长20-30天；然后给药组和对照组用戊巴比妥钠麻醉处死大鼠,迅速开胸,取出肺脏,部分用于制作组织切片,部分速冻于液氮备作羟脯氨酸含量测定。
2.根据权利要求1所述的一种大鼠肺细胞纤维化模型，其特征在于：所述药品中胺碘酮和盐酸萘甲唑啉浓度分别为3-5mg/ml和0.03-0.06mg/ml。
3.根据权利要求2所述的一种大鼠肺细胞纤维化模型，其特征在于：所述药品中含有浓度为5-10μM的1-磷酸鞘氨醇和1-5μM的激动剂SEW2871。
4.根据权利要求3所述的一种大鼠肺细胞纤维化模型，其特征在于：所述胺碘酮的给药量为3-5mg/kg体重。
5.根据权利要求4所述的一种大鼠肺细胞纤维化模型，其特征在于：所述加样枪通过鼻腔给药的方式给于药品具体操作过程如下：将大鼠脖颈处毛发剔除，准备一个口部边沿带弹性紧固带的透明塑料袋，将所述透明塑料袋套在大鼠头部，使所述透明塑料袋口部边沿的弹性紧固带套设在大鼠脖颈处，在透明塑料袋上设置两个洞，其中一个洞中插入导气管，所述导气管另一端连接有三通阀，所述三通阀一端和抽气泵相连，还有一端和吹气泵相连，另一个洞中插入软质导药管，所述导药管一端和加样枪的针头相连，另一端和大鼠一侧鼻孔相连，所述导气管和导药管外侧壁与透明塑料袋相接处无缝贴合；在大鼠晕倒后，使大鼠呈仰卧位状以弹力固定夹将其四肢分别固定于鼠板上；给药步骤如下，首先打开抽气泵和吹气泵，操作者一手控制三通阀，另一手控制注射器，注射器内装定量药品，先让抽气泵和导气管相通将透明塑料袋中空气抽出，保持3-5s，迅速切换三通阀使吹气泵和导气管相连，与此同时，迅速推注药品100-200μl进入鼻腔内，使药物随大鼠吸气时的气流充分进入支气管内，推注完毕后，保持5-10s，重复上述给药步骤若干次，解除鼠四肢弹力固定夹将鼠放回鼠笼内待复苏，然后置于恒温动物房饲养。
6.根据权利要求1-5任一项所述的一种大鼠肺细胞纤维化模型，其特征在于：所述加样枪的加样速度为15-30μL/min。
7.根据权利要求6所述的一种大鼠肺细胞纤维化模型，其特征在于：鼻腔给药后将小鼠直立旋转2-3min，利用体位及重力作用，尽量使药液在两侧肺内均匀分布。
8.根据权利要求6所述的一种大鼠肺细胞纤维化模型，其特征在于：鼻腔给药时把鼠板竖起与桌面成70-80°夹角，然后向右倾斜与桌面成60-70°夹角，将药品吹入单侧肺中。
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