CN107087742A - 一种甘草和葛根提取物抑菌防腐剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种甘草和葛根提取物抑菌防腐剂的制备方法，是将甘草和葛根分别与70％乙醇按照料液质量比在三角瓶中混匀、水浴、超声波处理后，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩干燥成粉末，再按质量比混合后，用无菌水配制成天然的抑菌防腐剂，在0‑4℃温度下保存备用。本发明的天然抑菌防腐剂无化学毒害、抑菌防腐广谱、高效、用量少、成本低，具有广阔的开发和应用前景。
Description
技术领域
本发明属于抑菌防腐技术领域，具体涉及一种甘草和葛根提取物抑菌防腐剂的制备方法。
背景技术
食品防腐剂来源分为人工合成化学防腐剂(如山梨酸钾、苯甲酸钠、脱氢乙酸钠等)和天然防腐剂(如溶菌酶和植物源防腐剂等)两大类，由于化学防腐剂存在致癌或潜在致癌、致突变、致畸等毒副作用，所以天然、安全、高效、广谱的植物源防腐剂已成为当代研究热点和开发趋势。如魔芋中的甘露聚糖、丁香中的精油、翅果油树中的生物碱等都表现出明显的抑菌效应。然而，目前植物源性天然防腐剂的研发处于起步阶段，还面临着一些问题有待解决，如防腐剂用量大，抗菌时效短，成本高等。因此，开发由多种活性成组成分的复合型食品防腐剂具有更高效的实际应用价值。目前普遍应用于这个领域的较少，有些还没有克服诸如光谱性差、抑菌防腐效应弱等缺点，因而离实际应用还有些距离。
发明内容
本发明为解决现有技术中的问题，提供一种甘草和葛根提取物抑菌防腐剂的制备方法，它工艺简单、高效、用量少、成本低。
本发明采用的技术方案为：
一种甘草和葛根提取物抑菌防腐剂的制备方法，包括以下步骤：
a.甘草乙醇提取物的制备：将甘草与70％乙醇按照料液质量比1:10-15在三角瓶中混匀，用锡箔纸密封瓶口，在30-50℃下水浴60-90min，然后超声波处理45-60min，以10000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得甘草活性提取物。
b.葛根乙醇提取物的制备：将葛根与70％乙醇按照料液比1：10-15混匀，锡箔纸密封，30-50℃水浴60-90min，然后超声波处理45-60min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得葛根活性提取物。
c.将步骤a、步骤b中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1～1.5:1质量比混合后，用无菌水配制成200～300μg/ml，即得到天然的抑菌防腐剂，在0-4℃温度下保存备用。
优选的，将步骤c中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1～1.4:1的质量比混合。1.2:1
优选的，将步骤c中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1～1.3:1的质量比混合。1.3:1
优选的，所述步骤c中，将步骤c中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1～1.2:1的质量比混合。
优选的，所述步骤c中，将步骤c中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1:1的质量比混合。
优选的，所述的甘草和葛根提取物抑菌防腐剂的制备方法，包括以下具体步骤：
a.甘草乙醇提取物的制备：将甘草粉末30g与浓度为70％的乙醇300g在三角瓶中混匀，用锡箔纸密封瓶口，在45℃下水浴80min，然后超声波处理60min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得甘草活性提取物。
b.葛根乙醇提取物的制备：将葛根粉末30g与浓度为70％的乙醇300g在三角瓶中混匀，用锡箔纸密封瓶口，在45℃下水浴80min，然后超声波处理55min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得葛根活性提取物。
c、将步骤a、b中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1:1的质量比混合后，用无菌水配制成300μg/ml，即得到天然的抑菌防腐剂，在4℃温度下保存备用。
混合甘草活性提取物一般包含有甘草甜素、甘草酸、甘草甙、甘草类黄酮、后幕比檀素、刺芒柄花素、槲皮素等，性状为黄色至棕黄色粉末，在医药领域应用广泛。葛根富含多糖、异黄酮类、香豆素和皂苷，也具有一定的抑菌活性。可见，甘草和葛根含有的活性成分不相同，故将二者配伍使用，能够达到一种更加高效的抑菌防腐效果。
本发明与现有技术相比具有的效果为：
提供了一种由甘草配伍葛根活性提取物制备天然抑菌防腐剂的方法。甘草和葛根属药食两用资源，该抑菌防腐剂可应用于食品、药品等方面，有利于甘草和葛根的开发和利用；本发明的天然抑菌防腐剂天然、无化学毒害、抑菌防腐广谱、高效、用量少、成本低，具有广阔的开发和应用前景。
本发明将70％乙醇甘草提取物和70％乙醇葛根提取物按质量比1:1配制的抑菌剂，总体效果较单独使用甘草乙醇提取物作用效果尤其好，因为甘草中主要抑菌作用物质为甘草甙等黄酮、类黄酮类物质，其与乙醇极性更为相近，则乙醇提取物中该成分百分含量最高，而葛根富含多糖、异黄酮类、香豆素和皂苷，具有一定的抑菌活性，所以本发明所制得的抑菌防腐剂，能够在食品保鲜方面得到更加高效的抑菌防腐效果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
a.甘草乙醇提取物的制备：将甘草粉末30g与浓度为70％的乙醇300g在三角瓶中混匀，用锡箔纸密封瓶口，在30℃下水浴65min，然后超声波处理45min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得甘草活性提取物。
b.葛根乙醇提取物的制备：将葛根粉末30g与浓度为70％的乙醇300g在三角瓶中混匀，用锡箔纸密封瓶口，在40℃下水浴65min，然后超声波处理60min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得活性提取物。
c.将步骤a、b中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1:1的质量比混合后，用无菌水配制成200μg/ml，即得到天然的抑菌防腐剂A，在0℃温度下保存备用。
实施例2
a.甘草乙醇提取物的制备：将甘草粉末30g与浓度为70％的乙醇300g在三角瓶中混匀，用锡箔纸密封瓶口，在50℃下水浴75min，然后超声波处理60min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得甘草活性提取物。
b.葛根乙醇提取物的制备：将葛根粉末30g与浓度为70％的乙醇300g在三角瓶中混匀，用锡箔纸密封瓶口，在30℃下水浴90min，然后超声波处理45min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得葛根活性提取物。
c.将步骤a、b中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1.2:1的质量比混合后，用无菌水配制成230μg/ml，即得到天然的抑菌防腐剂B，在1℃温度下保存备用。
实施例3
a.甘草乙醇提取物的制备：将甘草粉末30g与浓度为70％的乙醇300g在三角瓶中混匀，用锡箔纸密封瓶口，在40℃下水浴90min，然后超声波处理60min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得甘草活性提取物。
b.葛根乙醇提取物的制备：将葛根粉末30g与浓度为70％的乙醇300g在三角瓶中混匀，用锡箔纸密封瓶口，在50℃下水浴80min，然后超声波处理55min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得葛根活性提取物。
c.将步骤a、b中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1.3:1的质量比混合后，用无菌水配制成250μg/ml，即得到天然的抑菌防腐剂C，在2℃温度下保存备用。
实施例4
a.甘草乙醇提取物的制备：将甘草粉末30g与浓度为70％的乙醇300g在三角瓶中混匀，用锡箔纸密封瓶口，在45℃下水浴80min，然后超声波处理55min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得甘草活性提取物。
b.葛根乙醇提取物的制备：将葛根粉末30g与浓度为70％的乙醇300g在三角瓶中混匀，用锡箔纸密封瓶口，在35℃下水浴75min，然后超声波处理50min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得葛根活性提取物。
c.将步骤a、b中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1.4:1的质量比混合后，用无菌水配制成280μg/ml，即得到天然的抑菌防腐剂D，在3℃温度下保存备用。
实施例5
a.甘草乙醇提取物的制备：将甘草粉末30g与浓度为70％的乙醇300g在三角瓶中混匀，用锡箔纸密封瓶口，在45℃下水浴80min，然后超声波处理60min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得甘草活性提取物。
b.葛根乙醇提取物的制备：将葛根粉末30g与浓度为70％的乙醇300g在三角瓶中混匀，用锡箔纸密封瓶口，在45℃下水浴80min，然后超声波处理55min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得葛根活性提取物。
c、将步骤a、b中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1.5:1的质量比混合后，用无菌水配制成300μg/ml，即得到天然的抑菌防腐剂E，在4℃温度下保存备用。
下面结合具体实验说明本方法制备得到的甘草配伍葛根活性提取物体外抑菌作用。
1、菌种来源
大肠杆菌、葡萄球菌、八叠球菌和枯草芽孢杆菌来自本研究室保存的菌种。
2.菌悬液的制备和浓度测定
菌悬液制备：将菌体接种到装有30ml LB液体培养基的锥形瓶中，用封口膜封好瓶口，在37℃下，转速105r/min的摇床上震荡培养12h，即得菌悬液。
菌悬液的稀释和浓度测定：取10μl菌悬液加入到90μl无菌水稀释混匀后，取稀释混匀菌液10μl加入到90μl无菌水稀释，依此类推，直至菌悬液被稀释107倍后，取100μl均匀涂布到LB固体培养基表面，在37℃下培养12h后统计生长的菌落数量。经测定，供试的5种菌悬液浓度分别为：大肠杆菌3.76×1010个/ml，枯草芽孢杆菌3.20×1010个/ml，八叠球菌2.96×1010个/ml，葡萄球菌4.30×1010/ml。
3.抑菌作用实验
4种菌悬液都被稀释107倍后，分别取50μl到无菌PE管，各加入50μl上述提取的抑菌防腐剂(以50μl无菌水为对照)混匀后均匀涂布于LB固体培养基表面，在37℃下培养12h后统计生长的菌落数量。
4.抑菌实验结果
表1甘草配伍葛根活性提取物对4种细菌的抑制作用
实验结论：采用超声波破碎细胞处理，70％乙醇提取甘草和葛根的活性物质粉末质量比1～1.5:1配伍制备的抑菌防腐剂与对照相比，具有明显的抑制大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、八叠球菌和葡萄球菌生长的作用。
优点：天然、无化学毒害、抑菌防腐广谱、高效、用量少、成本低。
本发明认为将70％乙醇甘草提取物和70％乙醇葛根提取物按质量比1:1配制的抑菌剂，总体效果较单独使用甘草乙醇提取物作用效果好，因为甘草中主要抑菌作用物质为甘草甙等黄酮、类黄酮类物质，其与乙醇极性更为相近，则乙醇提取物中该成分百分含量最高，而葛根富含多糖、异黄酮类、香豆素和皂苷，具有一定的抑菌活性，所以本发明所制得的抑菌防腐剂，能够在食品保鲜方面得到更加高效的抑菌防腐效果。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的数据范围和原则之内，所作的任何修改、同等替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种甘草配伍葛根提取物抑菌防腐剂的制备方法，其特征是：包括以下步骤：
a.甘草乙醇提取物的制备：将甘草与70％乙醇按照料液质量比1:10-15在三角瓶中混匀，用锡箔纸密封瓶口，在30-50℃下水浴60-90min，然后超声波处理45-60min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得甘草活性提取物；
b.葛根乙醇提取物的制备：将葛根与70％乙醇按照料液比1：10-15混匀，锡箔纸密封，30-50℃水浴60-90min，然后超声波处理45-60min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得葛根活性提取物；
c.将步骤a、步骤b中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1～1.5:1质量比混合后，用无菌水配制成200～300μg/ml，即得到天然的抑菌防腐剂，在0-4℃温度下保存备用。
2.如权利要求1所述的甘草和葛根提取物抑菌防腐剂的制备方法，其特征是：将步骤c中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1～1.4:1的质量比混合。1.2:1。
3.如权利要求1所述的甘草和葛根提取物抑菌防腐剂的制备方法，其特征是：将步骤c中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1～1.3:1的质量比混合。1.3:1。
4.如权利要求1所述的甘草和葛根提取物抑菌防腐剂的制备方法，其特征是：所述步骤c中，将步骤c中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1～1.2:1的质量比混合。
5.如权利要求1所述的甘草和葛根提取物抑菌防腐剂的制备方法，其特征是：所述步骤c中，将步骤c中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1:1的质量比混合。
6.如权利要求1所述的甘草和葛根提取物抑菌防腐剂的制备方法，其特征是包括以下具体步骤：
a.甘草乙醇提取物的制备：将甘草粉末30g与浓度为70％的乙醇300g在三角瓶中混匀，用锡箔纸密封瓶口，在45℃下水浴80min，然后超声波处理60min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得甘草活性提取物。
b.葛根乙醇提取物的制备：将葛根粉末30g与浓度为70％的乙醇300g在三角瓶中混匀，用锡箔纸密封瓶口，在45℃下水浴80min，然后超声波处理55min，以10 000r/min速度离心10min，取上清液，放入旋转蒸发仪浓缩成膏状，浓缩温度60℃，再经冷冻干燥仪冷冻干燥成粉末，即得葛根活性提取物。
c、将步骤a、b中的甘草活性提取物、葛根活性提取物按1:1的质量比混合后，用无菌水配制成300μg/ml，即得到天然的抑菌防腐剂，在4℃温度下保存备用。
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|---|---|---|---|---|
| CN108094825A (zh) * | 2017-12-30 | 2018-06-01 | 吴迪 | 一种基于甘草制备食品防腐剂的方法 |
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| CN102669191A (zh) * | 2012-04-26 | 2012-09-19 | 天津郁美净集团有限公司 | 植物抑菌组合物及其在化妆品中的应用 |
| CN103653175A (zh) * | 2013-12-21 | 2014-03-26 | 栾晓健 | 一种天然食品防腐剂 |
| CN103999885A (zh) * | 2014-06-17 | 2014-08-27 | 吉首大学 | 一种天然植物源竹材防腐剂及其制备方法 |
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