CN107041488A

CN107041488A - 一种水蚤专用高硒饲料及其使用方法

Info

Publication number: CN107041488A
Application number: CN201710185983.4A
Authority: CN
Inventors: 黄蓓; 陈凌云; 汤成华; 张意; 张玉英
Original assignee: ANHUI HUAXIN NATURAL MEDICINE Co Ltd; Anhui University
Current assignee: ANHUI HUAXIN NATURAL MEDICINE Co Ltd; Anhui University
Priority date: 2017-03-27
Filing date: 2017-03-27
Publication date: 2017-08-15
Anticipated expiration: 2037-03-27
Also published as: CN107041488B

Abstract

本发明公开了一种水蚤专用高硒饲料配方及其应用。与用池塘水培养的水蚤相比，用本专用高硒饲料培养下的水蚤其存活率可提高10%‑15%、产卵率提高18%‑23%、水蚤体内GSH‑PX活性提高163%‑180%、T‑SOD活性提高83.67%‑85.72%。该配方含硒量高，所用原料培养成本低，生长周期短，规模化养殖技术成熟，培养出的水蚤繁殖力、抗逆性强，营养价值高，可用于水蚤的商业化生产。

Description

一种水蚤专用高硒饲料及其使用方法

技术领域

本发明属于饲料研制及应用领域，涉一种水蚤专用高硒饲料及其使用方法。

背景技术

水蚤俗称红虫，是禽、畜、鱼类的好饲料，不污染水、不得寄生虫病。其干品含蛋白质60.4%、脂肪21.8%、糖1.1%、酪氨酸4.27%、色氨酸3.62%、精氨酸10.92%、组氨酸2.69%、胱氨酸1.17%、蛋氨酸3.45%.还含丰富的维生素和矿物质，营养价值优于鱼粉。水蚤作为鱼饲料在很多方面有不可代替性，如，经济价值很高的鲟鱼和鲑鱼、革胡子鲶鱼、幼鱼必须吃水蚤，否则成活率极低；名贵金鱼也必须喂蚤，否则易患消化不良病。

水蚤也是实验室用于环境检测、动物生长发育研究的模式生物之一，水蚤的培养环境和饲养条件是保证实验数据可信性的重要标准。

目前水蚤的培养主要为绿水培养和单独的酵母，单独的螺旋藻培养，但是池塘水培养的水蚤卫生条件无法确定，单独的酵母培养或螺旋藻培养则易爆缸，需定期清理，耗时耗力。

酵母是一些单细胞真菌，并非系统演化分类的单元。是子囊菌、担子菌等几科单细胞真菌的通称，一般泛指能发酵糖类的各种单细胞真菌，可用于酿造生产。酵母含有丰富的蛋白质、维生素和酶等生理活性物质，医药上将其制成酵母片如食母生片，用于治疗因不合理的饮食引起的消化不良症。

Se是动物体内的必需微量营养元素，谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶，硒是GSH-PX的必需部分，每克分子酶含4克原子硒。测定GSH-PX的活力可以作为衡量机体硒水平的一项生化指标。超氧化物歧化酶（SOD）对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用，此酶能清除超氧阴离子自由基保护细胞免受损伤。通过测定机体内的GSH-PX与T-SOD活性，可以反映机体细胞的健康状态及抗逆性能力。硒酵母中有机硒含量较高,是一种比较理想的硒营养剂。

研究发现，水蚤不能直接利用藻类做食物，必须加入酵母帮助其消化藻类食物。李荷超等人利用小球藻酵母粉做到水蚤的规模化养殖，螺旋藻与其具有相似的营养价值，且培养成本低，生长周期短，规模化养殖技术成熟，目前市场上尚未见到硒酵母螺旋藻饲料的报道。

鉴于以上分析，本发明利用硒酵母与螺旋藻以特定比例混合，控制硒含量，得到水蚤专用的硒酵母培养饲料。通过喂食硒酵母螺旋藻饲料培养出的水蚤可作为饵料喂养出营养价值高的鱼虾类水产品，又可培育出无污染健康的模式动物水蚤用于实验室的科学研究。

发明内容

本发明的目的是利用硒酵母螺旋藻饲料培育出高繁殖力，高营养价值，抗逆性强的水蚤，用于水蚤的商业生产及无污染健康的模式动物水蚤用于实验室的科学研究。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种高产养殖水蚤专用高硒饲料，其特征在于，制备方法为：

将新鲜螺旋藻与硒酵母粉,以适当比例混合后加适量水制成悬浮液，使硒的最终浓度为0.03-0.05ug/ml,螺旋藻0.03-0.05g/ml,即可。

所述的一种高产养殖水蚤专用高硒饲料，其特征在于，

所述的硒酵母粉中的硒含量为1mg～2.5mg/g。

所述的一种高产养殖水蚤专用高硒饲料，其特征在于，所述的适量水指的是隔夜自来水0.8-1.2L。

所述的一种高产养殖水蚤专用高硒饲料，其特征在于，

新鲜螺旋藻的培养方法：将螺旋藻种投入螺旋藻培养液中培养，接种量V/V为9-11%,温度24-26℃，光照强度3900-4100Lx，培养8-10天后，用滤网捞出1/3左右的螺旋藻，用水冲洗干净后，即得新鲜螺旋藻备用，剩余的藻液继续培养。

所述的高产养殖水蚤专用高硒饲料的使用方法，其特征在于，取制得的硒酵母螺旋藻饲料悬浮液静置0.8-1.2小时，即可加入水蚤进行培养。

所述的高产养殖水蚤专用高硒饲料的使用方法，其特征在于，水蚤进行培养后每2天投食一次即可。

水蚤生长状态及抗逆性检测

水蚤生长状态可通过水蚤存活率、胚胎成活率进行检测。水蚤抗逆性则可通过GSH-PX与T-SOD活性测定来判断。

与用池塘水喂养的水蚤相比存活率可提高10%-15%、抱卵率可提高18%-23%、水蚤体内GSH-PX活性可提高163%-180%、T-SOD活性提高83.67%-85.72% 。获得高产水蚤的硒酵母螺旋藻饲料，以便培育出高繁殖力，高营养价值，抗逆性强的水蚤，用于水蚤的商业生产。

1.水蚤硒酵母-螺旋藻饲料配制

将新鲜螺旋藻与硒酵母粉(硒含量1mg～2.5mg/g),以适当比例混合后加隔夜自来水1L制成悬浮液，使硒的最终浓度为0.04ug/ml,螺旋藻0.04g/ml。

螺旋藻的培养：

将螺旋藻种投入螺旋藻培养液培养，接种量为10%（V/V）、温度25度、光照强度4000Lx培养8-10天后，用滤网捞出1/3螺旋藻，用水冲洗干净后备用，剩余的藻液继续培养。螺旋藻培养的培养基配方为：NaHCO₃ 16.8g/L，NaNO₃ 32.5g/L，K₂HPO₄0.5g/L，NaCl 1.0g/L, NaEDTA0.08g/L，MgSO₄.7H₂O O.2g/L，CaCl 20.04g/L.

2.水蚤饲养方法

取1制成的硒酵母螺旋藻饲料悬浮液静止1小时（避免螺旋藻进入水蚤气管使其窒息死亡），即可加入水蚤进行培养，每2天投食一次即可。

3.水蚤存活率检测

在5ml螺旋藻悬浮液中加入10只发育初期水蚤培养32小时后，记录其剩余数目，计算其存活率。

存活率(%) = 剩余水蚤数/总水蚤数 x 100/100。

4.水蚤抱卵率的检测

在24孔培养板的每孔中放2只水蚤成熟雌体进行培养，等其产卵后，将同一发育期的水蚤取出后每孔2只放入培养板继续培养，以此得到一定数目同一发育期的水蚤。

在5ml螺旋藻悬浮液中加入10只同一发育期水蚤培养48小时后,取出水蚤于载玻片上，用70%乙醇固定2分钟，显微镜下观察拍照，观察其生理状态，计数小水蚤的个数，计算水蚤抱卵率。

5.GSH-PX活性和T-SOD活性的测定

样品准备：在24孔培养板的每孔中放2只水蚤成熟雌体进行培养，等其产卵后，将同一发育期的水蚤取出后每孔2只放入培养板继续培养，以此得到一定数目同一发育期的水蚤。

在5ml螺旋藻悬浮液中加入10只同一发育期水蚤培养32小时后，取5只水蚤测量其湿重后加10倍体积生理盐水4℃保存。

将4℃保存的样品在冰浴条件下置于超声波破碎仪中,调整探头位置使之离Ep管底lcm,破碎条件为破碎3see、间歇3see,输出功率为400w,破碎时间为5min,将破碎完成的样品置于高速离心机中13000转离心10min,取上清制备成1%的组织匀浆,用于蛋白含量和GSH-PX活性与T-SOD活性的测定。

检测方法：以南京建成生物工程研究所研发的GSH-PX活性和T-SOD活性测试盒检测步骤进行检测.

本发明的有益效果为：

与用池塘水培养的水蚤相比，用本专用高硒饲料培养下的水蚤其存活率可提高10%-15%、抱卵率提高18%-23%、水蚤体内GSH-PX活性提高163%-180%、T-SOD活性提高83.67%-85.72%。

而只用螺旋藻-普通酵母培养的水蚤其存活率提高7%-10%、抱卵率提高10%-17%，GSH-PX活性降低90.54%-92.36%、T-SOD活性提高84.29%-89.15%。

与池塘水喂养的水蚤相比硒的主要作用是提高水蚤的存活率、抱卵率、GSH-PX活性、T-SOD活性；与酵母加螺旋藻喂养的水蚤相比硒的主要作用是提高水蚤的存活率、抱卵率、GSH-PX活性，而对T-SOD活性则无太大影响。

水蚤俗称红虫，是禽、畜、鱼类的好饲料，也是实验室用于环境检测、动物生长发育研究的模式生物之一。本发明公开了一种水蚤专用高硒饲料配方及其应用。与用池塘水培养的水蚤相比，用本专用高硒饲料培养下的水蚤其存活率可提高10%-15%、产卵率提高18%-23%、水蚤体内GSH-PX活性提高163%-180%、T-SOD活性提高83.67%-85.72%。该配方含硒量高，所用原料培养成本低，生长周期短，规模化养殖技术成熟，培养出的水蚤繁殖力、抗逆性强，营养价值高，可用于水蚤的商业化生产。

附图说明

图1为专用高硒饲料喂养的水蚤繁殖状况图。

具体实施方式

实施例1：中华哲水蚤的硒酵母螺旋藻饲料培养：

将螺旋藻种投入螺旋藻培养液培养，接种量为10%（V/V）, 温度25度，光照强度4000Lx培养8天后，取培养的螺旋藻200g，饲料酵母200mg（硒含量为1mg/g),配制培养液5L，加入适量水蚤（硒浓度0.04ug/ml）， 48小时后与池塘水培养的水蚤相比其存活率提高12.18%，产卵率提高20.03%，GSH-PX活性提高170.26%,T-SOD活性提高85.67%。

实施例2：裸腹水蚤的硒酵母螺旋藻饲料培养

将螺旋藻种投入螺旋藻培养液培养，接种量为10%（V/V）, 温度25度，光照强度4000Lx培养8天后，取培养的螺旋藻200g，饲料酵母130mg（硒含量为1.5mg/g),配制培养液5L，加入适量水蚤（硒浓度0.04ug/ml），48小时后与池塘水培养的水蚤相比其存活率提高10.53%，产卵率18.72%，GSH-PX活性提高175.58%，T-S0D活性提高84.15%。

实施例3：实验室裸腹水蚤的硒酵母螺旋藻饲料培养

将螺旋藻种投入螺旋藻培养液培养，接种量为10%（V/V）, 温度25度，光照强度4000Lx培养8天后，取培养的螺旋藻1g，饲料酵母2.6mg（硒含量为1.5mg/g),配制培养液100ml,加入适量水蚤（硒浓度0.04ug/ml），48小时后与绿水培养的水蚤相比其存活率提高14.36%，产卵率22.90%，GSH-PX活性提高178.64%，T-S0D活性提高87.29%。

实施例4、一种高产养殖水蚤专用高硒饲料，制备方法为：

将新鲜螺旋藻与硒酵母粉,取培养的螺旋藻1g，饲料硒酵母2.0mg（硒含量为2.0mg/g),配制培养液100ml,加入适量水蚤（硒浓度0.04ug/ml)喂养即可。

如图1所示为专用高硒饲料喂养的水蚤繁殖状况图；

在显微镜下观察到的专用饲料喂养的水蚤，其中A为池塘水培养的水蚤其育儿袋有3只待出生的小水蚤。B为喂食4.0mg/ml 酵母螺旋藻培养的水蚤，其其育儿袋有4只待出生的小水蚤.C为喂食本实施例4所得硒含量为0.04ug /ml，酵母含量为20ug/ml的硒酵母螺旋藻培养的水蚤，可见旁边有已出生的4只水蚤及育儿袋中待出生的1只水蚤。

Claims

1.一种高产养殖水蚤专用高硒饲料，其特征在于，制备方法为：

2.根据权利要求1所述的一种高产养殖水蚤专用高硒饲料，其特征在于，

所述的硒酵母粉中的硒含量为1mg～2.5mg/g。

3.根据权利要求1所述的一种高产养殖水蚤专用高硒饲料，其特征在于，所述的适量水指的是隔夜自来水0.8-1.2L。

4.根据权利要求1所述的一种高产养殖水蚤专用高硒饲料，其特征在于，

5.一种如权利要求1所述的高产养殖水蚤专用高硒饲料的使用方法，其特征在于，取制得的硒酵母螺旋藻饲料悬浮液静置0.8-1.2小时，即可加入水蚤进行培养。

6.根据权利要求5所述的高产养殖水蚤专用高硒饲料的使用方法，其特征在于，水蚤进行培养后每2天投食一次即可。