CN107007830A - 一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物的用途、疫苗及制备方法 - Google Patents
一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物的用途、疫苗及制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107007830A CN107007830A CN201710408550.0A CN201710408550A CN107007830A CN 107007830 A CN107007830 A CN 107007830A CN 201710408550 A CN201710408550 A CN 201710408550A CN 107007830 A CN107007830 A CN 107007830A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- toxoplasm
- vaccine
- avirulent strain
- herbal polysaccharide
- treatment
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 30
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 30
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 28
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 64
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 13
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 229920001491 Lentinan Polymers 0.000 claims description 20
- 229940115286 lentinan Drugs 0.000 claims description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 11
- 201000005485 Toxoplasmosis Diseases 0.000 claims description 8
- 241001061264 Astragalus Species 0.000 claims description 4
- 235000006533 astragalus Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 210000004233 talus Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 8
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 210000001239 CD8-positive, alpha-beta cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 2
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 abstract description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 abstract description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 16
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001815 biotherapy Methods 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 6
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 6
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 6
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- 208000003609 Bile Duct Adenoma Diseases 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 3
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- WBNQDOYYEUMPFS-UHFFFAOYSA-N N-nitrosodiethylamine Chemical compound CCN(CC)N=O WBNQDOYYEUMPFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 210000000013 bile duct Anatomy 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 229940126678 chinese medicines Drugs 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000011357 CAR T-cell therapy Methods 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003445 biliary tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 201000001531 bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- ZSQANMZWGKYDER-JXMROGBWSA-N clocinizine Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)N1CCN(C\C=C\C=2C=CC=CC=2)CC1 ZSQANMZWGKYDER-JXMROGBWSA-N 0.000 description 1
- 229960003826 clocinizine Drugs 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000003953 foreskin Anatomy 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 1
- 238000013412 genome amplification Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 208000033065 inborn errors of immunity Diseases 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 244000309459 oncolytic virus Species 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 208000028529 primary immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000011127 radiochemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012744 reinforcing agent Substances 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000010570 urinary bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55583—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
- A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明公开了一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物的用途、疫苗及制备方法，中药多糖佐剂可通过免疫协同作用，与弓形体的免疫激活作用配合，多靶点高效激活抗肿瘤的某些特异免疫调控通路，特别是与杀伤性T细胞免疫激活有关的抗肿瘤免疫通路可用于治疗肿瘤及制备治疗肿瘤的生物药物，尤其用于治疗消化道肿瘤，特别是对胆管癌具有显著的治疗作用。
Description
技术领域
本发明涉及肿瘤生物治疗领域，具体涉及一种肿瘤药物、疫苗及制备方法。
背景技术
包括胆管癌在内的消化道肿瘤（包括胃癌、结直肠癌、肝胆胰癌等） 是我国的多发性癌症，严重威胁人民健康。胆管癌是一种起源于胆道上皮的高度恶性的肿瘤，胆管癌的发病率占消化道恶性肿瘤的3%，其发病率和死亡率，近年来在全球范围内持续增加，在我国胆管癌的发病率也在快速上升。胆管癌的增生性特点是肿瘤微血管极为丰富并且肿瘤基因异质性强，这使得诸如化疗放疗等辅助疗法治疗困难。目前，肿瘤的根治性切除和肝脏移植是已知的根治性治疗胆管癌方法，但由于胆管癌起病隐匿，易早期出现淋巴浸润及远处转移，患者住院时可能已经失去最佳手术时机，导致根治性切除率低且不稳定，术后年生存率极低。因此，迫切需要寻找新的胆管癌治疗方法。
肿瘤免疫治疗是目前国内外肿瘤研究的热点，肿瘤免疫治疗通过提高肿瘤细胞的免疫原性和对效应细胞杀伤的敏感性，激发和增强机体抗肿瘤免疫应答；目前肿瘤免疫治疗方法主要包括：单克隆抗体类免疫检查点抑制剂（如CTLA-4单抗、PD-1/PD-L1单抗等）、CAR-T细胞疗法、小分子抑制剂（如IDO）、肿瘤疫苗（如肿瘤抗原肽段疫苗、树突状细胞（DC）疫苗、溶瘤病毒疫苗等），以及生物治疗（如病原体疟原虫疫苗）等。虽然这些治疗方法在其他肿瘤的治疗中取得了一定的效果，但是对于胆管癌效果并不理想。
生物治疗涉及一切应用生物大分子进行治疗的方法，生物治疗通过调动宿主的天然防御机制或给予天然产生的针对性、靶向性很强的物质，来提高患者自身免疫能力，实现对肿瘤的治疗；目前生物治疗已成为继传统手术、放疗和化疗后最有发展前途的肿瘤治疗手段之一。生物治疗的一个重要特征是增强机体的免疫功能。大量的研究已表明，机体免疫系统对于肿瘤的发生发展具有重要的作用，作为肿瘤免疫防御系统，免疫系统可通过清除或抑制病毒感染来保护机体免受病毒诱发肿瘤；及时清除病原体和控制炎症防止建立有利于肿瘤发生的炎症环境；通过肿瘤免疫监视，特异性识别和消灭癌细胞或癌前细胞。目前研究表明，T淋巴细胞，尤其是CD8+T细胞是机体免疫系统监视和抑制肿瘤的最主要效应细胞。
虽然T细胞在许多肿瘤中存在并激活，但通常它们活性比较低，这可能主要归咎于抑制肿瘤微环境中T细胞的功能失调，肿瘤细胞为逃逸免疫监视发展了多种策略逃避或抑制T细胞应答：通过下调肿瘤细胞抗原或I类MHC分子，使T细胞发现不了肿瘤细胞；通过表达细胞毒性 T 细胞的抑制分子(PD-L1，CTLA-4)抑制肿瘤抗原特异性T细胞的活化；通过募集调节性T细胞或髓源性抑制细胞等抑制T细胞增殖和活化。肿瘤抗原特异性 T 细胞不但是机体免疫监视肿瘤的主要效应机制，同时也是肿瘤的免疫逃避的核心环节。如何有效激活机体T细胞免疫应答是目前肿瘤免疫治疗研究的重点。
弓形体（细胞内寄生病原体）是具有很强感染宿主细胞能力的单细胞真核微生物，感染后在宿主细胞内生存和复制，造成弓形体病，由于免疫正常宿主通常可通过免疫力清除弓形体感染，弓形体病相对危害小，目前多作为细胞内模式病原生物来研究。研究发现，弓形体感染宿主产生的细胞因子、化学因子，以及T细胞免疫反应具有良好的抗肿瘤效果。例如，50年前弓形体感染已被发现具有抗肿瘤效果，来自于死的弓形体的蛋白提取物被证明可抑制多种肿瘤的生长，包括纤维肉瘤、肺癌、黑色素瘤、肉瘤及化学方法诱导的肿瘤等。应用活的弓形体感染小鼠也被发现可抑制小鼠膀胱癌、脑肿瘤、白血病、Lewis肺癌、黑色素瘤等多种癌症的生长。然而，由于野生型弓形体的感染对宿主的危害问题，活的弓形体不太适合应用于肿瘤患者的治疗，另外癌症患者常伴有免疫力低下，更易于受到弓形体的感染伤害。
无毒株弓形体是一种通过同源重组特异敲除弓形体CPS基因的尿嘧啶营养缺陷型虫株，因其感染后不能在宿主细胞内复制而基本无毒。体外培养时可通过在培养基中添加一定浓度的尿嘧啶维持重组弓形体的正常侵袭和存活，但其不能在宿主细胞或小鼠体内复制，因此对宿主基本无毒，从而保证了疫苗的安全性。香菇多糖是从优质香菇子实体中提取的有效活性成分，是香菇的主要有效成分，主要为甘露糖甘肽，其余为多种糖分和各种氨基酸等，是一种宿主免疫增强剂，具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等作用，目前已广泛应用于胃癌、结直肠癌等的临床辅助治疗。
发明内容
为了克服现有技术的不足，一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物的用途、疫苗及制备方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物的用途，该组合物应用于治疗肿瘤及制备治疗肿瘤的药物。
进一步，该组合物应用于治疗消化道肿瘤及制备治疗消化道肿瘤的药物。
进一步，组合物应用于治疗胆管癌及制备治疗胆管癌的药物。
一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物制成的疫苗，用于治疗肿瘤。
进一步，无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物制成的疫苗用于治疗消化道肿瘤。
进一步，无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物制成的疫苗用于治疗胆管癌。
上述疫苗的制备方法为：用无毒株弓形体感染HFF细胞，用选择培养基进行培养，从HFF细胞离心收集新鲜破壁的无毒株弓形体，用PBS振荡溶解中药多糖，然后将收集的无毒株弓形体重悬于中药多糖佐剂中制成疫苗。
进一步，中药多糖佐剂选自香菇多糖、黄芪多糖、人参多糖或灵芝多糖中的一种或多种，优选香菇多糖佐剂。
本发明的有益效果是：本发明的无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物疫苗可用于治疗肿瘤及制备治疗肿瘤的药物，尤其用于治疗消化道肿瘤，特别是对胆管癌具有显著的治疗作用。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
图1是弓形体CPSⅡ6.6Kb基因片段的PCR结果示意图；
图2是重组质粒 pBluescript/CPSⅡ结构示意图；
图3是重组质粒 pBluescript/CPS/HXG结构示意图；
图4是重组质粒pBluescript/CPSⅡ/HXG的HindIII酶切结果图；
图5是PCR鉴定CPS基因敲除的无毒株弓形体的结果图；
图6是胆管瘤（CA）的发生率比较图；
图7是胆管瘤（CA）的肿瘤个数比较图；
图8是胆管癌（CCA）的发生率比较图；
图9是胆管癌（CCA）的肿瘤个数比较图。
具体实施方式
一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物的用途，该组合物应用于治疗肿瘤及制备治疗肿瘤的药物，目前的药物研究表明，香菇多糖、黄芪多糖、人参多糖、灵芝多糖对肿瘤具有治疗效果，本发明的中药多糖分别采用自香菇多糖、黄芪多糖、人参多糖、灵芝多糖中的一种、任一两种及两种以上的混合物。
中药多糖佐剂可通过免疫协同作用，与弓形体的免疫激活作用配合，多靶点高效激活抗肿瘤的某些特异免疫调控通路，特别是与杀伤性T细胞免疫激活有关的抗肿瘤免疫通路，通过腹腔注射小鼠实验证明，对膀胱癌、脑肿瘤、白血病、Lewis肺癌、黑色素瘤等多种癌症具有一定治疗作用，对治疗消化道肿瘤具有明显的治疗效果，对胆管癌的治疗效果尤为显著，因此，这里的中药多糖是指从植物药、菌类中提取，对肿瘤具有治疗效果的多糖，在本发明的研发及实验过程中，中药多糖一般采用香菇多糖。
无毒株弓形体和中药多糖佐剂的组合物可以制成用于治疗肿瘤的疫苗，该疫苗的制备方法为：无毒株弓形体感染HFF细胞（人包皮成纤维细胞）（ATCC），用选择培养基（DMEM+3%FBS+100 U/ml青霉素+100μg/ml链霉素+25μg/ml霉酚酸+50μg/ml黄嘌呤+250μM尿嘧啶）进行培养，从HFF细胞离心收集新鲜破壁的无毒弓形体，用PBS振荡溶解香菇多糖（山西泰盛制药有限公司，国药准字H20064611），然后将收集的无毒弓形体重悬于香菇多糖佐剂中。
疫苗需要冷冻保存，保存时无毒株弓形体的浓度要大于2×107个/mL，冷冻液是：选择培养基+20%FBS+10%DMSO或选择培养基+15%乙二醇，疫苗在-80℃可保存1年以上，在液氮条件下可保存5年。使用时配在选择培养基+15%乙二醇的细胞保护液里，在4℃下可保存2-3天。
无毒株弓形体的制备方法如下（参见参考文献：1：Nature 2002, 415(6874):926-9；2：Infect Immun 2010, 78(9):3744-5；3：J Vis Exp 2013(77)：e50598）：
1、pBluescript/CPSⅡ质粒的构建
利用PCR技术，从弓形体基因组扩增两端含有限制性内切酶HindШ识别位点的CPSⅡ6.6Kb基因片段。利用 Easy pure gel extraction kit胶回收试剂盒（北京全式金（Transgen Biotech），货号是#EG101）回收PCR产物。用HindIII（New England Biolabs公司，货号是#R0104）酶切6.6Kb DNA片段，并用DNA clean-up kit试剂盒（康为生物（CWbiotech, Beijing），货号是#CW2301M）回收酶切的产物，结果参照图1，命名为CPSⅡ6.6Kb。利用PCR技术使线性化pBluescript vector带CPS Ⅱ基因序列接头，产物命名为pBluescript vector（Stratagene）。利用无缝连接试剂盒Trelief™ SoSoo Cloning Kit（北京擎科，货号是TSV-V1），连接pBluescript vector和CPSⅡ6.6Kb。利用热激法将重组质粒转化到大肠杆菌（天根生化科技有限公司，货号#CB104）。利用Easy pure plasmidminiPrep kit（北京全式金（Transgen Biotech），货号是#EM101）抽提质粒，由北京擎科测序鉴定，结果参照图2，获得pBluescript/CPSⅡ质粒。
2、pBluescript/CPSⅡ/HXG质粒的构建
设计含有接头的引物，利用PCR技术，从Pmini-HXG质粒扩增筛选标记HXGPRT，利用Easypure gel extraction kit胶回收试剂盒（北京全式金（Transgen Biotech），货号是#EG101）纯化DNA，命名为HXG（BamHI）。用BamHІ酶（New England Biolabs公司，货号是#R0136）切重组质粒pBluescript/CPSⅡ。利用Easy pure gel extraction kit胶回收试剂盒（北京全式金（Transgen Biotech），货号是#EG101）回收大片段的线性载体，命名为pBluescript/CPSⅡ（BamHІ）。利用公司的无缝连接试剂盒Trelief™ SoSoo Cloning Kit（北京擎科，货号是TSV-V1），连接pBluescript/CPSⅡ（BamHІ）和HXG（BamHІ）。利用热激法将重组质粒转化到大肠杆菌。 利用Easy pure plasmid miniPrep kit（北京全式金（Transgen Biotech），货号是#EM101）抽提质粒，由北京擎科测序鉴定，结果参照图3，获得重组质粒pBluescript/CPSⅡ/HXG。利用无内毒素中提试剂盒（天根生化科技有限公司，货号#DP117）抽提重组质粒pBluescript/CPSⅡ/HXG。用NEB公司的HindIII（New EnglandBiolabs公司，货号是#R0104）酶切质粒，结果参照图4。利用Easy pure gel extractionkit胶回收试剂盒（北京全式金（Transgen Biotech），货号是#EG101）回收并乙醇沉淀纯化大片段DNA，获得CPSⅡ/HXG（HindIII）片段。
3、无毒株弓形体cps的构建
将CPSⅡ/HXG（HindIII）片段利用电穿孔系统(美国BTX ECM830 电穿孔仪)转至弓形体（RHΔku80Δhxgprt），将电转的弓形体接种到HFF细胞，利用含Mycophenolic acid 25 μg/mL、Xanthine 50 μg/mL、Uracil 250μM的DMEM培养基培养筛选目的弓形体并进行PCR验证，结果参照图5。
4、无毒株弓形体和香菇多糖佐剂组合物疫苗用于治疗胆管癌实验
胆管癌小鼠模型参照参考文献（Gastroenterology 2011，141(1):378-88）进行。简而言之，Balb/c小鼠每周腹腔注射二乙基亚硝胺（DEN）2次，连续2周，2周后行左和中胆管结扎，1周后进行DEN口服给药。同时在小鼠胆管癌建模过程，用香菇多糖和无毒株弓形体联合疫苗进行治疗。从HFF细胞离心收集新鲜破壁的无毒弓形体，用PBS振荡溶解香菇多糖（山西泰盛制药有限公司，国药准字H20064611），然后将收集的无毒弓形体重悬于香菇多糖佐剂中制备联合疫苗。分别在小鼠胆管癌建模的第2、5、9、12、17、18、20、22周，腹腔注射疫苗，无毒弓形体的剂量是1×106个/小鼠，香菇多糖佐剂的剂量是40mg/kg。分四组：无治疗组，PBS；香菇多糖治疗组，lentinan；无毒株弓形体治疗组，cps；香菇多糖和无毒株弓形体联合治疗组，cps + Lentinan。28周观察小鼠胆管肿瘤形成情况，参照图6至图9，结果显示，与无治疗组相比较，无毒株弓形体治疗可显著降低胆管瘤和胆管癌的发生率及肿瘤数目，而无毒株弓形体和香菇多糖佐剂组合物联合治疗的效果更为明显，具有统计学意义（P<0.05）。
Claims (9)
1.一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物的用途，该组合物应用于治疗肿瘤及制备治疗肿瘤的药物。
2.一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物的用途，该组合物应用于治疗消化道肿瘤及制备治疗消化道肿瘤的药物。
3.一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物的用途，该组合物应用于治疗胆管癌及制备治疗胆管癌的药物。
4.一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物制成的疫苗，用于治疗肿瘤。
5.一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物制成的疫苗，用于治疗消化道肿瘤。
6.一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物制成的疫苗，用于治疗胆管癌。
7.上述权利要求4-6所述疫苗的制备方法为：用无毒株弓形体感染HFF细胞，用选择培养基进行培养，从HFF细胞离心收集新鲜破壁的无毒株弓形体，用PBS振荡溶解中药多糖，然后将收集的无毒株弓形体重悬于中药多糖佐剂中制成疫苗。
8.上述权利要求1-6中，中药多糖佐剂选自香菇多糖、黄芪多糖、人参多糖、灵芝多糖中的一种或多种。
9.上述权利要求1-6中，中药多糖佐剂选用香菇多糖佐剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710408550.0A CN107007830B (zh) | 2017-06-02 | 2017-06-02 | 一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物的用途、疫苗及制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710408550.0A CN107007830B (zh) | 2017-06-02 | 2017-06-02 | 一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物的用途、疫苗及制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107007830A true CN107007830A (zh) | 2017-08-04 |
| CN107007830B CN107007830B (zh) | 2020-07-14 |
Family
ID=59452662
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710408550.0A Expired - Fee Related CN107007830B (zh) | 2017-06-02 | 2017-06-02 | 一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物的用途、疫苗及制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107007830B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114191560A (zh) * | 2022-02-09 | 2022-03-18 | 中山大学 | 用于治疗实体肿瘤的免疫治疗组合药物 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101090633A (zh) * | 2004-09-17 | 2007-12-19 | 莲见国际研究基金会 | 树突细胞肿瘤注射（dcti）疗法 |
| CN105079801A (zh) * | 2015-08-14 | 2015-11-25 | 新疆大学 | 肉苁蓉多糖作为疫苗佐剂的应用 |
-
2017
- 2017-06-02 CN CN201710408550.0A patent/CN107007830B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101090633A (zh) * | 2004-09-17 | 2007-12-19 | 莲见国际研究基金会 | 树突细胞肿瘤注射（dcti）疗法 |
| CN105079801A (zh) * | 2015-08-14 | 2015-11-25 | 新疆大学 | 肉苁蓉多糖作为疫苗佐剂的应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| KIAH L. SANDERS ET AL.: "Attenuated Toxoplasma gondii stimulates immunity to pancreatic cancer by manipulation of myeloid cell populations", 《CANCER IMMUNOL RES.》 * |
| 蔡永春 等: "中药多糖防治肿瘤的研究进展", 《中国中西医结合杂志》 * |
| 郑昱婧 等: "中药多糖在抗肿瘤免疫中的研究进展", 《生命的化学》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114191560A (zh) * | 2022-02-09 | 2022-03-18 | 中山大学 | 用于治疗实体肿瘤的免疫治疗组合药物 |
| WO2023151202A1 (zh) * | 2022-02-09 | 2023-08-17 | 中山大学 | 用于治疗实体肿瘤的免疫治疗组合药物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107007830B (zh) | 2020-07-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3215520B1 (en) | Cancer immunotherapy using virus particles | |
| CN105821039B (zh) | 联合免疫基因抑制HBV复制的特异性sgRNA、表达载体及其应用 | |
| Aly | Cancer therapy and vaccination | |
| CN102277387B (zh) | 基因载体系统及其制备方法 | |
| CN109593693B (zh) | 一株大肠杆菌Nissle 1917抗肿瘤靶向工程菌及其构建方法与应用 | |
| Cai et al. | The construction of a new oncolytic herpes simplex virus expressing murine interleukin‐15 with gene‐editing technology | |
| WO2017197624A1 (en) | Purine-scaffold tlr7 ligands and conjugate thereof | |
| Lu et al. | A biotin-avidin-system-based virus-mimicking nanovaccine for tumor immunotherapy | |
| Koellhoffer et al. | Cowpea mosaic virus and natural killer cell agonism for in situ cancer vaccination | |
| CN102238959B (zh) | 包含卡介菌多糖和卡介菌核酸的组合物及其在制备药剂中的应用 | |
| AU2020103637A4 (en) | Recombinant oncolytic herpes simplex virus type ii and its pharmaceutical composition | |
| CN107007830A (zh) | 一种无毒株弓形体和中药多糖佐剂组合物的用途、疫苗及制备方法 | |
| CN116966281A (zh) | 工程化t细胞荷载溶瘤病毒的方法和用途 | |
| CN109641020A (zh) | 在癌细胞中具有增强复制的hsv载体 | |
| Jin et al. | Combination of GNRs-PEI/cGAMP-laden macrophages-based photothermal induced in situ tumor vaccines and immune checkpoint blockade for synergistic anti-tumor immunotherapy | |
| Yu et al. | Construction of rBCG carrying the IL-2-BZLF1 fusion gene and its immunological function | |
| KR20220044310A (ko) | 악성 종양을 치료하기 위한 병용약, 악성 종양을 치료하기 위한 의약 조성물 및 악성 종양 치료용 의약 조성물 | |
| CN116421738B (zh) | 捕获抗原的溶瘤病毒及其药物组合与制备和应用 | |
| CN110643623B (zh) | 人可溶性cd80融合基因转化乳酸菌及其应用 | |
| CN104357466B (zh) | 一种单纯疱疹病毒胸苷激酶突变体及其制备方法和用途 | |
| CN112126661B (zh) | 一种高效敲除nk细胞中tigit基因的方法 | |
| Lin | New Possibilities for Cancer Immunotherapy Discovered Through Cancer Vaccines | |
| Yang | Classification and research status of tumor vaccines | |
| CN101974557A (zh) | 一种靶向治疗实体瘤的双歧杆菌pBES-tk重组载体及其用途 | |
| Liu et al. | A bi-adjuvant nanovaccine amplifying STING activation for cancer immunotherapy |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20200714 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |