CN106999489A

CN106999489A - 以二环式含氮芳香族杂环酰胺化合物作为有效成分的药物组合物

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Publication number: CN106999489A
Application number: CN201580067347.0A
Authority: CN
Inventors: 长岛建之
Original assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Astellas Pharma Inc; Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2014-12-09
Filing date: 2015-12-08
Publication date: 2017-08-01
Also published as: US20170360781A1; KR20170088880A; MX2017007648A; CA2972230A1; RU2017120180A; EP3231426A1; BR112017012355A2; WO2016093255A1; JPWO2016093255A1

Abstract

本发明提供一种与线粒体复合物I相关的各种癌症、特别是大肠癌、白血病和/或恶性淋巴瘤的治疗用药物组合物。本发明人出于研制各种癌症的治疗用药物组合物的目的进行了深入研究，结果确认，特定的二环式含氮芳香族杂环酰胺化合物具有线粒体复合物I抑制和AMPK活化作用，含有这些化合物作为有效成分的药物组合物对与线粒体复合物I相关的各种癌症、特别是大肠癌、白血病和/或恶性淋巴瘤具有治疗效果，从而完成了本发明。

Description

以二环式含氮芳香族杂环酰胺化合物作为有效成分的药物组合物

技术领域

本发明涉及一种与线粒体复合物I相关的各种癌症、特别是大肠癌、白血病和/或恶性淋巴瘤的治疗用药物组合物，其以二环式含氮芳香族杂环酰胺化合物或其制药学上可接受的盐作为有效成分。

背景技术

大肠癌为在世界范围内罹患率和致死率高的癌症，在日本，罹患率也逐年增加。作为其原因，可以列举与饮食生活的欧美化相伴随的肥胖、吸烟、运动不足等(Jpn.J.Clin.Oncol.2013,43:685-694)。在大肠癌的治疗中，最有效的手段为外科手术，近年化学疗法和放射线疗法等的进步也很显著。以欧美为中心进行了大规模的临床试验，结果表明，组合多种抗癌剂的化学联合疗法对于大肠癌而言有效，有助于肿瘤萎缩和预后延长(J.Clin.Oncol.2004,22:229-237)。进而，在化学疗法基础上，抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)抗体、抗表皮生长因子受体(epidermalgrowth factor receptor，EGFR)抗体之类的分子靶向药也作为首选药，用于与化学疗法的联合使用中，今后也期待分子靶向药的开发。

关于大肠癌，已知在形成以后可确认到多个癌相关基因的突变，其中约40％中，与磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)通路相关的分子中产生了基因突变，例如有报道指出，在作为PI3K的p110α催化单元的PIK3CA中发生了突变(Nature.2005,436:792)。当PI3K活化时，称为Akt的丝氨酸/苏氨酸激酶被磷酸化而活化。存在于Akt的下游的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)为丝氨酸/苏氨酸激酶，已经鉴定其为雷帕霉素靶标，在细胞增殖、生存等的调节中承担着主要作用。PI3K/Akt/mTOR通路的异常信号亢进在癌细胞的增殖、生存中起到重要的作用(Oncologist.2011,16:404-414)。此外，有报道指出，约10％的大肠癌存中，鼠科肉瘤病毒癌基因同源物b1(v-raf murine sarcoma viral oncogene homolog b1，BRAF)基因存在突变(Nature.2002,417:949-954)。该突变使有丝分裂原激活蛋白(mitogen-activatedprotein kinase，MAPK)通路活化，诱导MAPK靶分子的异常的表达亢进。还已知上述PI3K/mTOR通路和RAF/MAPK通路是交互作用的(クロストーク)(Cell.2005,121:179-193)。

在日本，被诊断为白血病的患者中，90％以上为20岁以上的成人，2008年，患者人数全年为约11,000例(公益财团法人癌研究振兴财团：癌症统计2013)。其中，被诊断为急性髄系白血病(acute myeloid leukemia；AML)的患者上升到全年约3,800例(CancerMPact(注册商标),Japan February 2010,v1.1)。AML的青壮年患者中，60％至80％通过标准疗法而实现完全缓解(complete remission；CR)，5年无病生存率为将近30％～40％(Hematology Am.Soc.Hematol.Educ.Program2005,143)。60岁以上的患者的治疗成绩差，CR率为40％至55％，长期生存率也低。缓解率和总生存率除了依赖于年龄以外，也依赖于细胞遗传学因素、骨髄障碍(骨髄增生异常综合征等)的既往病史、并发症等多种因素。

在日本，作为针对未经治疗的成人AML患者的标准缓解导入疗法，进行阿糖胞苷和蒽环霉素(道诺红菌素或伊达比星)的联合使用治疗(白血病治疗手册(白血病治療マニュアル)修订版第3版,南江堂,2009,27)。通过该治疗，约80％的患者得以完全缓解，但其中约70％会复发，维持缓解状态、长期生存的患者不过为30％左右。此外，还存在约15％的患者对初次缓解导入疗法有抗性。从而，在AML的治疗中，现在的治疗法依然不能说充分，以改善AML患者的预后为目标而开发新药剂的意义很大。

有报道指出，在急性白血病中，PI3K/Akt/mTOR通路持续且异常地活化(CancerLett.2014,346:188-196)。进而，最近公开了如下发现：在AML细胞中，线粒体呼吸链的活性降低，因此对于呼吸链抑制剂的敏感性高(Blood.2015,125:2120-2130)。

恶性淋巴瘤(malignant lymphoma)是一种血液癌症，是由淋巴系统组织产生的恶性肿瘤。大致分为霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma、HL或Hodgkin's disease、HD)和非霍奇金淋巴瘤(non Hodgkin's lymphoma、NHL)，进而，非霍奇金淋巴瘤分为B细胞癌变的淋巴瘤(B细胞性非霍奇金淋巴瘤)和T细胞或NK细胞癌变的淋巴瘤(T/NK细胞性非霍奇金淋巴瘤)。作为B细胞性非霍奇金淋巴瘤，已知有弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B celllymphoma、DLBCL)、套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma、MCL)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、滤泡性淋巴瘤(follicular center lymphoma、FCL)、MALT淋巴瘤(MALT lymphoma、HL)、慢性淋巴细胞白血病/小细胞淋巴瘤(chronic lymphocyticleukemia/small lymphocytic lymphoma CLL/SLL)等，作为T/NK细胞性非霍奇金淋巴瘤，已知有成人T细胞淋巴瘤(adult T-cell lymphoma、ATL)、外周T细胞淋巴瘤、淋巴母细胞淋巴瘤等。此外，非霍奇金淋巴瘤根据其进展速度还分为低恶性度组(以1年为单位缓慢进展，滤泡性淋巴瘤等中较多)、中恶性度组(以1个月为单位进展，DLBCL等中较多)和高恶性度组(以1周为单位迅速进展，伯基特氏淋巴瘤、淋巴母细胞淋巴瘤等中较多)。

淋巴系统组织在全身循环，因此与其它癌症不同，主要应用放射线疗法和化学疗法，而不是通过外科手术进行切除。在经治疗检测不到肿瘤的时刻，判断为“完全缓解”，但复发的情况也较多，淋巴瘤的临床课题在于完全缓解率的提高、以及无进展生存期的延长。

DLBCL在非霍奇金淋巴瘤患者中占到约30％至40％，是比例最高的类型的淋巴瘤(Blood.1997,89:3909-3918)。由分子生物学解析获知，DLBCL的基因异常中存在3个不同的小团簇(clusters)，分别称为氧化磷酸化(OXPHOS)型、B细胞受体(BCR)/增生型、宿主应答(HR)型。其中，关于OXPHOS型肿瘤已知的是，与线粒体的电子传递体系中的ATP生成反应、即OXPHOS相关的基因、与线粒体功能相关的基因以及与电子传递链相关的基因是高表达的。具体而言，含有线粒体复合物I的NADH脱氢酶复合物、细胞色素c-细胞色素氧化酶复合物、ATP合成酶等高表达(Blood.2005,105:1851-1861)。

近年有报道指出，作为2型糖尿病治疗药的首选药而已知的二甲双胍通过将一磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine monophosphate(AMP)-activated protein kinase，AMPK)活化来抑制乳腺癌细胞、大肠癌细胞或AML细胞的增殖(Cancer Res.2006,66:10269-10273、Cancer Res.2007,15:6745-6752、Blood 2010,116:4262-4273)。AMPK是高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶，在各种细胞中控制能量代谢，在细胞内监测并响应AMP/ATP比值的改变(Annu.Rev.Biochem.1998,67:821-855)。已知二甲双胍所引起的AMPK活化基于线粒体复合物I抑制作用(Diabetes Metab.2003,29(4Pt 2):6S88-94)。线粒体复合物I是指位于线粒体内膜的NADH脱氢酶，已知其为线粒体中的氧化磷酸化的“起始酶”。通过抑制线粒体复合物I，从而线粒体的电子传递体系中的ATP生成反应、即氧化磷氧化受到抑制，细胞内ATP水平降低时，AMP/ATP比值上升，AMP变构结合于AMPK，从而AMPK活化。活化后的AMPK通过位于PI3K/Akt通路下游的结节性硬化复合物2(tuberous sclerosis complex 2，TSC2)的磷酸化来抑制mTOR的信号(Genes Cells.2003,8:65-79)。这被认为是二甲双胍抑制癌细胞的增殖的原因之一(Cancer Res.2007,67:10804-10812)。进而还有报道指出，AMPK的活化还通过抑制RAF/MAPK通路来抑制具有BRAF突变的癌细胞的增殖(Molecular Cell.2009,33:237-247)。

作为具有线粒体复合物I抑制作用的化合物，已知鱼藤酮(rotenone)、哒螨酮(pyridaben)、泡番荔枝辛(bullatacin)、杀粉蝶菌素A(piericidin A)、辣椒素(capsaicin)、喹螨醚(fenazaquin)等天然或非天然的多种化合物。此外，例如还报道了：下述式(A)的化合物具有线粒体复合物I抑制作用，抑制各种癌细胞的增殖(专利文献1)。

[化学式1]

(式中的符号的含义参见该公报。)

此外报道了：作为具有AMPK活化作用的化合物，例如，下述式(B)和(C)的化合物具有AMPK活化作用，在2型糖尿病、动脉粥样硬化、心血管疾病等代谢性疾病的治疗等中有用(分别参见专利文献2和专利文献3)。但是，该文献中并不存在教导对癌症治疗等的有用性的具体记载。

[化学式2]

(式中的符号的含义参见该公报。)

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第02/20008号

专利文献2：国际公开第2009/132136号

专利文献3：国际公开第2012/016217号

发明内容

发明所要解决的问题

提供一种与线粒体复合物I相关的各种癌症、特别是大肠癌、白血病和/或恶性淋巴瘤的治疗用药物组合物。

用于解决问题的方法

本发明人以研制各种癌症的治疗用药物组合物为目的进行了深入研究，结果发行，特定的二环式含氮芳香族杂环酰胺化合物或其制药学上可接受的盐有优良的线粒体复合物I抑制作用和AMPK活化作用，以在本申请的优先权日之后公开的国际公开第2014/199933号中公开的这些化合物为有效成分的药物组合物可以期待作为选自大肠癌、白血病和恶性淋巴瘤中的癌症的治疗用药物组合物来使用；作为某一方式，可以期待作为选自PIK3CA突变阳性大肠癌治疗用药物组合物、AML治疗用药物组合物和DLBCL中的癌症的治疗用药物组合物来使用，从而完成了本发明。

即，本发明涉及一种选自大肠癌、白血病和恶性淋巴瘤中的癌症的治疗用药物组合物，其含有以下化合物或它们的制药学上可接受的盐作为有效成分，所述化合物选自：

(5-{1-[(6-甲氧基吡啶-3-基)甲基]哌啶-4-基}-1H-苯并咪唑-2-基){4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮(以下有时称为“化合物A”)、

(5-{1-[(5-甲氧基吡嗪-2-基)甲基]哌啶-4-基}-1H-苯并咪唑-2-基){4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮(以下有时称为“化合物B”)、

4-({4-[(6-{1-[(5-乙氧基吡嗪-2-基)甲基]哌啶-4-基}-1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]哌嗪-1-基}甲基)苯甲腈(以下有时称为“化合物C”)，以及

4-({4-[(5-{1-[(5-甲氧基吡嗪-2-基)甲基]哌啶-4-基}-1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]哌嗪-1-基}甲基)苯甲腈(以下称为“化合物D”)。

此外，本发明包含一种选自大肠癌、白血病和恶性淋巴瘤中的癌症的治疗剂，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐作为有效成分。

此外，本发明涉及：选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐在制造选自大肠癌、白血病和恶性淋巴瘤中的癌症的治疗用药物组合物中的应用；一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐的用途，其用于选自大肠癌、白血病和恶性淋巴瘤中的癌症的治疗；选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐，其用于大肠癌、白血病和/或恶性淋巴瘤的治疗；以及，一种选自大肠癌、白血病和恶性淋巴瘤中的癌症的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐给药于对象的步骤。需要说明的是，“对象”是指有必要进行该治疗的人或其它动物，作为某一方式，为有必要进行该治疗的人。

发明效果

作为本发明的药物组合物的有效成分的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐具有线粒体复合物I抑制和AMPK活化作用，可以作为选自大肠癌、AML和DLBCL中的癌症的治疗用药物组合物的有效成分来使用，作为某一方式，可以作为选自PIK3CA突变阳性大肠癌、AML和DLBCL中的癌症的治疗用药物组合物的有效成分来使用，作为另一方式，可以作为选自PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性大肠癌、AML和DLBCL中的癌症的治疗用药物组合物的有效成分来使用。

具体实施方式

以下详细说明本发明。

与线粒体复合物I相关的大肠癌是指由于线粒体的电子传递体系活化、从而氧化磷酸化亢进的大肠癌，作为某一方式，可以列举PIK3CA突变阳性大肠癌，作为另一方式，可以列举PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性大肠癌。

与线粒体复合物I相关的白血病是指由于线粒体的电子传递体系活化、从而氧化磷酸化亢进的白血病，作为某一方式，可以列举AML，作为作为另一方式，可以列举PI3K/Akt/mTOR通路亢进的AML。

与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤是指由于线粒体的电子传递体系活化、从而氧化磷酸化亢进的恶性淋巴瘤，作为某一方式，可以列举DLBCL，作为另一方式，可以列举氧化磷酸化型DLBCL。

本说明书中，“选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的制药学上可接受的盐”是指化合物A、化合物B、化合物C或化合物D的酸加成盐，具体而言，可以列举：与盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸的酸加成盐；与甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、扁桃酸、酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二甲苯酰酒石酸、柠檬酸、甲磺酸(Mesylic acid)、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸(tosylic acid)、天冬氨酸、谷氨酸等有机酸的酸加成盐。

需要说明的是，“选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物”中包括化合物A、化合物B、化合物C或化合物D的各种溶剂化物，具体而言，包括水合物、乙醇化物。进而，“制药学上可接受的盐”中也包括这些溶剂化物的酸加成盐。

此外，作为“选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐”的某一方式，可以列举未形成盐的游离碱，即化合物A、化合物B、化合物C或化合物D，作为另一方式，为化合物A，作为又一方式，为化合物B，作为又一方式，为化合物C，此外，作为又一方式，为化合物D。此外，作为另一方式，为化合物A、化合物B、化合物C或化合物D的对甲苯磺酸盐，作为又一方式，为化合物A的二对甲苯磺酸盐，作为又一方式，为化合物B的二对甲苯磺酸盐，作为又一方式，为化合物C的二对甲苯磺酸盐，此外，作为又一方式，为化合物D的二对甲苯磺酸盐。

以下示出本发明的方式。

(1-1)一种选自大肠癌、与线粒体复合物I相关的白血病和与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤中的癌症的治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐作为有效成分。另一方式为一种选自大肠癌、AML和DLBCL中的癌症的治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐作为有效成分。另一方式为一种选自大肠癌、与线粒体复合物I相关的白血病和与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤中的癌症的治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐作为有效成分。另一方式为一种选自大肠癌、AML和DLBCL中的癌症的治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐作为有效成分。

(1-2)选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐在制造选自大肠癌、与线粒体复合物I相关的白血病和与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤中的癌症的治疗用药物组合物中的应用。另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐在制造选自大肠癌、AML和DLBCL中的癌症的治疗用药物组合物中的应用。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐在制造选自大肠癌、与线粒体复合物I相关的白血病和与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤中的癌症的治疗用药物组合物中的应用。进而，另一方式为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐在制造选自大肠癌、AML和DLBCL中的癌症的治疗用药物组合物中的应用。

(1-3)一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐的用途，其用于选自大肠癌、与线粒体复合物I相关的白血病和与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤中的癌症的治疗。另一方式为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐的用途，其用于选自大肠癌、AML和DLBCL中的癌症的治疗。进而，另一方式为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐的用途，其用于选自大肠癌、与线粒体复合物I相关的白血病和与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤中的癌症的治疗。进而，另一方式为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐的用途，其用于选自大肠癌、AML和DLBCL中的癌症的治疗。

(1-4)选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐，其用于选自大肠癌、与线粒体复合物I相关的白血病和与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤中的癌症的治疗。另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐，其用于选自大肠癌、AML和DLBCL中的癌症的治疗。另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐，其用于选自大肠癌、与线粒体复合物I相关的白血病和与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤中的癌症的治疗。另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐，其用于选自大肠癌、AML和DLBCL中的癌症的治疗。

(1-5)一种选自大肠癌、与线粒体复合物I相关的白血病和与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤中的癌症的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐给药于对象的步骤。另一方式为一种选自大肠癌、AML和DLBCL中的癌症的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐给药于对象的步骤。进而，另一方式为一种选自大肠癌、与线粒体复合物I相关的白血病和与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤中的癌症的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐给药于对象的步骤。进而，另一方式为一种选自大肠癌、AML和DLBCL中的癌症的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐给药于对象的步骤。

(2-1)一种大肠癌的治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐作为有效成分。另一方式为一种PIK3CA突变阳性大肠癌治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐作为有效成分。进而，另一方式为一种PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性大肠癌治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐作为有效成分。进而，另一方式为一种大肠癌的治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐作为有效成分。进而，另一方式为一种PIK3CA突变阳性大肠癌治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐作为有效成分。此外，作为又一方式，为一种PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性大肠癌治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐作为有效成分。

(2-2)选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐在制造大肠癌的治疗用药物组合物中的应用。另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐在制造PIK3CA突变阳性大肠癌治疗用药物组合物用途。另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐在制造PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性大肠癌治疗用药物组合物中的应用。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐在制造大肠癌的治疗用药物组合物中的应用。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐在制造PIK3CA突变阳性大肠癌治疗用药物组合物中的应用。此外，作为又一方式，为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐在制造PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性大肠癌治疗用药物组合物中的应用。

(2-3)一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐的用途，其用于大肠癌的治疗。另一方式为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐的用途，其用于PIK3CA突变阳性大肠癌的治疗。进而，另一方式为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐的用途，其用于PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性大肠癌的治疗。进而，另一方式为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐的用途，其用于大肠癌的治疗。进而，另一方式为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐的用途，其用于PIK3CA突变阳性大肠癌的治疗。此外，作为又一方式，为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐的用途，其用于PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性大肠癌的治疗。

(2-4)选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐，其用于大肠癌的治疗。另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐，其用于PIK3CA突变阳性大肠癌的治疗。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐，其用于PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性大肠癌的治疗。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐，其用于大肠癌的治疗。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐，其用于PIK3CA突变阳性大肠癌的治疗。此外，作为又一方式，为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐，其用于PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性大肠癌的治疗。

(2-5)一种大肠癌的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐给药于对象的步骤。另一方式为一种PIK3CA突变阳性大肠癌的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐给药于对象的步骤。进而，另一方式为一种PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性大肠癌的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐给药于对象的步骤。进而，另一方式为一种大肠癌的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐给药于对象的步骤。进而，另一方式为一种PIK3CA突变阳性大肠癌的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐给药于对象的步骤。此外，作为又一方式，为一种PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性大肠癌的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐给药于对象的步骤。

(3-1)一种与线粒体复合物I相关的白血病的治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐作为有效成分。另一方式为一种AML治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐作为有效成分。进而，另一方式为一种PI3K/Akt/mTOR通路亢进的AML治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐作为有效成分。进而，另一方式为一种与线粒体复合物I相关的白血病的治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐作为有效成分。进而，另一方式为一种AML治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐作为有效成分。此外，作为又一方式，为一种PI3K/Akt/mTOR通路亢进的AML的治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐作为有效成分。

(3-2)选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐在制造与线粒体复合物I相关的白血病的治疗用药物组合物中的应用。另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐在制造AML治疗用药物组合物中的应用。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐在制造PI3K/Akt/mTOR通路亢进的AML治疗用药物组合物中的应用。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐在制造与线粒体复合物I相关的白血病的治疗用药物组合物中的应用。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐在制造AML治疗用药物组合物中的应用。此外，作为又一方式，为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐在制造PI3K/Akt/mTOR通路亢进的AML治疗用药物组合物中的应用。

(3-3)一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐的用途，其用于与线粒体复合物I相关的白血病的治疗。另一方式为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐的用途，其用于AML的治疗。进而，另一方式为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐的用途，其用于PI3K/Akt/mTOR通路亢进的AML的治疗。进而，另一方式为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐的用途，其用于与线粒体复合物I相关的白血病的治疗。进而，另一方式为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐的用途，其用于AML的治疗。此外，作为又一方式，为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐的用途，其用于PI3K/Akt/mTOR通路亢进的AML的治疗。

(3-4)选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐，其用于与线粒体复合物I相关的白血病的治疗。另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐，其用于AML的治疗。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐，其用于PI3K/Akt/mTOR通路亢进的AML的治疗。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐，其用于与线粒体复合物I相关的白血病的治疗。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐，其用于AML的治疗。此外，作为又一方式，为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐，其用于PI3K/Akt/mTOR通路亢进的AML的治疗。

(3-5)一种与线粒体复合物I相关的白血病的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐给药于对象的步骤。另一方式为一种AML的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐给药于对象的步骤。进而，另一方式为一种PI3K/Akt/mTOR通路亢进的AML的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐给药于对象的步骤。进而，另一方式为一种与线粒体复合物I相关的白血病的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐给药于对象的步骤。进而，另一方式为一种AML的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐给药于对象的步骤。此外，作为又一方式，为一种PI3K/Akt/mTOR通路亢进的AML的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐给药于对象的步骤。

(4-1)一种与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤的治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐作为有效成分。另一方式为一种DLBCL治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐作为有效成分。进而，另一方式为一种OXPHOS型DLBCL治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐作为有效成分。进而，另一方式为一种与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤的治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐作为有效成分。此外，作为又一方式，为一种DLBCL的治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐作为有效成分。进而，另一方式为一种OXPHOS型DLBCL治疗用药物组合物，其含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐作为有效成分。

(4-2)选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐在制造与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤的治疗用药物组合物中的应用。另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐在制造DLBCL治疗用药物组合物中的应用。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐在制造OXPHOS型DLBCL治疗用药物组合物中的应用。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐在制造与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤的治疗用药物组合物中的应用。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐在制造DLBCL治疗用药物组合物中的应用。此外，作为又一方式，为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐在制造OXPHOS型DLBCL治疗用药物组合物中的应用。

(4-3)一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐的用途，其用于与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤的治疗。另一方式为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐的用途，其用于DLBCL的治疗。进而，另一方式为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐的用途，其用于OXPHOS型DLBCL的治疗。进而，另一方式为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐的用途，其用于与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤的治疗。进而，另一方式为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐的用途，其用于DLBCL的治疗。此外，作为又一方式，为一种选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐的用途，其用于OXPHOS型DLBCL的治疗。

(4-4)选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐，其用于与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤的治疗。另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐，其用于DLBCL的治疗。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐，其用于OXPHOS型DLBCL治疗。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐，其用于与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤的治疗。进而，另一方式为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐，其用于DLBCL的治疗。此外，作为又一方式，为选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐，其用于OXPHOS型DLBCL的治疗。

(4-5)一种与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐给药于对象的步骤。另一方式为一种DLBCL的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐给药于对象的步骤。进而，另一方式为一种OXPHOS型DLBCL的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐给药于对象的步骤。进而，另一方式为一种与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐给药于对象的步骤。进而，另一方式为一种DLBCL的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐给药于对象的步骤。此外，作为又一方式，为一种OXPHOS型DLBCL的治疗方法，其包含将有效量的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物的二对甲苯磺酸盐给药于对象的步骤。

本发明的药物组合物的药理效果通过以下的试验例来确认。在以下的试验例中，使用化合物A的二对甲苯磺酸盐(以下有时称为化合物A1。后述表15中记载的实施例编号1(Ex.1))、化合物B的二对甲苯磺酸盐(以下有时称为化合物B1。后述表15中记载的实施例编号2(Ex.2))、化合物C的二对甲苯磺酸盐(以下有时称为化合物C1。后述表15中记载的实施例编号3(Ex.3))和化合物D的二对甲苯磺酸盐(以下有时称为化合物D1。后述表15中记载的实施例编号4(Ex.4))作为受试化合物。需要说明的是，各试验例中，化合物A1、B1、C1和D1的浓度换算成各自的游离碱的浓度而进行记载。

试验例1人线粒体复合物I抑制作用的评价

从作为人PIK3CA突变阳性乳腺癌的MDA-MB-453肿瘤中提取线粒体，来评价化合物A1、B1、C1和D1的复合物I抑制活性。

需要说明的是，PIK3CA突变阳性乳腺癌是指：在磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)通路的基因突变中，在作为PI3K的催化单元的p110α的基因名PIK3CA中具有突变的乳腺癌。

此外，本试验例和此后的试验例2中使用的MDA-MB-453细胞由美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(以下有时记作ATCC)获得。

在4周龄的雄性裸小鼠(日本查尔斯河公司)的皮下荷瘤来自人PIK3CA突变阳性乳腺癌的MDA-MB-453细胞，在达到一定的大小后，摘出MDA-MB-453肿瘤，加入为肿瘤重量的9倍量的线粒体提取用液(0.275M蔗糖,2.2mM EDTA,11mM Tris/HCl pH7.5,Complete-EDTA-free(罗氏诊断产品公司))，破碎。在600xg、4℃下离心10分钟而得到上清后，在14000xg、4℃下离心10分钟而得到沉淀物。将沉淀物悬浮在为所摘出的肿瘤重量的5倍量的10mMTris/HCl pH7.5中，得到人线粒体悬浮液。

然后，相对于复合物I活性测定用液(25mM磷酸钾pH7.6，0.35％牛血清白蛋白(BSA)，60μM 2,6-二氯苯酚靛酚，70μM癸基泛醌，1μM抗霉素)1ml加入人线粒体悬浮液25或50μl。分配到96孔板或384孔板中后，以终浓度10000nM至终浓度0.3nM间的任意范围添加受试化合物。作为阴性对照，添加受试化合物的溶剂、即二甲基亚砜(DMSO)至终浓度达到1％，作为阳性对照，添加作为复合物I抑制剂的鱼藤酮至终浓度达到1μM。进而，在各孔中添加NADH至终浓度达到0.2或0.5mM，用预先设为37℃的SpectraMax(Molecular Device公司)测定波长600nm处的吸光度的变化。将用DMSO处理的信号值作为top、将用鱼藤酮1μM处理的信号值作为bottom，在反应为线性的范围内算出信号的变动，通过Sigmoid-Emax模型非线性回归分析法算出50％抑制值(IC₅₀)。将受试化合物A1、B1、C1和D1的结果示于表1。需要说明的是，化合物A1～D1在后述的实施例1～4中制造(以下同样)。

[表1]

受试化合物	IC₅₀(nM)
		A1	41
B1	75
		C1	22
D1	120

试验例2 AMPK活化作用的评价

通过Cell ELISA来测定作为AMPK的底物的乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的第79位的丝氨酸(Ser79)的磷酸化，从而评价化合物A1、B1、C1和D1的AMPK活化作用。

将MDA-MB-453细胞按照每孔中达到15000细胞的方式用含有10％胎牛血清的Leibovitz′s L-15培养基(Life technologies公司)以各孔36μl接种到384孔板中，在不存在CO₂的条件下在37℃培养一晚。第二天将受试化合物A1、B1、C1、D1和作为阴性对照的受试化合物的溶剂DMSO用新鲜的培养基稀释到终浓度的10倍浓度，在各孔中添加4μl(受试化合物为终浓度10000nM到终浓度0.3nM的10个梯度，DMSO的终浓度为0.1％)。然后，在不存在CO₂的条件下在37℃培养2小时。培养后，在各孔中添加40％乙二醛溶液(Nacalai Tesque公司)20μl，在室温下静置30分钟，从而将细胞固定。然后，对板进行离心(Ecospin；C.A.N.公司，800rpm，8秒，以下只要没有特别声明则离心均以同一条件来进行)，从而除去上清，在各孔中添加含有0.1％Triton X-100的磷酸盐缓冲液(PBS)20μl，在室温下静置10分钟。通过离心除去含有0.1％Triton X-100的PBS，在各孔中添加封闭溶液(Odyssey BlockingBuffer；LI-COR Biosciences公司)20μl，在室温下静置1小时。通过离心除去封闭溶液，在各孔中添加含有相对于原液为1/500量的作为第一抗体的ACC Ser79的磷酸化抗体(CellSignaling公司)的封闭溶液10μl，在4℃下静置一晚。第二天对板进行离心而除去反应液，在各孔中添加含有0.05％Tween-20的Tris缓冲液(TBS)(Thermo Scientific公司；将20xTBS Tween-20用离子交换水稀释，以1x来使用)25μl，通过离心而除去，从而洗涤各孔。洗涤共进行3次。洗涤后，在各孔中添加含有相对于原液为1/1000量的作为第二抗体的IRDye(注册商标)800CW山羊抗兔IgG(LI-COR Biosciences公司)的封闭溶液10μl，在室温下静置1小时。对板进行离心而除去反应液，用含有0.05％Tween-20的TBS与第一抗体反应后同样地将各孔洗涤3次。除去洗涤液后，直接将板在室温下风干3小时以上，用Aerius(LI-CORBiosciences公司)测定信号。将用DMSO处理的信号值作为bottom、将达到平台时的信号值作为top，通过Sigmoid-Emax模型非线性回归分析法算出50％活化值(EC₅₀)。将受试化合物A1、B1、C1和D1的结果示于表2。

[表2]

受试化合物	EC₅₀(nM)
		A1	24
B1	8.3
		C1	1.8
D1	3.3

试验例3人大肠癌来源细胞荷瘤小鼠中的抗肿瘤试验1

将悬浮于PBS溶液的或者悬浮于使PBS和Matrigel(注册商标)以1∶1混合而成的溶液的、来自人大肠癌的PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性的RKO细胞1.5×10⁶个或PIK3CA突变阳性的Colo201细胞3×10⁶个注射到5-6周龄的雄性Balb/c裸小鼠(日本查尔斯河公司)的背部皮下，从而进行移植。在肿瘤体积达到100～300mm³时进行分组，开始进行受试化合物的给药。试验以溶剂组和化合物给药组各5只来进行，溶剂组经口给药6％环糊精水溶液，化合物给药组则以成为8mg/kg的方式在6％环糊精水溶液中混合受试化合物后经口给药。给药进行10天(RKO)或14天(Colo201)，且1天进行1次，1周内测定2次体重和肿瘤直径。在算出肿瘤体积时使用以下的式子。

[肿瘤体积(mm³)]＝[肿瘤的长径(mm)]×[肿瘤的短径(mm)]²×0.5

按照下述式子由肿瘤体积的平均值算出肿瘤增殖抑制率。

肿瘤增殖抑制率(％)＝(1-各组的平均肿瘤体积增加÷溶剂组的平均肿瘤体积增加)×100

将化合物A1的测定最终日的抗肿瘤效果示于表3。

需要说明的是，来自人大肠癌细胞的RKO细胞和Colo201细胞例如可以从ATCC等购买。

[表3]

细胞	抑制率
		RKO	67％
Colo201	60％

试验例4人大肠癌来源细胞荷瘤小鼠中的抗肿瘤试验2

将悬浮于使PBS和Matrigel(注册商标)以1∶1混合而成的溶液的来自人大肠癌的PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性的RKO细胞或PIK3CA突变阳性的Colo201细胞各3×10⁶个注射到4-5周龄的雄性Balb/c裸小鼠(日本查尔斯河公司)的背部皮下，从而进行移植。在肿瘤体积达到100～250mm³时进行分组，开始进行受试化合物的给药。试验以溶剂组和化合物给药组各5只来进行，溶剂组经口给药6％环糊精水溶液，化合物给药组则在6％环糊精水溶液中按照表4的用量混合受试化合物后经口给药。给药进行11天(RKO)或21天(Colo201)，且1天进行1次，1周内测定2次体重和肿瘤直径。在算出肿瘤体积时使用以下的式子。

[肿瘤体积(mm³)]＝[肿瘤的长径(mm)]×[肿瘤的短径(mm)]²×0.5

按照下述式子由肿瘤体积的平均值算出肿瘤增殖抑制率。

将受试化合物A1、B1、C1和D1的测定最终日的抗肿瘤效果示于表4。

需要说明的是，RKO细胞和Colo201细胞是由ATCC得到的。

[表4]

试验例5移植了来自人AML的KG-1细胞的荷瘤小鼠中的抗肿瘤试验1

将悬浮于使PBS和Matrigel(注册商标)以1:1混合而成的溶液中的KG-1细胞3×10⁶个注射到4周龄的雄性Balb/c裸小鼠(日本查尔斯河公司)的背部皮下，从而进行移植。移植16天后，开始进行受试化合物的给药。试验以溶剂组(6％环糊精水溶液)和受试化合物给药组(在溶剂组中混合受试化合物A1并设为2、4或8mg/kg的用量)各5只来进行。给药进行14天且1天进行1次经口给药，1周内测定2次体重和肿瘤直径。在算出肿瘤体积时使用以下的式子。

[肿瘤体积(mm³)]＝[肿瘤的长径(mm)]×[肿瘤的短径(mm)]²×0.5

按照下述式子由肿瘤体积的平均值算出肿瘤增殖抑制率和肿瘤萎缩率。对于肿瘤增殖抑制率＞100％的组，算出肿瘤萎缩率。

肿瘤萎缩率(％)＝(1-各组的测定日的平均肿瘤体积÷各组的分组时的平均肿瘤体积)×100

将受试化合物A1的测定最终日的抗肿瘤效果示于表5。

需要说明的是，来自人AML的KG-1细胞例如可以从ATCC等购买。

[表5]

给药最	抑制或萎缩率
		2mg/kg	54％抑制
4mg/kg	70％抑制
		8mg/kg	8％萎缩

试验例6移植了来自人AML的KG-1细胞的荷瘤小鼠中的抗肿瘤试验2

将悬浮于使PBS和Matrigel(注册商标)以1∶1混合而成的溶液的KG-1细胞3×10⁶个注射到4-5周龄的雄性Balb/c裸小鼠(日本查尔斯河公司)的背部皮下，从而进行移植。在肿瘤体积达到100～200mm³时进行分组，开始进行受试化合物的给药。试验以溶剂组和化合物给药组各5只来进行，溶剂组经口给药6％环糊精水溶液，化合物给药组则在6％环糊精水溶液中按照表6的用量混合受试化合物后经口给药。给药进行21天，且1天进行1次，1周内测定2次体重和肿瘤直径。在算出肿瘤体积时使用以下的式子。

[肿瘤体积(mm³)]＝[肿瘤的长径(mm)]×[肿瘤的短径(mm)]²×0.5

将受试化合物A1、B1、C1和D1的测定最终日的抗肿瘤效果示于表6。

需要说明的是，KG-1细胞是由ATCC得到的。

[表6]

试验例7移植了来自人AML的MV-4-11细胞的荷瘤小鼠中的抗肿瘤试验1

将悬浮于使PBS和Matrigel(注册商标)以1:1混合而成的溶液的MV-4-11细胞5×10⁶个注射到4-5周龄的雄性NOD/SCID小鼠(日本查尔斯河公司)的背部皮下，从而进行移植。移植7天后，开始进行受试化合物的给药。试验以溶剂组(6％环糊精水溶液)和受试化合物给药组(在溶剂组中混合受试化合物A1且设为8mg/kg的用量)各5只来进行。给药进行19天，且1天进行1次经口给药，1周内测定2次体重和肿瘤直径。在算出肿瘤体积时使用以下的式子。

[肿瘤体积(mm³)]＝[肿瘤的长径(mm)]×[肿瘤的短径(mm)]²×0.5

按照下述式子由肿瘤体积的平均值算出肿瘤增殖抑制率。

将受试化合物A1的测定最终日的抗肿瘤效果示于表7。

需要说明的是，来自人AML的MV-4-11细胞是由ATCC得到的。

[表7]

给药量	抑制率
		8mg/kg	96％

试验例8移植了来自人AML的MV-4-11细胞的荷瘤小鼠中的抗肿瘤试验2

将悬浮于使PBS和Matrigel(注册商标)以1∶1混合而成的溶液的MV-4-11细胞5×10⁶个注射到4-5周龄的雄性NOD/SCID小鼠(日本查尔斯河公司)的背部皮下，从而进行移植。在肿瘤体积达到100～250mm³时，开始进行受试化合物的给药。试验以溶剂组和化合物给药组各5只来进行，溶剂组经口给药6％环糊精水溶液，化合物给药组则在6％环糊精水溶液中按照表8的用量混合受试化合物后进行经口给药。给药以1天1次来进行经口给药，1周内测定2次体重和肿瘤直径。在算出肿瘤体积时使用以下的式子。

[肿瘤体积(mm³)]＝[肿瘤的长径(mm)]×[肿瘤的短径(mm)]²×0.5

将受试化合物A1、B1、C1和D1的测定最终日(给药开始起14天后)的抗肿瘤效果示于表8。

需要说明的是，来自人AML的MV-4-11细胞是由ATCC得到的。

[表8]

试验例9DLBCL来源细胞荷瘤小鼠中的抗肿瘤试验1

将悬浮于使PBS和Matrigel(注册商标)以1:1混合而成的溶液的来自DLBCL的DB细胞或WSU-DLCL-2细胞各3×10⁶个注射到4-5周龄的雄性Balb/c裸小鼠(日本查尔斯河公司)的背部皮下，从而进行移植。在平均肿瘤体积达到400～500mm³时进行分组，开始进行受试化合物的给药。试验以溶剂组(6％环糊精水溶液)和化合物给药组(在溶剂中混合受试化合物A1且设为8mg/kg的用量)各5只来进行。给药进行16天(DB)、17天(WSU-DLCL-2)，并且以1天1次的经口给药来进行，1周内测定2次体重和肿瘤直径。在算出肿瘤体积时使用以下的式子。

[肿瘤体积(mm³)]＝[肿瘤的长径(mm)]×[肿瘤的短径(mm)]²×0.5

按照下述式子由肿瘤体积的平均值算出肿瘤萎缩率。

将化合物A1的测定最终日的抗肿瘤效果示于表9。

需要说明的是，来自DLBCL的DB细胞和WSU-DLCL-2细胞可以从ATCC、德国微生物菌种保藏中心(German Collection of Microorganisms and Cultures)等购买。

[表9]

DLBCL细胞株	萎缩率
		DB	67％
WSU-DLCL-2	72％

试验例10 DLBCL来源细胞荷瘤小鼠中的抗肿瘤试验2

将悬浮于使PBS和Matrigel(注册商标)以1∶1混合而成的溶液的来自DLBCL的DB细胞或SU-DHL-4细胞各3×10⁶个注射到4-5周龄的雄性Balb/c裸小鼠(日本查尔斯河公司)的背部皮下，从而进行移植。在肿瘤体积达到100～250mm³时进行分组，开始进行受试化合物的给药。试验以溶剂组和化合物给药组各5只来进行，溶剂组经口给药6％环糊精水溶液，化合物给药组则在6％环糊精水溶液中按照表10的用量混合受试化合物后进行经口给药。给药进行21天，并且1天1次的经口给药来进行，1周内测定2次体重和肿瘤直径。在算出肿瘤体积时使用以下的式子。

[肿瘤体积(mm³)]＝[肿瘤的长径(mm)]×[肿瘤的短径(mm)]²×0.5

将受试化合物A1、B1、C1和D1的测定最终日的抗肿瘤效果示于表10。

需要说明的是，来自DLBCL的DB细胞和SU-DHL-4是由ATCC得到的。

[表10]

由以上的结果确认了，作为本发明的药物组合物的有效成分的化合物A、化合物B、化合物C和化合物D抑制复合物I，而且还具有AMPK活化作用。此外确认了，对移植了大肠癌细胞的荷瘤小鼠、移植了来自DLBCL的细胞的荷瘤小鼠和移植了来自AML细胞的荷瘤小鼠具有抗肿瘤作用。

因此，选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐可以用于大肠癌、特别是PIK3CA突变阳性大肠癌、进而是PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性大肠癌的治疗，可以用于与线粒体复合物I相关的白血病、特别是AML的治疗，以及可以用于与线粒体复合物I相关的恶性淋巴瘤、特别是DLBCL的治疗。

含有选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐作为有效成分的药物组合物还可以含有作为任选添加剂的赋形剂，此外可以使用本领域中通常使用的赋形剂、即药剂用赋形剂或药剂用载体等通过常规方法进行制备。

关于给药，可以是利用片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、液体制剂等的经口给药，或者利用关节内、静脉内、肌肉内等的注射剂、栓剂、经皮用液体制剂、软膏剂、经皮用贴剂、经粘膜液体制剂、经粘膜贴剂等非经口给药中的任一种方式。

作为用于经口给药的固体组合物，可以使用片剂、散剂、颗粒剂等。在这样的固体组合物中，将1种或2种以上的有效成分与至少一种惰性赋形剂混合。组合物可以根据常规方法而含有惰性的添加剂，例如润滑剂、崩解剂、稳定剂、助溶剂。片剂或丸剂可以根据需要而用糖衣、或者胃溶性或肠溶性物质的膜进行包衣。

用于经口给药的液体组合物包括药剂上允许的乳浊剂、溶液剂、悬浮剂、糖浆剂或酏剂等，包含通常使用的惰性的稀释剂，例如纯化水或乙醇。该液体组合物中除了惰性的稀释剂以外，还可以含有增溶剂、润湿剂、助悬剂之类的助剂、甜味剂、风味剂、芳香剂、防腐剂。

用于非经口给药的注射剂含有无菌的水性或非水性的溶液制剂、悬浮剂或乳浊剂。作为水性的溶剂，包括例如注射用蒸馏水或生理盐水。作为非水性的溶剂，有例如乙醇之类的醇类。这样的组合物还可以含有等渗剂、防腐剂、润湿剂、乳化剂、分散剂、稳定剂、或助溶剂。这些制剂例如可以通过过滤、配合杀菌剂或辐射来进行无菌化，所述过滤是指使其通过截留细菌的过滤器。此外，这些制剂也可以通过制造无菌的固体组合物、在使用前溶解或悬浮于无菌水或无菌的注射用溶剂中来使用。

作为外用剂，包括软膏剂、硬膏剂、霜剂、凝胶剂、巴布剂、喷雾剂、洗剂等。含有通常使用的软膏基质剂、洗液基质剂、水性或非水性的液体制剂、助悬剂、乳剂等。

经鼻剂等经粘膜剂可以使用固体、液体或半固体状的物质，通过现有公知的方法来制造。还可以适当添加例如公知的赋形剂、以及pH调节剂、防腐剂、表面活性剂、润滑剂、稳定剂、增稠剂等。给药可以使用适当的用于吸入或吹送的装置。例如，可以使用定量给药吸入装置等公知的装置或喷雾器，从而将化合物单独或以配方后的混合物的粉末的形式、或者与药学上可允许的载体进行组合而以溶液或悬浮液的方式给药。干粉吸入器等可以单次或多次给药，可以使用干粉或含有粉末的胶囊。或者，也可以为使用适当的喷射剂、例如氯氟烷或二氧化碳等适当气体的加压气雾喷雾剂等方式。

通常在经口给药的情况下，1天的给药量相对于体重为约0.001～100mg/kg、优选为0.1～30mg/kg、进一步优选为0.1～10mg/kg是合适的，将该给药量1次给药或分为2次～4次给药。在静脉内给药的情况下，1天的给药量相对于体重为约0.0001～10mg/kg是合适的，1天1次～分成多次给药。此外，作为经粘膜剂，将相对于体重为约0.001～100mg/kg以1天1次～分成数次来给药。给药量可以考虑症状、年龄、性别等根据各自的情况来适当确定。

虽然根据给药途径、剂形、给药部位、赋形剂和添加剂的种类而不同，但本发明的药物组合物含有0.01～100重量％的作为有效成分的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或其制药学上可接受的盐；作为某一方式，本发明的药物组合物含有0.01～50重量％的作为有效成分的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐。

本发明的药物组合物可以与认为对大肠癌、白血病或恶性淋巴瘤显示出有效性的各种治疗剂联合使用。该联合使用可以同时给药、或者分开连续地给药或间隔期望的时间间隔来给药。在同时给药的情况下，可以为配合剂，也可以各自制剂化。

实施例

以下基于实施例来详细说明化合物A、化合物B、化合物C和化合物D的制造方法。此外，在制造例中示出它们的原料化合物的制造方法。此外，化合物A、化合物B、化合物C和化合物D的制造方法并非仅限于以下示出的具体实施例的制造方法，也可以通过这些制造方法的其它组合、或对本领域技术人员而言显而易见的方法来制造。

本说明书中，化合物的命名有时使用ACD/Name(注册商标、Advanced ChemistryDevelopment,Inc.)等命名软件。

此外，为了方便，将浓度mol/l表示为M。例如，1M氢氧化钠水溶液是指1mol/l的氢氧化钠水溶液。

粉末X射线衍射使用RINT-TTRII(RIGAKU公司)，在真空管：Cu、管电流：300mA、管电压：50kV、采样宽度：0.020°、扫描速度：4°/分钟、波长：测定衍射角范围(2θ)：2.5～40°的条件下来测定，包括数据处理在内的装置操作按照各装置所指示的方法和步骤来进行。

各晶体通过各自的粉末X射线衍射图来表征，但就粉末X射线衍射而言，从数据的性质上来看，在晶体的同一性认定中晶格间距、整体的图案是重要的，衍射角和衍射强度可能根据晶体生长方向、晶粒大小、测定条件而稍有改变，因此不应被严格地解释。对于粉末X射线衍射中的衍射角(2θ(°))而言，考虑该测定方法中通常允许的误差范围进行解释，作为某一方式，可取±0.2°的误差范围。

制造例1

在5-溴-1H-苯并咪唑-2-甲酸(1.0g)、1-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪(1.0g)、1-羟基苯并三唑(840mg)和N,N-二甲基甲酰胺(10ml，以下简记为DMF)的混合物中加入N-[3-(二甲基氨基)丙基]-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.2g)，在室温下搅拌过夜。在反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，在室温下搅拌1小时，滤取所生成的固体后，在减压下干燥。在加热回流下将所得到的固体溶解于氯仿(100ml)和乙醇(1ml)的混合物。将混合物冷却到室温后，加入己烷(100ml)。滤取所生成的固体后，在减压下干燥，以固体形式得到(5-溴-1H-苯并咪唑-2-基){4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮(1.4g)。

制造例2

将(5-溴-1H-苯并咪唑-2-基){4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮(1.2g)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(1.6g)、四(三苯基膦)钯(590mg)、碳酸钠(2.2g)、二噁烷(40ml)和水(10ml)的混合物在氩气氛、95℃下搅拌24小时后，自然冷却到室温。在反应混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，除去干燥剂后，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的残渣通过硅胶柱色谱(氯仿-甲醇)纯化，以油状物形式得到4-[2-({4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}羰基)-1H-苯并咪唑-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(1.2g)。

制造例3

在4-[2-({4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}羰基)-1H-苯并咪唑-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(1.4g)的乙醇(40ml)溶液中加入10％钯-活性炭(含水约50％的产品、500mg)，在氢气氛、室温下搅拌6小时。除去不溶物后，在减压下蒸馏除去溶剂，在得到的残渣的乙醇(40ml)溶液中加入10％钯-活性炭(含水约50％的产品、500mg)，在3.0kgf/cm²的氢气氛、室温下搅拌4小时。除去不溶物后，在减压下蒸馏除去溶剂，在得到的残渣的甲醇(41ml)溶液中加入20％氢氧化钯-活性炭(含水约50％的产品、800mg)，在3.0kgf/cm²的氢气氛、室温下搅拌24小时。除去不溶物后，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的残渣通过硅胶柱色谱(氯仿-甲醇)纯化，以油状物形式得到4-[2-({4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}羰基)-1H-苯并咪唑-5-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.1g)。

制造例4

在4-[2-({4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}羰基)-1H-苯并咪唑-5-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.1g)的乙酸乙酯(30ml)溶液中加入4M氯化氢/乙酸乙酯溶液(5ml)，在室温下搅拌6小时，静置过夜。在减压下蒸馏除去溶剂，在得到的残渣中加入乙酸乙酯和己烷。滤取所生成的固体后，在减压下干燥，以固体形式得到[5-(哌啶-4-基)-1H-苯并咪唑-2-基]{4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮的盐酸盐(740mg，但与氯化氢的摩尔比未确定)。

制造例5

在4-[2-({4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}羰基)-1H-苯并咪唑-5-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(270mg)的二氯甲烷(2ml)溶液中加入三氟乙酸(1ml)，在室温下搅拌30分钟。在反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取。将有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤后，用无水硫酸钠干燥。除去干燥剂后，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的残渣通过氨基硅胶柱色谱(氯仿-甲醇)纯化，以非晶形形式得到[5-(哌啶-4-基)-1H-苯并咪唑-2-基]{4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮(150mg)。

制造例6

将6-溴-1H-吲哚-2-甲酸(1.0g)、N-[3-(二甲基氨基)丙基]-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.1g)、1-羟基苯并三唑(770mg)和二氯甲烷(15ml)的混合物在室温下搅拌10分钟。在反应混合物中加入4-(哌嗪-1-基甲基)苯甲腈二盐酸盐(1.2g)和N,N-二异丙基乙基胺(1.6ml)，在室温下搅拌过夜。在反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取后，用氯仿-甲醇萃取。将有机层用无水硫酸镁干燥，除去干燥剂后，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的残渣通过硅胶柱色谱(氯仿-甲醇)纯化，以固体形式得到4-({4-[(6-溴-1H-吲哚-2-基)羰基]哌嗪-1-基}甲基)苯甲腈(1.1g)。

制造例7

将4-({4-[(6-溴-1H-吲哚-2-基)羰基]哌嗪-1-基}甲基)苯甲腈(1.1g)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(1.6g)、四(三苯基膦)钯(480mg)、碳酸钠(790mg)、二噁烷(18ml)和水(1.8ml)的混合物在氩气氛、100℃下搅拌过夜后，自然冷却到室温。在反应混合物中加入水，用氯仿萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，除去干燥剂后，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的残渣通过硅胶柱色谱(氯仿-甲醇、然后己烷-乙酸乙酯)纯化，将得到的固体用二异丙基醚洗涤，以固体形式得到4-(2-{[4-(4-氰基苄基)哌嗪-1-基]羰基}-1H-吲哚-6-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(470mg)。

制造例8

在4-(2-{[4-(4-氰基苄基)哌嗪-1-基]羰基}-1H-吲哚-6-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(470mg)、四氢呋喃(以下简记为THF)(14ml)和乙醇(3ml)的混合物中加入10％钯-活性炭(含水约50％的产品、230mg)，在氢气氛、室温下搅拌2小时。除去不溶物后，在减压下蒸馏除去溶剂，在得到的残渣、THF(14ml)和乙醇(3ml)的混合物中加入10％钯-活性炭(含水约50％的产品、230mg)，在氢气氛、室温下搅拌过夜。除去不溶物后，在减压下蒸馏除去溶剂，在得到的残渣、THF(14ml)和乙醇(3ml)的混合物中加入20％氢氧化钯-活性炭(含水约50％的产品、230mg)，在3.0kgf/cm²的氢气氛、室温下搅拌4小时后，静置3天。除去不溶物后，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的残渣通过氨基硅胶柱色谱(氯仿-甲醇)纯化，以油状物形式得到4-[2-(哌嗪-1-基羰基)-1H-吲哚-6-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(360mg)。

制造例9

在4-[2-(哌嗪-1-基羰基)-1H-吲哚-6-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(350mg)、4-甲酰基苯甲腈(140mg)和二氯甲烷(3ml)的混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠(360mg)，在室温下搅拌1.5小时。在反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液和甲醇，用氯仿萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，除去干燥剂后，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的残渣通过硅胶柱色谱(氯仿-甲醇)纯化，以油状物形式得到4-(2-{[4-(4-氰基苄基)哌嗪-1-基]羰基}-1H-吲哚-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(450mg)。

制造例10

在4-(2-{[4-(4-氰基苄基)哌嗪-1-基]羰基}-1H-吲哚-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(450mg)的DMF(4ml)溶液中，在冰冷却下加入氢化钠(含有约45％液体石蜡、40mg)，在室温下搅拌1小时。在室温下，在反应混合物中加入碘甲烷(58μl)，在室温下搅拌1小时。在反应混合物中加入饱和氯化铵水溶液和水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用水、饱和氯化钠水溶液依次洗涤后，用无水硫酸钠干燥。除去干燥剂后，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的残渣通过硅胶柱色谱(氯仿-甲醇)纯化，以油状物形式得到4-(2-{[4-(4-氰基苄基)哌嗪-1-基]羰基}-1-甲基-1H-吲哚-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(200mg)。

制造例11

在4-(2-{[4-(4-氰基苄基)哌嗪-1-基]羰基}-1-甲基-1H-吲哚-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(200mg)的二氯甲烷(1ml)溶液中，在室温下加入三氟乙酸(500μl)，在室温下搅拌2小时。在减压下蒸馏除去溶剂，在得到的残渣中加入饱和碳酸氢钠水溶液和水，用氯仿萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，除去干燥剂后，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的残渣通过氨基硅胶柱色谱(氯仿-甲醇)纯化，以固体形式得到4-[(4-{[1-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-2-基]羰基}哌嗪-1-基)甲基]苯甲腈(120mg)。

制造例12

在5-乙氧基吡嗪-2-甲酸乙酯(4.5g)的甲醇(100ml)溶液中，在冰冷却下将硼氢化钠(2.6g)分数次加入，在室温下搅拌6小时。在反应混合物中加入1M盐酸使pH达到4后，在室温下搅拌15分钟。在混合物中加入1M氢氧化钠水溶液使pH达到9后，用氯仿萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，除去干燥剂后，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的残渣通过硅胶柱色谱(己烷-乙酸乙酯)纯化，以油状物形式得到(5-乙氧基吡嗪-2-基)甲醇(2.6g)。

制造例13

在(5-乙氧基吡嗪-2-基)甲醇(150mg)的二氯甲烷(3ml)溶液中，在冰冷却下加入亚硫酰氯(200μl)，在室温下搅拌30分钟。在减压下浓缩，以油状物形式得到2-(氯甲基)-5-乙氧基吡嗪(160mg)。

制造例14

将5-溴-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(5.2g)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(13g)、四(三苯基膦)钯(5.3g)、2M碳酸钠水溶液(28ml)和二噁烷(110ml)的混合物在氩气氛、95℃下搅拌17小时后，自然冷却到室温。在反应混合物中加入水，用氯仿萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，除去干燥剂后，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的残渣通过硅胶柱色谱(己烷-乙酸乙酯、然后氯仿-甲醇)和氨基硅胶柱色谱(己烷-乙酸乙酯)纯化，在得到的固体(6.5g)中加入己烷-二异丙基醚而粉末化。滤取固体后，在减压下干燥，以固体形式得到5-[1-(叔丁氧羰基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(5.0g)。

制造例15

在5-[1-(叔丁氧羰基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(5.0g)、乙醇(55ml)和THF(55ml)的混合物中加入20％氢氧化钯-活性炭(含水约50％的产品、1.0g)，在氢气氛、室温下搅拌3小时。除去不溶物后，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的残渣通过氨基硅胶柱色谱(己烷-乙酸乙酯)纯化，以固体形式得到5-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(4.8g)。

制造例16

在5-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(4.8g)、碳酸铯(7.0g)和乙腈(70ml)的混合物中加入硫酸二甲酯(1.8ml)，在75℃下搅拌2小时后，自然冷却到室温。在反应混合物中乙酸乙酯后，用水、饱和氯化钠水溶液依次洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，除去干燥剂后，在减压下蒸馏除去溶剂，以油状物形式得到5-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(5.7g)。

制造例17

在5-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(5.7g)、二噁烷(23ml)和乙醇(23ml)的混合物中加入1M氢氧化钠水溶液(23ml)，在60℃下搅拌过夜后，自然冷却到室温。在反应混合物中，在冰冷却下加入1M盐酸(23ml)，用氯仿萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，除去干燥剂后，在减压下蒸馏除去溶剂，以非晶形形式得到5-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸(4.8g)。

制造例18

在5-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸(4.8g)、1-羟基苯并三唑(1.9g)、N,N-二异丙基乙基胺(6.8ml)和二氯甲烷(55ml)的混合物中加入4-(哌嗪-1-基甲基)苯甲腈二盐酸盐(4.0g)和N-[3-(二甲基氨基)丙基]-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(3.1g)，在室温下搅拌2小时。在反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液和水，用氯仿萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，除去干燥剂后，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的残渣通过硅胶柱色谱(己烷-乙酸乙酯)纯化，以非晶形形式得到4-(2-{[4-(4-氰基苄基)哌嗪-1-基]羰基}-1-甲基-1H-吲哚-5-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(6.8g)。

制造例19

在4-(2-{[4-(4-氰基苄基)哌嗪-1-基]羰基}-1-甲基-1H-吲哚-5-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(6.8g)的二氯甲烷(10ml)溶液中，在室温下加入三氟乙酸(5ml)，在室温下搅拌2小时。在减压下蒸馏除去溶剂，在得到的残渣中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，除去干燥剂后，在减压下蒸馏除去溶剂，以非晶形形式得到4-[(4-{[1-甲基-5-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-2-基]羰基}哌嗪-1-基)甲基]苯甲腈(7.1g)。

实施例1

将[5-(哌啶-4-基)-1H-苯并咪唑-2-基]{4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮的盐酸盐(200mg)、6-甲氧基烟醛(100mg)、三乙胺(140μl)、乙酸(100μl)和二氯甲烷(4ml)的混合物在室温下搅拌10分钟。在反应混合物中，在室温下加入三乙酰氧基硼氢化钠(580mg)，在室温下搅拌2小时后，在室温下静置过夜。在反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，除去干燥剂后，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的粗产物通过氨基硅胶柱色谱(氯仿-甲醇)纯化，在得到的油状物(化合物A；110mg)的丙酮溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(69mg)，在减压下蒸馏除去溶剂。在得到的残渣中加入乙醇(3ml)和二异丙醚(20ml)，在室温下搅拌。滤取所生成的固体后，在减压下干燥，以非晶形形式得到(5-{1-[(6-甲氧基吡啶-3-基)甲基]哌啶-4-基}-1H-苯并咪唑-2-基){4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮(化合物A)的二对甲苯磺酸盐(180mg)。此外，将与上述同样地制造的化合物A(200mg)与乙腈(10ml)的混合物在95℃下搅拌30分钟后，加入对甲苯磺酸一水合物(130mg)。将混合物在搅拌下自然冷却至室温后，在室温下搅拌7天。滤取所生成的固体后，在减压下干燥，以晶体形式得到(5-{1-[(6-甲氧基吡啶-3-基)甲基]哌啶-4-基}-1H-苯并咪唑-2-基){4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮(化合物A)的二对甲苯磺酸盐(300mg)。将该晶体的粉末X射线衍射数据示于后述表16。

实施例2

在[5-(哌啶-4-基)-1H-苯并咪唑-2-基]{4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮(47mg)、N,N-二异丙基乙基胺(68μl)、乙腈(1ml)和DMF(1ml)的混合物中加入2-(氯甲基)-5-甲氧基吡嗪(16mg)，在室温下搅拌5天。在反应混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，除去干燥剂后，在减压下蒸馏除去溶剂。将得到的粗产物通过硅胶柱色谱(氯仿-甲醇)纯化，在所得到的油状物(化合物B；38mg)的丙酮(2ml)溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(24mg)和乙酸乙酯(3ml)，在室温下搅拌过夜。滤取所生成的固体后，在减压下干燥，以固体形式得到(5-{1-[(5-甲氧基吡嗪-2-基)甲基]哌啶-4-基}-1H-苯并咪唑-2-基){4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮(化合物B)的二对甲苯磺酸盐(53mg)。此外，将与上述同样制造的化合物B(200mg)、丙酮(18ml)和乙腈(3ml)的混合物在80℃下搅拌后，加入对甲苯磺酸一水合物(130mg)。将混合物在搅拌下自然冷却到室温后，在室温下搅拌72小时。滤取所生成的固体后，在减压下干燥，以晶体形式得到(5-{1-[(5-甲氧基吡嗪-2-基)甲基]哌啶-4-基}-1H-苯并咪唑-2-基){4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮(化合物B)的二对甲苯磺酸盐(300mg)。将该晶体的粉末X射线衍射数据示于后述表16。

实施例3

在4-[(4-{[1-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-2-基]羰基}哌嗪-1-基)甲基]苯甲腈(120mg)、N,N-二异丙基乙基胺(160μl)、乙腈(1ml)的混合物中加入2-(氯甲基)-5-乙氧基吡嗪(53mg)的乙腈(500μl)溶液，在室温下搅拌过夜。在减压下将反应混合物的溶剂蒸馏除去后，将得到的残渣通过硅胶柱色谱(氯仿-甲醇)和DIOL硅胶柱色谱(己烷-乙酸乙酯)纯化。将得到的固体(110mg)和丙酮(3ml)的混合物在80℃下搅拌后，加入对甲苯磺酸一水合物(68mg)。将混合物在搅拌下自然冷却到室温后，在室温下搅拌过夜。滤取所生成的固体后，在减压下干燥，以晶体形式得到4-({4-[(6-{1-[(5-乙氧基吡嗪-2-基)甲基]哌啶-4-基}-1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]哌嗪-1-基}甲基)苯甲腈(化合物C)的二对甲苯磺酸盐(130mg)。将该晶体的粉末X射线衍射数据示于后述表16。

实施例4

在4-[(4-{[1-甲基-5-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-2-基]羰基}哌嗪-1-基)甲基]苯甲腈(2.0g)、N,N-二异丙基乙基胺(2.7ml)、乙腈(10ml)的混合物中加入2-(氯甲基)-5-甲氧基吡嗪(760mg)的二氯甲烷(5ml)溶液，在室温下搅拌5天。在减压下将反应混合物的溶剂蒸馏除去，将得到的残渣通过硅胶柱色谱(氯仿-甲醇)和氨基硅胶柱色谱(己烷-乙酸乙酯、然后氯仿-甲醇)纯化，得到非晶形物(1.4g)。将得到的非晶形物(1.2g)通过硅胶柱色谱(氯仿-乙酸乙酯)纯化，将得到的固体(760mg)和丙酮(100ml)的混合物在80℃下加热搅拌30分钟后，加入对甲苯磺酸一水合物(510mg)。将混合物在搅拌下自然冷却到室温后，在室温下搅拌4小时。滤取所生成的固体后，在减压下干燥，以晶体形式得到4-({4-[(5-{1-[(5-甲氧基吡嗪-2-基)甲基]哌啶-4-基}-1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]哌嗪-1-基}甲基)苯甲腈(化合物D)的二对甲苯磺酸盐(1.1g)。将该晶体的粉末X射线衍射数据示于后述表16。

将制造例化合物和实施例化合物的结构、以及物理化学数据示于后述表11～表16。

需要说明的是，在后述表11～表16中，有时使用以下的缩写。Pre：制造例编号，Ex：实施例编号，Str：化学结构式，Dat：物理化学数据，ESI+：质谱中的m/z值(离子化法ESI，无特别声明时为[M+H]⁺)，ESI-：质谱中的m/z值(离子化法ESI，无特别声明时为[M-H]^-)，APCI/ESI：APCI/ESI-MS(大气压化学离子化法APCI，APCI/ESI是指同时测定APCI和ESI，APCI/ESI+为[M+H]⁺)，NMR1：CD₃OD中的¹H-NMR中的峰的δ(ppm)，NMR2：DMSO-d₆中的¹H-NMR中的峰的δ(ppm)，Me：甲基，Et：乙基，Boc：叔丁氧羰基，以及，2θ(°)：粉末X射线衍射中的衍射角。

进而，化学结构式中的xHCl表示该化合物为盐酸盐、但与氯化氢的摩尔比未确定，2TsOH表示该化合物为二对甲苯磺酸盐。

[表11]

[表12]

[表13]

[表14]

[表15]

[表16]

产业上的利用可能性

作为本发明的药物组合物的有效成分的选自化合物A、化合物B、化合物C和化合物D中的化合物或它们的制药学上可接受的盐具有线粒体复合物I抑制作用和AMPK活化作用，期待作为大肠癌、特别是PIK3CA突变阳性大肠癌、进而是PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性大肠癌、白血病、特别是AML、和/或恶性淋巴瘤、特别是DLBCL的治疗用药物组合物的有效成分来使用。

Claims

1.一种选自大肠癌、白血病和恶性淋巴瘤中的癌症的治疗用药物组合物，其含有以下化合物或它们的制药学上可接受的盐作为有效成分，所述化合物选自：

(5-{1-[(6-甲氧基吡啶-3-基)甲基]哌啶-4-基}-1H-苯并咪唑-2-基){4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮、(5-{1-[(5-甲氧基吡嗪-2-基)甲基]哌啶-4-基}-1H-苯并咪唑-2-基){4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮、4-({4-[(6-{1-[(5-乙氧基吡嗪-2-基)甲基]哌啶-4-基}-1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]哌嗪-1-基}甲基)苯甲腈和4-({4-[(5-{1-[(5-甲氧基吡嗪-2-基)甲基]哌啶-4-基}-1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]哌嗪-1-基}甲基)苯甲腈。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，选自大肠癌、白血病和恶性淋巴瘤中的癌症为大肠癌。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，选自大肠癌、白血病和恶性淋巴瘤中的为白血病。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，选自大肠癌、白血病和恶性淋巴瘤中的癌症为恶性淋巴瘤。

5.根据权利要求2所述的药物组合物，其中，大肠癌为PIK3CA突变阳性大肠癌。

6.根据权利要求2所述的药物组合物，其中，大肠癌为PIK3CA突变阳性且BRAF突变阳性大肠癌。

7.根据权利要求3所述的药物组合物，其中，白血病为急性髄系白血病。

8.根据权利要求3所述的药物组合物，其中，白血病为PI3K/Akt/mTOR通路亢进的急性髄系白血病。

9.根据权利要求4所述的药物组合物，其中，恶性淋巴瘤为弥漫性大B细胞淋巴瘤。

10.根据权利要求5、6、7、8或9中的任一项所述的药物组合物，其中，含有(5-{1-[(6-甲氧基吡啶-3-基)甲基]哌啶-4-基}-1H-苯并咪唑-2-基){4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮或其制药学上可接受的盐作为有效成分。

11.根据权利要求5、6、7、8或9中的任一项所述的药物组合物，其中，含有(5-{1-[(5-甲氧基吡嗪-2-基)甲基]哌啶-4-基}-1H-苯并咪唑-2-基){4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮或其制药学上可接受的盐作为有效成分。

12.根据权利要求5、6、7、8或9中的任一项所述的药物组合物，其中，含有4-({4-[(6-{1-[(5-乙氧基吡嗪-2-基)甲基]哌啶-4-基}-1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]哌嗪-1-基}甲基)苯甲腈或其制药学上可接受的盐作为有效成分。

13.根据权利要求5、6、7、8或9中的任一项所述的药物组合物，其中，含有4-({4-[(5-{1-[(5-甲氧基吡嗪-2-基)甲基]哌啶-4-基}-1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]哌嗪-1-基}甲基)苯甲腈或其制药学上可接受的盐作为有效成分。

14.根据权利要求5、6、7、8或9中的任一项所述的药物组合物，其中，含有(5-{1-[(6-甲氧基吡啶-3-基)甲基]哌啶-4-基}-1H-苯并咪唑-2-基){4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮二对甲苯磺酸盐作为有效成分。

15.根据权利要求5、6、7、8或9中的任一项所述的药物组合物，其中，含有(5-{1-[(5-甲氧基吡嗪-2-基)甲基]哌啶-4-基}-1H-苯并咪唑-2-基){4-[4-(三氟甲基)苄基]哌嗪-1-基}甲酮二对甲苯磺酸盐作为有效成分。

16.根据权利要求5、6、7、8或9中的任一项所述的药物组合物，其中，含有4-({4-[(6-{1-[(5-乙氧基吡嗪-2-基)甲基]哌啶-4-基}-1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]哌嗪-1-基}甲基)苯甲腈二对甲苯磺酸盐作为有效成分。

17.根据权利要求5、6、7、8或9中的任一项所述的药物组合物，其中，含有4-({4-[(5-{1-[(5-甲氧基吡嗪-2-基)甲基]哌啶-4-基}-1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]哌嗪-1-基}甲基)苯甲腈二对甲苯磺酸盐作为有效成分。