CN106967755A - 一种以半夏为原料发酵植物促生菌在抗虫中的应用 - Google Patents

一种以半夏为原料发酵植物促生菌在抗虫中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种发酵半夏制备杀虫剂的方法，其工艺特点是以半夏为主要原料，辅以生活垃圾、淀粉类物质及水，以市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47为发酵菌株，按照半夏：生活垃圾：淀粉类物质:纯净水＝1～3:1～2:0.01:7～8的比例和体系1～3％的菌株接种量，发酵温度为25～35℃，转速为100～120rpm，保持pH＝5～8，发酵时间6～9d。本发明完全发酵，使其中的多种酶、维生素、氨基酸和微量元素充分释放出来，使产品提高杀虫剂的药效及其功能。而且又不影响植物性杀虫剂的生理活性物质。

Description

一种以半夏为原料发酵植物促生菌在抗虫中的应用
技术领域
一种微生物发酵制备杀虫剂的方法，涉及到用市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47冻干粉，以半夏为原料发酵制备杀虫剂的方法，属于生物工程及发酵技术领域。
背景技术
半夏为天南星科多年生草本植物。高15-35cm，块茎近球形，直径0.5-3.0cm，基生叶1～4枚，叶出自块茎顶端，叶柄长5-25cm，叶柄下部有一白色或棕色珠芽，直径3-8cm，偶见叶片基部亦具一白色或棕色小珠芽，直径2-4mm。花单性，花序轴下着生雌花，无花被，有雌蕊20-70个，花柱短，雌雄同株；雄花位于花序轴上部，白色，无被，雄蕊密集成圆筒形，与雌花间隔3-7mm，其间佛焰苞合围处有一直径为1mm的小孔，连通上下，花序末端尾状，伸出佛焰苞，绿色或表紫色，直立，或呈“S”形弯曲。半夏块茎含挥发油、β-谷甾醇-β-D-葡萄糖甙、3，4-二羟基苯甲醛，又含药理作用与毒芹碱及烟碱相似的生物碱具有一定的杀虫作用。但植物性杀虫剂多用有机溶剂或煎煮提取，1)不利于节能也有较大的环境风险；2)影响活性物质的稳定性和遗失活性物质；3)增加成本使得开发应用困难较大，作用效果缓慢，因此给植物源杀虫剂的研发和生产带来了巨大的经济困难。利用合适的植物促生菌发酵半夏，不仅有利于生理活性物质的提取，还不易造成活性物质的失活，促生菌本身还有较好的杀虫防病和促生作用。有利于改善植物生长和增强杀虫效果。有利于环境保护和半夏植物本身的有效利用。
发明内容
本发明利用半夏的丰富资源，通过微生物进行发酵产生抗氧化因子及植物促生菌产生酶类、醇类及芳香物质等多类有义代谢产物从而提高杀虫剂的药效及其功能，本发明拥有着发酵时间短，有害微生物滋生少甚至没有，避免由于过长时间发酵而产生的病毒，以及能产生脂肽等生理活性物质等优点，从而提高杀虫防病的功效和植物生长的促生作用。
本发明配方及用法：
(1)挑选材料：选择新鲜、质量好的半夏为发酵主原料。
(2)材料的处理：先用自来水冲洗，再使用无锡百年尚水饮品有限公司提供的百年尚水清水洗两遍，最后再用0.9％的NaCl溶液侵泡120秒，沥干备用。
(3)菌种培养：使用无锡百年尚水饮品有限公司提供的百年尚水配制LB培养基，将原保存菌株活化，培养约48小时得到的菌液备用；
(4)接种发酵：均按照接种比例1～3％，将市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47按一定的比例接入发酵原液，各菌浓度为106CFU/ml，发酵3～9d，pH值5.0～8.0，温度25℃～35℃。
(5)后期处理制作：粗过滤，初步筛掉大颗粒残渣，避免半夏久放容易造成酸败，过滤条件：过滤筛数目为20～32目。细过滤：进一步滤掉小型颗粒残渣，使液态呈现较清澈的状态，过滤条件：过滤筛数目为80～100目，既得以半夏发酵原料的杀虫剂。
步骤(1)原料的制备方法包括如下步骤：
(11)所使用的工具、器具均要灭菌，无油腻。
(12)把半夏用纯净水洗净，再用纯净水或0.9％的盐水浸泡沥干。
(13)再将半夏置于已灭菌的容器中，后加入生活垃圾及淀粉类物质和纯净水，其中发酵原液中体积比半夏：生活垃圾：淀粉类物质:纯净水＝1～3:1～2:0.01:7～8，即得半夏发酵原液。
发明的有益效果：
本利用合适的植物促生菌发酵半夏，不仅有利于生理活性物质的提取，保持活性物质的稳定性，促生菌本身可通过优势菌株抑制了其他杂菌滋生从而有较好的杀虫防病和促生作用。有利于改善植物生长和增强杀虫效果。有利于环境保护和半夏植物本身的有效利用。提高杀虫剂的经济价值。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完善地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种以半夏为原料发酵制备杀虫剂的方法，包括以下步骤：
(1)选择新鲜、质量好的半夏做为发酵主要原料。
(2)纯净水清水洗两遍，最后再用0.9％的NaCl溶液浸泡，低温杀菌，然后沥干，装入纯净水清洗好的容器中，大概占体积的20％，加入占总液体体积5％的生活垃圾及1％的淀粉类物质为发酵原液备用。
(3)配制LB培养基，将原保存菌株活化，100r/min振荡培养约48小时得到的发酵菌液备用；
(4)均按照接种比例3％，将市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47按等比分别取接入发酵原液，120r/min振荡培养发酵6d，pH值6.0，温度25℃。
(5)先进行粗过滤，过滤筛数目为20～32目。然后细过滤，过滤筛数目为为80～100目，即得半夏为发酵原料的杀虫剂。
实施例2
一种以半夏为原料发酵制备杀虫剂的方法，包括以下步骤：
(1)选择新鲜、质量好的半夏做为发酵主要原料。
(2)纯净水清水洗两遍，最后再用0.9％的NaCl溶液浸泡，低温杀菌，然后沥干，装入纯净水清洗好的容器中，大概占体积的30％，加入占总液体体积10％的生活垃圾及1％的淀粉类物质为发酵原液备用。
(3)配制LB培养基，将原保存菌株活化，100r/min振荡培养约48小时得到的发酵菌液备用；
(4)按照不同接种比例(市售短小芽孢杆菌：苏云杆菌：解淀粉芽孢杆菌＝2：3：1)，将接种量为2％市售短小芽孢杆菌：3％苏云杆菌：1％解淀粉芽孢杆菌H47分别取接入发酵原液，120r/min振荡发酵6d，pH值6.0，温度25℃。
(5)先进行粗过滤，过滤筛数目为20～32目。然后细过滤，过滤筛数目为为80～100目，即得半夏为发酵原料的杀虫剂。
实施例3
一种以半夏为原料发酵制备杀虫剂的方法，包括以下步骤：
(1)选择新鲜、质量好的半夏做为发酵主要原料。
(2)纯净水清水洗两遍，最后再用0.9％的NaCl溶液浸泡，低温杀菌，然后沥干，装入纯净水清洗好的容器中，大概占体积的40％，加入占总液体体积15％的生活垃圾及1％的淀粉类物质为发酵原液备用。
(3)配制LB培养基，将原保存菌株活化，100r/min振荡培养约48小时得到的发酵菌液备用；
(4)按照不同的接种比例(市售短小芽孢杆菌：苏云杆菌：解淀粉芽孢杆菌＝1：2：3)，将接种量1％市售短小芽孢杆菌、2％苏云杆菌和3％解淀粉芽孢杆菌H47分别取接入发酵原液，120r/min振荡发酵6d，pH值6.0，温度25℃。
(5)先进行粗过滤，过滤筛数目为20～32目。然后细过滤，过滤筛数目为为80～100目，即得半夏为发酵原料的杀虫剂。
实施例4
一种以半夏为原料发酵制备杀虫剂的方法，包括以下步骤：
(1)选择新鲜、质量好的半夏做为发酵主要原料。
(2)纯净水清水洗两遍，最后再用0.9％的NaCl溶液浸泡，低温杀菌，然后沥干，装入纯净水清洗好的容器中，大概占体积的50％，加入占总液体体积20％的生活垃圾及1％的淀粉类物质为发酵原液备用。
(3)配制LB培养基，将原保存菌株活化，100r/min振荡培养约48小时得到的发酵菌液备用；
(4)按照不同的接种比例(市售短小芽孢杆菌：苏云杆菌：解淀粉芽孢杆菌＝1：3：2)，将接种量为1％市售短小芽孢杆菌、3％苏云杆菌和2％解淀粉芽孢杆菌H47分别取接入发酵原液，120r/min振荡发酵6d，pH值6.0，温度25℃。
先进行粗过滤，过滤筛数目为20～32目。然后细过滤，过滤筛数目为为80～100目，即得半夏为发酵原料的杀虫剂。
本发明中的半夏含有丰富的次级代谢物质以及半夏醚提物及醇提物等对植物具有促生作用且药效明显，但是不仅仅限于此，可以根据实际情况，确定半夏的鲜重或是干重的添加量或者选择淀粉类物质及生活垃圾混合在一起，只要能达到杀虫剂配比合理、杀虫剂的药效就可以发挥明显作用。
另外发酵原液的选择和配比、接菌量也不限于实施例所举的组合，可根据实际情况选择不同的组合。
以上所述仅为本发明的较佳实例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的思路和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种以半夏为原料发酵制备杀虫剂的技术，其特点是以质量好的半夏为主要发酵原料，加入淀粉及生活垃圾，采用市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47，生产制备杀虫剂，其工艺为：
1)选用新鲜无病变的半夏用自来水洗净表面污物，再使用无锡百年尚水饮品有限公司提供的百年尚水清水洗两遍，最后再用0.9％的NaCl溶液侵泡120秒，沥干，放入罐中，按体积比为半夏：生活垃圾：淀粉类物质:纯净水＝1～3:1～2:0.01:7～8配制成发酵原液。
2)配制LB培养基，将原保存菌株活化，培养约48小时得到的菌液备用；再将市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47按一定的比例接入发酵原液
3)发酵体系中，加入体系1～3％的菌种，发酵温度为25～35℃，转速为100～120rpm，保持pH＝5～8，发酵时间6～9d。
4))发酵完成后的发酵液先经粗过滤，过滤筛数目为20～32目；再细过滤，过滤筛数目为80～100目，即可制备得到以半夏为原料的杀虫剂。
2.根据权利要求1所述的一种发酵半夏制备杀虫剂的方法，其特征是：均按照接种比例4％，将市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47等比接入发酵原液，各菌浓度为106CFU/ml，转速为100～200rpm，发酵3～9d，pH值5.0～8.0，温度25℃～35℃。
3.根据权利要求1所述的一种发酵半夏制备杀虫剂的方法，其特征是：配制的LB培养基为：胰蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠10g,定容到1L，调pH＝7.0。
4.根据权利要求1所述的一种发酵半夏制备杀虫剂的方法，其特征是：发酵原液体积比为半夏：生活垃圾：淀粉类物质:纯净水＝1～3:1～2:0.01:7～8。
5.根据权利要求1所述的一种发酵半夏制备杀虫剂的方法，其特征是：发酵菌株采用2013年6月24日保存于中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC M 2013283的Bacillus amyloliquefaciens H47的解淀粉芽孢杆菌菌株为发酵菌株。
6.根据权利要求1所述的一种发酵半夏制备杀虫剂的方法，其特征是：菌种的加入量为体系的1～3％。
7.根据权利要求1所述的一种发酵半夏制备杀虫剂的方法，其特征是：原料的处理方法为选用新鲜无病变的半夏用自来水洗净表面污物，用0.9％的NaCl溶液侵泡120秒，沥干备用。
8.根据权利要求1所述的一种发酵半夏制备杀虫剂的方法，其特征是：原料及菌种、生活垃圾及淀粉类物质混合均匀，发酵温度为25～35℃，转速100～200rpm，保持pH＝5～8，发酵时间6～9d。
9.根据权利要求1所述的一种发酵半夏制备杀虫剂的方法，其特征是：发酵完成后的发酵液先经粗过滤，过滤筛数目为20～32目；再细过滤，过滤筛数目为80～100目。
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