CN106967641A - 一种微嗜酸寡养单胞菌及其应用 - Google Patents

一种微嗜酸寡养单胞菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN106967641A
CN106967641A CN201710237439.XA CN201710237439A CN106967641A CN 106967641 A CN106967641 A CN 106967641A CN 201710237439 A CN201710237439 A CN 201710237439A CN 106967641 A CN106967641 A CN 106967641A
Authority
CN
China
Prior art keywords
micro
stenotrophomonas
acidophilus
application
acidophilus stenotrophomonas
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710237439.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN106967641B (zh
Inventor
赵晓祥
孙璐璐
周月
白恒
程晨
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Donghua University
National Dong Hwa University
Original Assignee
Donghua University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Donghua University filed Critical Donghua University
Priority to CN201710237439.XA priority Critical patent/CN106967641B/zh
Publication of CN106967641A publication Critical patent/CN106967641A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106967641B publication Critical patent/CN106967641B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/02Acetobacter
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C02TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02FTREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F3/00Biological treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F3/34Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/10Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C02TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02FTREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2101/00Nature of the contaminant
    • C02F2101/30Organic compounds
    • C02F2101/308Dyes; Colorants; Fluorescent agents

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Hydrology & Water Resources (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及一种微嗜酸寡养单胞菌及其应用,为微嗜酸寡养单胞菌(Stenotrophomonas acidaminiphila)SP‑3,保藏号为CGMCC No.13711,核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。用于脱色降解颜料红23废水。本发明对偶氮染料废水的降解效果好,应用方法简单,成本低,具有良好的应用前景。

Description

一种微嗜酸寡养单胞菌及其应用
技术领域
本发明属于染料脱色降解领域,特别涉及一种微嗜酸寡养单胞菌及其应用。
背景技术
染料作为一种有机化合物可以溶于水和其他介质中,使纤维染成各种各样牢靠的颜色。全世界每年约有80万吨产量的染料,其中中国年产量约为15万吨,位居世界前列。染料的排放首先造成水体色度的变化,即便存在微量的染料都会造成水体色度上较大的变化,不仅影响水体的透光度和溶解度,而且对水中生物的生存造成威胁。印染行业所使用的染料可根据其化学结构划分成多种类型,其中偶氮染料作为印染行业中广泛使用且用量最大的一类人工合成染料,占全部染料的70%左右。
颜料红23作为一种色酚系偶氮有机颜料,该颜料品种呈暗蓝光红色,耐光牢度为3级,相对密度为1.47g/cm3,粒径小,呈透明型,粘度较高,耐溶剂性能较差导致在包装印墨中出现结晶现象。可用于织物印花,NC-型及水性印墨,亦可用于涂料着色,只是耐罩漆性能稍差。在特殊条件下,它能分解产生20多种致癌芳香胺,经过活化作用改变人体的基因结构引起病变和诱发癌症。
目前,关于脱色偶氮染料主要的研究方向集中在物理方法和化学方法,物理法主要通过过滤、吸附、萃取、沉淀、膜分离等一系列方法不改变染料化学结构,化学法主要是通过化学混凝、氧化和电化学法等化学作用去除或降低废水中的污染物,并使污染物的性质改变。物化法对染料废水的脱色效果较好,但是由于其操作成本较高,过程中可能造成二次污染,相比之下,生物法成本低、费用少、避免产生二次污染,并且由于微生物适应性强、繁殖速度快等特点在偶氮染料废水的降解脱色研究中有着广泛的前景,对于改善纺织印染行业及颜料化工厂等废水处理问题具有一定的现实意义。
由于微生物对环境的适应性强,且污染过程经历一段自然驯化期,因而可以通过驯化从自然环境中筛选到可降解某一污染物的微生物降解菌株。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种微嗜酸寡养单胞菌及其应用,该微嗜酸寡养单胞菌,对偶氮染料废水的降解效果好,应用方法简单,成本低,具有良好的应用前景。
本发明提供了一种微嗜酸寡养单胞菌,所述微嗜酸寡养单胞菌为微嗜酸寡养单胞菌(Stenotrophomonas acidaminiphila)SP-3,保藏号为CGMCC No.13711,核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明的微嗜酸寡养单胞菌(Stenotrophomonas acidaminiphila)SP-3已于2017年02月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,保藏号为CGMCC No.13711。
本发明还提供了一种微嗜酸寡养单胞菌的应用,用于脱色降解颜料红23废水。
所述脱色降解颜料红23废水的具体步骤如下:在无菌条件下,将微嗜酸寡养单胞菌接种到富集培养基中,在恒温摇床中震荡培养;取富集培养后的菌液进行离心配置成菌悬液,然后将菌悬液接种到含有颜料红23的脱色培养基中进行脱色降解,即可。
所述富集培养基的组成为:10g/L鱼粉蛋白胨、5g/L酵母粉、10g/L NaCl,1L蒸馏水,pH=6.8~7.2。
所述脱色培养基的组成为:0.1g/L CaCl2、0.5g/L MgSO4·7H2O、1g/L NaCl、1g/LK2HPO4、1g/L Na2HPO4、10g/L氮源或碳源,1L蒸馏水,pH=6.8~7.2。
所述氮源为鱼粉蛋白胨、尿素、硫酸铵、磷酸铵或氯化铵。优选的,氮源为鱼粉蛋白胨。
所述碳源为葡萄糖、麦芽糖、可溶性淀粉、酵母粉或牛肉膏。优选的,碳源为酵母粉。
所述震荡培养的条件为:30-40℃、120-130rpm条件下培养18-24h。
所述脱色降解条件为:接种量为0.1~2%,pH为4.5~9.5,温度为10~50℃,盐度为0~8%,120-130rpm条件下培养18-24h。
优选的,接种量低于1%(最优0.5%),pH为6.5,温度为35℃,盐度小于4%对颜料红23废水的脱色率达90%。
所述微嗜酸寡养单胞菌以海藻酸钠作为包埋载体、FeCl3作为交联剂制成固定化小球进行脱色降解。
固定化小球的制备方法包括如下步骤:
取海藻酸钠加入无菌水中,在加热的条件下待完全溶解后配成胶状溶液,待冷却至30℃。在无菌条件下,将菌悬液与胶状溶液混合均匀。用注射器于将混合物快速地滴入不断搅拌的FeCl3溶液中,形成均匀规则的小球,将小球浸泡在FeCl3溶液中,并置于4℃冰箱内静置24h。将固化交联后的小球用无菌水清洗2-3次,即得固定化微生物小球。
优选的,质量分数为5%的FeCl3作为交联剂,菌体量为1.5%制成固定化小球,投加量为50g/L时对颜料红23废水的脱色率达86%。
有益效果
本发明对偶氮染料废水的降解效果好,脱色率可达90%;还可制成固定化小球,脱色率可达86%;应用方法简单,成本低,固定后的菌株在不良环境中表现出良好的耐受性,提高对环境的适应能力,在偶氮染料废水处理中具有良好的应用前景。
附图说明
图1为Stenotrophomonas acidaminiphila菌株的生长曲线及颜料红23的脱色曲线;
图2为碳源种类对颜料红23废水的脱色效果的影响;
图3为氮源种类对颜料红23废水的脱色效果的影响;
图4为接种量对颜料红23废水的脱色效果的影响;
图5为温度对颜料红23废水的脱色效果的影响;
图6为pH对颜料红23废水的脱色效果的影响;
图7为盐度对颜料红23废水的脱色效果的影响;
图8为Stenotrophomonas acidaminiphila菌株对颜料红23废水脱色前后的紫外光谱图;
图9为海藻酸钠作为包埋载体、FeCl3作为交联剂的Stenotrophomonasacidaminiphila菌株固定化小球及其脱色效果。
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解,在阅读了本发明讲授的内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
1、菌株的分离
(1)采集污水处理厂的活性污泥,置于一个长31.2cm、宽22.0cm、高22.5cm的玻璃驯化装置,在不加营养物质,没有进水出水交换的基础上用空压机不间断曝气3天。然后进行换水,排出装置中大约10L的泥水混合物,加入营养液并进行不间断曝气。在培养10天后在加入营养液的同时开始加入颜料红23溶液,保持装置中颜料红23浓度在10mg/L左右,并按照SBR工艺(进水、曝气、静置、排水、闲置)进行驯化培养,隔天换水,培养驯化30天。培养液的配制:400mg/L葡萄糖、80mg/L无水乙酸钠、125mg/L NaHCO3、4.75mg/L KCl、2.5mg/L无水CaCl2、24mg/L KH2PO4、27.5mg/L MgSO4·7H2O、矿物盐配方1mL。矿物盐配方:375mg/LFeCl3、37.5mg/L H3BO3、7.5mg/L CuSO4·5H2O、45mg/L KI、30mg/L MnCl2·4H2O、30mg/LZnSO4·7H2O、2500mg/L EDTA,配制成约10L营养液。
(2)取1mL SBR混合废水上清液,加入100mL液体培养基的250mL的三角瓶中,于35℃恒温振荡培养12h。采用相同的方法接种一代培养液1mL至新鲜的富集培养基中进行振荡培养,使样品中的好氧菌群得到富集和活化。富集培养基的主要成分为:10g/L鱼粉蛋白胨、5g/L酵母粉、10g/L NaCl,1L蒸馏水,pH=6.8~7.2。
(3)分装颜料红23筛选培养基100mL于250mL的锥形瓶中,在无菌条件下,接种第一代活化菌液1mL进行筛选培养。采用此方法对混合菌液连续筛选培养5代,利用颜料红23作为碳源进行以3天为一个周期的逐渐增加污染物浓度的驯化方法进行驯化培养。摇床转速为120rpm,温度为35℃,培养时间为半个月。在无机盐培养基(0.1g/L CaCl2、0.5g/LMgSO4·7H2O、1g/L NaCl、1g/L KH2PO4、1g/L Na2HPO4,1L蒸馏水,pH=6.8~7.2)中加入颜料红23溶液,配制颜料红23浓度梯度为20、40、60、80、100mg/L的驯化培养基。
(4)取驯化最后一个周期的驯化培养基1mL,按10倍稀释法,用无菌水将菌液作10-1~10-7梯度稀释。每种稀释浓度分别取0.1m L菌液均匀涂布于固体培养基上,将培养皿倒置于30℃培养箱中培养。固体培养基的主要成分为:10g/L鱼粉蛋白胨、5g/L酵母粉、10g/LNaCl、100mg/L颜料红23、20g/L琼脂,1L蒸馏水,pH=6.8~7.2。
(5)待长出独立菌落后,观察各菌落形态,挑取形态清晰的单一菌落,在分离培养基上划线分离,将培养皿倒置于35℃培养箱中培养48h,再观察结果。反复5~7次,并在电子显微镜下观察,确保是纯的单一菌株后,并将其接种到固体斜面培养基上,4℃下保存于冰箱中,待后续进行脱色试验。固体分离培养基SM(Separate Medium)的主要成分为:10g/L鱼粉蛋白胨、5g/L酵母粉、10g/L NaCl、100mg/L颜料红23、20g/L琼脂,1L蒸馏水,pH=6.8~7.2。固体斜面培养基的主要成分:10g/L鱼粉蛋白胨、5g/L酵母粉、10g/L NaCl、20g/L琼脂,1L蒸馏水,pH=6.8~7.2。
2、菌体及菌落形态特征
微嗜酸寡养单胞菌株个体为球状,革兰氏染色阴性;其菌落为圆形,边缘整齐,黄色,不透明,隆起,有粘性。
微嗜酸寡养单胞菌(Stenotrophomonas acidaminiphila sp.)SP-3,其16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。
3、菌体生长曲线及染料降解曲线测定
配置富集培养基,其主要成分为:10g/L鱼粉蛋白胨、5g/L酵母粉、10g/L NaCl,1L蒸馏水,pH=6.8~7.2。在无菌条件下,将菌株接种到装有100mL富集培养基的250mL灭菌锥形瓶中,在35℃、120rpm环境下恒温培养48h。
配置颜料红23脱色培养基,其主要成分为:0.1g/L CaCl2、0.5g/L Mg SO4·7H2O、1g/L NaCl、1g/L KH2PO4、1g/L Na2HPO4、10g/L酵母粉、100mg/L颜料红23,1L蒸馏水,pH=6.8~7.2。取出10mL富集培养的菌液置于灭菌离心管中,以6000r/min的转速离心10min,用无菌生理盐水洗涤并离心2次,配成一定浓度的菌悬液。在颜料红23的脱色培养基中接种10%的菌悬液,在35℃、120rpm环境下恒温培养18h。每2h取样取出10mL培养基在10000r/min离心6min,取上清液测定在579nm的吸光度At,以无菌脱色培养基做空白对照A0,计算其脱色率η=(A0-At)/A0×100%,分析该菌株对颜料红23的脱色效果。重复3次取平均值。
如图1所示,可知该菌株在连续培养24h内,随着培养时间增长,该菌株生长密度逐渐增大,使得对颜料红23的降解作用随之增强,但由于空间和营养源的作用,在18h后生长密度达到饱和,对颜料红23的降解作用也达到最大。两条曲线均符合细菌生长趋势及其降解能力。
实施例2
将该菌株接种于颜料红23脱色培养基中,每2h测定其OD600和在579nm处的吸光度,以未接种的脱色培养基作为空白对照,绘制该菌的生长曲线和颜料脱色曲线,确定最佳脱色时间是18h。选取碳源、氮源、接种量、温度、pH、盐度,研究其单一因素的最佳条件,判断各因素对该菌株的生长及对颜料脱色效果的影响。每个因子均设置不同的影响梯度,研究其中某一因素的影响时,仅对该因素设置不同影响水平,其他因素保持不变,后面因素以前面实验得到的各因素最适条件为前提进行。所有实验均设置三组平行实验。
结果表明:微嗜酸寡养单胞菌(Stenotrophomonas acidaminiphila)SP-3最适宜的脱色条件为酵母粉作为营养源,接种量为0.5%,pH为6.5,温度为35℃,盐度小于4%,在此条件下,微嗜酸寡养单胞菌脱色率达90%。此外,紫外可见光分光光度计扫描脱色代谢产物的吸收图谱表明,染料脱色过程主要以生物降解为主,如图8所示。
具体实施如下:
(1)碳源对颜料脱色的影响
无机盐培养基的主要成分为:0.1g/L CaCl2、0.5g/L MgSO4·7H2O、1g/L NaCl、1g/L KH2PO4、1g/L Na2HPO4、100mg/L颜料红23,1L蒸馏水,pH=6.8~7.2。碳源种类为葡萄糖、麦芽糖、可溶性淀粉、酵母粉、牛肉膏,添加以上碳源各1g。在无菌条件下,将10mL菌悬液接种于装有100mL脱色培养基的250mL灭菌锥形瓶中,在35℃、120rpm下恒温震荡培养18h,取样测菌体OD600及在579nm处上清液吸光度,并计算脱色率。重复3次取平均值。
如图2所示,可知酵母粉、牛肉膏、麦芽糖为碳源时都呈现较好的脱色效果,优选的,碳源为酵母粉。
(2)氮源对颜料脱色的影响
无机盐培养基的主要成分为:0.1g/L CaCl2、0.5g/L MgSO4·7H2O、1g/L NaCl、1g/L KH2PO4、1g/L Na2HPO4、100mg/L颜料红23,1L蒸馏水,p H=6.8~7.2。氮源种类为鱼粉蛋白胨、尿素、硫酸铵、磷酸铵、氯化铵,添加以上氮源各1g。在无菌条件下,将10mL菌悬液接种于装有100mL脱色培养基的250mL灭菌锥形瓶中,在35℃、120rpm下恒温震荡培养18h,取样测菌体OD600及在579nm处上清液吸光度,并计算脱色率。重复3次取平均值。
如图3所示,可知相比碳源,鱼粉蛋白胨、尿素、硫酸铵、磷酸铵或氯化铵作为氮源对颜料的脱色效果普遍偏低,优选的,氮源为鱼粉蛋白胨。
(3)接种量对颜料脱色的影响
在最佳营养源浓度为酵母粉的条件下,脱色培养基的主要成分为:1g酵母粉、0.1g/L CaCl2、0.5g/L MgSO4·7H2O、1g/L NaCl、1g/L KH2PO4、1g/L Na2HPO4、100mg/L颜料红23,1L蒸馏水,pH=6.8~7.2。无菌条件下,设置接种量为单菌落,0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mL,接种于装有100mL脱色培养基的250mL灭菌锥形瓶中,在35℃、120rpm下恒温震荡培养18h,取样测菌体OD600及在579nm处上清液吸光度,并计算脱色率。重复3次取平均值。
如图4所示,可知接种量在0.1%~0.5%时,该菌株对颜料的脱色率随接种量增加而增大,高于0.5%时,菌株对颜料的脱色效果随之降低,最优接种量为0.5%。
(4)温度对颜料脱色的影响
在最佳营养源浓度为酵母粉、接种量为0.5%的最佳条件下,1g酵母粉、0.1g/LCaCl2、0.5g/L MgSO4·7H2O、1g/L NaCl、1g/L KH2PO4、1g/L Na2HPO4、100mg/L颜料红23,1L蒸馏水,pH=6.8~7.2。设置温度梯度为10、20、30、35、40、50℃,无菌条件下,将0.5mL菌悬液接种于装有100mL脱色培养基的250mL灭菌锥形瓶中,在不同温度下、120rpm恒温震荡培养18h,取样测菌体OD600及在579nm处上清液吸光度,并计算脱色率。重复3次取平均值。
如图5所示,可知在10℃到35℃范围内,随着温度升高,菌株对颜料的脱色效果随之增强。在35℃到50℃范围内,随着温度升高,导致菌株生长缓慢、脱色作用减弱。菌株在30℃到40℃具有较好的脱色效果,过高或过低的温度都会抑制菌株对颜料的脱色作用。
(5)pH对颜料脱色的影响
在最佳营养源浓度为酵母粉、接种量为0.5%的最佳条件下,1g酵母粉、0.1g/LCaCl2、0.5g/L MgSO4·7H2O、1g/L NaCl、1g/L KH2PO4、1g/L Na2HPO4、100mg/L颜料红23,1L蒸馏水,调节pH梯度为4.5、5.5、6.5、7、7.5、8.5、9.5,无菌条件下,将0.5mL菌悬液接种于装有100mL脱色培养基的250mL灭菌锥形瓶中,在35℃、120rpm下恒温震荡培养18h,取样测菌体OD600及在579nm处上清液吸光度,并计算脱色率。重复3次取平均值。
如图6所示,可知在强酸、强碱环境下,菌株的生长受到抑制,导致脱色效果最低。当pH在6.5~7.5范围内脱色能力较好,其中pH=6.5的微酸性环境下,菌株的脱色效果最佳,脱色率达到最大值。
(6)盐度对颜料脱色的影响
在最佳营养源浓度为酵母粉、接种量为0.5%的最佳条件下,1g酵母粉、0.1g/LCaCl2、0.5g/L MgSO4·7H2O、1g/L KH2PO4、1g/L Na2HPO4、100mg/L颜料红23,1L蒸馏水,pH=6.5,设置盐度梯度为0、0.5%、1%、2%、4%、6%、8%。在无菌条件下,将0.5mL菌悬液接种于装有100mL脱色培养基的250mL灭菌锥形瓶中,在35℃、120rpm下恒温震荡培养18h,取样测菌体OD600及在579nm处上清液吸光度,并计算脱色率。重复3次取平均值。
如图7所示,可知盐度在0到4%范围内,菌株对颜料的脱色率较高。当盐度大于4%时,菌株对颜料的脱色效果减弱,脱色率随着盐度增大而逐渐减小。可见,低盐度时细胞渗透压保持正常,并未影响细菌的生长作用和降解能力。
实施例3
取0.75g海藻酸钠至于50mL无菌水,在加热的条件下待完全溶解后配成胶状溶液,待冷却至30℃。在无菌条件下,将3mL菌悬液与胶状溶液混合均匀。用1mL注射器于将混合物快速地滴入不断搅拌的FeCl3溶液中,形成均匀规则的小球,将小球浸泡在FeCl3溶液中,并置于4℃冰箱内静置24h。将固化交联后的小球用蒸馏水清洗2次,即得固定化微生物小球,如图9所示。
在最佳营养源浓度为酵母粉,1g酵母粉、0.1g/L CaCl2、0.5g/L MgSO4·7H2O、1g/LKH2PO4、1g/L Na2HPO4、100mg/L颜料红23,1L蒸馏水配置脱色培养基,pH=6.5。在无菌条件下,将100mL脱色培养基分装到250mL灭菌锥形瓶中。
取10~90g/L的小球分别加入到100mL浓度为100mg/L脱色培养基中,在35℃、120r/min下好氧培养18h。取样测菌体OD600及在579nm处上清液吸光度,并计算脱色率。重复3次取平均值。
如图9所示,固定化小球的添加量在10、90g/L时,该菌株对颜料的脱色率较低;30~70g/L时,对颜料红23的脱色效果较好,其中固定化小球添加量为50g/L时效果最佳。
SEQUENCE LISTING
<110> 东华大学
<120> 一种微嗜酸寡养单胞菌及其应用
<130> 1
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1419
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
cgtggcagcg ccctcccgaa ggttaagcta cctgcttctg gtgcaacaaa ctcccatggt 60
gtgacgggcg gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcacc gcagcaatgc tgatctgcga 120
ttactagcga ttccgacttc atggagtcga gttgcagact ccaatccgga ctgagatagg 180
gtttctggga ttggctcacc gtcgccggct tgcagccctc tgtccctacc attgtagtac 240
gtgtgtagcc ctggccgtaa gggccatgat gacttgacgt catccccacc ttcctccggt 300
ttgtcaccgg cggtctcctt agagttccca ccattacgtg ctggcaacta aggacaaggg 360
ttgcgctcgt tgcgggactt aacccaacat ctcacgacac gagctgacga cagccatgca 420
gcacctgtgt cacggttccc gaaggcacca atccatctct ggaaagttcc gtgcatgtca 480
aggccaggta aggttcttcg cgttgcatcg aattaaacca catactccac cgcttgtgcg 540
ggcccccgtc aattcctttg agtttcagtc ttgcgaccgt actccccagg cggcgaactt 600
aacgcgttag cttcgatact gcgtgccaaa ttgcacccaa catccagttc gcatcgttta 660
gggcgtggac taccagggta tctaatcctg tttgctcccc acgctttcgt gcctcagtgt 720
cagtgttggc ccaggcagtc gccttcgcca cggatgttcc tcctgatctc tacgcatttc 780
actgctacac caggaattcc actaccctct gccacactct agtcgcccag tttccatcgc 840
cattcccagg ttgagcccag ggctttcacg acagacttaa acaaccacct acgcacgctt 900
tacgcccagt aattccgagt aacgcttgca cccttcgtat taccgcggct gctggcacga 960
agttagccgg tgcttattct ttgggtaccg tcagaacaac cgggtattaa ccggctgctt 1020
ttctttccca acaaaagggc tttacaaccc gaaggccttc ttcacccacg cggtatggct 1080
ggatcaggct tgcgcccatt gtccaatatt ccccactgct gcctcccgta ggagtctgga 1140
ccgtgtctca gttccagtgt ggctgatcat cctctcagac cagctaccga tcgtcgcctt 1200
ggtgggctct taccccgcca actagctaat cgggcatcgg ctcattcaat cgcgcaaggt 1260
ccgaagatcc cctgctttca cccgtaggtc gtatgcggta ttagcgtaag tttccctacg 1320
ttatccccca cgacagagta gattccgatg cattcctcac ccgtccgcca ctcgccaccc 1380
gtaagagcaa gctcttactg tgctgccgtt cgacttgca 1419

Claims (10)

1.一种微嗜酸寡养单胞菌,其特征在于:所述微嗜酸寡养单胞菌为微嗜酸寡养单胞菌(Stenotrophomonas acidaminiphila)SP-3,保藏号为CGMCC No.13711,核苷酸序列如SEQID NO.1所示。
2.一种如权利要求1所述的微嗜酸寡养单胞菌的应用,其特征在于:用于脱色降解颜料红23废水。
3.根据权利要求2所述的一种微嗜酸寡养单胞菌的应用,其特征在于:所述脱色降解颜料红23废水的具体步骤如下:在无菌条件下,将微嗜酸寡养单胞菌接种到富集培养基中,在恒温摇床中震荡培养;取富集培养后的菌液进行离心配置成菌悬液,然后将菌悬液接种到含有颜料红23的脱色培养基中进行脱色降解,即可。
4.根据权利要求3所述的一种微嗜酸寡养单胞菌的应用,其特征在于:所述富集培养基的组成为:10g/L鱼粉蛋白胨、5g/L酵母粉、10g/L NaCl,1L蒸馏水,pH=6.8~7.2。
5.根据权利要求3所述的一种微嗜酸寡养单胞菌的应用,其特征在于:所述脱色培养基的组成为:0.1g/L CaCl2、0.5g/L MgSO4·7H2O、1g/L NaCl、1g/L K2HPO4、1g/L Na2HPO4、10g/L氮源或碳源,1L蒸馏水,pH=6.8~7.2。
6.根据权利要求5所述的一种微嗜酸寡养单胞菌的应用,其特征在于:所述氮源为鱼粉蛋白胨、尿素、硫酸铵、磷酸铵或氯化铵。
7.根据权利要求5所述的一种微嗜酸寡养单胞菌的应用,其特征在于:所述碳源为葡萄糖、麦芽糖、可溶性淀粉、酵母粉或牛肉膏。
8.根据权利要求3所述的一种微嗜酸寡养单胞菌的应用,其特征在于:所述震荡培养的条件为:30-40℃、120-130rpm条件下培养18-24h。
9.根据权利要求3所述的一种微嗜酸寡养单胞菌的应用,其特征在于:所述脱色降解条件为:接种量为0.1~2%,pH为4.5~9.5,温度为10~50℃,盐度为0~8%,120-130rpm条件下培养18-24h。
10.根据权利要求2所述的一种微嗜酸寡养单胞菌的应用,其特征在于:所述微嗜酸寡养单胞菌以海藻酸钠作为包埋载体、FeCl3作为交联剂制成固定化小球进行脱色降解。
CN201710237439.XA 2017-04-12 2017-04-12 一种微嗜酸寡养单胞菌及其应用 Active CN106967641B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710237439.XA CN106967641B (zh) 2017-04-12 2017-04-12 一种微嗜酸寡养单胞菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710237439.XA CN106967641B (zh) 2017-04-12 2017-04-12 一种微嗜酸寡养单胞菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106967641A true CN106967641A (zh) 2017-07-21
CN106967641B CN106967641B (zh) 2019-11-08

Family

ID=59332484

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710237439.XA Active CN106967641B (zh) 2017-04-12 2017-04-12 一种微嗜酸寡养单胞菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106967641B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110079475A (zh) * 2019-04-15 2019-08-02 广西大学 利用多种抗生素抑制杂菌的微生物发酵降解琼脂的方法
CN110591980A (zh) * 2019-10-22 2019-12-20 中国石油化工股份有限公司 一种用于降解高凝油的微生物复合菌剂及其应用
CN115449498A (zh) * 2022-11-11 2022-12-09 江苏聚庚科技股份有限公司 寡养单胞菌、菌剂及其降解芳香胺废水的方法和处理系统

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104498469A (zh) * 2014-12-09 2015-04-08 陕西科技大学 处理偶氮染料污水的聚氨酯泡沫固定化微生物的制备方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104498469A (zh) * 2014-12-09 2015-04-08 陕西科技大学 处理偶氮染料污水的聚氨酯泡沫固定化微生物的制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MANJINDER SINGH KHEHRA等: "Comparative studies on potential of consortium and constituent pure bacterial isolates to decolorize azo dyes", 《WATER RESEARCH》 *
刘学功等: "《城市水环境改善与水源保护技术》", 29 February 2012, 中国水利水电出版社 *
胡起靖等: "一株嗜麦芽寡养单胞菌对结晶紫的脱色条件研究", 《福建师范大学学报 (自然科学版)》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110079475A (zh) * 2019-04-15 2019-08-02 广西大学 利用多种抗生素抑制杂菌的微生物发酵降解琼脂的方法
CN110591980A (zh) * 2019-10-22 2019-12-20 中国石油化工股份有限公司 一种用于降解高凝油的微生物复合菌剂及其应用
CN115449498A (zh) * 2022-11-11 2022-12-09 江苏聚庚科技股份有限公司 寡养单胞菌、菌剂及其降解芳香胺废水的方法和处理系统

Also Published As

Publication number Publication date
CN106967641B (zh) 2019-11-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102888353B (zh) 溶藻细菌及其去除铜绿微囊藻的方法
CN103160451B (zh) 一种假交替单胞菌及其用途
CN103898016B (zh) 一株高产乳酸菌及其发酵蛋壳制备乳酸钙的方法
CN106834269A (zh) 一种PAEs降解菌的固定化微球及其制备方法和应用
CN106967641B (zh) 一种微嗜酸寡养单胞菌及其应用
CN106011005A (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌t600及其菌剂制备方法和应用
CN104498407A (zh) 一株产耐高温角蛋白酶的地衣芽孢杆菌utm107 及其应用
CN106635909A (zh) 一种原油降解混合菌、菌剂及其应用
CN107541477A (zh) 一种利用乳酸菌发酵液培养光合细菌的方法
CN107287125A (zh) 一种蛋白核小球藻的培养方法
CN105950472B (zh) 一种微生物的高通量分离培养方法
CN106635908A (zh) 一种海洋石油降解菌、菌剂及其应用
CN106635910A (zh) 一种缺陷短波单胞菌、菌剂及其应用
Manasa et al. Isolation and characterisation of Pseudomonas fluorescens isolates from different rhizosphere soils of Telangana
CN113005054B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌ss-zc-26及其制备方法和应用
CN102417890B (zh) 一株草木樨中华根瘤菌及应用其发酵产锰过氧化物酶的方法
CN103667108B (zh) 一种红球菌菌株及其在印染废水处理中的应用
CN106811426A (zh) 用于乳化原油的热堆肥芽孢杆菌菌株、培养方法及应用
CN101338289A (zh) 一种利用酒精废水发酵生产印染废水染料专属生物脱色菌剂的方法
CN105907687A (zh) 一种利用水华藻类为基质培养光合细菌的方法
CN106190898A (zh) 一种溶解池塘甲藻的蜡样芽孢杆菌jzbc1的工业化液体发酵方法
CN109825454A (zh) 一株硝酸盐还原菌、培养方法及应用
CN110229763A (zh) 一株絮凝剂生产菌及其在对虾生物絮团养殖和染料脱色中应用
CN106755274B (zh) 一种猪源大肠杆菌的分离鉴定方法
CN105296399B (zh) 一株马氏副球菌及其在促进聚球藻生长中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant