CN106957801B - 一种稻曲病菌产五种稻曲病菌毒素的方法 - Google Patents

一种稻曲病菌产五种稻曲病菌毒素的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106957801B
CN106957801B CN201610803472.XA CN201610803472A CN106957801B CN 106957801 B CN106957801 B CN 106957801B CN 201610803472 A CN201610803472 A CN 201610803472A CN 106957801 B CN106957801 B CN 106957801B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ustilaginoidea virens
toxins
rice
producing
toxin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610803472.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN106957801A (zh
Inventor
林晓燕
陈铭学
牟仁祥
曹兆云
朱智伟
吴俐
曹珍珍
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China National Rice Research Institute
Original Assignee
China National Rice Research Institute
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China National Rice Research Institute filed Critical China National Rice Research Institute
Publication of CN106957801A publication Critical patent/CN106957801A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106957801B publication Critical patent/CN106957801B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种稻曲病菌产五种稻曲病菌毒素的方法，取培养15d的大米培养基进行毒素提取。所述稻曲病菌为稻绿核菌（Ustilaginoidea virens）YY7850，保藏号为CCTCC NO：M2016229，已于2016年4月26日送交湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，上述稻曲病菌可以高产五种稻曲病菌毒素。

Description

一种稻曲病菌产五种稻曲病菌毒素的方法
技术领域
本发明涉及一种稻曲病菌，尤其是一种稻曲病菌产五种稻曲病菌毒素的方法。
背景技术
稻曲病菌毒素对人、畜具有毒害作用。据研究发现，Ustiloxins能够抑制细胞微管蛋白的聚合，使细胞骨架的形成受到干扰，并可抑制细胞有丝分裂的发生，导致动物内脏发生病变(Li et al，2008；Koiso et al，1994)。Nakamura等(1993)曾报道受Ustiloxins污染的饲料能引起动物严重的肾脏疾病；而Koiso等(1994)也发现小鼠离体肝细胞和肾管状细胞会随Ustiloxin A处理而急剧坏死，同时具有与秋水仙素类似的性质，可抑制细胞的有丝分裂或引起有丝分裂反常，因此可将这一特性应用于肿瘤细胞的控制，是具有潜在发展远景的抗肿瘤药物。
同样，植物也会受稻曲病菌毒素的毒害作用。稻曲球浸出液无论是否煮熟均对水稻、小麦、玉米种子萌发及生长具有明显的抑制作用(田鸿等，2000)；李燕等(2012)也在研究中发现粗毒素对小麦胚根生长抑制率可达到50％以上。Hamed等(2014)利用稻曲球提取液考察对浮萍植物生长的影响，结果发现叶片呈现生长下降，出现坏死斑、叶片浅褐色甚至死亡。
目前从稻曲球的水提取液中分析测出6种结构相似的稻曲病菌毒素命名为：Ustiloxin A、Ustiloxin B、Ustiloxin C、Ustiloxin D、Ustiloxin E和Ustiloxin F；并且除由于在稻曲球中含量较少不易获得的Ustiloxin E外，其他5种毒素的分子式以及结构式均通过X-射线结晶学及氨基酸分析等技术得到确定。Koiso等于1992-1998年首次成功从稻曲球中分离纯化出5种单一稻曲病菌毒素，由于采用的分离源为稻曲球，杂菌及其他杂质较多，因此，他们所采用的分离方法过程复杂、费时费力，分离纯化效率低，不利于大批量分离纯化，从而使稻曲病菌毒素的广泛研究受到限制限制。目前，国内只有Ustiloxin A有纯品(祭芳等，2012)。由于从稻曲球中分离5种纯品的难度比较大，目前的研究多是利用提取的粗毒素(尤其是应用在稻曲病菌毒素对植物的毒害研究中)进行的，市场上并没有稻曲病菌毒素的标准品(纯品)出售。
发明内容
本发明的目的在于，尤其是一种稻曲病菌产五种稻曲病菌毒素的方法。
本发明解决技术问题的技术方案为：一种稻曲病菌，保藏号为CCTCC NO：M2016229。
本发明解决技术问题的进一步技术方案为：一种稻曲病菌产五种稻曲病菌毒素的方法，其方法包括以下步骤：S1.制定大米培养基：大米于旋风研磨仪中粉碎，称取30g米粉于250mL锥形瓶中，于121℃下高温压湿热灭菌20min，在无菌条件下，分别加入15mL无菌水，摇匀后采用孢子悬浮液接种(孢子数量为1×106个/瓶)，28℃恒温培养箱中培养15d；
S2.毒素提取：取培养15d的大米培养基，按米粉∶水＝1∶5的比例进行提取毒素。
上述菌株的稻曲病菌可以高产五种毒素，该稻曲病菌(稻曲病菌)YY7850(Ustilaginoidea virens(Cke.)Tak.YY7850)已于2016年4月26日送交湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，其保藏号为CCTCC NO：M2016229，并且能提取五种高产毒素。
附图说明
图1为稻曲病菌所产的五种毒素含量的测定结果。
具体实施方式
一种稻曲病菌，保藏号为CCTCC NO：M2016229。
一种稻曲病菌产五种稻曲病菌毒素的方法，其方法包括以下步骤：S1.大米培养基：大米于旋风研磨仪中粉碎，称取30g米粉于250mL锥形瓶中，于121℃下高温压湿热灭菌20min。在无菌条件下，分别加入0、15和30mL无菌水，摇匀后采用孢子悬浮液接种(孢子数量为1×106次方个/瓶)，28℃恒温培养箱中培养15d；
S2.毒素提取：取培养15d的大米培养基，按米粉∶水＝1∶5的比例进行提取毒素。
取培养15d的大米培养基，按米粉∶水＝1∶5的比例进行提取毒素，提取净化后的毒素利用TSQ Quantum Access Max三重四极杆质谱仪进行检测，检测结果如图1所示。
由图1可以看出，大米培养基中水分含量对稻曲病菌产毒效果的影响很大，其中，效果最好的2号培养基，即30g米粉中加入15mL无菌水，5种毒素(A-D，F)均有检出，且不管是单一毒素含量还是5种毒素总含量均远高于其他两种培养基配比。利用本实验室分离纯化到的5种稻曲病菌毒素纯品进行定量分析发现，5种稻曲病菌毒素均有检出，且含量均较高，总含量为134290.1ng/g。产毒的含量很高。
本发明利用分离到的高效产毒稻曲病菌菌株分离获得5种毒素的纯品，打破了国内只有稻曲病菌毒素A的局面，为安全、高效、大规模的在实验室提取纯化稻曲病菌5种毒素提供了非常宝贵的菌种资源。从长远来看，由于我们获得了高产5种毒素的纯菌株，在此基础上分离获得了5种毒素的纯品，与以往用Ustiloxin A的粗提液进行各种研究不同，以往的研究由于粗提液成分比较复杂，所得结果不能准确反映真实情况，而用从高产毒菌株中提取的5种毒素纯品进行各项研究(农业上：毒素产生、代谢机制等；医学上：各种动物实验、药物开发等)，所得实验结果更加全面、准确、可靠。可见，该菌株具有广阔的应用前景。就国内来看，本专利第一次通过培养分离到的高产毒菌株进而获得5种毒素纯品，该菌株乃至毒素纯品应用潜力很大。
显然，上述实施例仅仅是为了清楚的说明所做的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围内。

Claims (1)

1.一种稻曲病菌产五种稻曲病菌毒素的方法，所述稻曲病菌为稻绿核菌（Ustilaginoidea virens）YY7850，保藏号为 CCTCC NO：M2016229，其特征在于，该方法包括以下步骤：
S1.制备大米培养基并接种：大米于旋风研磨仪中粉碎，称取30g米粉于250mL锥形瓶中，于121℃下高温高压湿热灭菌20min，在无菌条件下加入15mL无菌水，摇匀后采用所述菌株的孢子悬浮液接种，孢子数量为1×106个/瓶，28℃恒温培养箱中培养15d；
S2：毒素提取：取培养15d的大米培养基进行提取毒素。
CN201610803472.XA 2016-06-24 2016-08-29 一种稻曲病菌产五种稻曲病菌毒素的方法 Active CN106957801B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2016105084036 2016-06-24
CN201610508403 2016-06-24

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106957801A CN106957801A (zh) 2017-07-18
CN106957801B true CN106957801B (zh) 2020-08-07

Family

ID=59335090

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610803472.XA Active CN106957801B (zh) 2016-06-24 2016-08-29 一种稻曲病菌产五种稻曲病菌毒素的方法
CN201610803390.5A Active CN106967612B (zh) 2016-06-24 2016-08-29 一种稻绿核菌产五种稻曲病菌毒素的方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610803390.5A Active CN106967612B (zh) 2016-06-24 2016-08-29 一种稻绿核菌产五种稻曲病菌毒素的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (2) CN106957801B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106167764A (zh) * 2016-10-17 2016-11-30 中国水稻研究所 产五种稻曲病菌毒素的稻绿核菌的有效分离方法
CN109355417A (zh) * 2018-11-14 2019-02-19 中国水稻研究所 一种同时产五种稻曲病菌毒素的稻曲病菌的鉴定方法
CN113249250B (zh) * 2021-04-30 2022-08-12 中国水稻研究所 一株铜绿假单胞菌9#及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
水稻稻曲病菌的毒素研究;白云俊等;《辽宁农业科学》;19971231(第1期);30-33，特别是第30页1.2.1、1.3.1部分 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN106967612A (zh) 2017-07-21
CN106957801A (zh) 2017-07-18
CN106967612B (zh) 2020-08-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zhou et al. Applied modern biotechnology for cultivation of Ganoderma and development of their products
KR101467903B1 (ko) 흑미의 담자균류균사 발효 및 생물전환공정을 통해 생산된 면역증강제
CN104285820A (zh) 一株富硒蛹虫草菌种及其应用
CN106957801B (zh) 一种稻曲病菌产五种稻曲病菌毒素的方法
CN105219655B (zh) 对杀菌剂抗性且不产黄曲霉毒素的黄曲霉生防菌株及其应用
US10820612B2 (en) Method for producing fermented bamboo extract and immunostimulating agent
CN108330086B (zh) 一种产胞外多糖空间植物乳杆菌ss18-33及其在提高生物抗氧化活性中的应用
CN112574893A (zh) 鲍氏桑黄孔菌、其发酵产物的制备方法及应用
CN106729520A (zh) 一种生姜提取物的制备方法
CN107893033B (zh) 烟曲霉sqh4及在生物转化法制备花旗松素中的应用
CN104342472B (zh) 一种小球藻抑菌肽的制备方法
CN116355816A (zh) 一种发酵翅果油种子的微生物及其降血脂组合物
CN103937687B (zh) 不产黄曲霉毒素的黄曲霉混合菌株及其应用
JP4721128B2 (ja) 冬虫夏草新菌株
US9950020B2 (en) Extracts from fusarium oxysporum and use thereof
JP5882635B2 (ja) マイタケ由来の高分子α−グルカン
Chen et al. Analysis of Taiwan patents for the medicinal mushroom “Niu-Chang-Chih”
CN104278070A (zh) 一种提高桑黄液体发酵产物中麦角甾醇含量的方法
KR101999273B1 (ko) 고순도 코디세핀의 제조 방법, 고함량의 코디세핀을 함유하는 동충하초 및 그로부터 얻어지는 고순도 코디세핀
CN100447129C (zh) 姜酚肟及其合成与应用
CN105506021B (zh) 一种含紫杉醇培养组合物及其制备方法
Chatterjee et al. Nuclear disintegration in chicken peritoneal macrophages exposed to fumonisin B1 from Indian maize
RU2619551C1 (ru) Способ комплексной переработки гриба трутовика лекарственного
CN111004197A (zh) 一类sorbicillinoid类衍生物及其制备方法和应用
CN113564210B (zh) 一种利用甘草内生真菌发酵工业大麻的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant