CN106943338A - 个性化美容护肤品及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种个性化美容护肤品其及制备方法，个性化美容护肤品，由以下重量百分比的原料混合而成：表达水蛭素的个性化人源免疫细胞培养上清液冻干粉1～20％、油脂1～15％、脂肪酸酯1～27％、有机溶剂1～8％、香料0.1～1％、营养素5～30％，余量为超纯水。本发明的含有表达水蛭素的个性化免疫细胞培养上清液冻干粉美容护肤品，既含有纯天然的、个性化的细胞生长所需要的大部分生长因子，用于美容可以避免免疫排斥反应，又含有经基因转染、由个性化免疫细胞分泌表达的水蛭素，故而使本发明的个性化美容护肤品具有疏通皮肤微循环、抗微血栓、祛斑、祛痘、润肤、嫩肤、美白、预防皮肤衰老、增强皮肤弹性之综合功效，为个性化、高效、绿色美容护肤品。

Description

个性化美容护肤品及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物美容护肤品，特别涉及一种个性化美容护肤品及其制备方法。
背景技术
随着人们生活水平的提高，人们对于美容保养越来越重视，市场上的美容保养品种类繁多。但是现有的精细化工护肤品大都含有铅、汞、酒精、防腐剂、激素、香料等对肌肤有损害的物质，在使用美容保养品的同时，也对皮肤造成了较大的伤害，甚至会产生的色斑、红血丝、过敏等问题，对人们的生活质量和身体健康造成了潜在的威胁。
现有的美容护肤品，大都不具有生物活性物质，部分产品添加的生物活性物质大多通过化工方法制得，其产品中有潜在的有害物质残留，长期使用会对皮肤产生不利影响。
利用免疫活性细胞培养上清中的生物成分，能够起到较好的护肤效果，而且其生产方法脱离了化工生产工艺，具有较好的安全性和更好的生物活性，具有较好的推广和应用前景，是最近几年新发展起来的生物美容技术。
水蛭素是自吸血水蛭中提取出的一种具有凝血酶抑制作用的小分子蛋白质(多肽)，能高效抗凝血、抗血栓形成，具有较好的渗透性和改善微循环、促进新陈代谢的作用。因此，水蛭素可疏通和扩张面部皮肤毛细血管，改善真皮血液微循环，促进皮肤新陈代谢。但自中药水蛭中提取天然水蛭素不可避免带有非人源杂质蛋白污染，具有引发过敏的潜在风险，是天然水蛭素应用于美容护肤领域的不利因素。
发明内容
本发明的目的是提供一种个性化美容护肤品及其制备方法，至少能够解决上述问题之一。
为实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种个性化美容护肤品，其由以下重量百分比的原料混合而成：表达水蛭素的个性化人源免疫细胞培养上清液冻干粉1～20％、油脂1～15％、脂肪酸酯1～27％、有机溶剂1～8％、香料0.1～1％、营养素5～30％、透明质酸钠1～5％，余量为超纯水，表达水蛭素的个性化免疫细胞为个性化人源免疫细胞。
在一些实施方式中，免疫细胞为人外周血单个核细胞(PBMC)、人间充质干细胞(MSC)、人脐带血干细胞、人NK细胞、人αβT细胞、人γδT细胞、人NKT细胞或人CIK细胞。
在一些实施方式中，水蛭素为天然水蛭素、水蛭素异构体、水蛭素突变体、水蛭素嵌合体、截短的水蛭肽，基因修饰的水蛭素或水蛭素融合蛋白。
在一些实施方式中，营养素为维生素、珍珠水解液，氨基酸、胎盘素、水解蛋清、水杨酸、芦荟提取液和人参提取液中的一种或多种；
油脂为甘油、橄榄油、白油、凡士林、石蜡油、月桂油、杏仁油、角鲨烷、霍霍巴籽油或牛油果树果脂油中的一种或多种；
脂肪酸酯为甘油三硬脂酸酯、甘油单硬脂酸酯、曲酸单硬脂酸酯和羊毛酯的一种或多种；
有机溶剂为乙醇、十六醇、十八醇、丁二醇、丙二醇或苯氧乙醇；
香料为医药用、食品用的植物香料或动物香料。
相应地，本发明还提供了上述美容护肤品的制备方法，包括以下步骤：
体外培养个性化的人源免疫细胞，在水蛭素N末端添加人源分泌表达信号肽序列，化学合成重组水蛭素编码基因，并在重组编码基因的两端添加限制性酶切位点，将该重组编码基因插入基因载体制备重组载体，将该重组载体转染免疫细胞，获得表达重组水蛭素的过继免疫细胞，进行细胞培养，收集细胞培养上清液制备表达水蛭素的个性化免疫细胞培养上清液冻干粉；
将以重量百分比计的表达水蛭素的个性化免疫细胞的培养上清液冻干粉1～20％、油脂1～15％、脂肪酸酯1～27％、有机溶剂1～8％、香料0.1～1％、营养素5～30％、透明质酸钠1～5％、超纯水按比例混合均匀，得到美容护肤品。
在一些实施方式中，重组载体通过基因转染免疫细胞，基因转染系统为慢病毒转染系统、逆转录病毒转染系统、腺病毒转染系统、腺相关病毒转染系统、睡美人转座子转染系统或质粒电转染系统。
在一些实施方式中，细胞培养的培养基为添加5％～20％的自体血清的细胞培养基或无血清细胞培养基。
在一些实施方式中，细胞培养的培养基为无酚红细胞培养基。
在一些实施方式中，表达水蛭素的个性化免疫细胞培养上清液冻干粉的制备步骤为：收集表达水蛭素的免疫细胞培养上清液，离心后－80℃冻存；将－80℃冻存的上清液抽真空，升华干燥，除去冰晶，制得冻干粉，－20℃保存。
本发明的有益效果为：
水蛭素是吸血水蛭唾液腺中的一种具有抗凝作用的活性成分，由65～66个氨基酸组成。水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用，是迄今为止发现的最强的凝血酶天然特异抑制剂。动物试验与临床研究表明，水蛭素能高效抗凝血、抗血栓形成。此外，水蛭素还能抑制凝血酶诱导的成纤维细胞的增殖和凝血酶对内皮细胞的刺激。与肝素相比，水蛭素用量少，引起出血风险小，也不依赖于内源性凝血辅助因子。由于水蛭素分子量极小，具有较好的组织渗透性和极强的改善微循环、促进新陈代谢的作用，因此，天然水蛭素可疏通和扩张面部皮肤毛细血管，改善真皮血液微循环，促进黑色素细胞代谢，迅速渗透到皮肤深层，易被皮肤细胞吸收。另一方面，水蛭素疏通毛细血管，改善面部微循环，促进皮肤新陈代谢，可从根本上解决色斑、青春痘、疤印、红血丝、色素沉着等各类皮肤问题。
本发明的个性化是指，人源免疫细胞取自定制本美容护肤品的顾客，即顾客使用的美容护肤品中的细胞培养上清液冻干粉来源于自身细胞的培养。
本发明的含有表达水蛭素的个性化人源免疫细胞培养上清液冻干粉的美容护肤品，既含有纯天然的、个性化的细胞生长所需要的多种生物活性因子，用于美容可以避免免疫排斥反应，又含有经基因转染、由个性化免疫细胞分泌表达的水蛭素，避免了由中药水蛭中提取或发酵生产提纯过程不可避免的非人源杂质蛋白污染，故而使本发明的美容护肤品具有疏通皮肤微循环、抗微血栓、祛斑、祛痘、润肤、嫩肤、美白、预防皮肤衰老、增强皮肤弹性之综合功效，为个性化、高效、绿色美容护肤品。
利用个性化免疫细胞培养液中的生物活性成分，能够起到较好的护肤效果，而且其生产方法脱离了化工生产工艺，具有较好的安全性和更好的生物活性，具有较大的推广价值和应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。
实施例1制备含有表达水蛭素的免疫细胞培养上清液冻干粉
本实施例的制备方法包括步骤S1～S4，具体如下。
S1、体外培养个性化人源CIK细胞，包括步骤A的外周血单个核细胞(PBMC)采集和步骤B的CIK细胞培养。
A、PBMC的采集具有以下步骤：
A1、自接受本美容护肤品的顾客个体抽取外周血50～100ml；
A2、淋巴细胞分离液密度梯度离心法进一步纯化PBMC；
A3、无血清培养液洗涤2次，获得纯度在90％以上的PBMC。
B、细胞的培养：
B1、将PBMC按1～2×106/ml的浓度悬浮于无血清培养液中，加入1,000U/ml的重组人IFN-γ，37℃，5％CO2培养箱中培养；
B2、24h后加入50ng/ml的CD3单克隆抗体和300U/ml的重组人IL-2，刺激CIK细胞的生长和增殖；
注：此时也可同时加入100U/ml的重组人IL-1α。
B3、每三天半量换液或扩瓶一次，并补加重组人IL-2 300U/ml；
B4、在培养的第14d，收获CIK细胞。
其中，细胞培养的培养基为无酚红细胞培养基。在其他实施方式中，细胞培养基中还可添加5％～20％的自体血清。
在其他实施方式中，免疫细胞还可采用人间充质干细胞(MSC)、人脐带血干细胞、人NK细胞、人αβT细胞、人γδT细胞或人NKT细胞。
S2、依照水蛭素的基因序列，在其N末端添加人源分泌表达信号肽序列，化学合成基因片段，将其连接成重组水蛭素编码基因。
水蛭素为天然水蛭素、水蛭素异构体、水蛭素突变体、水蛭素嵌合体、截短的水蛭肽，基因修饰的水蛭素或水蛭素融合蛋白。本实施例中的水蛭素采用水蛭素异构体。水蛭素异构体有三种，水蛭素异构体HV1、水蛭素异构体HV2和水蛭素异构体HV3。本实施例采用其中一种。
连接有人源分泌表达信号肽的水蛭素异构体HV1的氨基酸序列为：SEQ ID NO.1，基因序列为：SEQ ID NO.2。
连接有人源分泌表达信号肽的水蛭素异构体HV2的氨基酸序列为：SEQ ID NO.3，基因序列为：SEQ ID NO.4。
连接有人源分泌表达信号肽的水蛭素异构体HV3的氨基酸序列为：SEQ ID NO.5，基因序列为：SEQ ID NO.6。
在其他实施方式中，还可采用其他重组水蛭素，列举如下。
重组水蛭素的结构为：人酰胺化酶(PAM)信号肽-水蛭素HV1-HV3嵌合体，氨基酸序列：SEQ ID NO.7，基因序列：SEQ ID NO.8。
重组水蛭素采用水蛭素融合蛋白序列，N端修饰有EPR，其结构为：人酰胺化酶(PAM)信号肽-EPR-水蛭素HV1，氨基酸序列：SEQ ID NO.9，基因序列：SEQ ID NO.10。
其中，寡肽EPR可被凝血因子Ⅹa识别并裂解，这样既封闭了水蛭素在正常组织中的活性，降低了全身出血的风险，又可使重组水蛭素在血栓形成部位释放具有生物活性的水蛭素，达到抗凝和抗栓的双效目的。EPR短肽可以被同等功效短肽序列替换，如：IEGR(ATCGAAGGTCGT)；LGPR(TTGGGTCCAAGA)；LEKRLGPR(CTCGAGAAAAGATTGGGTCCAAGA)；LEKRIEGR(CTCGAGAAAAGAATCGAAGGTCGT)。水蛭素HV1可被HV2、HV3等其它水蛭素异构体替换
重组水蛭素采用水蛭素嵌合体，N端修饰有EPR，其结构为：人酰胺化酶(PAM)信号肽-EPR-水蛭素HV1-HV3嵌合体，氨基酸序列：SEQ ID NO.11，基因序列：SEQ ID NO.12.
S3、采用公知的基因工程操作技术将经步骤S2得到的编码基因插入真核表达载体中，本例选择pIRES质粒，用该重组质粒以质粒电转染方法转染步骤S1得到的CIK细胞，之后进行细胞培养36h以上。
在其他实施方式中，重组载体通过基因转染免疫细胞的基因转染系统还可采用慢病毒转染系统、逆转录病毒转染系统、腺病毒转染系统、腺相关病毒转染系统或睡美人转座子转染系统。
S4、用50ml无菌离心管收集转染有水蛭素的人CIK细胞培养上清液，在4℃下400g离心15min，打开离心管，用无菌枪头吸出离心管中的上清液至一无菌的收集管中，弃沉淀，记录标志，－80℃冻存备用，将－80℃冻存的上清液抽真空，升华干燥，除去冰晶，最后制得冻干粉，－20℃保存。
实施例2制备美容护肤品
把以重量百分比计的甘油5％、甘油三硬脂酸酯15％、甘油单硬脂酸酯12％、维生素C1％、珍珠液5％、十六醇4％、透明质酸钠1％和适量的超纯水混合后，加热至80℃～90℃，使其融合，直至显出柔和的膏体，待其冷却到30℃时再加入15％实施例1制备的表达水蛭素的免疫细胞培养上清液冻干粉以及0.3％香料，然后充分搅拌使之完全均匀即得美容护肤品。
本实施例的表达水蛭素的免疫细胞培养上清液冻干粉采用实施例1的方法制备而成。免疫细胞取自定制本美容护肤品的顾客。
实施例3制备美容护肤品
把以重量百分比计的甘油5％、甘油三硬脂酸酯5％、芦荟提取液5％、乙醇5％、氨基酸15％、水杨酸0.5％、透明质酸钠5％和适量的超纯水混合后，加热至60℃～70℃，使其融合，待其冷却到30℃时再加入12％的表达水蛭素的免疫细胞培养上清液冻干粉以及0.7％香料，然后充分搅拌使之完全均匀即得美容护肤品。
本实施例的表达水蛭素的免疫细胞培养上清液冻干粉采用实施例1的方法制备而成。免疫细胞取自定制本美容护肤品的顾客。
实施例4制备美容护肤品
把以重量百分比计的橄榄油1％、羊毛酯25％、丙二醇8％、胎盘素3％、人参提取液2％、透明质酸钠2％和适量超纯水混合后，加热至60℃～70℃，使其融合，待其冷却到30℃时再加入20％的表达水蛭素的免疫细胞培养上清液冻干粉以及1％香料，然后充分搅拌使之完全均匀即得美容护肤品。
本实施例的表达水蛭素的免疫细胞培养上清液冻干粉采用实施例1的方法制备而成。免疫细胞取自定制本美容护肤品的顾客。
实施例5制备美容护肤品
把以重量百分比计的月桂油15％、曲酸单硬脂酸酯1％、乙醇1％、维生素C5％、氨基酸20％、5％珍珠液、透明质酸钠3％和适量超纯水混合后，加热至60℃～70℃，使其融合，待其冷却到30℃时再加入1％的表达水蛭素的免疫细胞培养上清液冻干粉以及0.1％香料，然后充分搅拌使之完全均匀即得美容护肤品。
本实施例的表达水蛭素的免疫细胞培养上清液冻干粉采用实施例1的方法制备而成。免疫细胞取自定制本美容护肤品的顾客。
实施例6制备美容护肤品
把以重量百分比计的杏仁油10％、甘油三硬脂酸酯10％、十八醇3％、人参提取液5％、维生素C6％、珍珠液9％、透明质酸钠4％和适量超纯水混合后，加热至60℃～70℃，使其融合，待其冷却到30℃时再加入6％的表达水蛭素的免疫细胞培养上清液冻干粉以及0.5％香料，然后充分搅拌使之完全均匀即得美容护肤品。
本实施例的表达水蛭素的免疫细胞培养上清液冻干粉采用实施例1的方法制备而成。免疫细胞取自定制本美容护肤品的顾客。
上述实施例2～6的美容护肤品可制作成膏体状、液体状或啫喱状三种形态：
膏体状美容护肤品的生产方法如下：
先按一定比例的油类、脂肪酸酯、有机溶剂和适量的超纯水混合，加热至60℃～90℃，使其融合，直至显出柔和的膏体，冷却到50℃时边搅拌边加入其它营养成分或特殊医药物质，待其冷却到室温时再加入表达水蛭素的免疫细胞培养上清液冻干粉和适量的香精，然后充分搅拌使之完全均匀得到产品。
液体状美容护肤化妆品的生产方法如下：
把一定比例的油类、脂肪酸酯、有机溶剂和适量精制水混合后，加热至60℃～90℃，使其融合，待其冷却到室温时再加入表达水蛭素的免疫细胞培养上清液冻干粉和适量的香精，然后充分搅拌使之完全均匀得到产品。
啫哩状美容护肤化妆品的生产方法如下：
啫哩状美容化妆品生产方法是先把美容化妆品基质做成啫哩状，然后在室温下添加一定数量的表达水蛭素的免疫细胞培养上清液冻干粉，然后充分搅拌使之完全均匀得到产品。
以上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
序列表
<110>何向锋
<120>个性化美容护肤品及其制备方法
<160>12
<210>1
<211>84
<212>PRT
<213>人工序列
<400>1
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5 10 15
Gly Val Gln Cys Val Val Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gln
20 25 30
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Lys Cys Ile Leu Gly Ser Asn Gly Glu Lys Asn Gln Cys Val Thr
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<210>2
<211>252
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<210>3
<211>84
<212>PRT
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<211>252
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<212> PRT
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Phe Glu Pro Ile Pro Glu Asp Ala Tyr Asp Glu Lys
80 85
<210>8
<211>264
<212>DNA
<213>人工序列
<400>8
atggctggcc gcgtccctag cctgctagtt ctccttgttt ttccaagcag ctgtttggct 60
gttgtttaca cggattgtac agaatcgggt caaaatttgt gcctctgcga ggatagcaat 120
gtttgcggtc aaggcaataa gtgcatattg ggttctaatg gagagaaaaa ccaatgtgtc 180
actggcgaag gtacaccgaa gcctcaaagc cataatcaag gcgatttcga accaattcca 240
gaagacgctt atgatgaaaa atga 264
<210>9
<211>88
<212> PRT
<213>人工序列
<400>9
Met Ala Gly Arg Val Pro Ser Leu Leu Val Leu Leu Val Phe Pro
5 10 15
Ser Ser Cys Leu Ala Glu Pro Arg Val Val Tyr Thr Asp Cys Thr
20 25 30
Glu Ser Gly Gln Asn Leu Cys Leu Cys Glu Asp Ser Asn Val Cys
35 40 45
Gly Gln Gly Asn Lys Cys Ile Leu Gly Ser Asn Gly Glu Lys Asn
50 55 60
Gln Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr Pro Lys Pro Gln Ser His Asn
65 70 75
Asp Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu Gln
80 85
<210>10
<211>267
<212>DNA
<213>人工序列
<400>10
atggctggcc gcgtccctag cctgctagtt ctccttgttt ttccaagcag ctgtttggct 60
gaacctaggg ttgtttacac ggattgtaca gaatcgggtc aaaatttgtg cctctgcgag 120
gatagcaatg tttgcggtca aggcaataag tgcatattgg gttctaatgg agagaaaaac 180
caatgtgtca ctggcgaagg tacaccgaag cctcaaagcc ataatgacgg cgatttcgaa 240
gaaattccag aagaatattt acaatag 267
<210>11
<211>90
<212> PRT
<213>人工序列
<400>11
Met Ala Gly Arg Val Pro Ser Leu Leu Val Leu Leu Val Phe Pro
5 10 15
Ser Ser Cys Leu Ala Glu Pro Arg Val Val Tyr Thr Asp Cys Thr
20 25 30
Glu Ser Gly Gln Asn Leu Cys Leu Cys Glu Asp Ser Asn Val Cys
35 40 45
Gly Gln Gly Asn Lys CysIle Leu Gly Ser Asn Gly Glu Lys Asn
50 55 60
Gln Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr Pro Lys Pro Gln Ser His Asn
65 70 75
Gln Gly Asp Phe Glu Pro Ile Pro Glu Asp Ala Tyr Asp Glu Lys
80 85 90
<210>12
<211>273
<212>DNA
<213>人工序列
<400>12
atggctggcc gcgtccctag cctgctagtt ctccttgttt ttccaagcag ctgtttggct 60
gaacctaggg ttgtttacac ggattgtaca gaatcgggtc aaaatttgtg cctctgcgag 120
gatagcaatg tttgcggtca aggcaataag tgcatattgg gttctaatgg agagaaaaac 180
caatgtgtca ctggcgaagg tacaccgaag cctcaaagcc ataatcaagg cgatttcgaa 240
ccaattccag aagacgctta tgatgaaaaa tga 273

Claims (9)

1.个性化美容护肤品，其特征在于，其由以下重量百分比的原料混合而成：表达水蛭素的个性化免疫细胞培养上清液冻干粉1～20％、油脂1～15％、脂肪酸酯1～27％、有机溶剂1～8％、香料0.1～1％、营养素5～30％、透明质酸钠1～5％，余量为超纯水，表达水蛭素的个性化免疫细胞为个性化人源免疫细胞。
2.权利要求1所述的个性化美容护肤品，其特征在于，所述免疫细胞为人外周血单个核细胞、人间充质干细胞、人脐带血干细胞、人NK细胞、人αβT细胞、人γδT细胞、人NKT细胞或人CIK细胞。
3.权利要求1所述的个性化美容护肤品，其特征在于，所述水蛭素为天然水蛭素、水蛭素异构体、水蛭素突变体、水蛭素嵌合体、截短的水蛭肽、基因修饰的水蛭素或水蛭素融合蛋白。
4.根据权利要求1所述的个性化美容护肤品，其特征在于，所述营养素为维生素、珍珠水解液、氨基酸、胎盘素、水解蛋清、水杨酸、芦荟提取液和人参提取液中的一种或多种；
所述油脂为甘油、橄榄油、白油、凡士林、石蜡油、月桂油、杏仁油、角鲨烷、霍霍巴籽油或牛油果树果脂油中的一种或多种；
所述脂肪酸酯为甘油三硬脂酸酯、甘油单硬脂酸酯、曲酸单硬脂酸酯和羊毛酯的一种或多种；
所述有机溶剂为乙醇、十六醇、十八醇、丁二醇、丙二醇或苯氧乙醇；
所述香料为医药用、食品用的植物香料或动物香料。
5.权利要求1～4任一项所述的个性化美容护肤品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
体外培养个性化的人源免疫细胞，在水蛭素N末端添加人源分泌表达信号肽序列，化学合成重组水蛭素编码基因，并在重组编码基因的两端添加限制性酶切位点，将该重组编码基因插入基因载体制备重组载体，将该重组载体转染免疫细胞，获得表达重组水蛭素的过继免疫细胞，进行细胞培养，收集细胞培养上清液，制备表达水蛭素的个性化免疫细胞培养上清液冻干粉；
将以重量百分比计的表达水蛭素的个性化免疫细胞培养上清液冻干粉1～20％、油脂1～15％、脂肪酸酯1～27％、有机溶剂1～8％、香料0.1～1％、营养素5～30％、透明质酸钠1～5％、超纯水按比例混合均匀，得到所述美容护肤品。
6.权利要求5所述的个性化美容护肤品的制备方法，其特征在于，所述重组载体通过基因工程方法转染免疫细胞，所述基因工程方法使用的基因转染系统为慢病毒转染系统、逆转录病毒转染系统、腺病毒转染系统、腺相关病毒转染系统、睡美人转座子转染系统或质粒电转染系统。
7.权利要求5所述的个性化美容护肤品的制备方法，其特征在于，所述细胞培养的培养基为添加5％～20％的自体血清的细胞培养基或无血清培养基。
8.权利要求5所述的个性化美容护肤品的制备方法，其特征在于，所述细胞培养的培养基为无酚红细胞培养基。
9.权利要求5所述的个性化美容护肤品的制备方法，其特征在于，所述表达水蛭素的免疫细胞培养上清液冻干粉的制备步骤为：收集表达水蛭素的免疫细胞培养上清液，离心后－80℃冻存；将－80℃冻存的上清液抽真空，升华干燥，除去冰晶，制得冻干粉，－20℃保存。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106983713A (zh) * 2017-03-31 2017-07-28 杭州哈佛赛尔干细胞技术有限公司 一种干细胞护肤组合物及其制备方法和使用方法
CN108743426A (zh) * 2018-07-25 2018-11-06 宁波博睿修存生物科技有限公司 修护乳液
CN109251892A (zh) * 2018-10-18 2019-01-22 深圳市汉科生命工程有限公司 一种hank细胞培养上清液的制备及其在化妆品中的应用
CN109260046A (zh) * 2018-09-28 2019-01-25 重庆雅素生物科技有限公司 水蛭素修复肌肤红血丝或激素脸的应用、组合物及制备方法
CN113520898A (zh) * 2021-09-17 2021-10-22 汇泰渤海水产有限责任公司 水蛭肽he-d在护肤美白中的应用
KR102326939B1 (ko) * 2021-03-09 2021-11-17 주식회사 스마트셀랩 중간엽 줄기세포 및 면역세포 공동배양액을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1522689A (zh) * 2003-09-12 2004-08-25 周维海 水蛭提取物美容化妆品及其制备方法
CN106176561A (zh) * 2016-07-19 2016-12-07 安徽惠恩生物科技股份有限公司 一种自体皮肤成纤维细胞用于美容抗衰的制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1522689A (zh) * 2003-09-12 2004-08-25 周维海 水蛭提取物美容化妆品及其制备方法
CN106176561A (zh) * 2016-07-19 2016-12-07 安徽惠恩生物科技股份有限公司 一种自体皮肤成纤维细胞用于美容抗衰的制备方法

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106983713A (zh) * 2017-03-31 2017-07-28 杭州哈佛赛尔干细胞技术有限公司 一种干细胞护肤组合物及其制备方法和使用方法
CN106983713B (zh) * 2017-03-31 2020-06-26 杭州哈佛赛尔干细胞技术有限公司 一种干细胞护肤组合物及其制备方法和使用方法
CN108743426A (zh) * 2018-07-25 2018-11-06 宁波博睿修存生物科技有限公司 修护乳液
CN109260046A (zh) * 2018-09-28 2019-01-25 重庆雅素生物科技有限公司 水蛭素修复肌肤红血丝或激素脸的应用、组合物及制备方法
CN109251892A (zh) * 2018-10-18 2019-01-22 深圳市汉科生命工程有限公司 一种hank细胞培养上清液的制备及其在化妆品中的应用
KR102326939B1 (ko) * 2021-03-09 2021-11-17 주식회사 스마트셀랩 중간엽 줄기세포 및 면역세포 공동배양액을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물
CN113520898A (zh) * 2021-09-17 2021-10-22 汇泰渤海水产有限责任公司 水蛭肽he-d在护肤美白中的应用
CN113520898B (zh) * 2021-09-17 2021-12-21 汇泰渤海水产有限责任公司 水蛭肽he-d在护肤美白中的应用

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