CN106883996B - 一种防治芦笋茎枯病的生防菌株ls01及其生防菌剂 - Google Patents

一种防治芦笋茎枯病的生防菌株ls01及其生防菌剂 Download PDF

Info

Publication number
CN106883996B
CN106883996B CN201510940115.3A CN201510940115A CN106883996B CN 106883996 B CN106883996 B CN 106883996B CN 201510940115 A CN201510940115 A CN 201510940115A CN 106883996 B CN106883996 B CN 106883996B
Authority
CN
China
Prior art keywords
biocontrol
microbial inoculum
strain
asparagus
paenibacillus polymyxa
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201510940115.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106883996A (zh
Inventor
程池
刘洋
陈建国
梁寒峭
尹俊玉
李生有
李国栋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bei Jing Xnk Research Centre Of Asparagus
China National Research Institute of Food and Fermentation Industries
Original Assignee
Bei Jing Xnk Research Centre Of Asparagus
China National Research Institute of Food and Fermentation Industries
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bei Jing Xnk Research Centre Of Asparagus, China National Research Institute of Food and Fermentation Industries filed Critical Bei Jing Xnk Research Centre Of Asparagus
Priority to CN201510940115.3A priority Critical patent/CN106883996B/zh
Publication of CN106883996A publication Critical patent/CN106883996A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106883996B publication Critical patent/CN106883996B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/10—Animals; Substances produced thereby or obtained therefrom

Abstract

本发明涉及一种防治芦笋茎枯病的生防菌株LS01及其生防菌剂应用，属于植物保护技术领域。本发明提供一种多粘类芽孢杆菌LS01及其应用，以及包含该菌株的生防菌剂及其应用。本发明提供的生防菌株LS01为多粘类芽孢杆菌，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号CGMCC NO.11690。在28‑37℃下，在LB培养液中，180 rpm振荡培养该菌株20‑48小时，离心、收集菌体，采用微生物冻干法进行处理从而制成生防菌剂，菌剂成品中活菌总浓度为1×106‑1×1011CFU/g，实际使用时将菌剂成品与无菌水按照1：20稀释制备成菌悬液后施用。经试验证明，本发明的生防菌剂在实验室内对芦笋拟茎点霉抑菌率达到100%，且在温室条件下（人工接种）对芦笋茎枯病的防效可以达到76.07％。

Description

一种防治芦笋茎枯病的生防菌株LS01及其生防菌剂
技术领域
本发明涉及一种防治芦笋茎枯病的生防菌株LS01及其生防菌剂应用，属于植物保护技术领域，具体涉及芦笋茎枯病的防治。
背景技术
芦笋茎枯病是一种分布广、危害重的毁灭性病害，在我国各芦笋产区几乎都有发生。近年来我国芦笋面积不断扩大，其危害程度也随之加重。一旦得了茎枯病，轻则减产，重则毁园绝收，给广大笋农造成巨大损失。同时，因为一旦感染茎枯病将很难根除，因此，芦笋茎枯病被称为“芦笋癌症”。
通常采用化学农药来防治芦笋茎枯病，虽然取得了一定的防效，但始终未能很好控制该病害的发生。而且化学农药对农田生态系统的严重破坏，病原菌对药剂的抗性越来越明显。同时，化学农药不易降解，高残留，对人畜极不安全都严重限制了在将来的农业生产上的使用。而生物防治对人畜安全无毒，不污染环境，无残留，不易使病原菌产生耐药性，且生防微生物还具有促进作物生长的作用等特点，是最有前途的防治芦笋茎枯病的方法。目前利用微生物制剂防治芦笋茎枯病虽取得了一些进展，但效果并不理想。综上所述，开发新的、更为高效和安全的微生物杀菌剂控制芦笋茎枯病的发生，是实现农业安全和可持续发展的需要，符合社会发展要求。
发明内容
针对目前芦笋种植过程中茎枯病防治难度大、成本高、化学农药抗性日益突出和农药残留高等问题，本发明提供一株多粘类芽孢杆菌 (Paenibacillus polymyxa)菌株LS01，所述菌株的保藏号为CGMCC NO. 11690，保藏日期为2015年11月20日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
在本发明的一种实施方式中，本发明提供所述多粘类芽孢杆菌 (Paenibacillus polymyxa)菌株 LS01在防治芦笋茎枯病中的应用。
在本发明的另一种实施方式中，本发明提供一种生防菌剂及其在防治芦笋茎枯病中的应用，所述生防菌剂包括所述多粘类芽孢杆菌 (Paenibacillus polymyxa)菌株LS01。
本发明还提供一种芦笋茎枯病的防治方法，所述方法包括对具有芦笋茎枯病的芦笋施用所述多粘类芽孢杆菌 (Paenibacillus polymyxa)菌株 LS01或所述生防菌剂。
本发明提供的多粘类芽孢杆菌 (Paenibacillus polymyxa)菌株及生防菌剂对芦笋茎枯病有较好的防治效果，对人畜安全无毒，不污染环境，无残留，且不易使病原菌产生耐药性，是农业与环境领域允许使用的安全性菌株。
附图说明
图1为芦笋拟茎点霉菌照片，图2 为本发明的多粘类芽孢杆菌LS01 生防菌剂在培养皿内抑制芦笋拟茎点霉菌丝生长的照片。
具体实施方式
下面将结合具体实施例来进一步对本发明作详细描述，以使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚。以下实施例仅用于举例说明，并不对本发明构成任何限制。
实施例1 多粘类芽孢杆菌LS01 生防菌剂及其制备方法。
本实施例利用多粘类芽孢杆菌LS01（即多粘类芽孢杆菌CGMCC NO. 11690）制作生防菌剂，该生防菌剂是由多粘类芽孢杆菌LS01 经活化、种子培养、生产培养和菌剂制备后得到，具体制备方法包括以下步骤：
（1）活化：将多粘类芽孢杆菌LS01接种到LB固体培养基上，培养温度为37℃，培养3-4天；然后转接到LB液体培养基中，温度为30℃，180 rpm 振荡培养16-28h。
（2）种子培养：将步骤（1）活化后的菌液接入至容积为250 mL三角瓶中，温度为30℃，180 rpm 振荡培养16-28h，培养至对数生长期；
（3）生产培养：将步骤（2）培养得到的菌液，按LB生产培养基总体积的0.5%-2% 的接种量接种到发酵罐中，罐温为30℃，搅拌速度为200rpm，培养时间为40h，得到发酵液。
（4）菌剂制备：将步骤（3）培养得到的发酵液进行离心，收集菌体，采用微生物冻干法，制成生防菌剂，菌剂成品中活菌总浓度为1×106 CFU/g 至1×1011CFU/g。
实施例2 多粘类芽孢杆菌LS01生防菌剂对芦笋拟茎点霉抑制效果。
芦笋茎枯病致病菌拟茎点霉经活化两次后，加入10mL无菌水，用接种针将孢子和菌丝小心刮下，然后倒入放有玻璃珠的三角瓶中，摇床振荡将菌块打碎，静置，将上清倒入已冷却至45℃的300mL PDA培养基中，摇匀后立即倒平板，冷却凝固后，放置无菌小圆滤纸片（2个/皿），30 ℃培养过夜。将多粘类芽孢杆菌LS01生防菌剂与无菌水按照1：20稀释后，取3μL滴加在病原菌培养基的滤纸片上，以无菌水作为空白对照组，30℃培养24-36 h，观察抑菌圈。
抑菌试验结果如图1 所示，具体检测数值如下表1 所示。
表1 ：多粘类芽孢杆菌LS01生防菌剂对芦笋拟茎点霉的抑制效果
Figure DEST_PATH_840923DEST_PATH_IMAGE001
实施例3 温室盆栽试验检测多粘类芽孢杆菌LS01生防菌剂对芦笋茎枯病的防效
移栽之前，用多粘类芽孢杆菌LS01生防菌剂稀释100倍后，浸种处理芦笋幼苗30min ；移栽时采用20 mL生防菌剂稀释液灌根处理，移栽7 天后接种1000 个/mL 芦笋拟茎点霉游动孢子悬液20mL。另外不用多粘类芽孢杆菌LS01生防菌剂处理，直接接种芦笋拟茎点霉菌游动孢子悬液的处理作为对照组。每个处理组20 株，重复三次。在温度25～28℃，相对湿度50％，培养4周后调查病级数，计算病害严重度和防效。
灌根接种法的分级标准：
0级，无任何症状；
1级，幼苗根茎部稍有变黑，叶片不萎蔫或可恢复性萎蔫；
2级，幼苗根茎部变黑达1 ～ 2cm，叶片不可恢复性萎蔫，下部叶片偶有脱落；
3级，幼苗根茎部变黑超过1 ～ 2cm，叶片明显萎蔫或落叶明显；
4级，幼苗根茎部变黑、皱缩，生长点外部叶脱落或整株萎蔫；
5级，植株枯死。
移栽4周后的调查结果显示，多粘类芽孢杆菌LS01生防菌剂对芦笋拟茎点霉的防效达到76.07％。
Figure DEST_PATH_556179DEST_PATH_IMAGE004
以上结合具体实施方式对本发明进行了说明，这些具体实施方式仅仅是示例性的，不能以此限定本发明的保护范围，本领域技术人员在不脱离本发明实质的前提下可以进行各种修改、变化或替换。因此，依照本发明所作的各种等同变化，仍属于本发明所涵盖的范围。

Claims (5)

1.多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)菌株LS01，其特征在于，所述菌株的保藏号为CGMCC NO.11690。
2.如权利要求1所述的多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)菌株LS01在防治芦笋茎枯病中的应用。
3.一种生防菌剂，包括权利要求1所述的多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)菌株LS01，所述生防菌剂具体制备方法包括以下步骤：
(1)活化：将多粘类芽孢杆菌LS01接种到LB固体培养基上，培养温度为37℃，培养3-4天；然后转接到LB液体培养基中，温度为30℃，180rpm振荡培养16-28h；
(2)种子培养：将步骤(1)活化后的菌液接入至容积为250mL三角瓶中，温度为30℃，180rpm振荡培养16-28h，培养至对数生长期；
(3)生产培养：将步骤(2)培养得到的菌液，按LB生产培养基总体积的0.5％-2％的接种量接种到发酵罐中，罐温为30℃，搅拌速度为200rpm，培养时间为40h，得到发酵液；
(4)菌剂制备：将步骤(3)培养得到的发酵液进行离心，收集菌体，采用微生物冻干法，制成生防菌剂，菌剂成品中活菌总浓度为1×106CFU/g至1×1011CFU/g。
4.如权利要求3所述的生防菌剂在防治芦笋茎枯病中的应用。
5.一种芦笋茎枯病的防治方法，所述方法包括对具有芦笋茎枯病的芦笋施用权利要求1所述的多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)菌株LS01或权利要求3所述的生防菌剂。
CN201510940115.3A 2015-12-16 2015-12-16 一种防治芦笋茎枯病的生防菌株ls01及其生防菌剂 Active CN106883996B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510940115.3A CN106883996B (zh) 2015-12-16 2015-12-16 一种防治芦笋茎枯病的生防菌株ls01及其生防菌剂

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510940115.3A CN106883996B (zh) 2015-12-16 2015-12-16 一种防治芦笋茎枯病的生防菌株ls01及其生防菌剂

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106883996A CN106883996A (zh) 2017-06-23
CN106883996B true CN106883996B (zh) 2020-04-28

Family

ID=59174449

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510940115.3A Active CN106883996B (zh) 2015-12-16 2015-12-16 一种防治芦笋茎枯病的生防菌株ls01及其生防菌剂

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106883996B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108034611A (zh) * 2018-01-12 2018-05-15 中国科学院成都生物研究所 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
芦笋茎枯病拮抗茵KJ-1的筛选及其对土壤微生物区系的影响;周德平 等;《中国农学通报》;20111231;第27卷(第27期);第288-293页 *
芦笋茎枯病的生物防治及机理研究;马利平 等;《中国生态农业学报》;20091130;第17卷(第6期);参见摘要、表1、表3 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN106883996A (zh) 2017-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107446847B (zh) 一株贝莱斯芽孢杆菌gt11及其应用
CN103215210B (zh) 一种西姆芽孢杆菌及其在制备微生物海藻肥料中的应用
CN102533617B (zh) 一株枯草芽孢杆菌及其应用
CN105907680B (zh) 一种枯草芽孢杆菌j-5及其生物菌剂和应用
CN102676416B (zh) 一株水稻纹枯病菌生防菌rs-bc及微生物菌剂与制备方法和应用
CN112342173B (zh) 贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN102172249A (zh) 防治香蕉枯萎病的海洋细菌2bs12
CN102160553A (zh) 一种抗植物病毒病Ba制剂及其应用
CN102146350B (zh) 防治生姜青枯病的生防菌株3yw8
CN114231444B (zh) 一株耐盐芽孢杆菌及其应用
CN114907986A (zh) 一种哈茨木霉菌及其在防治三七根腐病制剂中的应用
CN105132296A (zh) 一种钩状木霉菌菌株及其应用
CN109169712B (zh) 一种复合生防菌剂及其制备方法和应用
CN102972445A (zh) 一种防治棉花病害的生物菌剂及其制备方法
CN102604857B (zh) 一株烟草普通花叶病毒生防蒙氏假单胞菌菌株
CN107034153B (zh) 一种用于兰州百合的复合微生物菌剂及其制备方法
CN105420136A (zh) 一株防治植物根癌病的苍白杆菌及其应用
CN106883996B (zh) 一种防治芦笋茎枯病的生防菌株ls01及其生防菌剂
CN115960777B (zh) 一株假真菌样芽孢杆菌及其在蔬菜疫病防治中的应用
CN105820969A (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用
CN102191198A (zh) 防治水稻纹枯病和稻瘟病的生防菌株jh21及其生防菌剂
CN114806892A (zh) 一株深绿木霉菌菌株及其在防治三七根腐病中的应用
CN101402930B (zh) 一株植物根际促生细菌
CN105349434B (zh) 一株毒杀植物寄生线虫的产紫青霉及其制备方法和应用
CN105331561B (zh) 一株防治植物根癌病的放射形根瘤菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information
CB02 Change of applicant information

Address after: 100027 Beijing city Chaoyang District Xiaoyun Road No. 32

Applicant after: China Food Fermentation Industry Research Institute Co., Ltd.

Applicant after: Seed & Sci-Tech Co., Ltd. Of BAAFS

Address before: 100027 Beijing city Chaoyang District Xiaoyun Road No. 32

Applicant before: China National Academy of Food & Fermentation Industries

Applicant before: Seed & Sci-Tech Co., Ltd. Of BAAFS

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant