CN106872683A - 一种超低检测限的莱克多巴胺的检测方法 - Google Patents

一种超低检测限的莱克多巴胺的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106872683A
CN106872683A CN201710086762.1A CN201710086762A CN106872683A CN 106872683 A CN106872683 A CN 106872683A CN 201710086762 A CN201710086762 A CN 201710086762A CN 106872683 A CN106872683 A CN 106872683A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ractopamine
solution
detection method
added
sufficiently mixed
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710086762.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106872683B (zh
Inventor
黎杉珊
罗擎英
刘耀文
申光辉
张志清
吴贺君
陈安均
刘兴艳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chengdu Metropolitan Modern Agricultural Industry Technology Research Institute Co., Ltd.
Sichuan Agricultural Science Source Detection Technology Co., Ltd.
Original Assignee
Sichuan Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sichuan Agricultural University filed Critical Sichuan Agricultural University
Priority to CN201710086762.1A priority Critical patent/CN106872683B/zh
Publication of CN106872683A publication Critical patent/CN106872683A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106872683B publication Critical patent/CN106872683B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明属于食品残留物检测领域，具体涉及一种超低检测限的莱克多巴胺的检测方法，该方法利用羧基化多壁碳纳米管、壳聚糖和羧甲基化的β‑环糊精等作为检测探针原料，建立了葡萄糖浓度与莱克多巴胺含量之间的关系，获得了可利用血糖仪快速且可重复性好的检测莱克多巴胺的技术效果，同时该方法还具有低至0.001μg/L的检测限，使得利用葡萄糖浓度测量莱克多巴胺含量的技术具有更强的实用性。

Description

一种超低检测限的莱克多巴胺的检测方法
技术领域
本发明属于食品残留物检测领域，具体涉及一种超低检测限的莱克多巴胺的检测方法。
背景技术
莱克多巴胺是苯乙醇胺类 β 2- 肾上腺素兴奋剂,如果给动物饲用含莱克多巴胺的饲料, 会造成肌肉及组织中不同程度的残留, 通过食物链进入人体, 使消费者出现不同程度的中毒现象。 目前，我国已经明确将其列为禁用药品目录。
目前，检测莱克多巴胺的实验室确证技术是高效液相色谱( HPLC) 或液相色谱-质谱联用技术检出限为2 μg /L左右， 但是样品前处理过程复杂，分析过程费时、费力。而酶联免疫法具有检测时间长的缺点。为此，开发一种方便快捷、检测限低的莱克多巴胺检测方法是十分紧迫的。
经过本领域研究人员的不懈研究，近两年开发出了一种利用血糖仪检测莱克多巴胺含量的技术，然而，其探针的制备需要用到特殊的Envision试剂，成本较为高昂。另外，是否还可以获得更好的检测限，也是本领域人员非常感兴趣的。
发明内容
为了解决本领域中的技术缺点和填补技术空白，本发明的目的在于提供一种一种超低检测限的莱克多巴胺的检测方法，其特征在于，所述方法包括：
（1）将羧基化多壁碳纳米管溶于DMF溶液中并加入壳聚糖乙酸溶液中，超声处理后，得到浑浊液，再加入羧甲基化的β-环糊精、1-(3- 二甲氨基丙基 )-3- 乙基碳二亚胺盐酸盐和N- 羟基琥珀酰亚胺的PBS溶液，充分混合后，分散在含有牛血清蛋白的PBS溶液中；所述羧基化多壁碳纳米管的长度为0.5~1.5μm；
（2）将莱克多巴胺抗体Ab加入到胶体金溶液中，再加入蔗糖酶溶液，充分搅拌后，离心取沉淀并置于含有牛血清蛋白的PBS溶液中；
（3）将步骤（1）所得物加入到待测样品中，室温下充分混合，清洗后，加入步骤（2）所得物，室温下充分混合，再加入蔗糖溶液，室温下充分混合反应，待反应完毕，去除沉淀取上清液，测量葡萄糖含量；通过建立标准曲线，获得待测样品中莱克多巴胺的含量。
步骤（1）中，羧基化多壁碳纳米管在DMF溶液的浓度为0.0020~0.0025g/ml；壳聚糖乙酸溶液中乙酸体积分数为1%，壳聚糖的浓度为0.005~0.008g/ml，所述羧基化多壁碳纳米管DMF溶液与所述壳聚糖乙酸溶液的体积比为1：10~15。
步骤（1）中，羧甲基化的β-环糊精、1-(3- 二甲氨基丙基 )-3- 乙基碳二亚胺盐酸盐和N- 羟基琥珀酰亚胺的质量比为2:1:1。
步骤（1）或步骤（2）中，牛血清蛋白的质量分数为1%。
步骤（2）中，所述莱克多巴胺抗体Ab的浓度为0.1mg/ml，其与胶体金溶液的体积比为1:10。
步骤（3）中，将步骤（1）所得物加入到待测样品中，室温下充分混合，震荡2h。
步骤（3）中，检测葡萄糖含量时可以采用血糖仪。
所述PBS溶液的pH为7.2。
近些年来，在莱克多巴胺的快捷检测领域一直未有十分明显的突破，直到中国专利201410015040.3提供了一种快速检测方法，其不但解决了常规检测方法复杂且耗时的缺点，更具有十分优秀的可重复性和检测限。一般而言，HPLC对于莱克多巴胺的检测限仅有2μg/L左右，而该专利的检测限可低至0.02 μg/L。
然而，在莱克多巴胺的检测领域，已经出现了检测限可低至0.08μg/L的电化学检测芯片。从这个角度而言，该专利并没有实现检测限方面的突破。
通过大量实验摸索，本发明发现当如上所述制备探针后，可以不进行信号的放大，而直接获得低至0.001 μg/L的检测限，不但实现了快速检测，还实现了更为精确的检测，使得利用葡萄糖浓度测量莱克多巴胺含量的技术具有更强的实用性。
具体实施方式
以下结合实施例进一步对本发明进行说明，值得一提的时，下述实施例仅仅起到示例作用，并非旨在对本发明有所限定，本领域的技术人员应该理解，凡是符合本发明精神的技术方案均属于本发明的保护范围。
实施例1
待测样品（猪肉）的制备方法同中国专利201410015040.3中实施例1所述。
按下述方法进行检测：
（1）将羧基化多壁碳纳米管溶于DMF溶液中并加入壳聚糖乙酸溶液中，超声处理后，得到浑浊液，再加入羧甲基化的β-环糊精、1-(3- 二甲氨基丙基 )-3- 乙基碳二亚胺盐酸盐和N- 羟基琥珀酰亚胺的PBS溶液，充分混合后，分散在含有牛血清蛋白的PBS溶液中；所述羧基化多壁碳纳米管的长度为0.5~1.5μm；
（2）将莱克多巴胺抗体Ab加入到胶体金溶液中，再加入蔗糖酶溶液，充分搅拌后，离心取沉淀并置于含有牛血清蛋白的PBS溶液中；
（3）将步骤（1）所得物加入到待测样品中，室温下充分混合，清洗后，加入步骤（2）所得物，室温下充分混合，再加入蔗糖溶液，室温下充分混合反应，待反应完毕，去除沉淀取上清液，测量葡萄糖含量；通过建立标准曲线，获得待测样品中莱克多巴胺的含量。
步骤（1）中，羧基化多壁碳纳米管在DMF溶液的浓度为0.0025g/ml；壳聚糖乙酸溶液中乙酸体积分数为1%，壳聚糖的浓度为0.005g/ml，所述羧基化多壁碳纳米管DMF溶液与所述壳聚糖乙酸溶液的体积比为1：10。
步骤（1）中，羧甲基化的β-环糊精、1-(3- 二甲氨基丙基 )-3- 乙基碳二亚胺盐酸盐和N- 羟基琥珀酰亚胺的质量比为2:1:1；其中β-环糊精的质量浓度为10g/L。
步骤（1）或步骤（2）中，牛血清蛋白的质量分数为1%。
步骤（2）中，所述莱克多巴胺抗体Ab的浓度为0.1mg/ml，其与胶体金溶液的体积比为1:10。
步骤（3）中，将步骤（1）所得物加入到待测样品中，室温下充分混合，震荡2h。
步骤（3）中，检测葡萄糖含量时可以采用血糖仪。
上述步骤中，所用到的PBS的pH=7.2。
检测结果为如表1所示。
表1
本发明的检测限为0.001μg/L。

Claims (8)

1.一种超低检测限的莱克多巴胺的检测方法，其特征在于，所述方法包括：
（1）将羧基化多壁碳纳米管溶于DMF溶液中并加入壳聚糖乙酸溶液中，超声处理后，得到浑浊液，再加入羧甲基化的β-环糊精、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的PBS溶液，充分混合后，分散在含有牛血清蛋白的PBS溶液中；所述羧基化多壁碳纳米管的长度为0.5~1.5μm；
（2）将莱克多巴胺抗体Ab加入到胶体金溶液中，再加入蔗糖酶溶液，充分搅拌后，离心取沉淀并置于含有牛血清蛋白的PBS溶液中；
（3）将步骤（1）所得物加入到待测样品中，室温下充分混合，清洗后，加入步骤（2）所得物，室温下充分混合，再加入蔗糖溶液，室温下充分混合反应，待反应完毕，去除沉淀取上清液，测量葡萄糖含量；通过建立标准曲线，获得待测样品中莱克多巴胺的含量。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中，羧基化多壁碳纳米管在DMF溶液的浓度为0.0020~0.0025g/ml；壳聚糖乙酸溶液中乙酸体积分数为1%，壳聚糖的浓度为0.005~0.008g/ml，所述羧基化多壁碳纳米管DMF溶液与所述壳聚糖乙酸溶液的体积比为1：10~15。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中，羧甲基化的β-环糊精、1-(3- 二甲氨基丙基 )-3- 乙基碳二亚胺盐酸盐和N- 羟基琥珀酰亚胺的质量比为2:1:1。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）或步骤（2）中，牛血清蛋白的质量分数为1%。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中，所述莱克多巴胺抗体Ab的浓度为0.1mg/ml，其与胶体金溶液的体积比为1:10。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（3）中，将步骤（1）所得物加入到待测样品中，室温下充分混合，震荡2h。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（3）中，测量葡萄糖含量时，用血糖仪进行。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述PBS溶液的pH为7.2。
CN201710086762.1A 2017-02-17 2017-02-17 一种莱克多巴胺的检测方法 Active CN106872683B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710086762.1A CN106872683B (zh) 2017-02-17 2017-02-17 一种莱克多巴胺的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710086762.1A CN106872683B (zh) 2017-02-17 2017-02-17 一种莱克多巴胺的检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106872683A true CN106872683A (zh) 2017-06-20
CN106872683B CN106872683B (zh) 2018-07-13

Family

ID=59167209

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710086762.1A Active CN106872683B (zh) 2017-02-17 2017-02-17 一种莱克多巴胺的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106872683B (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102636549A (zh) * 2012-02-27 2012-08-15 苏州科技学院 胶束识别的人体血清中多巴胺的电化学传感器及测定方法
CN103196968A (zh) * 2013-03-28 2013-07-10 江西科技师范大学 一种检测有机磷农药甲基对硫磷的电化学传感器制备方法
CN103792328A (zh) * 2014-01-13 2014-05-14 宁波大学 一种食品中莱克多巴胺含量的检测方法
CN104297233A (zh) * 2014-09-28 2015-01-21 中国农业大学 动物体液中β-受体激动剂类药物的检测方法及试剂盒
CN104655848A (zh) * 2015-01-15 2015-05-27 宁波大学 检测莱克多巴胺的酶联免疫检测试剂盒及其制备方法和应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102636549A (zh) * 2012-02-27 2012-08-15 苏州科技学院 胶束识别的人体血清中多巴胺的电化学传感器及测定方法
CN103196968A (zh) * 2013-03-28 2013-07-10 江西科技师范大学 一种检测有机磷农药甲基对硫磷的电化学传感器制备方法
CN103792328A (zh) * 2014-01-13 2014-05-14 宁波大学 一种食品中莱克多巴胺含量的检测方法
CN104297233A (zh) * 2014-09-28 2015-01-21 中国农业大学 动物体液中β-受体激动剂类药物的检测方法及试剂盒
CN104655848A (zh) * 2015-01-15 2015-05-27 宁波大学 检测莱克多巴胺的酶联免疫检测试剂盒及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YU LIU ET AL: "Supramolecular Architectures of-Cyclodextrin-Modified Chitosan and Pyrene Derivatives Mediated by Carbon Nanotubes and Their DNA Condensation", 《J. AM. CHEM. SOC》 *
杨怀成等: "β 环糊精-碳纳米管壳聚糖自组装膜修饰电极在过量抗坏血酸存在下测定多巴胺", 《分析试验室》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN106872683B (zh) 2018-07-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101793881B (zh) 一种食品中生物胺的检测方法
Wei et al. A novel label-free electrochemical immunosensor based on graphene and thionine nanocomposite
Ashley et al. An aptamer based surface plasmon resonance biosensor for the detection of bovine catalase in milk
Bagheri Hashkavayi et al. Label‐free electrochemical aptasensor for determination of chloramphenicol based on gold nanocubes‐modified screen‐printed gold electrode
CN101387617B (zh) 丝网印刷电极及其合成氯霉素分子印迹膜的方法
CN103116023A (zh) 用于检测肿瘤标志物的电化学发光免疫传感器及其制备方法和应用
CN106883849A (zh) 一种含氮硫参杂的石墨烯量子点及其制备方法与在制备赖氨酸荧光检测试剂上的应用
JP5202761B2 (ja) 抗体を自己組織化膜上に固定する方法
CN109060917B (zh) 一种检测肠致病性大肠杆菌的核酸适配体电化学传感器及其制备方法和应用
Tian et al. Piezoelectric aptasensor with gold nanoparticle amplification for the label-free detection of okadaic acid
CN107422009B (zh) 一种方便检测葡萄糖的非酶电化学生物传感方法
CN110057891B (zh) 一种基于PtCu RNDFs的电化学传感器的制备方法及应用
CN102994638B (zh) 生物样品中待检物的夹心免疫pcr检测方法和试剂盒
CN102288656A (zh) 一种检测卵巢skov-3癌细胞的三明治型电化学传感器
CN108776160B (zh) 一种同时检测双酚a和双酚s的方法
CN103278621A (zh) 一种利用生物传感器与血糖仪检测转录因子的方法
CN102268488A (zh) 检测牛病毒性腹泻病毒的荧光定量rt-pcr检测试剂盒及其应用
CN101532980B (zh) 检测志贺氏菌的酶免疫传感器及其制备方法和运用
CN108841828B (zh) 一种特异性识别妥布霉素的单链dna适配体及其应用
CN106872683A (zh) 一种超低检测限的莱克多巴胺的检测方法
CN103163193A (zh) 同时检测三种瘦肉精的电化学传感器的制备方法及应用
CN104198563A (zh) 铅离子负载金磁性多壁碳纳米管传感器的制备方法及应用
CN104764774A (zh) 一种检测大肠杆菌的生物传感器及其制备方法
CN104391020A (zh) 一种电化学适配体传感器、其制备方法及其用途
CN104698053B (zh) 一种二氧化钛‑碳棒微电极、制备方法及其检测血液中对乙酰氨基酚浓度的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20190417

Address after: 611130 No. 203, 204 and 205, No. 355 Kejin Road, Wenjiang District, Chengdu City, Sichuan Province

Co-patentee after: Chengdu Metropolitan Modern Agricultural Industry Technology Research Institute Co., Ltd.

Patentee after: Sichuan Agricultural Science Source Detection Technology Co., Ltd.

Address before: 611130 Huimin Road, Wenjiang District, Chengdu, Sichuan Province, No. 211

Patentee before: Sichuan Agricultural University

TR01 Transfer of patent right