CN106868092A - 一种农村饮用水微生物现场快速检测的方法 - Google Patents

一种农村饮用水微生物现场快速检测的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种农村饮用水微生物现场快速检测的方法。该方法包括如下步骤：吸取未经处理的农村饮用水样品，滴入采用冷水凝固剂混合粉末和液体培养基制备的检测凝胶中，密封培养后，观察并计数检测凝胶中的菌落个数。本发明检测方法用的检测凝胶易溶于冷水、吸水性能良好，保水能力强，无毒、透明，凝胶强度高，对微生物生长无明显抑制作用；且检测工具携带方便，操作简单，成本低廉，能缩短检测时间，与国标方法检验结果无显著性差异。

Description

一种农村饮用水微生物现场快速检测的方法
技术领域
本发明属于环境微生物检测技术领域，尤其涉及一种农村饮用水微生物现场快速检测的方法。
背景技术
农村饮用水由于地形、投资等条件限制，很少像大型集中式供水那样对生活饮用水进行专业消毒，若有微生物污染，将会使人患上肠道传染病及其他疾病，严重影响人们的生活及环境卫生质量。
我国的生活饮用水相关标准中对微生物指标都做了限值要求并提供了检验方法，传统的微生物检验方法所用的琼脂不能在冷水中凝固，配制微生物培养基时，需先加热溶解、灭菌、再冷却后才能使用，操作繁琐，准备和收尾工作繁重，大大影响了检验效率。另外，我国部分农村由于农村道路不畅、距离远等限制，从现场取水样到运送至实验室耗时长，并且取样、运输等过程可能存在的染菌对检验结果也有重大的影响。
冷水培养基凝固剂作培养基载体，在农村饮用水微生物检验时，无需加热预处理，携带方便，可在户外现场直接滴加水样开始进行检测。因此，研发一种无毒、透明、稳定、保水效果好、凝胶强度高的凝胶材料并用于农村饮用水微生物现场快速检测上，对缩短检验时间，提高检验效率与时效有着重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种农村饮用水微生物现场快速检测的方法。本发明方法现场检测农村饮用水微生物指标，检测工具携带方便，操作简单，成本低廉，能缩短检测时间、提高检验时效，且与国标方法检验结果无显著性差异。
本发明通过如下技术方案实现。
一种农村饮用水微生物现场快速检测的方法，包括如下步骤：
吸取未经处理的农村饮用水样品，现场直接加入到采用冷水凝固剂混合粉末和液体培养基制备的检测凝胶中，密封培养后，观察并计数检测凝胶中的菌落数。
进一步地，检测的微生物包括细菌、真菌。
进一步地，检测指标包括菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌。
进一步地，所述检测凝胶通过如下步骤制备得到：
将冷水凝固剂混合粉末添加到液体培养基中，煮沸溶解，再冷却，倒入培养皿中，烘干，杀菌，无菌密封保存，备用。
更进一步地，所述冷水凝固剂混合粉末由黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、聚丙烯酸钠和羟乙基纤维素组成；所述黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、聚丙烯酸钠和羟乙基纤维素均为食品级原料，并经过粉碎、过60-100目筛，颗粒大小均匀，形成凝胶反应时间短，凝胶性能良好；
所述黄原胶和卡拉胶的质量比为1：1.5～2，优选为1:1.5；所述海藻酸钠、聚丙烯酸钠和羟乙基纤维素的质量比为1：4～7：6～10，优选为1:5:8；黄原胶和卡拉胶的混合物与海藻酸钠、聚丙烯酸钠和羟乙基纤维素的混合物的质量比为6～9：1，优选为7:1。
更进一步地，所述液体培养基包括微生物检测领域常见的液体培养基，包括营养肉汤培养基、孟加拉红液体培养基、乳糖胆盐液体培养基、紫红胆盐葡萄糖液体培养基、EC-MUG液体培养基、伊红美蓝液体培养基或VRBA液体培养基。
更进一步地，所述冷水凝固剂混合粉末与液体培养基的料液比为1.0～2.5：100g/ml。
更进一步地，所述煮沸溶解的时间为5-15min。
更进一步地，所述冷却是冷却至50-60℃。
更进一步地，所述培养皿包括玻璃平皿或一次性塑料平皿，优选为一次性塑料平皿。
更进一步地，所述烘干的温度为60℃，时间为45-90min。
更进一步地，所述杀菌是采用紫外线或Co60杀菌。
更进一步地，所述保存的温度为2-8℃。
进一步地，所述密封培养的温度为35-45℃，时间为18-24h。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和有益效果：
(1)本发明检测方法用的检测凝胶易溶于冷水、吸水性能良好，保水能力强，无毒、透明，凝胶强度高，对微生物生长无明显抑制作用；
(2)本发明方法现场检测农村饮用水微生物指标，检测工具携带方便，操作简单，成本低廉，能缩短检测时间，且与国标方法检验结果无显著性差异。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明内容中的技术方案进行清楚、完整地描述，但本发明不限于以下实施例。
实施例1
(1)分别粉碎黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、聚丙烯酸钠、羟乙基纤维素，过100目筛；将粉碎过筛后的黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、聚丙烯酸钠、羟乙基纤维素按质量比为9:15:1:6:8混合均匀，得到冷水凝固剂混合粉末；称取上述混合粉末2.0g添加到100ml液体伊红美蓝液体培养基中，煮沸10min，冷却至55℃后，吸取10ml，滴加于直径6cm的一次性塑料平皿中；60℃干燥60min，Co60杀菌后，无菌密封，4℃冰箱保存备用。
所得检测凝胶平整性及透明度好，吸水量83.5g/g，pH值7.0，凝胶强度238g/cm2，对微生物生长无明显抑制作用。
(2)将装有检测凝胶的无菌密封检测平皿带至甘肃省农村某窖水饮用水采样现场；在现场用无菌吸管吸取10ml未经处理的水样均匀喷洒至上述检测凝胶上，用parafilm膜封口一次性塑料平皿，密封平皿35℃环境下培养24h后，观察并计数带金属光泽的紫黑色菌落。同时，用无菌采样瓶在现场取水样，带回实验室后按照国家标准《生活饮用水标准检验方法—微生物指标》(GBT5750.12-2006)方法，进行饮用水大肠菌群指标检测。
本发明方法与国标检测方法的检测结果如表1所示。
表1 2种方法测定农村饮用水水样中大肠菌群数(单位：CFU/ml)
由表1可知，2种检测方法的检验结果无显著性差异。
实施例2
(1)分别粉碎黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、聚丙烯酸钠、羟乙基纤维素，过80目筛；将粉碎过筛后的黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、聚丙烯酸钠、羟乙基纤维素按质量比为6:12:1:7:9混合均匀，得到冷水凝固剂混合粉末；称取上述混合粉末2.5g添加到100ml紫红胆盐葡萄糖液体培养基中，煮沸5min，冷却至60℃后，吸取10ml，滴加于直径6cm的一次性塑料平皿中；60℃干燥45min，Co60杀菌后，无菌密封，8℃保存备用。
所得检测凝胶平整性及透明度好，吸水量78.5g/g，pH值7.0，凝胶强度226g/cm2。
(2)将装有检测凝胶的无菌密封检测平皿带至甘肃省农村某窖水饮用水采样现场；在现场用无菌吸管吸取15ml未经处理的水样均匀喷洒至上述检测凝胶上，用parafilm膜封口一次性塑料平皿，密封平皿在45℃环境下培养18h后，观察并计数绕有红色沉淀环的深红色菌落。同时，用无菌采样瓶在现场取水样，带回实验室后按照国家标准《生活饮用水标准检验方法—微生物指标》(GBT5750.12-2006)方法，进行饮用水耐热大肠菌群指标检测。
本发明方法与国标检测方法的检测结果如表2所示。
表2 2种方法测定农村饮用水水样中耐热大肠菌群(单位：CFU/ml)
由表2可知，2种检测方法的检验结果无显著性差异。
实施例3
(1)分别粉碎黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、聚丙烯酸钠、羟乙基纤维素，过60目筛；将粉碎过筛后的黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、聚丙烯酸钠、羟乙基纤维素按质量比为8:14:1:5:10混合均匀，得到混合粉末；称取上述混合粉末1.5g添加到100ml EC-MUG液体培养基中，煮沸5min，冷却至50℃，倒入一次性塑料平皿中，60℃烘75min，紫外线杀菌后，密封，2℃冰箱保存备用。
所得检测凝胶平整性及透明度好，吸水量75.4g/g，pH值6.9，凝胶强度207.4g/cm2，对微生物的生长无明显抑制。
(2)将装有检测凝胶的无菌密封检测平皿带至甘肃省农村某窖水饮用水采样现场；在现场用无菌吸管吸取15ml取未经处理的水样，均匀喷洒至上述检测凝胶上，用parafilm膜封口一次性塑料平皿，密封平皿44.5℃环境下培养22h观察计数。同时，用无菌采样瓶在现场取样，带回实验室后按照国家标准《生活饮用水标准检验方法—微生物指标》(GBT5750.12-2006)方法，进行饮用水大肠埃希氏菌检测。
本发明方法与国标检测方法的检测结果如表3所示。
表3 2种方法测定农村饮用水水样中大肠埃希氏菌数(单位：CFU/ml)
由表3可知，2种检测方法的检验结果无显著性差异。
实施例4
(1)分别粉碎黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、聚丙烯酸钠、羟乙基纤维素，过60目筛；将粉碎过筛后的黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、聚丙烯酸钠、羟乙基纤维素按质量比为7:10:1:4:6混合均匀，得到混合粉末；称取上述混合粉末1.0g添加到100ml液体营养肉汤培养基中，煮沸15min，冷却至55℃，倒入一次性塑料平皿中，60℃烘90min，紫外线杀菌后，密封，4℃冰箱保存备用。
所得检测凝胶平整性及透明度好，吸水量97.4g/g，pH值6.9，凝胶强度264g/cm2，对微生物的生长无明显抑制。
(2)将装有检测凝胶的无菌密封检测平皿带至贵州省山区农村山泉水采样现场；在现场用无菌吸管吸取0.1ml取未经处理的山泉水水样加入5ml无菌双蒸水中，混匀后均匀喷洒至上述检测凝胶上，用parafilm膜封口一次性塑料平皿，平皿37℃环境下培养24h观察计数。同时，用无菌采样瓶在现场取样，带回实验室后按照国家标准《生活饮用水标准检验方法—微生物指标》
(GBT5750.12-2006)方法，进行饮用水菌落总数指标检测。
本发明方法与国标检测方法的检测结果如表4所示。
表4 2种方法测定农村饮用水水样中菌落总数(单位：CFU/ml)
由表4可知，2种检测方法的检验结果无显著性差异。
显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

Claims (9)

1.一种农村饮用水微生物现场快速检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：
吸取未经处理的农村饮用水样品，现场直接加入到采用冷水凝固剂混合粉末和液体培养基制备的检测凝胶中，密封培养后，观察并计数检测凝胶中的菌落数。
2.根据权利要求1所述的一种农村饮用水微生物现场快速检测的方法，其特征在于，检测的微生物包括细菌、真菌。
3.根据权利要求1所述的一种农村饮用水微生物现场快速检测的方法，其特征在于，检测指标包括菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌。
4.根据权利要求1所述的一种农村饮用水微生物现场快速检测的方法，其特征在于，所述检测凝胶通过如下步骤制备得到：
将冷水凝固剂混合粉末添加到液体培养基中，煮沸溶解，再冷却，倒入培养皿中，烘干，杀菌，无菌密封保存，备用。
5.根据权利要求1或4所述的一种农村饮用水微生物现场快速检测的方法，其特征在于，所述冷水凝固剂混合粉末由黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、聚丙烯酸钠和羟乙基纤维素组成；所述黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、聚丙烯酸钠和羟乙基纤维素均为食品级原料，并经过粉碎、过60-100目筛。
6.根据权利要求5所述的一种农村饮用水微生物现场快速检测的方法，其特征在于，所述黄原胶和卡拉胶的质量比为1：1.5~2；所述海藻酸钠、聚丙烯酸钠和羟乙基纤维素的质量比为1：4~7：6~10；黄原胶和卡拉胶的混合物与海藻酸钠、聚丙烯酸钠和羟乙基纤维素的混合物的质量比为6~9：1。
7.根据权利要求1或4所述的一种农村饮用水微生物现场快速检测的方法，其特征在于，所述液体培养基包括微生物检测领域常见的液体培养基，包括营养肉汤培养基、孟加拉红液体培养基、乳糖胆盐液体培养基、紫红胆盐葡萄糖液体培养基、EC-MUG液体培养基、伊红美蓝液体培养基或VRBA液体培养基。
8.根据权利要求4所述的一种农村饮用水微生物现场快速检测的方法，其特征在于，所述冷水凝固剂混合粉末与液体培养基的料液比为1.0~2.5：100g /ml；所述煮沸溶解的时间为5-15min；所述冷却是冷却至50-60℃；所述烘干的温度为60℃，时间为45-90min；所述杀菌是采用紫外线或Co60杀菌；所述保存的温度为2-8℃。
9.根据权利要求1所述的一种农村饮用水微生物现场快速检测的方法，其特征在于，所述密封培养的温度为35-45℃，时间为18-24h。
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