CN106866696B - 三白草酮磺酸盐及其京尼平苷组合物在制备药物中应用 - Google Patents

三白草酮磺酸盐及其京尼平苷组合物在制备药物中应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及三白草酮磺酸盐或三白草酮和京尼平苷(或者称栀子苷)的药物组合物及其在制备保肝药物或治疗老年痴呆药物中的应用。本发明人结合三白草酮或京尼平苷单独应用在保肝或治疗老年痴呆的药理活性存在吸收差且消除快、存在肝肠循环和生物利用度极低等问题，将三白草酮磺酸盐或三白草酮和京尼平苷进行药物组合应用，解决了上述三白草酮和京尼平苷单独应用存在疗效不佳的问题，三白草酮磺酸盐或三白草酮和京尼平苷的组合物疗效确切，副作用小，特别是三白草酮磺酸钠和京尼平苷的注射剂治疗肝炎或肝损伤或老年痴呆疗效非常确切，可用于静脉给药。

Description

三白草酮磺酸盐及其京尼平苷组合物在制备药物中应用
技术领域
本发明涉及三白草酮磺酸盐、三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷的组合物及其在制备保肝药物或老年痴呆药物或阿尔茨海默病药物中的应用，属于中医药制备技术领域。
背景技术
三白草酮木脂素类成分具有保肝或护肝或治疗老年痴呆或阿尔茨海默病的药理活性，但药动学实验研究报道发现其在体内的吸收差，且消除很快，主要因三白草酮的水溶性和脂溶性都很差。本发明人对其结构进行修饰改造，制备成三白草酮磺酸盐，特别是三白草酮磺酸钠，其水溶性增大。上述研究还没有报道，我们通过整体药理实验研究，首先发现三白草酮磺酸钠具有保肝或抗老年痴呆的治疗作用，且疗效优于三白草酮。
京尼平苷(或者称栀子苷)环烯醚萜类成分具有保肝或护肝或治疗老年痴呆或阿尔茨海默病的药理活性，但研究报道其大剂量应用时能导致严重肝损伤，小剂量应用时疗效不佳。主要是京尼平苷(也称为栀子苷)极性较大，水溶性好，脂溶性差，口服给药存在肝肠循环，生物利用度极低，不足10％。
本发明人结合三白草酮和京尼平苷在保肝或护肝或治疗老年痴呆或阿尔茨海默病药物中的药理活性存在吸收差且消除快、存在肝肠循环和生物利用度极低等问题，将三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷进行药物组合应用，解决了上述三白草酮和京尼平苷单独应用存在疗效不佳的问题，三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷的组合物疗效确切，副作用少，特别是三白草酮磺酸钠和京尼平苷的注射剂治疗肝炎或肝损伤或治疗老年痴呆疗效非常确切，可用于静脉给药。上述研究尚未见报道，我们通过整体药理实验研究，首先发现三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷的组合物对由酒精性肝炎或肝损伤、非酒精性肝炎或肝损伤、酒精性脂肪肝或肝损伤、非酒精性脂肪肝或肝损伤、肝损伤肝纤维化、肝硬化的肝炎或肝损伤具有显著的治疗作用。同时，三白草酮磺酸钠和京尼平苷的注射剂对由衰老、睡眠障碍、心脑血管疾病(心脏病、高血压、动脉粥样硬化和短暂性脑缺血发作等)、神经系统疾病等导致的淀粉样蛋白Aβ沉积或Aβ纤丝聚集形成的老年痴呆或阿尔茨海默病疾病或记忆障碍或记忆力减退具有良好的治疗作用或辅助治疗功效。
发明内容
三白草酮磺酸盐或三白草酮和京尼平苷的组合物及其在制备保肝药物或老年痴呆药物中的应用。
本发明采用了下述技术方案。
一种三白草酮磺酸盐，其特征在于：其三白草酮磺酸盐母核分子式为 C20H21O9S-，其三白草酮磺酸盐母核分子量为437，其三白草酮磺酸盐母核结构式为：
Figure GDA0002142809110000021
本发明所述三白草酮磺酸盐其中一种三白草酮磺酸钠，其分子式为 C20H21O9SNa，其分子量为460，其结构式为：
Figure GDA0002142809110000022
本发明所述三白草酮磺酸盐在制备各类药物中的应用，各类药物还包括各种单方和复方制剂。
本发明所述应用三白草酮磺酸盐的保肝药物组合物，包含三白草酮磺酸钠和京尼平苷。
本发明所述应用三白草酮磺酸盐的治疗老年痴呆或阿尔茨海默病的药物组合物，包含三白草酮磺酸钠和京尼平苷。
本发明所述应用三白草酮磺酸盐的保肝或治疗老年痴呆或阿尔茨海默病的药物组合物，所述三白草酮磺酸钠和京尼平苷的质量百分含量为1％～99％： 99％～1％。
本发明所述应用三白草酮磺酸盐的保肝药物组合物，所涉及肝炎或肝损伤为酒精性肝炎或肝损伤、非酒精性肝炎或肝损伤、酒精性脂肪肝或肝损伤、非酒精性脂肪肝或肝损伤、肝损伤肝纤维化或肝硬化的任意一种。
本发明所述应用三白草酮磺酸盐的治疗老年痴呆或阿尔茨海默病的药物组合物，所涉及的老年痴呆或阿尔茨海默病是由衰老、睡眠障碍、心脑血管疾病、神经系统疾病导致的淀粉样蛋白Aβ沉积或聚集形成的老年痴呆以及阿尔茨海默病中的任意一种。
本发明所述三白草酮磺酸盐在药物中的应用，所述药物包括口服液、胶囊、片剂、泡腾片、粉针剂、水针剂、注射剂、雾化剂、微乳剂、凝胶剂、纳米制剂或各种已知剂型制剂或各种可接受剂型制剂。
本发明所述的一种三白草酮，其三白草酮分子式为C20H20O6，其三白草酮分子量为356，应用在三白草酮的保肝药物组合物，包含三白草酮和京尼平苷。
本发明所述的三白草酮用于治疗老年痴呆或阿尔茨海默病的药物组合物，包含三白草酮和京尼平苷。
三白草酮和京尼平苷的组合物及其在制备保肝药物中的应用，作为三白草酮和京尼平苷的组合物优选：三白草酮和京尼平苷的质量百分含量为1％～99％： 99％～1％。
三白草酮和京尼平苷的组合物及其在制备老年痴呆药物中的应用，三白草酮和京尼平苷的质量百分含量为1％～99％：99％～1％。
三白草酮和京尼平苷的药物组合物及其在制备保肝药物中的应用，所涉及肝炎或肝损伤为酒精性肝炎或肝损伤、非酒精性肝炎或肝损伤、酒精性脂肪肝或肝损伤、非酒精性脂肪肝或肝损伤、肝损伤肝纤维化或肝硬化的任意一种。
三白草酮和京尼平苷的药物组合物及其在制备治疗老年痴呆或阿尔茨海默病药物中的应用，所涉及的老年痴呆或阿尔茨海默病是由衰老、睡眠障碍、心脑血管疾病、神经系统疾病导致的淀粉样蛋白Aβ沉积或聚集形成的老年痴呆以及阿尔茨海默病中的任意一种。
三白草酮和京尼平苷的药物组合物及其在制备保肝药物或治疗老年痴呆或阿尔茨海默病药物中的应用，所述药物包括口服液、胶囊、片剂、泡腾片、粉针剂、水针剂、注射剂、雾化剂、微乳剂、凝胶剂、纳米制剂或各种已知制剂剂型或各种可接受剂型制剂。
本发明的优点是：本发明人结合三白草酮或京尼平苷单独应用在保肝或护肝或治疗老年痴呆或阿尔茨海默病疾的药理活性存在吸收差且消除快、存在肝肠循环和生物利用度极低等问题，将三白草酮磺酸盐、三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷进行药物组合应用，解决了上述三白草酮和京尼平苷单独应用存在疗效不佳的问题，三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷的组合物疗效确切，副作用少，特别是三白草酮磺酸钠和京尼平苷的注射剂治疗肝炎或肝损伤或老年痴呆疗效非常确切，可用于静脉给药。
所得三白草酮磺酸盐、三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷(或者称栀子苷)的组合物可用于制备保肝药物或治疗老年痴呆或阿尔茨海默病药物的口服液、胶囊、片剂、泡腾片、粉针剂、水针剂、注射剂、雾化剂、微乳剂、凝胶剂、纳米制剂或各种已知制剂剂型或各种可接受剂型制剂的原料药。
附图说明
图1为三白草酮磺酸盐的分子结构式的结构图。
图2为三白草酮磺酸盐的M+质谱图。
图3为三白草酮磺酸钠的分子结构式的结构图。
图4为三白草酮磺酸钠的[M-H]+质谱图。
图5为三白草酮的分子结构式的结构图。
图6为三白草酮的[M+H]+质谱图。
图7为京尼平苷(或者称栀子苷)的分子结构式的结构图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述：
实施例1
三白草酮木脂素类成分具有保肝或护肝的药理活性，但药动学实验研究报道发现其在体内的吸收差，且消除很快，主要因三白草酮的水溶性和脂溶性都很差。本发明人对其结构进行修饰改造，制备成三白草酮磺酸盐，特别是三白草酮磺酸钠，其水溶性增大。上述研究尚未见报道，我们通过整体药理实验研究，首先发现三白草酮磺酸钠具有保肝或护肝的治疗作用，且疗效优于三白草酮。
京尼平苷(或者称栀子苷)环烯醚萜类成分具有保肝或护肝的药理活性，但研究报道其大剂量应用时能导致严重肝损伤，小剂量应用时疗效不佳。主要是京尼平苷(也称为栀子苷)极性较大，水溶性好，脂溶性差，口服给药存在肝肠循环，生物利用度极低，不足10％。
本发明人结合三白草酮和京尼平苷在保肝或护肝的药理活性存在吸收差且消除快、存在肝肠循环和生物利用度极低等问题，将三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷进行药物组合应用，解决了上述三白草酮和京尼平苷单独应用存在疗效不佳的问题，三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷的组合物疗效确切，副作用少，特别是三白草酮磺酸钠和京尼平苷的注射剂治疗肝炎或肝损伤非常确切，可用于静脉给药。上述研究尚未见报道，我们通过整体药理实验研究，首先发现三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷的组合物对由酒精性肝炎或肝损伤、非酒精性肝炎或肝损伤、酒精性脂肪肝或肝损伤、非酒精性脂肪肝或肝损伤、肝损伤肝纤维化、肝硬化的肝炎或肝损伤具有显著的治疗作用。本实验通过腹腔注射 40％四氯化碳橄榄油溶液同时喂饮13度的白酒引发肝损伤模型，研究筛选各单体及三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷配伍组合对急慢性肝损伤的保护作用，为保肝新药开发及指导临床用药提供依据。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1实验动物 SPF级SD大鼠，体质量200-240g，雌雄各半，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号：SCXK(湘)2011-0003。
1.1.2药品与试剂 京尼平苷(也称为栀子苷)单体(纯度大于98.0％)、三白草酮单体(纯度大于99.0％)、三白草酮磺酸钠(纯度大于98.5％)，上述单体均由本实验室自行分离与合成制得。联苯双酯滴丸(万邦德制药集团股份有限公司，国药准字H11020980，批号A02150126)；橄榄油(成都艾科达化学试剂有限公司，批号201609251)；四氯化碳(分析纯，天津市福晨化学试剂厂)；北京二锅头白酒(56度，北京双庆和酒业有限公司)；PBS磷酸盐缓冲剂(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，批号4A10A00160)；AST、ALT、SOD、GSH-Px检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20161215、20161206、20161221、20161217)。
1.1.3仪器 DF-101s集热式恒温磁力搅拌器(杭州明远仪器有限公司)；Thermo D-37520台式高速冷冻离心机(赛默飞世尔科技有限公司)；HH-数显恒温水浴锅(江苏金坛医疗仪器厂)；721可见分光光度计(上海悦丰仪器仪表有限公司)。
1.2方法
1.2.1药物的配置 京尼平苷(也称为栀子苷)单体(纯度大于98.0％)、三白草酮单体(纯度大于99.0％)、三白草酮磺酸钠(纯度大于98.5％)由实验室自行分离或合成制得，各给药组用2％聚山梨酯水溶液制备供试液。联苯双酯滴丸，配成浓度为9mg/mL的水溶液。
1.2.2动物的分组与给药 将120只健康SD大鼠，雌雄各半，按体重随机分为正常对照组、模型组、联苯双酯滴丸组(60.0mg/kg)、京尼平苷组(60.0mg/kg)、三白草酮组(60.0mg/kg)、京尼平苷：三白草酮为1:1的中剂量组(60.0+60.0 mg/kg)、京尼平苷：三白草酮为1:1的高剂量组(90.0+90.0mg/kg)、京尼平苷：三白草酮磺酸钠为1:1的中剂量组(60.0+60.0mg/kg)、京尼平苷：三白草酮磺酸钠为1:1的高剂量组(90.0+90.0mg/kg)、三白草酮磺酸钠组(60.0mg/kg)、京尼平苷：三白草酮磺酸钠为1:1的中剂量注射给药组(15.0+15.0mg/kg)、京尼平苷：三白草酮磺酸钠为1:1的高剂量注射给药组(30.0+30.0mg/kg)，每组10只大鼠。于第6周开始模型组用蒸馏水灌胃，药物治疗组分别用相应的药物灌胃或静脉注射给药，每天1次，连续7天。
1.2.3模型的制备 配制40％四氯化碳橄榄油溶液，按0.15mL/100g体重给予，每3天腹腔注射一次，连续6周，共腹腔注射13次，于第4-5周开始喂饮13度白酒14天，于第6周开始模型组用蒸馏水灌胃，药物治疗组分别用相应的药物灌胃或静脉注射给药，每天1次，连续7天。
1.2.4观察指标
1.2.4.1大鼠体重的变化 实验造模前，大鼠称重一次，每次造模腹腔注射40％四氯化碳橄榄油溶液前均称重，给药后大鼠称重一次，记录大鼠体重的变化情况。
1.2.4.2大鼠肝脏指数的变化 实验结束，动物麻醉，心脏取血后，迅速取出肝脏，用生理盐水冲洗干净肝脏内余血，用滤纸吸去水分，称重，计算肝脏指数，肝脏指数＝肝重/体重×100。称重后，取肝右叶迅速放入4％多聚甲醛液中浸泡过夜、修块、脱水、石蜡包埋用于制备病理切片使用。
1.2.4.3 AST、ALT、SOD、GSH-Px的检测 给药7天后心脏取血6ml，静置2h后 4000r/min离心20min取上清液。试剂盒检测AST、ALT、SOD、GSH-Px的含量。
1.3统计方法 结果均用表示，利用SPSS13.0统计软件单因素方差分析方法进行组间比较。
2研究结果
2.1大鼠体重的变化
正常对照组大鼠体重增长迅速，模型组大鼠体重增长缓慢，给药各组大鼠体重增加明显，尤其是(京尼平苷：三白草酮磺酸钠)注射给药组体重增长情况接近正常对照组。与模型组相比，给药各组大鼠体重有不同程度的明显增加(P <0.05或P<0.01)。结果见表1。
表1各给药组对肝损伤大鼠体重变化的影响(
Figure GDA0002142809110000061
n＝8)
Figure GDA0002142809110000062
Figure GDA0002142809110000071
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01.
2.2大鼠肝脏指数的影响
正常对照组大鼠肝脏形态正常，被膜光滑、色泽红润、质地柔软。模型组大鼠肝脏明显肿胀，色泽变深，肝组织呈颗粒性，表面可见弥漫性出血点及散在瘀斑，质地偏硬，有的肝表面有明显脂肪样病变及炎性细胞浸润，肝脏指数明显增加。其余各给药组大鼠肝脏表面有少量散在出血点和脂肪样病变与炎性细胞浸润，面积较模型组小，各给药组尤其是(京尼平苷：三白草酮磺酸钠)注射给药组明显降低肝脏指数(P<0.05或P<0.01)。三白草酮磺酸钠与京尼平苷配伍使用，可明显降低其肝损伤作用，对肝损伤病变的改善作用较其他给药组明显。结果见表2。
表2各给药组对肝损伤大鼠肝脏指数的影响(
Figure GDA0002142809110000072
n＝8)
Figure GDA0002142809110000073
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01.
2.3对大鼠血清中AST、ALT、SOD、GSH-Px的影响
与正常对照组比较，模型组大鼠血清中AST、ALT活性明显升高，而SOD、GSH-PX含量明显降低(P＜0.01)；给药各组能降低AST、ALT的活性，使SOD、GSH-PX含量明显上升(P＜0.05或P＜0.01)，与模型组相比具有显著差异(P＜0.05或P＜0.01)，说明给药各组能使四氯化碳致急慢性肝损伤模型大鼠血清中AST、ALT的活性降低，而使血清中SOD、GSH-PX的活力恢复，具有降低血清酶的含量，并通过提高机体抗氧化酶的活性，清除自由基，抑制脂质过氧化，从而拮抗四氯化碳引起的氧化损伤，发挥保护肝脏的作用。结果见表3。结果显示，京尼平苷(也称为栀子苷)、三白草酮和三白草酮磺酸钠单独使用保肝效果次于三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷(也称为栀子苷)配伍使用给药组，而三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷(也称为栀子苷)配伍使用注射给药组保肝效果明显优于口服给药组，增加保肝降酶的效果。
表3各组对肝损伤大鼠血清中AST、ALT、SOD、GSH-Px的影响(
Figure GDA0002142809110000081
n＝8)
Figure GDA0002142809110000082
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；△P<0.05与京尼平苷：三白草酮磺酸钠1:1(90+90)组比较
3讨论
本研究运用CCl4致大鼠急慢性肝损伤并结合喂饮白酒的模型，研究对比了京尼平苷(也称为栀子苷)、三白草酮和三白草酮磺酸钠三种单体成分与三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷(也称为栀子苷)每两种成分配比口服给药与静脉注射给药不同给药途径对肝损伤的保护作用。CCl4是经典的化学性肝毒剂，腹腔注射致大鼠肝损伤模型重现性好，结合酒精引起肝毒性加重，既可以造成肝细胞实质性损伤(细胞变性和坏死)，又可以引起肝功能异常。CCl4所致肝损伤中自由基的形成及引发的链式过氧化反应，肝细胞受到自由基攻击，细胞膜的通透性升高，引发细胞内酶释放，使血清酶AST、ALT的含量升高；CCl4导致肝细胞肿胀和炎性浸润，使肝脏指数明显增加。
SOD是广泛存在于生物体内的清除自由基的重要抗氧化酶，可抑制自由基启动的脂质过氧化反应，肝细胞受到自由基攻击时，SOD可因其耗竭而减少。脂质过氧化反应使GSH含量降低，使机体解毒能力降低，增加了肝细胞对损伤因子的敏感性，使细胞膜结构易受损伤。因此，测定SOD、GSH-PX的含量来做为反映脂质过氧化反应的指标。
本研究表明，CCl4致大鼠急慢性肝损伤并结合喂饮白酒后，模型组大鼠体重增长缓慢，肝脏肿胀、色泽变深、质地偏硬，并出现脂肪样病变及炎性细胞浸润，肝脏指数明显增加，大鼠血清中AST、ALT活性升高，而SOD、GSH-PX含量明显降低。给药各组大鼠体重增加明显，肝脏表面有少量散在出血点和脂肪样病变与炎性细胞浸润，病变面积明显减少，可降低血清中AST、ALT的活性，增加血清中 SOD、GSH-PX的含量，说明给药各组具有降低血清酶的含量，并通过提高机体抗氧化酶的活性，清除自由基，抑制脂质过氧化，从而拮抗四氯化碳引起的氧化损伤，发挥保肝降酶的作用。结果表明，京尼平苷(也称为栀子苷)、三白草酮和三白草酮磺酸钠单独使用保肝效果次于三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷 (也称为栀子苷)每两种成分配伍使用给药组，而三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷(也称为栀子苷)每两种成分配伍使用尤其是(京尼平苷：三白草酮磺酸钠1:1)静脉注射给药组保肝效果明显优于口服给药组，增强保肝降酶的疗效。上述研究，为保肝或护肝新药开发及指导临床用药提供依据。
实施例2
三白草酮木脂素类成分具有治疗老年痴呆药物或阿尔茨海默病的药理活性，但药动学实验研究报道发现其在体内的吸收差，且消除很快，主要因三白草酮的水溶性和脂溶性都很差。本发明人对其结构进行修饰改造，制备成三白草酮磺酸盐，特别是三白草酮磺酸钠，其水溶性增大。上述研究尚未见报道，我们通过整体药理实验研究，首先发现三白草酮磺酸钠具有抗老年痴呆的治疗作用，且疗效优于三白草酮。
京尼平苷(或者称栀子苷)环烯醚萜类成分治疗老年痴呆药物或阿尔茨海默病的药理活性，但研究报道其大剂量应用时能导致严重肝损伤，小剂量应用时疗效不佳。主要是京尼平苷(也称为栀子苷)极性较大，水溶性好，脂溶性差，口服给药存在肝肠循环，生物利用度极低，不足10％。
本发明人结合三白草酮和京尼平苷在治疗老年痴呆药物或阿尔茨海默病药物中的药理活性存在吸收差且消除快、存在肝肠循环和生物利用度极低等问题，将三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷进行药物组合应用，解决了上述三白草酮和京尼平苷单独应用存在疗效不佳的问题，三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷的组合物疗效确切，副作用少，特别是三白草酮磺酸钠和京尼平苷的注射剂治疗老年痴呆疗效非常确切，可用于静脉给药。上述研究尚未见报道，我们通过整体药理实验研究，首先发现三白草酮磺酸钠和京尼平苷的注射剂对由衰老、睡眠障碍、心脑血管疾病(心脏病、高血压、动脉粥样硬化和短暂性脑缺血发作等)、神经系统疾病等导致的淀粉样蛋白Aβ沉积或Aβ纤丝聚集形成的老年痴呆或阿尔茨海默病疾病或记忆障碍或记忆力减退具有良好的治疗作用或辅助治疗功效。
1材料
1.1动物 SPF级健康SD雄性大鼠，体质量350-400g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号：SCXK(湘)2009-0004。饲养条件：温度20-22℃，喂以大鼠标准饲料，自由饮水。
1.2药品与试剂 京尼平苷(也称为栀子苷)单体(纯度大于98.0％)、三白草酮单体(纯度大于99.0％)、三白草酮磺酸钠(纯度大于98.5％)，上述单体均由本实验室自行分离与合成制得。盐酸多奈哌齐(卫材药业有限公司，国药准字 H20050978，批号131027A)；D-半乳糖(Sigma公司，批号Lot#SLBD5369V)；Aβ1-40 (Sigma公司，批号052M4801V)；SOD、GSH-Px和TChE检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20141024)。
1.3仪器 ZS-B型脑立体定位仪、Morris水迷宫视频分析系统(北京众实迪创科技发展有限责任公司)，Forma-86C ULT超低温冰箱(美国赛默飞)，Allegra64R 高速冷冻离心机(美国贝克曼库尔特)，UV-1800型紫外-可见分光光度计(日本岛津公司)。
2方法
2.1药物的制备 京尼平苷(也称为栀子苷)单体(纯度大于98.0％)、三白草酮单体(纯度大于99.0％)、三白草酮磺酸钠(纯度大于98.5％)由实验室自行分离或合成制得，各给药组用2％聚山梨酯水溶液制备供试液。
2.2动物分组和动物模型的建立 将144只健康SD雄性大鼠，按体重随机分为正常对照组、模型组、盐酸多奈哌齐组(10.0mg/kg)、京尼平苷组(191.0mg/kg)、三白草酮组(60.0mg/kg)、京尼平苷：三白草酮为1:1的中剂量组(95.5+60.0 mg/kg)、京尼平苷：三白草酮为1:1的高剂量组(191.0+90.0mg/kg)、三白草酮磺酸钠组(60.0mg/kg)、京尼平苷：三白草酮磺酸钠为1:1的中剂量组 (95.5+60.0mg/kg)、京尼平苷：三白草酮磺酸钠为1:1的高剂量组(191.0+90.0 mg/kg)、京尼平苷：三白草酮磺酸钠为1:1的中剂量注射给药组(23.9+15.0 mg/kg)、京尼平苷：三白草酮磺酸钠为1:1的高剂量注射给药组(47.8+30.0 mg/kg)，每组12只大鼠。
异质性及多因性阿尔茨海默病(AD)动物模型或记忆力减退或记忆障碍模型：各组实验大鼠每天腹腔注射D-半乳糖(50mg·kg-1)，造成亚急性衰老，4W后先进行双侧颈总动脉反复结扎间段性的阻断血流，造成脑缺血性病灶(水合氯醛腹腔注射麻醉，颈正中部切口，分离双侧颈总动脉，套“4”号丝线扣。拉紧丝扣，阻断血流10min，松开丝扣使血液灌注10min后，再次阻断血流10min，第2次再灌注后观察5min，缝合皮肤。)手术完成后，将大鼠喂养3天，取未死亡的状态良好的大鼠再脑内注射凝聚态Aβ1-40(水合氯醛麻醉，固定在脑立体定位仪上，头部备皮，在无菌下操作，沿颅中线做长2～3cm的切口，分离骨膜，暴露出“人”字缝和“十”字缝。在前囟后3.0mm，中线右侧旁开2.0mm，用 7号针头钻开颅骨，暴露硬脑膜，微量注射器自脑表面垂直进针4.0mm，然后向脑组织内缓慢注射5μ1 Aβ1-40，注射5min，留针5min，注射后用牙科泥封堵颅骨。消炎后缝合皮肤。
空白组(正常对照组)不予处理；模型组与给药组分别按上述造模方法予以处理。模型组于脑内注射手术后第3天开始灌胃2％吐温-80水溶液6天，每天1 次。各给药组手术后第3天开始连续灌胃给药6天，每天1次。
2.3 Morris水迷宫实验 预先在水池里注入清水使水面高出平台1-2cm，水温控制在24士2℃左右。水池内壁涂有黑漆，每次测试前须向水池内加入适量黑色墨水，水池共分为4个象限。将平台放在第四象限中间，在其他三个象限任选一点面向水池池壁将大鼠放入水中，试验历时5天，每天上午每个象限各测试一次，每次测试1min。若大鼠在1min之内尚未找到平台，则将大鼠拿到平台上并使它在上面站15s，若大鼠在1min之内找到平台，也让其在平台上站15s，方结束一次训练，如此训练4天。在第5天，将平台移走，每只大鼠游1min，记录每只大鼠第一次经过原平台的时间(潜伏期)，每只大鼠在1min内经过平台的次数、游过的总距离以及在原平台所在象限及其它三个象限内逗留的时间，计算出在第四象限游泳的时间(t4)占整个游泳时间(t总)的百分比。
2.4分光光度法测定SOD、GSH-Px和TChE的含量 在2.3大鼠行为学检测后，每组大鼠用水合氯醛(300mg/kg)麻醉后，快速开胸，行心脏采血，3500r/min 离心10min取血清，置于-70℃低温保存。按试剂盒说明书，紫外分光光度法检测SOD、GSH-Px和TChE的含量。
2.5统计方法 采用SAS软件分析，实验数据用
Figure GDA0002142809110000111
表示，单因素方差分析实验的数据。P＜0.05为有统计学意义。
3结果
3.1 Morris水迷宫实验 与正常对照组比较，模型组大鼠潜伏期延长、过台次减少，在第四象限逗留时间短，差异显著(P＜0.01)；与模型组比较，给药盐酸多奈哌齐和京尼平苷、三白草酮、三白草酮磺酸钠单体与各单体不同配比口服与静脉注射不同给药途径各组均能缩短潜伏期、增加过台次数，在第四象限逗留时间延长(P＜0.05或P＜0.01)，说明各给药组治疗有效。结果显示，京尼平苷(也称为栀子苷)、三白草酮和三白草酮磺酸钠单独使用治疗老年痴呆或阿尔茨海默病效果次于三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷(也称为栀子苷)配伍使用给药组，而三白草酮磺酸钠或三白草酮和京尼平苷(也称为栀子苷)配伍使用注射给药组治疗老年痴呆或阿尔茨海默病效果明显优于口服给药组，其中京尼平苷：三白草酮磺酸钠(1:1)静脉注射给药组对改善大鼠空间学习记忆能力效果最明显。结果见表4。
表4各给药组对H/MAD大鼠空间记忆能力的影响(n＝8)
Figure GDA0002142809110000122
注：与模型组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01
3.2各给药组对H/MAD模型大鼠血清中SOD、TChE、GSH-PX含量的影响
与正常对照组比较，模型组大鼠血清中SOD、GSH-PX含量明显降低(P＜0.01)，TChE活力增强(P＜0.01)；给药各组能提高SOD、GSH-PX的含量(P＜0.05或P＜ 0.01)，并降低TChE活力(P＜0.05或P＜0.01)，与模型组相比具有显著差异(P ＜0.05或P＜0.01)，说明各单体给药组(尤其是京尼平苷：三白草酮磺酸钠(1:1) 静脉注射给药组)效果明显，能使H/MAD模型大鼠脑内SOD、GSH-PX的活力恢复，降低TChE的含量，增强清除自由基的能力，拮抗氧化反应，同时防止神经递质的减少，起到防治AD的作用。结果见表5。
表5各给药组对H/MAD模型大鼠血清中SOD、TChE、GSH-PX含量的影响
(
Figure GDA0002142809110000123
n＝8)
Figure GDA0002142809110000124
Figure GDA0002142809110000131
注：与模型组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01。
实施例3
三白草中三白草酮木脂素类成分的测定：本发明人建立了HPLC法测定三白草酮含量的方法，采用氯仿超声提取，Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm， 5μm)，流动相：甲醇-水(75：25)，流速为1.0mL·min-1，检测波长为240nm，柱温25℃。在此色谱条件下，三白草酮保留时间为10.2min，无杂质干扰，与其他峰分离度良好，得回归方程：Y＝4373376X+4304802,r＝0.9997(n＝5)，线性范围在0.232μg～4.640μg之间，加样回收率分别为98.6％。实验测得三白草药材中三白草酮平均含量为0.7831mg·g-1。结果显示，三白草药材的地上部分以黄酮类成分含量较高，而药材的地下部分以木脂素类成分三白草酮为主。本研究建立了三白草酮的提取分离方法和含量测定方法，简便快速、准确可行，可作为三白草药材质量标准制定的依据。

Claims (10)

1.一种三白草酮磺酸盐，其特征在于：其三白草酮磺酸盐母核分子式为C20H21O9S-，其三白草酮磺酸盐母核分子量为437，其三白草酮磺酸盐母核结构式为：
Figure FDA0002142809100000011
2.根据权利要求1所述的三白草酮磺酸盐，其特征在于：所述三白草酮磺酸盐为三白草酮磺酸钠，其三白草酮磺酸钠分子式为C20H21O9SNa，其三白草酮磺酸钠分子量为460，其三白草酮磺酸钠结构式为：
Figure FDA0002142809100000012
3.根据权利要求1或2任一项所述的三白草酮磺酸盐在制备药物中的应用，其特征在于：所述药物用于治疗老年痴呆或阿尔茨海默病，或所述药物为保肝药物。
4.一种保肝组合物，其特征在于：包含根据权利要求2所述的三白草酮磺酸钠和京尼平苷，其中三白草酮磺酸钠和京尼平苷的的质量百分含量比为1％～99％：99％～1％。
5.一种治疗老年痴呆或阿尔茨海默病组合物，其特征在于：包含根据权利要求2所述的三白草酮磺酸钠和京尼平苷，其中三白草酮磺酸钠和京尼平苷的质量百分含量比为1％～99％：99％～1％。
6.根据权利要求4所述的保肝组合物，其特征在于：所述保肝组合物用于治疗肝炎或肝损伤，所述肝炎或肝损伤为酒精性肝炎或肝损伤、非酒精性肝炎或肝损伤、酒精性脂肪肝或肝损伤、非酒精性脂肪肝或肝损伤、肝损伤肝纤维化或肝硬化的任意一种。
7.根据权利要求5所述的治疗老年痴呆或阿尔茨海默病组合物，其特征在于：所述治疗老年痴呆或阿尔茨海默病组合物用于治疗老年痴呆或阿尔茨海默病，所述老年痴呆或阿尔茨海默病是由衰老、睡眠障碍、心脑血管疾病、神经系统疾病导致的淀粉样蛋白Aβ沉积或聚集形成的老年痴呆以及阿尔茨海默病中的任意一种。
8.根据权利要求3所述的三白草酮磺酸盐在制备药物中的应用，其特征在于：所述药物的制剂剂型为口服液、胶囊、片剂、泡腾片、粉针剂、水针剂、注射剂、雾化剂、微乳剂、凝胶剂、纳米制剂。
9.根据权利要求4所述的组合物在制备保肝药物中的应用，其特征在于：所述保肝药物的制剂剂型为口服液、胶囊、片剂、泡腾片、粉针剂、水针剂、注射剂、雾化剂、微乳剂、凝胶剂、纳米制剂。
10.根据权利要求5所述的组合物在制备治疗老年痴呆或阿尔茨海默病药物中的应用，其特征在于：所述治疗老年痴呆或阿尔茨海默病药物的制剂剂型为口服液、胶囊、片剂、泡腾片、粉针剂、水针剂、注射剂、雾化剂、微乳剂、凝胶剂、纳米制剂。
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