CN106855575A - 一种乳腺癌三联快速检测试剂盒 - Google Patents

一种乳腺癌三联快速检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种肿瘤血清标志物CA125、HE4和P‑her2的乳腺癌三联快速检测试剂盒。本发明提供的乳腺癌三联快速检测试剂盒主要由抗体酶标板、生物素抗体包被板、血清稀释液、辣根过氧化物酶、四甲基联苯胺、盐酸、阴性对照液和阳性对照液组成。本发明提供的乳腺癌三联快速检测试剂盒可以检测手术治疗后患者或复发及转移性肿瘤患者体内CA125、HE4和P‑her2的表达水平，对乳腺癌的临床诊断具有重要意义。同时，本发明提供的乳腺癌三联快速检测试剂盒可以降低血清中其他物质的干扰，大大的提高检测结果的准确性和稳定性，有利于乳腺癌患者的早期诊断和预后处理。

Description

一种乳腺癌三联快速检测试剂盒
技术领域
本发明属于生物检测领域，具体涉及一种肿瘤血清标志物CA125、HE4和P-her2的乳腺癌三联快速检测试剂盒。
背景技术
乳腺癌是一种遗传异质疾病，是妇女中最常见的恶性肿瘤。据报道全世界每年估计约有800000个新病例出现，而且死亡率较高。近年来，乳腺癌患者逐渐趋于年轻化，严重威胁全球女性的身心健康。目前，乳房切除术是公认的治疗该病的首选方案。虽然乳房切除术可以切除原发性肿瘤，但其在诊断时无法检测到因肿瘤微转移导致的患处或较远的位点出现肿瘤复发的可能性，通常需要在手术后施用细胞毒性剂作为辅助疗法，不仅加重乳腺癌患者的痛苦，也增加其负担。由于乳腺癌发生和转移受环境和遗传因素二者的共同作用，其发病机制复杂多样，导致其难以诊断和检测。因此，预测和早期诊断乳腺癌对女性的健康具有重要意义。
目前，对乳腺癌的预警和早期诊断的技术主要有临床体格检查，影像学诊断法和生物靶标早期检测。临床体格检查是早期发现乳腺癌的有效方法之一，可以有效降低乳腺癌患者的死亡率。但是，由于乳腺癌普查耗资巨大，成本/效果比高，不适合大规模推广。影像学诊断法是以钼靶X线摄片为主要手段，辅以超声扫描和MRI扫描，对乳腺癌的早期诊断起到重要作用。但是，其对于不典型的病变，尤其是致密型乳腺内的病变及近胸壁的病变易出现漏诊的情况。生物靶标早期检测，包括乳腺癌相关基因普查，乳头溢液特异物检测及血清肿瘤标志物的测定，是一种较为理想的乳腺癌检测方法。
现代研究发现，CA125、HE4和P-her2在乳腺癌中具有较高的表达，并且CA125、HE4和P-her2血清水平及其变化趋势可用作肿瘤治疗效果的评价与预后评估指标。因此CA125、HE4和P-her2血清水平检测在肿瘤诊断和治疗中有着重要的应用价值。
专利文献CN105158474A在2015年9月18日公开了一种用于检测血清HER2的试剂盒及用途，所述试剂盒包括配对的抗HER2单克隆抗体曲妥珠单抗和生物素化的A18，该试剂盒是通过酶联免疫吸附法(ELISA)来检测乳腺癌患者血清中的HER2表达水平，从而达到检测乳腺癌的目的。该试剂盒是一种无创伤性、操作简便的诊断和监测HER2阳性肿瘤病程发展的乳腺癌检测试剂盒。但是，该试剂盒只能检测单一的指标，在检测过程中存在灵敏性和特异性低的缺陷。
专利文献CN103575891A在2012年8月3日公开了一种综合检测HE4、CA125的试剂盒及其应用，但该试剂盒主要用于卵巢癌的临床辅助诊断、疗效观察及预后判断。
因此，研究和开发出一种灵敏性高、特异性好的乳腺癌标志物和检测方法仍是当前亟需解决的难题。
发明内容
为了解决现有技术中的乳腺癌检测试剂盒的不足，本发明目的在于提供一种乳腺癌三联快速检测试剂盒，相比于现有的乳腺癌诊断试剂盒，本发明乳腺癌诊断试剂盒具有更高的灵敏度高和更强的特异性。
本发明提供了一种乳腺癌三联快速检测试剂盒，包括抗体酶标板、生物素抗体包被板、血清稀释液、辣根过氧化物酶、四甲基联苯胺、盐酸、阴性对照液和阳性对照液；所述酶标板抗体包括包被在酶标板上的抗CA125、HE4和P-her2单克隆抗体；所述生物素抗体包被板包括包被在微孔板的生物素标记的CA125、HE4和P-her2单克隆抗体。
进一步地，所述抗体酶标板的制备方法为：用pH为9.4的碳酸钠缓冲液将抗CA125、HE4和P-her2单克隆抗体稀释至20-100μg/ml，按100μl/孔的加入量加于96孔酶标板中，在温度为2-8℃的条件下放置过夜，然后用洗涤液洗涤，所述洗涤液为含有0.04％十二烷基三甲基氯化铵，pH为7.2的磷酸钠缓冲液，甩干，即得。
进一步地，所述生物素抗体包被板的制备方法为：将CA125、HE4和P-her2单克隆抗体与活化的生物素混合进行标记，透析去除未结合的生物素，得生物素CA125、HE4和P-her2单克隆抗体；用pH为9.4的碳酸钠缓冲液将CA125、HE4和P-her2单克隆抗体稀释至20-100μg/ml，按100μl/孔的加入量加于微孔板中，在温度为2-8℃的条件下放置过夜，然后用洗涤液洗涤，所述洗涤液为含有0.04％十二烷基三甲基氯化铵，pH为7.2的磷酸钠缓冲液，甩干，即得。
进一步地，所述血清稀释液由以下组分组成：甘氨酸8-16g/L、精氨酸10-15g/L、谷氨酰胺2-6g/L、磷酸二氢钾2-4g/L、丙酮酸钠3-6g/L、氯化钠18-25g/L、氯化镁12-18g/L、EDTA-2K 0.4-0.8g/L，余量为水。
进一步地，所述血清稀释液由以下组分组成：甘氨酸14g/L、精氨酸12g/L、谷氨酰胺4g/L、磷酸钾3g/L、丙酮酸钠5g/L、氯化钠22g/L、氯化镁15g/L、EDTA-2K 0.6g/L，余量为水。
进一步地，所述血清稀释液的pH值为8.4-8.8。
进一步地，所述血清稀释液的pH值为8.6。
进一步地，所述四甲基联苯胺的浓度为0.5mg/ml。
进一步地，所述盐酸的浓度为2-3mol/L。
进一步地，所述阴性对照液为不含CA125、HE4和P-her2的正常人血清，所述阳性对照液为含有乳腺癌肿瘤标志物CA125、HE4和P-her2的乳腺癌患者血清。
本发明是在常规酶联免疫吸附试验的基础上，通过生物素与辣根过氧化物酶之间的作用，建立了一种高灵敏度的生物素-酶联免疫检测试剂盒，以测定待测样中的肿瘤蛋白CA125、HE4和P-her2的表达水平。因为生物素很易与抗体等蛋白质以共价键结合，所以有生物素标记的CA125、HE4、P-her2单克隆抗体中的生物素容易与辣根过氧化物酶产生反应，既起到多级放大的作用，同时由于酶在遇到相应的显色底物时会发生催化作用而呈色的作用，从而达到检测目标抗原或抗体分子的目的。采用本发明的乳腺癌三联快速检测试剂盒可以有效、稳定地测定乳腺癌患者血清中CA125、HE4和P-her2的含量，其灵敏度高，测试重复性好。
进一步地，本发明提供的血清稀释液可以有效的减少受检血清中其他物质的干扰，可以大大的提高CA125、HE4和P-her2检测的灵敏度和稳定性，有利于乳腺癌患者的早期诊断和预后处理。
进一步地，经试验发现，本发明提供的乳腺癌三联快速检测试剂盒的灵敏度极佳，CA125的灵敏度为<1U/ml，HE4的灵敏度为<3pmol/L，P-her2的灵敏度为<1IU/mL。而且，该乳腺癌三联快速检测试剂盒在常温下存放12个月后仍与刚制备的试剂盒的灵敏度保持不变，在4℃下保存36个月后，该乳腺癌三联快速检测试剂盒的灵敏度仍然与刚制备的试剂盒无明显差别，说明本发明提供的乳腺癌三联快速检测试剂盒具有较好的稳定性。
与现有技术相比，本发明提供的技术方案具有以下优势：
(1)本发明提供的乳腺癌三联快速检测试剂盒可以检测手术治疗后患者或复发及转移性肿瘤患者体内的CA125、HE4和P-her2表达水平，对乳腺癌的临床诊断具有重要意义；
(2)本发明提供的乳腺癌三联快速检测试剂盒可以降低血清的其他物质的干扰，大大的提高检测结果准确性和稳定性，有利于乳腺癌患者的早期诊断和预后处理。
具体实施方式
下面将进一步的详细说明本发明。需要指出的是，以下说明仅仅是对本发明要求保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范围以所附权利要求书记载的内容为准。下列实施例中未注明具体试验条件的试验方法，通常按照常规条件，分子克隆试验指南(Sambrook J,et al.2008.Molecular Cloning:A LaboratoryManual,3rd Ed.)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1、一种乳腺癌三联快速检测试剂盒
所述乳腺癌三联快速检测试剂盒的制备
1、抗体酶标板的制备方法为：
用pH为9.4的碳酸钠缓冲液将抗CA125、HE4和P-her2单克隆抗体稀释至40μg/ml，按100μl/孔的加入量加于96孔酶标板中，在温度为4℃的条件下放置过夜，然后用洗涤液洗涤，所述洗涤液为含有0.04％十二烷基三甲基氯化铵，pH为7.2的磷酸钠缓冲液，甩干，得包被有抗CA125、HE4和P-her2单克隆抗体的96孔酶标板。
2、生物素抗体包被板的制备方法为：
将CA125、HE4和P-her2单克隆抗体与活化的生物素混合进行标记，透析去除未结合的生物素，得生物素CA125、HE4和P-her2单克隆抗体；用pH为9.4的碳酸钠缓冲液将CA125、HE4和P-her2单克隆抗体稀释至40μg/ml，按100μl/孔的加入量加于微孔板中，在温度为4℃的条件下放置过夜，然后用洗涤液洗涤，所述洗涤液为含有0.04％十二烷基三甲基氯化铵，pH为7.2的磷酸钠缓冲液，甩干，得包被有生物素CA125、HE4和P-her2单克隆抗体的微孔板。
3、血清稀释液的配置：
取甘氨酸8g/L、精氨酸10g/L、谷氨酰胺2g/L、磷酸二氢钾2g/L、丙酮酸钠3g/L、氯化钠18g/L、氯化镁12g/L、EDTA-2K 0.4g/L，加水调节pH为8.4。
4、将抗体酶标板、生物素抗体包被板、血清稀释液、辣根过氧化物酶、四甲基联苯胺、盐酸、阴性对照液和阳性对照液组装，所述四甲基联苯胺的浓度为0.5mg/ml，所述盐酸的浓度为2mol/L，即得。
实施例2、一种乳腺癌三联快速检测试剂盒
所述乳腺癌三联快速检测试剂盒的制备
1、抗体酶标板的制备方法为：
用pH为9.4的碳酸钠缓冲液将抗CA125、HE4和P-her2单克隆抗体稀释至60μg/ml，按100μl/孔的加入量加于96孔酶标板中，在温度为6℃的条件下放置过夜，然后用洗涤液洗涤，所述洗涤液为含有0.04％十二烷基三甲基氯化铵，pH为7.2的磷酸钠缓冲液，甩干，得包被有抗CA125、HE4和P-her2单克隆抗体的96孔酶标板。
2、生物素抗体包被板的制备方法为：
将CA125、HE4和P-her2单克隆抗体与活化的生物素混合进行标记，透析去除未结合的生物素，得生物素CA125、HE4和P-her2单克隆抗体；用pH为9.4的碳酸钠缓冲液将CA125、HE4和P-her2单克隆抗体稀释至60μg/ml，按100μl/孔的加入量加于微孔板中，在温度为6℃的条件下放置过夜，然后用洗涤液洗涤，所述洗涤液为含有0.04％十二烷基三甲基氯化铵，pH为7.2的磷酸钠缓冲液，甩干，得包被有生物素CA125、HE4和P-her2单克隆抗体的微孔板。
3、血清稀释液的配置：
取甘氨酸14g/L、精氨酸12g/L、谷氨酰胺4g/L、磷酸钾3g/L、丙酮酸钠5g/L、氯化钠22g/L、氯化镁15g/L、EDTA-2K 0.6g/L，加水调节pH为8.6。
4、将抗体酶标板、生物素抗体包被板、血清稀释液、辣根过氧化物酶、四甲基联苯胺、盐酸、阴性对照液和阳性对照液组装，所述四甲基联苯胺的浓度为0.5mg/ml，所述盐酸的浓度为2mol/L，即得。
实施例3、一种乳腺癌三联快速检测试剂盒
所述乳腺癌三联快速检测试剂盒的制备
1、抗体酶标板的制备方法为：
用pH为9.4的碳酸钠缓冲液将抗CA125、HE4和P-her2单克隆抗体稀释至80μg/ml，按100μl/孔的加入量加于96孔酶标板中，在温度为8℃的条件下放置过夜，然后用洗涤液洗涤，所述洗涤液为含有0.04％十二烷基三甲基氯化铵，pH为7.2的磷酸钠缓冲液，甩干，得包被有抗CA125、HE4和P-her2单克隆抗体的96孔酶标板。
2、生物素抗体包被板的制备方法为：
将CA125、HE4和P-her2单克隆抗体与活化的生物素混合进行标记，透析去除未结合的生物素，得生物素CA125、HE4和P-her2单克隆抗体；用pH为9.4的碳酸钠缓冲液将CA125、HE4和P-her2单克隆抗体稀释至80μg/ml，按100μl/孔的加入量加于微孔板中，在温度为8℃的条件下放置过夜，然后用洗涤液洗涤，所述洗涤液为含有0.04％十二烷基三甲基氯化铵，pH为7.2的磷酸钠缓冲液，甩干，得包被有生物素CA125、HE4和P-her2单克隆抗体的微孔板。
3、血清稀释液的配置：
取甘氨酸16g/L、精氨酸15g/L、谷氨酰胺g/L、磷酸二氢钾4g/L、丙酮酸钠6g/L、氯化钠25g/L、氯化镁18g/L、EDTA-2K 0.8g/L，加水调节pH为8.8。
4、将抗体酶标板、生物素抗体包被板、血清稀释液、辣根过氧化物酶、四甲基联苯胺、盐酸、阴性对照液和阳性对照液组装，所述四甲基联苯胺的浓度为0.5mg/ml，所述盐酸的浓度为3mol/L，即得。
对比例1、一种乳腺癌三联快速检测试剂盒
所述乳腺癌三联快速检测试剂盒的制备方法不同在于，所述抗体酶标板的制备过程采用的碳酸钠缓冲液的pH值为9.2，其余步骤与实施例2类似。
对比例2、一种乳腺癌三联快速检测试剂盒
所述乳腺癌三联快速检测试剂盒的制备方法不同在于，所述血清稀释液为：取甘氨酸18g/L、精氨酸12g/L、磷酸钾3g/L、丙酮酸钠5g/L、氯化钠22g/L、氯化镁15g/L、EDTA-2K0.6g/L，加水调节pH为8.6，其余步骤与实施例2类似。
对比例3、一种乳腺癌三联快速检测试剂盒
所述乳腺癌三联快速检测试剂盒的制备方法不同在于，所述血清稀释液为：取甘氨酸14g/L、精氨酸12g/L、天冬酰胺4g/L、磷酸钾3g/L、丙酮酸钠5g/L、氯化钠22g/L、氯化镁15g/L、EDTA-2K 0.6g/L，加水调节pH为8.6，其余步骤与实施例2类似。
对比例4、一种乳腺癌三联快速检测试剂盒
所述乳腺癌三联快速检测试剂盒的制备方法不同在于，所述血清稀释液为：取甘氨酸14g/L、精氨酸12g/L、谷氨酰胺4g/L、磷酸钾3g/L、二硫苏糖醇5g/L、氯化钠22g/L、氯化镁15g/L、EDTA-2K 0.6g/L，加水调节pH为8.6，其余步骤与实施例2类似。
对比例5、一种乳腺癌三联快速检测试剂盒
所述乳腺癌三联快速检测试剂盒的制备方法不同在于，所述血清稀释液为：甘氨酸14g/L、精氨酸12g/L、谷氨酰胺4g/L、磷酸钾3g/L、丙酮酸钠5g/L、氯化钠22g/L、氯化镁15g/L、EDTA-2K 0.6g/L，加水调节pH为8.4，其余步骤与实施例2类似。
试验例一、乳腺癌三联快速检测试剂盒的操作试验
1、加样：
(1)包被有抗CA125、HE4和P-her2单克隆抗体的96孔酶标板处理：
在包被有抗CA125、HE4和P-her2单克隆抗体的96孔酶标板上划分阳性对照孔、阴性对照孔、待测样品孔和空白孔共四组检测孔，阳性对照孔中加入阳性对照液，100μl/孔，阴性对照孔中加入阴性对照液，100μl/孔，待测样品孔中加入待测血清，100μl/孔，样本加完后，然后每孔加入50ul量的血清稀释液，在酶标板上加盖或者覆膜，在37℃条件下放置2h后弃去液体，用洗涤液洗涤，甩干；
(2)加入生物素CA125、HE4和P-her2单克隆抗体：
每个检测孔中加入100μl生物素CA125、HE4和P-her2单克隆抗体，在37℃条件下放置1h后弃去液体，每个检测孔中加入350μl洗涤液浸泡2min，甩干或轻轻地拍干，洗涤、甩干的动作重复3次；
(3)加入辣根过氧化物酶：
每个检测孔中加入100μl的辣根过氧化物酶，在37℃条件下放置1h后弃去液体，每个检测孔中加入350μl洗涤液浸泡2min，甩干或轻轻地拍干，洗涤、甩干的动作重复5次；
(4)加入显色底物：
在每个检测孔中依次加入一滴浓度为0.5mg/ml四甲基联苯胺，在37℃条件下避光，显色；
(5)加入终止液：
按照上述显色底物的加入顺序依次在每个检测孔中加入50μl浓度为2mol/L的盐酸溶液，终止反应，终止反应的表现为检测孔中的液体由蓝色快速转变成黄色。
2、结果检测：
在加入终止液后15min内，用酶联仪在450nm的波长条件下检测每个检测孔的光密度OD值，检测试剂盒的检测标准为：以标准品的浓度为纵坐标(或对数坐标)，OD值为横坐标(或对数坐标)，使用curve expert 1.30软件绘出标准曲线(最佳方程式应依回归方程计算的R2值来定，以R2值越趋近于1为好)，计算样品的实际浓度。其中：阳性结果判断标准如表1所示：
表1阳性结果判断标准
乳腺癌肿瘤标志物的浓度
CA125(U/ml) ＞10
HE4(pmol/L) ＞10
P-her2(IU/mL) ＞5
试验例二、乳腺癌三联快速检测试剂盒的精确度试验
本发明实施例1、实施例2和实施例3制备的包被96孔酶标板的变异系数CV值小于8％，而且对同一批次及不同批次的实施例1、实施例2和实施例3制备的乳腺癌三联快速检测试剂盒进行试验测试，测试结果显示批内及批间的试剂盒的CV值均小于8％，说明本发明提供的乳腺癌三联快速检测试剂盒具有高精密性。
试验例三、乳腺癌三联快速检测试剂盒的灵敏度试验
1、试验材料：实施例1、实施例2和实施例3制备的乳腺癌三联快速检测试剂盒；CA125、HE4和P-her2标准品，购于南京森贝伽生物科技有限公司。
2、试验方法：
将CA125、HE4和P-her2标准品分别配制不同浓度的供试溶液，具体如表2所示：
表2不同浓度的CA125、HE4和P-her2标准品供试溶液
采用实施例1-3制备的乳腺癌三联快速检测试剂盒测试各浓度供试溶液进行测定，通过酶标仪进行检测，每个浓度测定3次。
3、试验结果：
结果表明，实施例1-3制备的乳腺癌三联快速检测试剂盒的灵敏度极佳，CA125的灵敏度为<1U/ml，HE4的灵敏度为<3pmol/L，P-her2的灵敏度为<1IU/mL。
试验例四、乳腺癌三联快速检测试剂盒的稳定性试验
1、试验材料：实施例2、对比例1、对比例2、对比例3、对比例4和对比例5制备得到的乳腺癌三联快速检测试剂盒。
2、试验方法：将实施例2、对比例1、对比例2、对比例3、对比例4和对比例5制备的乳腺癌三联快速检测试剂盒在室温下放置3、6和12个月，然后按照试验例三的方法进行灵敏度测定。
3、试验结果
试验结果如表3、表4和表5所示：
表3乳腺癌三联快速检测试剂盒存放3个月后的灵敏度结果
实施例2 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4 对比例5
CA125(U/ml) <1 1 20 10 10 1
HE4(pmol/L) <3 3 12 6 6 6
P-her2(IU/mL) <1 1 20 10 10 1
表4乳腺癌三联快速检测试剂盒存放6个月后的灵敏度结果
表5乳腺癌三联快速检测试剂盒存放12个月后的灵敏度结果
实施例2 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4 对比例5
CA125(U/ml) <1 40 ＞80 80 80 40
HE4(pmol/L) <3 24 ＞48 ＞48 48 24
P-her2(IU/mL) <1 20 ＞80 ＞80 80 40
由表3、表4和表5可知，本发明制备的乳腺癌三联快速检测试剂盒在常温下存放12个月后仍与刚制备的试剂盒的灵敏度保持不变，说明本发明提供的乳腺癌三联快速检测试剂盒具有较好的稳定性。
另外，将本发明提供的乳腺癌三联快速检测试剂盒在4℃下保存36个月后，试剂盒灵敏度仍然与刚制备的试剂盒无明显差别。
本发明内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案，其中一个或更多个技术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合，这些经组合而得到的技术方案也在本申请保护范围内，就像这些经组合而得到的技术方案已经在本发明公开内容中具体记载一样。

Claims (10)

1.一种乳腺癌三联快速检测试剂盒，其特征在于，包括抗体酶标板、生物素抗体包被板、血清稀释液、辣根过氧化物酶、四甲基联苯胺、盐酸、阴性对照液和阳性对照液；所述酶标板抗体包括包被在酶标板上的抗CA125、HE4和P-her2单克隆抗体；所述生物素抗体包被板包括包被在微孔板的生物素标记的CA125、HE4和P-her2单克隆抗体。
2.如权利要求1所述的乳腺癌三联快速检测试剂盒，其特征在于，所述抗体酶标板的制备方法为：
用pH为9.4的碳酸钠缓冲液将抗CA125、HE4和P-her2单克隆抗体稀释至20-100μg/ml，按100μl/孔的加入量加于96孔酶标板中，在温度为2-8℃的条件下放置过夜，然后用洗涤液洗涤，所述洗涤液为含有0.04％十二烷基三甲基氯化铵，pH为7.2的磷酸钠缓冲液，甩干，即得。
3.如权利要求1所述的乳腺癌三联快速检测试剂盒，其特征在于，所述生物素抗体包被板的制备方法为：
将CA125、HE4和P-her2单克隆抗体与活化的生物素混合进行标记，透析去除未结合的生物素，得生物素CA125、HE4和P-her2单克隆抗体；用pH为9.4的碳酸钠缓冲液将CA125、HE4和P-her2单克隆抗体稀释至20-100μg/ml，按100μl/孔的加入量加于微孔板中，在温度为2-8℃的条件下放置过夜，然后用洗涤液洗涤，所述洗涤液为含有0.04％十二烷基三甲基氯化铵，pH为7.2的磷酸钠缓冲液，甩干，即得。
4.如权利要求1所述的乳腺癌三联快速检测试剂盒，其特征在于，所述血清稀释液由以下组分组成：
甘氨酸8-16g/L、精氨酸10-15g/L、谷氨酰胺2-6g/L、磷酸二氢钾2-4g/L、丙酮酸钠3-6g/L、氯化钠18-25g/L、氯化镁12-18g/L、EDTA-2K 0.4-0.8g/L，余量为水。
5.如权利要求4所述的乳腺癌三联快速检测试剂盒，其特征在于，所述血清稀释液由以下组分组成：
甘氨酸14g/L、精氨酸12g/L、谷氨酰胺4g/L、磷酸钾3g/L、丙酮酸钠5g/L、氯化钠22g/L、氯化镁15g/L、EDTA-2K 0.6g/L，余量为水。
6.如权利要求4所述的乳腺癌三联快速检测试剂盒，其特征在于，所述血清稀释液的pH值为8.4-8.8。
7.如权利要求5所述的乳腺癌三联快速检测试剂盒，其特征在于，所述血清稀释液的pH值为8.6。
8.如权利要求1所述的乳腺癌三联快速检测试剂盒，其特征在于，所述四甲基联苯胺的浓度为0.5mg/ml。
9.如权利要求1所述的乳腺癌三联快速检测试剂盒，其特征在于，所述盐酸的浓度为2-3mol/L。
10.如权利要求1所述的乳腺癌三联快速检测试剂盒，其特征在于，所述阴性对照液为不含CA125、HE4和P-her2的正常人血清，所述阳性对照液为含有乳腺癌肿瘤标志物CA125、HE4和P-her2的乳腺癌患者血清。
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