CN106834186B - 一种植物乳杆菌微生态制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种植物乳杆菌微生态制剂，该制剂的活性成分为植物乳杆菌Zhang‑LL；其中，所述植物乳杆菌Zhang‑LL的保藏号为：CGMCC No.6936。本发明还公开所述植物乳杆菌微生态制剂的制备方法和在降低总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、血清谷丙转氨酶含量和脏器指数上以及提高血清IgG含量上的应用。本发明制备的植物乳杆菌微生态制剂活菌含量高，菌浓度可高达1×10¹⁰CFU/g，是一剂具有良好功能及应用前景的微生态制剂。

Description

一种植物乳杆菌微生态制剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及微生态制剂技术领域。更具体地，涉及一种植物乳杆菌微生态制剂及其制备方法和应用。

背景技术

随着生活水平的提升，人们对高营养食品的追求也越来越多，然而意味着这样的食品中的胆固醇含量偏高。大量流行病学调查、科学实验及临床干预已经证明，摄入过多胆固醇而导致的动脉粥样硬化，血脂水平升高等是各种心脑血管疾病的主要原因。人体在血脂长期处于高水平的情况下，会造成血管内膜功能性损伤，出现纤维斑块，继续发展会导致斑块出血、斑块破裂、局部血栓等，也会造成血管管腔狭窄甚至闭塞，严重会形成动脉瘤。

降低血清中胆固醇的水平直接关系到人类的健康情况。很多研究者致力于降低人体血清中胆固醇含量的研究，防止相关疾病的发生，其中，包括控制饮食中胆固醇摄入，抑制自身合成或促进胆固醇的转化排泄等或者采用物理、化学方法去除食物中的胆固醇生物转化法脱除食品中的胆固醇等。目前，降低血脂的主要方法仍然是药物治疗，但是使用的大多数降血脂药物都有不同程度的副作用。

因此，开发一种安全、无副作用的具有降胆固醇能力的植物乳杆菌微生态制剂具有重要意义。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种植物乳杆菌微生态制剂。

本发明的第二个目的在于提供一种上述微生态制剂的制备方法。

本发明的第三个目的在于提供一种上述微生态制剂的应用。

为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：

一种植物乳杆菌微生态制剂，该制剂的活性成分为植物乳杆菌Zhang-LL；其中，所述植物乳杆菌Zhang-LL是发明人从发酵米粉中分离、选育得到，经中国普通微生物菌种保藏中心鉴定，并于2007年1月2日保藏于中国普通微生物菌种保藏中心保藏(简称CGMCC)，保藏号为：CGMCC No.6936。

本发明进一步提供了上述植物乳杆菌微生态制剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)活化菌种：

将植物乳杆菌Zhang-LL以1-3％(V/V)的接种量接种于MRS液体培养基，37℃培养16-18h，如此传代培养2-4次得到活化后的菌种；

(2)扩大培养：

将上述活化后的植物乳杆菌Zhang-LL以2-4％(V/V)的接种量接种于MRS液体培养基，37℃培养16-18h，得到扩大培养液；

(3)离心浓缩与加入保护剂：

离心扩大培养液，弃掉上清液，收集得到菌泥；将菌泥加入保护剂，混匀，得到浓缩发酵剂；

(4)预冻、冻干：

将上述浓缩发酵剂在0.16mBar真空度下-30℃预冻10h至完全冻结状态，得到预冻发酵剂；将上述预冻发酵剂于冻干温度-55℃、真空度0.16mBar条件下冻干48h至完全干燥状态，得到干粉微生态制剂。

优选地，步骤(3)所述离心为4℃、8000-10000r/min离心8-12min。

优选地，步骤(3)所述保护剂为甘油和谷氨酸钠，所述甘油和谷氨酸钠在菌泥中的终浓度均为2.5％。

本发明还提供了植物乳杆菌Zhang-LL及其微生态制剂在降低总胆固醇含量、降低低密度脂蛋白胆固醇含量、降低血清谷丙转氨酶含量、提高血清IgG含量和降低脏器指数上的应用。

本发明通过给SD大鼠饲喂高脂饲料，同时使用植物乳杆菌Zhang-LL微生态制剂灌胃进行人工干预，测定微生态制剂对SD大鼠血清总胆固醇、总甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量、血清谷丙转氨酶含量、血清IgG含量和脏器指数的影响。结果表明，植物乳杆菌Zhang-LL或由其制备的微生态制剂具有良好的降低血液中总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量、提高血清IgG含量的能力，并且能够减轻由于高脂食物引起的肝脏功能损伤和由于摄食高脂食物引起的脏器指数升高，对肝脏具有较好的保护作用。

本发明的有益效果如下：

本发明制备的植物乳杆菌Zhang-LL微生态制剂活菌含量高，菌浓度可高达1×10¹⁰CFU/g，能有效降低胆固醇含量、提高免疫力，还能减轻由于高脂食物引起的肝脏功能损伤和由于摄食高脂食物引起的体重和肝重增加以及脏器指数的升高，是一剂具有良好功能及应用前景的微生态制剂。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。

图1示出植物乳杆菌Zhang-LL微生态制剂对大鼠血清指标的影响；

图2示出植物乳杆菌Zhang-LL微生态制剂对大鼠血清谷丙转氨酶含量的影响；

图3示出植物乳杆菌Zhang-LL微生态制剂对大鼠血清IgG含量的影响。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例和附图对本发明做进一步的说明。附图中相似的部件以相同的附图标记进行表示。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。

实施例1植物乳杆菌Zhang-LL微生态制剂的制备

1、菌种活化

将植物乳杆菌Zhang-LL以2％(V/V)的接种量接种于10mL MRS液体培养基，37℃培养16h。如此传代培养3次得到活化后的菌种。其中，所述的植物乳杆菌Zhang-LL为申请人从发酵米粉中分离、选育得到，经中国普通微生物菌种保藏中心鉴定，并于2007年1月2日保藏于中国普通微生物菌种保藏中心保藏(简称CGMCC)，保藏号为：CGMCC No.6936。

2、扩大培养

将上述活化后的植物乳杆菌Zhang-LL以3％(V/V)的接种量接种于装有500mL MRS培养基(胰蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母浸粉5.0g、柠檬酸三铵2.0g、葡萄糖20.0g、吐温80 1.0mL、乙酸钠5.0g、磷酸氢二钾2.0g、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.25g、水1L，pH 6.5)的三角瓶中，37℃培养16h，得到扩大培养液。

3、离心浓缩与加入保护剂

将上述500mL液体发酵剂分装入离心瓶中，于4℃、8000r/min离心10min，弃掉上清液，收集得到菌泥；将菌泥加入2.5％甘油和2.5％谷氨酸钠，混匀，得到浓缩发酵剂。

4、预冻、冻干

将上述浓缩发酵剂在0.16mBar真空度下-30℃预冻10h至完全冻结状态，得到预冻发酵剂；利用真空冷冻干燥机，将上述预冻发酵剂于冻干温度-55℃、真空度0.16mBar条件下冻干48h至完全干燥状态，得到干粉微生态制剂。

采用平板菌落计数法测定活菌数。结果表明，制备的植物乳杆菌Zhang-LL微生态制剂活菌数达到1×10¹⁰CFU/g菌粉。

实施例2植物乳杆菌Zhang-LL微生态制剂功能分析

1、样品制备

将植物乳杆菌Zhang-LL微生态制剂用生理盐水稀释为1.0×108CFU/ml，4℃保藏。

2、实验动物及分组

实验使用5周龄雄性SD大鼠30只，体重152.26±9.17g。每单笼饲养，室温维持在23±2℃，相对湿度为55±5％，并且定时12小时光照和12小时黑暗。饲料和水由老鼠自由取食，高脂饲料配方如表1。适应一周后，将大鼠随机分为2组(高脂饲料组和高脂饲料+微生态制剂组)，每组15只，其中高脂饲料组SD大鼠喂食高脂饲料+灌胃生理盐水；高脂饲料+微生态制剂组SD大鼠喂食高脂饲料+灌胃植物乳杆菌Zhang-LL微生态制剂的菌液。

表1大鼠高脂饲料成分表

3、大鼠饲喂实验

高脂饲料组按体重2ml/100g灌胃无菌生理盐水，Zhang-LL组按体重2ml/100g灌胃植物乳杆菌Zhang-LL微生态制剂菌液，每天一次灌胃。实验8周末，禁食12h后测定所有大鼠体重，麻醉后，对小鼠进行眼球采血，剂量为1mL，血液在室温凝固一小时后离心(3500rpm，15min)，离心后得到500-700μL血清用作生化分析。得到血清后立即使用或置于-20℃～-70℃低温环境中储藏待用。

4、血脂分析

利用全自动生化分析仪测定大鼠血清总胆固醇(TC)、总甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量。结果如图1所示，植物乳杆菌Zhang-LL微生态制剂能够显著降低大鼠血清总固醇含量及低密度脂蛋白胆固醇含量(P＜0.05)。

5、血清谷丙转氨酶含量的测定

分离大鼠血清，采用试剂盒法(南京建成)检测血清谷丙转氨酶含量。结果如图2所示，与对照组相比，试验组的血清谷丙转氨酶含量有显著降低趋势(P＜0.05)。临床上谷丙转氨酶偏高，表明肝脏功能出现问题。可见，植物乳杆菌Zhang-LL微生态制剂能较好维持大鼠肝脏正常功能，降低由于高脂饲料引起的肝脏功能损伤。

6、大鼠血清IgG含量的测定

分离大鼠血清，采用试剂盒法(购自南京建成生物工程研究所有限公司)检测大鼠血清免疫球蛋白IgG含量。结果如图3，与对照组相比，植物乳杆菌Zhang-LL组与对照组相比血清IgG含量提高了38.6％，差异显著(P＜0.05)。说明植物乳杆菌Zhang-LL微生态制剂可以有效提高大鼠的免疫力。

7、脏器指数分析

摘取大鼠肝脏用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干称重，计算脏器指数(脏器指数＝(肝、脾、肾重量)/大鼠体重×100％)，实验如表2所示，结果表明，灌胃植物乳杆菌Zhang-LL后，大鼠的体重有所下降，肝脏重量显著下降(P＜0.05)，脏器指数也与高脂饲料组有显著差异(P＜0.05)。表明，植物乳杆菌能够显著降低由于高脂饮食引起的脏器指数升高，对肝脏具有显著的保护作用。

表2大鼠体重及脏器指数

显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

Claims (1)

1.一种植物乳杆菌在制备产品中的应用，其特征在于，所述植物乳杆菌的保藏号为CGMCC No.6936；所述产品具有的功能包括：降低总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量、降低血清谷丙转氨酶含量、提高血清IgG含量和降低脏器指数。

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