CN106822877A - 一种治疗hpv感染的组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医疗领域，具体地涉及一种治疗HPV感染的组合物及其应用。该组合物包括贻贝软组织提取物、胰蛋白酶以及油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油。本发明的组合物可以用于治疗HPV感染以及HPV感染有关的疾病，如子宫颈癌和生殖器疣等疾病，为HPV感染患者提供疗效好、起效时间短、无依赖、无毒副作用、复发率低的HPV感染用药。

Description

一种治疗HPV感染的组合物及其应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体地涉及一种治疗HPV感染的组合物及其应用。

背景技术

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)属于乳头瘤病毒科的乳头瘤病毒属，为球形无包膜的小型双链环状DNA病毒。目前已发现其有200余种，根据其是否致癌可将HPV分为高危型和低危型。目前较统一的流行病学分类定义了15种高危型HPV(如HPV-16、HPV-18)和12种低危型HPV(如HPV-6、HPV-11)。HPV的致病机制是HPV对皮肤和黏膜上皮细胞有高度亲嗜性，其在感染宿主皮肤或黏膜上皮细胞后，可在细胞核内自我复制或整合到宿主细胞DNA中，并随宿主细胞同步复制并转录。病毒复制诱导上皮增殖，使表皮变厚伴棘层增生和某种程度表皮角化，最终导致上皮增殖形成乳头状瘤，亦称为疣。疣一般是良性的，而其中HPV DNA是游离的。但某些型别的HPV具有诱导细胞转化的能力，其DNA可整合到宿主上皮细胞的染色体中，促进细胞DNA的合成，使皮肤特别是黏膜上皮细胞变为永生化细胞，从而诱发癌前病变或恶性肿瘤。

HPV感染可导致多种病变，其临床表现亦多种多样。孕妇和免疫力低下的人群感染后病情将更为严重。常见有以下几种：宫颈炎、宫颈糜烂、皮肤乳头状瘤、生殖器疣、扁平疣等，甚至导致恶性肿瘤。

目前HPV阳性主要是以外治为主，内治为辅。外治的方法很多，包括药物治疗、冷冻治疗、激光治疗、微波治疗、电烧治疗及手术治疗等。药物治疗方便，易于操作，但有些药物有灼伤粘膜的可能。注射昂贵的干扰素、白介素等免疫增强剂会起到一定作用，但其疗效在学术界尚存争议，而且大部分人会产生一定的副作用。

贻贝(Mytilusedulis Linnaeus)是一种海洋软体动物，属于双壳贝类，俗称“青口”和“淡菜”，遍布世界各沿岸国家。贻贝种类繁多，仅中国沿海就有30多种，经济价值较高的有10多种，其中紫贻贝、翡翠贻贝和厚壳贻贝是主要的养殖品种。贻贝富含蛋白质、脂肪、碳水化合物、钙、磷、铁、核黄素、尼克酸等营养元素，而且具有很高的药用价值。

胰蛋白酶(Trypsin,Parenzyme)，EC 3.4.21.4，是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。胰脏制造的前体胰蛋白酶原分泌到小肠后，肠肽酶使其活化，成为胰蛋白酶。胰蛋白酶是肽链内切酶，它能选择性地水解多肽链的赖氨酸和精氨酸残基中的羧基。胰蛋白酶不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用。

油酸(Oleic acid)是一种单不饱和Omega-9脂肪酸，亚油酸(Linoleic acid)是一种不饱和Omega-6脂肪酸，它们都是人和动物营养中必需的脂肪酸。

发明内容

为解决HPV治疗方法操作不方便、副作用大、价格昂贵的缺陷，本发明尤其提出一种治疗HPV感染的组合物，可以用于治疗HPV感染以及HPV感染有关的疾病，如子宫颈癌和生殖器疣等疾病，为HPV感染患者提供疗效好、起效时间短、无依赖、无毒副作用、复发率低的HPV感染用药。

为实现上述目的，本发明提出一种治疗HPV感染的组合物，其特征在于，所述治疗HPV感染的组合物是由贻贝软组织提取物、胰蛋白酶以及油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油组成的，或主要由它们组成。

根据本发明的一个或多个方面，所述治疗HPV感染的组合物按组合物含量计，包括：贻贝软组织提取物0.1-15份，胰蛋白酶0.1-20份以及油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油0.1-10份。

根据本发明的一个或多个实施方式，按组合物总重量计，贻贝软组织提取物是例如0.1份、1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份、5份、5.5份、6份、6.5份、7份、7.5份、8份、8.5份、9份、9.5份、10份、10.5份、11份、11.5份、12份、12.5份、13份、13.5份、14份、14.5份、15份等，胰蛋白酶是例如0.1份、0.2份、1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份、5份、5.5份、6份、6.5份、7份、7.5份、8份、8.5份、9份、9.5份、10份、10.5份、11份、11.5份、12份、12.5份、13份、13.5份、14份、14.5份、15份、15.5份、16份、16.5份、17份、17.5份、18份、18.5份、19份、19.5份、20份等，以及油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油是例如0.1份、1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份、5份、5.5份、6份、6.5份、7份、7.5份、8份、8.5份、9份、9.5份、10份等。

根据本发明的一个或多个方面，所述治疗HPV感染的组合物：贻贝软组织提取物与胰蛋白酶可以分别隔离存在或可以混合存在。这里，“隔离存在”是指两种成分以保持各自性质的互不干扰的独立包装存在。“混合存在”是指两种成分混合存在于一个包装中。根据本发明的一个或多个方面，所述用于治疗HPV感染的组合物中：贻贝软组织提取物与胰蛋白酶可以预混或使用前混合。

根据本发明的一个或多个方面，富含油酸和/或亚油酸的油包括但不限于以下活性物质中的一种或多种：槐豆油、红花油、黑芝麻油、青刺果油、葡萄籽油，橄榄油、月见草油、茶籽油。具体地，其可以是0.1-5份。

根据本发明的一个或多个方面，所述治疗HPV感染的组合物可以进一步加入辅料，所述辅料可以是抗氧化剂、抑菌剂、香精或基质材料等。

根据本发明的一个或多个方面，所述治疗HPV感染的组合物的最终pH值可以3.8-5.8，例如为3.8-5.5，或者例如为4.0-5.6。

根据本发明的一个或多个方面，所述治疗HPV感染的组合物中：贻贝软组织提取物和胰蛋白酶可以是干粉。

根据本发明的一个或多个方面，所述治疗HPV感染的组合物中：贻贝软组织提取物、胰蛋白酶可以是液体。

根据本发明的一个或多个方面，所述贻贝软组织提取物是以贻贝除壳以外的所有组分为原料，经过酸性水溶液提取而获得的上清液，其中蛋白质含量为0.2-15.0mg/ml，pH值1.0-6.0，例如为2.0-5.0，例如为3.0-4.0，例如为4.5-5.5。特别地，可以是以足丝为原料。

根据本发明的一个或多个方面，所述贻贝可以包括紫贻贝、翡翠贻贝和厚壳贻贝中的一种、两种或三种。

根据本发明的一个或多个实施方式，所述酸性水溶液可以包括：乙酸-乙酸钠缓冲液、乙酸、柠檬酸、高氯酸等，但不限于此。

根据本发明的一个或多个实施方式，所述贻贝软组织提取物的蛋白质含量可以为例如0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.7mg/ml、0.8mg/ml、0.9mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml、2.5mg/ml、3.0mg/ml、3.5mg/ml、4.0mg/ml、4.5mg/ml、5.0mg/ml、5.5mg/ml、6.0mg/ml、6.5mg/ml、7.0mg/ml、7.5mg/ml、8.0mg/ml、8.5mg/ml、9.0mg/ml、9.5mg/ml、10.0mg/ml、10.5mg/ml、11.0mg/ml、11.5mg/ml、12.0mg/ml、12.5mg/ml、13.0mg/ml、13.5mg/ml、14.0mg/ml、14.5mg/ml和15.0mg/ml等，但不限于此。

根据本发明的一个或多个方面，所述胰蛋白酶可以是从市场上常规购买的。替代地，所述胰蛋白酶可以是通过盐析、柱层析等方法制备的。

根据本发明的一个或多个方面，所述油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油可以是从市场上常规购买的。

根据本发明的一个或多个方面，所述用于治疗HPV感染的组合物可以用于治疗HPV感染，控制微生物感染、消除红肿、缓解疼痛。

此外，本发明还提出一种治疗HPV感染的药物，包括贻贝软组织提取物、胰蛋白酶以及油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油，任选地，还可含有其它医药领域常用或可接受的辅料。

根据本发明的一个或多个方面，所述治疗HPV感染的药物可以制备成喷剂、滴剂、凝胶剂、软膏剂、泡腾片剂、口服溶液剂、颗粒剂等形式。

此外，本发明还提出了上述治疗HPV感染的药物在治疗HPV感染中的应用。

根据本发明的一个或多个方面，所述治疗HPV感染的药物可以用于治疗HPV感染(包括高危型和低危型，尤其是高危型)以及HPV感染有关的疾病，如子宫颈癌和生殖器疣等疾病。

根据本发明的一个或多个方面，向有需要的受试者给予根据本发明的组合物，所述组合物包括贻贝软组织提取物、胰蛋白酶以及油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油。

根据本发明的一个或多个实施方式，所述贻贝软组织提取物、胰蛋白酶以及油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油是混合存在于组合物中。

根据本发明的一个或多个实施方式，所述贻贝软组织提取物、胰蛋白酶以及油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油也可以是分别隔离存在于组合物中。这里，当将贻贝软组织提取物、胰蛋白酶以及油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油组合给药时，给药可以是顺序给药或者同时给药，优选可以是顺序给药。对于顺序给药来说，可以将贻贝软组织提取物、胰蛋白酶以及油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油以任何顺序给药。例如，可以先给予贻贝软组织提取物再给予胰蛋白酶然后给予油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油，或者可以先给予胰蛋白酶再给予贻贝软组织提取物再给予油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油，在整个治疗周期，三者的给药频率可以相同或不同。

在本发明的一个方面，一种治疗HPV感染的组合物，包括：

贻贝软组织提取物0.1-15份，

胰蛋白酶0.1-20份，和

油酸0.1-10份。

在本发明的一个方面，一种治疗HPV感染的组合物，包括：

贻贝软组织提取物0.1-15份，

胰蛋白酶0.1-20份，和

亚油酸0.1-10份。

在本发明的一个方面，一种治疗HPV感染的组合物，包括：

贻贝软组织提取物0.1-15份，

胰蛋白酶0.1-20份，

亚油酸0.1-10份，和

槐豆油0.1-5份。

此外，本发明还提出一种治疗HPV感染的药物组合物，含有贻贝软组织提取物、胰蛋白酶和油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油，任选地，还可含有其它药学上常用或可接受的载体。

根据本发明的一个或多个方面，所述载体可以包括任何以及所有的溶剂、增溶剂、盐、分散介质、包衣材料、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料等和它们中一种、多种或全部的组合，这是本领域技术人员所熟知的(例如参见Remington'sPharmaceutical Sciences,18th Ed.Mack Printing Company,1990,pp.1289-1329)。除了与活性成分不相容的载体外，可考虑在治疗用或药物组合物中使用的任何常规载体。

采用包含贻贝软组织提取物、胰蛋白酶和油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油的治疗HPV感染的组合物可以用于治疗HPV感染(包括高危型和低危型，尤其是高危型)以及HPV感染有关的疾病，如子宫颈癌和生殖器疣等疾病。

本发明涉及的治疗HPV感染的组合物为HPV感染患者提供疗效好、起效时间短、无依赖、无毒副作用、复发率低的HPV感染用品。

以下实施例以治疗HPV感染的组合物为例进行说明，但不限于此，上述本发明提出的各种包含贻贝软组织提取物、胰蛋白酶和油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油的预防及治疗HPV感染组合物均适用于本发明。

具体实施方式

实施例1：一种贻贝软组织提取物的制备方法。

取贻贝去壳，收集软组织300g，分成三份，每份加入100ml含量0.3％的下表酸性溶液，匀浆10min后离心得到上清液即为贻贝软组织提取物。

测定上清液中蛋白含量和pH值，蛋白含量测定采用考马斯亮蓝法。

表1

实例	酸性溶液	蛋白质含量	pH值
				1	柠檬酸	2.6mg/ml	4.5
2	乙酸	3.5mg/ml	3.2
				3	高氯酸	3.0mg/ml	1.0

实施例2：一种包含贻贝软组织提取物、胰蛋白酶和油酸的组合物

包含贻贝软组织提取物、胰蛋白酶和油酸的治疗HPV感染的组合物由以下组分构成：贻贝软组织提取物干粉15mg，胰蛋白酶干粉20mg，油酸10ml加入纯化水充分溶解后得到治疗HPV感染的口服溶液剂。

收集HPV感染患者，无临床症状，经HPV DNA分型检测均感染高危型HPV病毒(包括16、18、31、33、35、39、45、51型等)的女性患者30例，随机分为试验组和对照组。试验组服用实施例2制备的治疗HPV感染的组合物，每日1次，一次15ml，间隔24h用药，用药期间禁止性生活及盆浴，月经期暂停，连续使用2周。对照组不使用任何治疗措施。所有患者的治疗后至复查期内的性生活全程使用避孕套。两组患者在治疗前和停药1个月后均进行HPV检测。

结果显示，使用本发明后试验组有86.67％的患者HPV病毒载量检测低于1.00RLU/Co(HC2法)，而对照组仅有20％。试验组的患者HPV病毒载量平均下降了89.26％，而对照组的HPV病毒载量反而平均升高了4.89％。表明本发明的组合物具有治疗HPV感染的作用。

实施例3：一种包含贻贝软组织提取物、胰蛋白酶和亚油酸的组合物

包含贻贝软组织提取物、胰蛋白酶和亚油酸的治疗HPV感染的组合物由以下组分构成：贻贝软组织提取物干粉10mg，胰蛋白酶干粉15mg，亚油酸5ml，贻贝软组织提取物和胰蛋白酶过筛,将可压性淀粉、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠混合，用5％的羟丙甲纤维素水溶液制粒、60℃烘干，将处方量的低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、胰蛋白酶、贻贝软组织提取物、亚油酸混合均匀后与颗粒混合，分装后制成颗粒剂。

收集30例宫颈HPV感染患者，年龄在20-50之间，病程3-21个月。宫颈HPV感染诊断标准为：取宫颈脱落细胞，检测样本的RLU/Co≥1.0，诊断为宫颈HPV感染阳性。药品用量为服用实施例3制备的治疗HPV感染的颗粒剂，每日服用1次，一次10g。连续用药治疗2周后复查。

疗效标准：连续用药2周后复查HPV-DNA，RLU/Co＜1.0时即痊愈；RLU/Co＜10.0时即为有效；RLU/Co＞10.0时即为无效。

临床结果：30例患者中，痊愈25例，痊愈率83.33％，有效3例，有效率(含痊愈)93.33％，无效2例，无效率为6.67％。

结论：本发明治疗HPV感染的组合物对HPV感染的患者具有很好的治疗作用。

实施例4：一种包含贻贝软组织提取物、胰蛋白酶和油酸的组合物

包含贻贝软组织提取物、胰蛋白酶和油酸的治疗HPV感染的组合物由以下组分构成：贻贝软组织提取物干粉8.5mg，胰蛋白酶干粉10.5mg，油酸6ml，加入生理盐水充分溶解制成喷剂。

收集HPV感染扁平疣患者30例，随机分成试验组和对照组，每组15组。试验组使用本实施例4制备的喷剂，对照组使用另取贻贝软组织提取物干粉8.5mg，胰蛋白酶干粉10.5mg，加入生理盐水充分溶解制备的喷剂。两组使用方法相同，每日3次，每次喷于患处3-5下，2周为一个疗程，一个疗程后观察疗效。

疗效标准：痊愈-疣体脱落、皮肤光滑；显效-疣体明显缩小或变薄大于50％；疣体明显缩小或变薄小于50％；无效-疗程结束疣体无明显缩小或变薄。一个疗程后观察试验组和对照组疗效，治疗效果如下表2所示：

组别	痊愈	显效	有效	无效	有效率
						试验组	12	1	1	1	93.33％
对照组	10	2	1	2	86.67％

从上表数据可以看出，试验组和对照组使用的喷剂对HPV感染扁平疣具有显著的疗效，并且本发明实施例4制备的含有贻贝软组织提取物、胰蛋白酶和油酸的喷剂的有效率明显高于对照组，进而证明本发明加入油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油后制备的喷剂对HPV感染扁平疣的治疗效果更好。

当然，本发明还可有其它多种实施例，在不背离本发明精神及其实质的情况下，熟悉本领域的技术人员可根据本发明作出各种相应的改变和变形，但这些相应的改变和变形都应属于本发明权利要求的保护范围。

Claims (10)

1.一种治疗HPV感染的组合物，其特征在于，所述治疗HPV感染的组合物包含贻贝软组织提取物、胰蛋白酶以及油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油。

2.根据任一前述权利要求所述的治疗HPV感染的组合物，其特征在于，所述治疗HPV感染的组合物按组合物总重量计，贻贝软组织提取物0.1-15份，胰蛋白酶0.1-20份以及油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油0.1-10份，例如按组合物总重量计，贻贝软组织提取物是例如0.1份、1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份、5份、5.5份、6份、6.5份、7份、7.5份、8份、8.5份、9份、9.5份、10份、10.5份、11份、11.5份、12份、12.5份、13份、13.5份、14份、14.5份、15份，胰蛋白酶是例如0.1份、0.2份、1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份、5份、5.5份、6份、6.5份、7份、7.5份、8份、8.5份、9份、9.5份、10份、10.5份、11份、11.5份、12份、12.5份、13份、13.5份、14份、14.5份、15份、15.5份、16份、16.5份、17份、17.5份、18份、18.5份、19份、19.5份、20份，以及油酸和/或亚油酸和/或富含它们的油是例如0.1份、1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份、5份、5.5份、6份、6.5份、7份、7.5份、8份、8.5份、9份、9.5份、10份。

3.根据任一前述权利要求所述的治疗HPV感染的组合物，其特征在于，所述组合物还含有以下活性物质中的一种或多种：槐豆油、红花油、黑芝麻油、青刺果油、葡萄籽油，橄榄油、月见草油、茶籽油。

4.根据任一前述权利要求所述的治疗HPV感染的组合物，其特征在于，所述组合物进一步包括辅料，例如抗氧化剂、抑菌剂、香精或基质材料；或者所述组合物进一步包括药学上可接受的载体，例如的溶剂、盐、分散介质、包衣材料、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料和它们中一种、多种或全部的组合。

5.根据任一前述权利要求所述的治疗HPV感染的组合物，其特征在于，所述组合物溶于水中的最终pH值为3.8-5.8。

6.根据任一前述权利要求所述的治疗HPV感染的组合物，其特征在于，所述贻贝软组织提取物、胰蛋白酶是干粉或液体。

7.根据任一前述权利要求所述的治疗HPV感染的组合物，其特征在于，所述贻贝软组织提取物是以贻贝除贝壳以外的组分原料，经过酸性水溶液提取，离心后取上清获得的，其中蛋白质含量0.2-15.0mg/ml，pH值1.0-6.0。

8.根据权利要求7所述的治疗HPV感染的组合物，其中所述酸性水溶液包括：乙酸-乙酸钠缓冲液、乙酸、柠檬酸、高氯酸，或者其中所述贻贝软组织提取物的蛋白质含量例如为0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.7mg/ml、0.8mg/ml、0.9mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml、2.5mg/ml、3.0mg/ml、3.5mg/ml、4.0mg/ml、4.5mg/ml、5.0mg/ml、5.5mg/ml、6.0mg/ml、6.5mg/ml、7.0mg/ml、7.5mg/ml、8.0mg/ml、8.5mg/ml、9.0mg/ml、9.5mg/ml、10.0mg/ml、10.5mg/ml、11.0mg/ml、11.5mg/ml、12.0mg/ml、12.5mg/ml、13.0mg/ml、13.5mg/ml、14.0mg/ml、14.5mg/ml和15.0mg/ml。

9.根据权利要求7所述的治疗HPV感染的组合物，其中所述贻贝包括紫贻贝、翡翠贻贝、厚壳贻贝中的一种、两种或三种。

10.根据任一前述权利要求所述的治疗HPV感染的组合物，其特征在于，所述组合物是喷剂、滴剂、凝胶剂、软膏剂、泡腾片剂、口服溶液剂、颗粒剂的形式。