CN106818837A - 生物抗菌多肽制剂、制备方法及其应用 - Google Patents

生物抗菌多肽制剂、制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种生物抗菌多肽制剂、制备方法及其应用，所述生物抗菌多肽制剂，以水为载体，含有如下重量百分比的组分：生物抗菌肽BQ 0.1％‑10％；聚六亚甲基双胍0.01‑1％。本发明杀菌效果好。该制剂核心杀菌成份为新型抗菌肽，其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌和病毒均具有很强的杀菌作用。体外实验作用2～5分钟即可达到99.9％的杀菌率。安全性高，对人体不会产生毒性或者残留，稳定性强，可做预防用药。本发明主要作用组分为生物制剂，克服了传统化学类制剂对粘膜具有刺激性，细菌容易产生耐药性的缺点。易被机体所接受，且没有任何毒副作用。适用于长期使用或者预防用药。

Description

生物抗菌多肽制剂、制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种抗菌肽制剂、制备方法及其应用。
背景技术
目前，在临床上的病菌感染相当严重，近20年来它己经成为威胁人类健康的一大杀手。而且，越来越多的细菌可以抵御抗生素的治疗，从而对公众健康造成了严重的威胁。在美国，1998年因为耐药性细菌感染而失去的生命比在越南战场上还要多。一度轻而易举就可以被抗生素杀死的病菌如：金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、绿脓杆菌、白色念珠菌、大肠杆菌等，现在因为产生了耐药性而变得越来越凶悍，让人越来越束手无策。而其中的耐药性金黄色葡萄球菌是其中最为活跃的分子，由它引起的感染，不仅在常规治疗下疗效欠佳或完全无效，同时还可以改变病人的正常菌群的生态状况，从而给病人造成额外的痛苦，增加经济负担和不幸。
目前市面上常用抗菌剂有含氯类、醛类、醇类、碘类、酚类以及季铵盐类等，存在对皮肤粘膜有刺激作用，或者抗菌谱窄，或者长期会产生细菌耐药等问题。特别是应用于敏感部位的抗菌剂对制剂配方要求更高，如女性私密部位专用抗菌剂。女性私密部位常发生细菌性、霉菌性、滴虫性及非特异性阴道炎、宫颈炎、外阴炎、阴部瘙痒等症。而由于这些部位的敏感性，对治疗药物要求更高，常见现有消毒剂会对皮肤粘膜产生刺激，抑菌谱不够广或者由于抗菌机制本身原因容易导致细菌耐药性不适用长期使用和预防使用，现有消毒剂存在诸多缺点无法满足上述要求。
发明内容
本发明的目的是公开一种生物抗菌多肽制剂、制备方法及其应用，以克服现有技术存在的缺陷。
所述的生物抗菌多肽制剂，以水为载体，含有如下重量百分比的组分：
生物抗菌肽BQ 0.1％-10％；
聚六亚甲基双胍(PHMB) 0.01-1％
优选的，以水为载体，含有如下重量百分比的组分：
生物抗菌肽BQ 0.1％-2％；
聚六亚甲基双胍(PHMB) 0.01-0.5％
所述生物抗菌肽BQ是氨基酸序列为Lys Trp Lys Ser Phe Ile Lys Lys Leu ThrSer Lys Phe Leu His Ser Ala Lys Lys Phe的多肽，所述生物抗菌肽BQ的制备、纯化及性质已经在授权公告号CN101570569B发明专利中，有具体的记载；
所述生物抗菌肽BQ是一种生物蛋白，在液体制剂中，要保持其蛋白活性非常重要，而一般化学试剂，尤其是高分子材料，表面活性剂成份对蛋白活性均会造成影响；
发明人发现，聚六亚甲基双胍为一种对该抗菌肽BQ活性不具有影响的化合物，两者可以联合使用。聚六亚甲基双胍本身是一种良好的广谱杀菌剂，其与抗菌肽BQ联合使用，可以极大的发挥制剂的抗菌效果。聚六亚甲基双胍浓度极低(重量含量万分之一)的情况下就可以维持好抗菌肽BQ的蛋白活性，使得抗菌肽BQ的效应发挥最大；
进一步优选的，所述的生物抗菌多肽制剂，以水为载体，还包括医药学上可接受的辅料，磷酸盐，如磷酸氢二钠、磷酸二氢钾；保护剂，如甘氨酸；稳定剂，如壳聚糖；润肤剂，如甘油；无机盐，如氯化钠、氯化钾；
进一步优选的，所述的生物抗菌多肽制剂，以水为载体，含有如下重量百分比的组分：
最优选的，以水为载体，含有如下重量百分比的组分：
本发明的制备方法，包括如下步骤：
(1)将所述的磷酸氢二钠和磷酸二氢钾溶解于水中，获得溶液A；
(2)将生物抗菌肽BQ、聚六亚甲基双胍和甘氨酸，溶于溶液A，然后将壳聚糖、氯化钠溶于水中，得到溶液B；
(3)将上述溶液A和溶液B混合后，加入甘油，即可获得所述的生物抗菌多肽制剂；
动物试验证明，所述的生物抗菌多肽制剂，具有十分好的灭菌效果，尤其对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、大肠杆菌和病毒，更具有明显的杀灭作用，可广泛、安全、实用地用于手、皮肤、粘膜的消毒，以及家庭、餐馆、宾馆酒店、公共交通工具、幼儿园、医院等场合中包括食饮具在内的一般物品表面的消毒，和空气消毒、动物消毒、宠物消毒等。
所述的生物抗菌多肽制剂，可通过浸渍、涂抹、喷洒途径施加于需要消毒的部位，剂量一般为一日1-3次，每次使用量为能均匀覆盖消毒表面部位。
本发明所述的生物抗菌多肽制剂，抗菌肽BQ与聚六亚甲基双胍复配物并不是两种物质功能简单叠加，而是具有协同增强作用，复配物的杀菌效果2-20倍于两者杀菌效果的简单叠加。复配物的杀菌谱也明显扩大，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和常见病毒，尤其是对一般杀菌剂都较难处理的耐药性革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均可达到很好的杀灭效果。
本发明生物抗菌多肽制剂的有益效果是：
1、杀菌效果好。该制剂核心杀菌成份为新型抗菌肽，其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌均具有很强的杀菌作用。体外实验作用2分钟即可达到99.9％的杀菌率，如果作用5分钟～10分钟，可使杀菌率达到100％。
2、安全性高：制剂核心杀菌成份为生物蛋白，即使经组织吸收后很快就会降解为氨基酸，对人体不会产生毒性或者残留问题。
3、稳定性强。本品在25℃常温保存六个月，生物活性基本没有改变。本品在4～8℃可以保存2年。
4、可做预防用药：本发明主要作用组分为生物制剂，克服了传统化学类制剂对粘膜具有刺激性，细菌容易产生耐药性的缺点。易被机体所接受，且没有任何毒副作用。适用于长期使用或者预防用药。
具体实施方式
实施例1
1、组成和配比：(重量百分比)
生物抗菌肽BQ 0.1％；聚六亚甲基双胍(PHMB)1％；甘氨酸1％；壳聚糖1％；甘油1％；磷酸二氢钾1％；磷酸氢二钠1％；氯化钠0.1％；其余用蒸馏水。
2、配制步骤
(1)将磷酸二氢钾和磷酸氢二钠，溶于蒸馏水中，得到溶液A；
(2)按照制剂处方，称取所需的生物抗菌肽BQ、聚六亚甲基双胍和甘氨酸，加入到部分A溶液中，搅拌并使溶解，得到溶液B。
(3)按配比称取壳聚糖、氯化钠溶于蒸馏水中，得到溶液C；
(4)将上述溶液B和溶液C混合后，加入甘油，搅拌均匀，即得成品。
分装于塑料或者玻璃瓶中直接作为消毒液使用；也可分装于带手动泵的喷雾瓶中，制备成消毒喷雾剂；也可作为湿巾添加液吸附于无纺布中，制成卫生湿巾。
实施例2
1、组成和配比：(重量百分比)
生物抗菌肽BQ 10％；聚六亚甲基双胍(PHMB)0.01％；甘氨酸8％；壳聚糖10％；甘油5％；磷酸二氢钾20％；磷酸氢二钠30％；氯化钠2％；其余用蒸馏水，各组份的重量百分比总和为100％。
2、制备方法同实施例1；
分装于塑料或者玻璃瓶中直接作为消毒液使用；也可分装于带手动泵的喷雾瓶中，制备成消毒喷雾剂；也可作为湿巾添加液吸附于无纺布中，制成卫生湿巾。
实施例3
1、组成和配比
生物抗菌肽BQ 2％；聚六亚甲基双胍(PHMB)0.02％；甘氨酸2％；壳聚糖2％；甘油3％；磷酸二氢钾10％；磷酸氢二钠20％；氯化钠1％；其余用蒸馏水，各组份的重量百分比总和为100％。
2、制备方法同实施例1。
分装于塑料或者玻璃瓶中直接作为消毒液使用；也可分装于带手动泵的喷雾瓶中，制备成消毒喷雾剂；也可作为湿巾添加液吸附于无纺布中，制成卫生湿巾。
实施例4
1、组成和配比
生物抗菌肽BQ 1％；聚六亚甲基双胍(PHMB)0.01％；甘氨酸8％；壳聚糖10％；甘油80％；磷酸二氢钾5％；磷酸氢二钠10％；氯化钠0.75％；其余用蒸馏水，各组份的重量百分比总和为100％。
2、制备方法同实施例1。
分装于塑料或者玻璃瓶中作为涂抹剂使用。
实施例5
下表是抗菌肽BQ与抗菌肽BQ复配物对各种微生物的杀灭作用比较(对微生物杀菌率试验按GB 15979-2002＿1＿2002-03-05＿0相关规定进行试验)：
由上表可知抗菌肽BQ与聚六亚甲基双胍复配物的杀菌作用并不是两种物质杀菌作用的简单叠加，抗菌肽BQ与聚六亚甲基双胍联合使用，可以极大的发挥抗菌肽BQ的抗菌效果。且聚六亚甲基双胍浓度极低(重量含量万分之一)的情况下就可以维持好抗菌肽BQ的蛋白活性，并使得抗菌肽BQ有效作用浓度降低，仍可以达到同样高效的杀菌效果。
实施例6
本发明生物抗菌多肽制剂的临床试用报告说明其功效：
试验一：生物抗菌多肽制剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌杀菌实验
一、器材
1、试验菌：金黄色葡萄球菌第6代(军事医学科学院消毒检测中心提供)、大肠杆菌笫6代(军事医学科学院消毒检测中心提供)
2、样品：实施例1的生物抗菌多肽制剂
3、中和剂：2％组氨酸、8％卵磷腊、10％吐温-80的D/E肉汤
4、PBS：0.03mol/L磷酸盐缓冲液
5、GNP-9160型隔水式恒温培养箱(上海精宏实验设备有限公司)
6、培养基：普通营养琼脂
7、机械秒表(504型)
8、可调恒温水浴箱(CBN28-3)
二、方法
1、检验依据：《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979-2002附录C3
2、中和剂鉴定试验：试验菌株：金黄色葡萄球菌样品浓度：1：20稀释液，作用时间：0.5min
3、定量杀菌试验：样品浓度：1:20稀释液
4、试验温度20℃，试验重复3次
三、结果
1、中和剂鉴定试验结果表明：笫1、2组生长茵落数分别为0cfu/mL和4.47*102cfu/mL，第3、4、5组三组间误差率分别为7.80％、9.72％、4.08％。
表1中和剂鉴定试验结果
2、试验温度20℃时，样品1：:2稀释液作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌杀菌率均为100％。
表2对实验菌杀菌效果
实施例7
试验二：实施例1的生物抗菌多肽制剂对白色念珠菌杀菌实验
一、器材
1、试验菌：白色念珠菌第6代(军事医学科学院消毒检测中心提供)
2、样品：生物抗菌多肽制剂
3、中和剂：2％组氨酸、8％卵磷腊、10％吐温-80的D/E肉汤
4、PBS：0.03mol/L磷酸盐缓冲液
5、GNP-9160型隔水式恒温培养箱(上海精宏实验设备有限公司)
6、培养基：沙氏培养基
7、机械秒表(504型)
8、可调恒温水浴箱(CBN28-3)
二、方法
1、检验依据：《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979-2002附录C3
2、中和剂鉴定试验：样品浓度：原液，作用时间：0.5min
3、定量杀菌试验：样品浓度：原液
4、试验温度20℃，试验重复3次
三、结果
1、中和剂鉴定试验结果表明：笫1、2组生长茵落数分别为0cfu/mL和1.06*103cfu/mL，第3、4、5组三组间误差率分别为7.78％、13.83％、9.08％。
表3中和剂鉴定试验结果
2、试验温度20℃时，样品1：:2稀释液作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟对白色念珠菌的杀菌率均为100％。
表4对实验菌杀菌效果
实施例8
试验三：实施例3的生物抗菌多肽制剂对流感病毒的杀菌实验
1、材料与方法
1.1测试样品：实施例3的生物抗菌多肽制剂。
1.2试验菌株：
流感病毒(H3N2)
1.3试验依据：
卫生部《消毒技术规范》中相应规定。
2、对流感病毒的灭活试验结果
在试验温度为20℃±1℃条件下，经3次重复试验证明，测试样品原液作用5.0min，对流感病毒平均杀灭对数值>5.00。(结果见表5)
表5对流感病毒的灭活效果
注：阳性对照平均对数值及范围4.32(4.23-4.50)。
实施例9
试验三：实施例2的生物抗菌多肽制剂阴道粘膜刺激性试验
―、材料和动物
1、受试物：样品为无色液体，取样品原液作为受试物，
2、动物：健康雌性新西兰白兔6只，普通级，金陵种兔场提供，合格证号：SCXK(苏)2012—0003号，体重2.0-2.4kg。
3.试验条件：动物环境设施合格证号：SYXK(苏)2012—0036号；环境温度：22±2℃；相对湿度：40-70％；饲料来源及证号：江苏省协同医药生物工程有限公司，苏A饲生字(2002)009号。主要仪器：婴儿秤(05-324)，病理切片机，显微镜。
二、方法
1、检验依据：卫生部(2002年版)《消毒技术规范》第二部分2.3.5阴道黏膜刺激试验。
2、试验方法：动物分入试验组、对照组，每组3只。动物仰面固定，暴露出会阴和阴道口。将小号消毐导尿管与2mL注射器连接，导管用受试物湿润后轻柔地插入动物阴道内(4-5cm),并缓慢注入2mL受试物，抽出导管，完成染毐。对照组动物闬生理盐水作同样处理，24mL后采用气栓法处死动物，剖腹取出完整的阴道，纵向切开，肉眼观察有无充血、水肿等表现，供病理取材时参考，将阴道放入10％福尔马林中固定24h以上，选取阴道的两端和中央3个部位的组织制片，HE染色后进行组织病理学检查。
三、实验结果
肉眼观察可见对照组2号和试验组各动物阴道黏膜轻度致中度水肿。组织病理学观察结果见下表。
受试物对动物阴道黏膜刺激反应评分
四、结论
受试物对家兔阴道粘膜刺激指数为1.56，阴道粘膜刺激强度为极轻刺激性。

Claims (10)

1.生物抗菌多肽制剂，其特征在于，以水为载体，含有如下重量百分比的组分：
生物抗菌肽BQ 0.1％-10％；
聚六亚甲基双胍(PHMB) 0.01-1％。
2.根据权利要求1所述的生物抗菌多肽制剂，其特征在于，以水为载体，含有如下重量百分比的组分：
生物抗菌肽BQ 0.1％-2％；
聚六亚甲基双胍(PHMB) 0.01-0.5％。
3.根据权利要求1或2所述的生物抗菌多肽制剂，其特征在于，以水为载体，还包括医药学上可接受的辅料。
4.根据权利要求3所述的生物抗菌多肽制剂，其特征在于，所述的生物抗菌多肽制剂，以水为载体，含有如下重量百分比的组分：
5.根据权利要求3所述的生物抗菌多肽制剂，其特征在于，所述的生物抗菌多肽制剂，以水为载体，含有如下重量百分比的组分：
6.根据权利要求1～5任一项所述的生物抗菌多肽制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将所述的磷酸氢二钠和磷酸二氢钾溶解于水中，获得溶液A；
(2)将生物抗菌肽BQ、聚六亚甲基双胍和甘氨酸，溶于溶液A，然后将壳聚糖、氯化钠溶于水中，得到溶液B；
(3)将上述溶液A和溶液B混合后，加入甘油，即可获得所述的生物抗菌多肽制剂。
7.根据权利要求1～5任一项所述的生物抗菌多肽制剂的应用，其特征在于，用于手、皮肤、粘膜的消毒，以及家庭、餐馆、宾馆酒店、公共交通工具、幼儿园、医院场合中包括食饮具在内的一般物品表面的消毒，和空气消毒、动物消毒、宠物消毒。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，通过浸渍、涂抹、喷洒途径施加于需要消毒的部位。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，剂量为一日1-3次，每次使用量为能均匀覆盖消毒表面部位。
10.根据权利要求1或2所述的生物抗菌多肽制剂在制备消毒剂中的应用。
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