CN106749746B - 一种提高获取诺丽果诺丽多糖的方法及所得提取物和应用 - Google Patents

一种提高获取诺丽果诺丽多糖的方法及所得提取物和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种提高获取诺丽果中诺丽多糖的方法及利用该方法获得的提取物和利用所得提取物在制备保健品或药品方面的应用。本发明通过发现了诺丽果的选择和干燥方式对诺丽多糖的提取有重要影响的基础上，对获取诺丽多糖工艺进行了改进，获得了诺丽多糖的高效、低成本和安全的获取方法。利用该方法可以获得诺丽多糖含量高的提取物，使其可以用于制备相关保健品或药品。

Description

一种提高获取诺丽果诺丽多糖的方法及所得提取物和应用
技术领域
本发明属于农产品加工领域，具体涉及一种提高获取诺丽果诺丽多糖的方法及所得提取物和应用。
背景技术
诺丽，又名海巴戟，也叫萝梨、印度桑葚、四季果或椿根，属茜草科巴戟天属热带常绿多年生灌木或小乔木。主要分布于中国西南部到东南部，以及台湾地区和香港地区。
有研究者发现诺丽多糖具有一定的抗癌作用(Antitumour potential of apolysaccharide-rich substance from the fruit juice of Mornda citrifolia(Noni)on sarcoma 180 ascites tumour in mice)。
由于诺丽的全球产量较低，在我国的种植面积也较小，如何有效的对其功能成分进行提取以满足研究和实际使用需求，成为本领域研究人员的重要课题。
这方面，许木果等人在《超声波辅助提取诺丽果多糖的工艺研究》中进行了有益的研究，其在传统的水提醇沉的方法之上研究了超声波对诺丽多糖提取的影响，得到了较好的提取效率。
李戈等人在《响应面法优化诺丽多糖提取工艺》通过对提取工艺中各个因素的考察，得到了较好的诺丽多糖的提取工艺。
不过，以上述两项研究为例的此类研究，存在如下缺点：(1)在提取过程中需要用到如超声波仪这样的辅助仪器，在实际大规模生产中，有一定的安全隐患且成本高昂；(2)对工艺参数组合的要求较为严格，且提取时间过长。
为了突破上述研究思路所具有的瓶颈，李戈等人在《不同来源地诺丽果质量分析》一文中分析了不同产地中诺丽果中功能成分含量的差异，希望通过控制诺丽的产地来实现对诺丽多糖的高效提取。然而，由于诺丽的产量本已有限，这种方法更加不利于相关产业的发展。
最近，陈建国等人在《灭菌条件对诺丽果汁活性物质及抗氧化活性影响》中提出了一个新思路，其考察了灭菌条件对于包括诺丽粗多糖在内的多种功能成分的影响。不过，其主要针对的是诺丽果汁的制备，对于无需进行严格灭菌的功能成分提取领域而言，其借鉴意义并不大。
综上所述，本领域亟需一种适合于规模生产且对诺丽多糖具有高效提取能力的诺丽多糖的获取方法。
发明内容
针对现有技术的缺点，本发明的目的之一在于提供一种提高获取诺丽果中诺丽多糖的方法，其包括：
(1)对诺丽果进行干燥并粉碎；
(2)利用水进行加热提取；
(3)利用有机溶剂进行沉淀、洗涤后，进行脱蛋白、脱色和透析处理；
其特征在于，
(A)步骤(1)中，摘取果色为白色的诺丽果；
(B)步骤(1)中，所述干燥方法为红外干燥或微波干燥。
本发明的发明人发现，利用果色为白色的诺丽果比利用果色为青色的诺丽果或成熟的诺丽果，在进行对诺丽多糖提取时，所得的诺丽多糖要多。
另外，还发现利用红外干燥法或微波干燥法对诺丽果进行干燥，可有助于诺丽多糖的提取。相对于一般的晒干方式，利用红外干燥法和微波干燥法后进行诺丽多糖提取时，所得多糖含量提高了36.3-40.8％。
令人惊奇的是，一般而言，冷冻干燥法对功能成分的损失应该会较小，但是进行冷冻干燥后进行提取，所得诺丽多糖的含量却不到本发明的一半。
值得指出的是，本发明虽然用到了红外干燥或微波干燥设备，但是这些设备并不用于后续的提取步骤。在大规模生产时，可将诺丽果大量集中的进行本发明的干燥处理，之后再利用常规的设备进行水提、有机溶剂沉淀来进行诺丽多糖的提取。
本领域的技术人员应当理解，本发明发现了影响诺丽多糖提取的关键性因素，在提取步骤中无需额外设备，可实现对诺丽多糖的高效、安全和低成本的大规模生产。
所述诺丽果为白色的完熟期果实。
所述干燥为红外干燥，优选的，所述红外干燥为将诺丽果片干燥至水分含量低于8％，干燥温度为50-70℃，优选为60℃。
所述干燥为微波干燥，优选的，所述微波干燥为将诺丽果片干燥至水分含量低于8％，干燥温度为50-90℃，优选为70℃。
作为优选方案，进行粉碎时，将所述诺丽果粉碎至20-100目，最好为60目。当将诺丽果粉碎至上述程度时，可方便后续操作。
本发明同时考察了优异的具体水提取方法，所用提取时间少，提取效率高。步骤(2)中，诺丽果与水的重量体积比为1:5-30，优选为1:8或1:20；和/或，提取时间为20-60分钟，优选30分钟。
本发明还考察了沉淀处理工艺。步骤(3)中：有机溶剂为乙醇，优选的，乙醇与步骤(2)所得提取液的体积比为3-5:1，最好为4:1；进行沉淀处理时，静置时间不小于4小时，优选于4℃下静置不小于4小时；洗涤时，洗涤次数为3-5次，优选为3次。
采用木瓜蛋白酶结合Sevage试剂对诺丽果多糖进行脱蛋白，大孔树脂法脱色后进行透析，进一步去除多糖中的杂质，得到纯度较高的诺丽果多糖。
所述脱蛋白的方法为：将粗多糖溶解于水配制成10mg/ml的溶液，向溶液中加入1.5％-2.5％质量浓度为1mg/ml的木瓜蛋白酶溶液，在55-65℃水浴中静置1.5-2h，加入Sevage试剂，充分混合均匀，在4000r/min离心15min，除去沉淀，取上清液再加入Sevage试剂，重复以上操作两次，得到的清液加4倍体积的乙醇沉淀、洗涤、抽滤后干燥；
所述脱色的方法为：将脱蛋白后的多糖配制成2mg/ml的多糖溶液，与经过预处理的的大孔树脂混合，比例为95-100ml：1g，加入恒温振荡器中振荡吸附6h，过滤得脱色多糖；
所述透析的方法为：将脱色后的多糖配制成10mg/ml水溶液，用自来水流动透析48h，再用蒸馏水透析24h，4倍体积无水乙醇沉淀、洗涤、抽滤、真空干燥得诺丽果多糖。
本发明的另外一个目的还在于提供由上述方法制备得到的诺丽果提取物。所得提取物中，诺丽多糖的含量较常规方法的高，使其具有更优的相关研发和使用的潜力。
本发明还有一个目的在于提供上述提取物在制备保健品或药品方面的应用，所述保健品或药品的剂型包括片剂、胶囊剂或颗粒剂。优选的，所述保健品或药品包括具有抗肿瘤作用的保健品或药品。容易理解的是，由于本发明所得提取物具有较高含量的诺丽多糖，因此其可用于抗肿瘤方面的保健品或者药品的制备上。
本发明的有益效果：
本发明实现了对诺丽多糖的高效、低成本和安全的提取，利于相关研究和产业的发展；本发明尤其获得了诺丽多糖含量高的提取物，利于相关保健品和药品的制备。
附图说明
图1为不同成熟度诺丽果中多糖含量的对比图。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1
诺丽果粉的制取：采摘果色为白色的完熟期诺丽果，分别红外干燥法、晒干法、冷冻干燥法和微波干燥法进行干燥，然后粉碎过60目筛。
称取诺丽果粉2.00g于100mL锥形瓶中，加入40mL蒸馏水，搅拌溶解。沸水浴加热30min，冷却后转移至100mL容量瓶，蒸馏水定容至刻度，准确移取5mL于50mL离心管中，加入20mL无水乙醇，混匀，于4℃冰箱静置4小时以上，以4000r/min离心5min，弃去上清液后，加入10mL无水乙醇再次离心、沉淀，重复三次。
将所取得的诺丽果粗多糖溶解于水配制成10mg/ml的溶液，向溶液中加入1.5％-2.5％质量浓度为1mg/ml的木瓜蛋白酶溶液，在55-65℃水浴中静置1.5-2h，加入Sevage试剂，充分混合均匀，在4000r/min离心15min，除去沉淀，取上清液再加入Sevage试剂，重复以上操作两次，得到的清液加4倍体积的乙醇沉淀、洗涤、抽滤后干燥；
将脱蛋白后的多糖配制成2mg/ml的多糖溶液，与经过预处理的的大孔树脂混合，比例为95-100ml：1g，加入恒温振荡器中振荡吸附6h，过滤得脱色多糖；
将脱色后的多糖配制成10mg/ml水溶液，用自来水流动透析48h，再用蒸馏水透析24h，4倍体积无水乙醇沉淀、洗涤、抽滤、真空干燥得诺丽果多糖。
用蒸馏水定容至50mL容量瓶中，摇匀；取2mL，加入6％苯酚溶液1mL，再加入12mL浓硫酸。摇匀后放入80℃水浴加热4min，取出冷却至室温。于波长485nm处检测吸光度值。利用已知葡萄糖标准曲线，计算出样品中多糖的含量。
不同干燥方式处理后的诺丽果多糖实验数据如表1。
表1
本发明发现，当诺丽果与水的重量体积比为1:5-30时可获得比较好的提取效果，当诺丽果与水的重量体积比为1:8时，效果略好；乙醇与所得提取液的体积比为3-5:1时，可获得较好的技术效果，当该体积比为4:1时，效果略好；进行沉淀处理时，静置时间不小于4小时，在4℃下静置时效果略好；洗涤时，洗涤次数为3-5次效果较好。
实施例2
诺丽果粉的制备：摘取不同时期(青果、白果和成熟果)，进行微波干燥并粉碎。干燥方法为将诺丽果片干燥至水分含量低于8％，干燥温度为70℃。
称取诺丽果粉5.00g于250mL锥形瓶中，加入40mL蒸馏水，搅拌溶解。沸水浴加热30min，冷却后转移至100mL容量瓶，蒸馏水定容至刻度；准确移取5mL样液于50mL离心管中，加入20mL无水乙醇，混匀，于4℃冰箱静置4小时以上，以4000r/min离心5min，弃去上清液后，加入10mL无水乙醇离心、沉淀，重复三次。
将所取得的诺丽果粗多糖溶解于水配制成10mg/ml的溶液，向溶液中加入1.5％-2.5％质量浓度为1mg/ml的木瓜蛋白酶溶液，在55-65℃水浴中静置1.5-2h，加入Sevage试剂，充分混合均匀，在4000r/min离心15min，除去沉淀，取上清液再加入Sevage试剂，重复以上操作两次，得到的清液加4倍体积的乙醇沉淀、洗涤、抽滤后干燥；
将脱蛋白后的多糖配制成2mg/ml的多糖溶液，与经过预处理的的大孔树脂混合，比例为95-100ml：1g，加入恒温振荡器中振荡吸附6h，过滤得脱色多糖；
将脱色后的多糖配制成10mg/ml水溶液，用自来水流动透析48h，再用蒸馏水透析24h，4倍体积无水乙醇沉淀、洗涤、抽滤、真空干燥得诺丽果多糖。
用蒸馏水定容至50mL容量瓶中，摇匀；取2mL，加入6％苯酚溶液1mL，再加入12mL浓硫酸。摇匀后放入80℃水浴加热4min，取出冷却至室温。于波长485nm处检测吸光度值。利用已知葡萄糖标准曲线，计算出样品中多糖的含量。结果如图1所示。
本发明发现，当微波干燥温度在50～90℃时，所得的效果与干燥温度为70℃时相差不大，为了在干燥时间和能耗取得平衡，选择70℃作为干燥温度最为适宜。
本发明发现，当利用微波干燥时，在提取时，诺丽果与水的重量体积比为1:5-30时，也可以获得比较好的技术效果，但是当诺丽果与水的重量体积比为1:20，效果略好。

Claims (12)

1.一种提高获取诺丽果中诺丽多糖的方法，其包括：
（1）对诺丽果进行干燥并粉碎；
（2）利用水进行加热提取；
（3）利用有机溶剂进行沉淀、洗涤后，进行脱蛋白、脱色和透析处理；
其特征在于，
(A)、步骤（1）中，摘取果色为白色的诺丽果；
(B)、步骤（1）中，所述干燥方法为红外干燥或微波干燥；当所述干燥为红外干燥时，其干燥方法为：将诺丽果片干燥至水分含量低于8％，干燥温度为50-70℃；当所述干燥为微波干燥时，其干燥方法为：将诺丽果片干燥至水分含量低于8％，干燥温度为50-90℃；
(C)、步骤（2）中，水提的时间为20-60分钟；
所述脱蛋白的方法为：将粗多糖溶解于水配制成10mg/ml的溶液，向溶液中加入1.5％-2 .5％质量浓度为1mg/ml的木瓜蛋白酶溶液，在55-65℃水浴中静置1 .5-2h，加入Sevage试剂，充分混合均匀，在4000r/min离心15min，除去沉淀，取上清液再加入Sevage试剂，重复以上操作两次，得到的清液加4倍体积的乙醇沉淀、洗涤、抽滤后干燥；
所述脱色的方法为：将脱蛋白后的多糖配制成2mg/ml的多糖溶液，与经过预处理的的大孔树脂混合，比例为95-100ml:1g，加入恒温振荡器中振荡吸附6h，过滤得脱色多糖；
所述透析的方法为：将脱色后的多糖配制成10mg/ml水溶液，用自来水流动透析48h，再用蒸馏水透析24h，4倍体积无水乙醇沉淀、洗涤、抽滤、真空干燥得诺丽果多糖。
2.根据权利要求1所述的提高获取诺丽果中诺丽多糖的方法，其特征在于，所述诺丽果为完熟期的白色果实。
3.根据权利要求1所述的提高获取诺丽果中诺丽多糖的方法，其特征在于，所述干燥为微波干燥，微波干燥温度为70℃。
4.根据权利要求1所述的提高获取诺丽果中诺丽多糖的方法，其特征在于，所述干燥为红外干燥，红外干燥温度为60℃。
5.根据权利要求1所述的提高获取诺丽果中诺丽多糖的方法，其特征在于，进行粉碎时，将所述诺丽果粉碎至20-100目。
6.根据权利要求5所述的提高获取诺丽果中诺丽多糖的方法，其特征在于，将所述诺丽果粉碎至60目。
7.根据权利要求1所述的提高获取诺丽果中诺丽多糖的方法，其特征在于，步骤（2）中，诺丽果与水的重量体积比为1:5-30，提取时间为30分钟。
8.根据权利要求7所述的提高获取诺丽果中诺丽多糖的方法，其特征在于，步骤（2）中，诺丽果与水的重量体积比为1:8或1:20。
9.根据权利要求1所述的提高获取诺丽果中诺丽多糖的方法，其特征在于，步骤（3）中：有机溶剂为乙醇，乙醇与步骤（2）所得提取液的体积比为3-5:1；进行沉淀处理时，静置时间不小于4小时；洗涤时，洗涤次数为3-5次。
10.根据权利要求1所述的提高获取诺丽果中诺丽多糖的方法，其特征在于，步骤（3）中乙醇与步骤（2）所得提取液的体积比为4:1；进行沉淀处理时，于4℃下静置不小于4小时；洗涤时，洗涤次数为3次。
11.权利要求1所述方法提取得到的诺丽多糖在制备保健品或药品方面的应用，其特征在于，所述保健品或药品的剂型包括片剂、胶囊剂或颗粒剂。
12.权利要求11所述方法提取得到的诺丽多糖在制备保健品或药品方面的应用，其特征在于，所述保健品或药品包括具有抗肿瘤方面的保健品或药品。
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