CN106749680A - 多肽修饰的纳米粒子及其制备方法和控制细胞中基因表达的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及纳米粒子领域，公开了一种多肽修饰的纳米粒子及其制备方法和控制细胞中基因表达的方法。所述多肽修饰的纳米粒子包括式(a)和式(b)所示化合物构成的主体结构以及修饰于主体结构上的多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述多肽通过末端半胱氨酸的巯基与式(b)所示的化合物的马来酰亚胺基团进行共价连接。本发明提供的多肽修饰的纳米粒子具有良好的光热性质，可将近红外光转化为热量进一步应用到生物领域，从而实现对深层组织细胞中基因表达的高时空分辨和远程遥控。n为15‑40的整数；
Description
技术领域
本发明涉及纳米粒子领域，具体地，涉及一种多肽修饰的纳米粒子，一种多肽修饰的纳米粒子的制备方法以及该方法制备得到的纳米粒子，一种控制细胞中基因表达的方法。
背景技术
基因转染，即将具有生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能。该技术不但革新了生物学和医学中许多基本问题的研究，也推动了诊断和治疗方面的分子技术发展。目前它已广泛应用于基因的结构和功能分析、基因表达与调控、基因治疗与转基因动物等研究。其中基因表达调控是现代分子生物学研究的中心课题之一。通过选择性表达某些特定基因，可实现对许多生物生命过程如细胞内信号通路的研究等。因此实现多模式的基因表达调控，如远程可控等，具有重要意义。
近年来，共轭聚合物纳米粒子因其良好的光物理特性和生物兼容性受到越来越广泛的关注，并应用于生物成像、化学检测、药物传输及治疗等。但由于目前共轭聚合物激发光源主要集中在可见光区，其组织渗透能力和光毒性极大限制了其在生物医学领域的广泛应用。由于近红外光对人体组织有一定的穿透性，所以科学家们都在致力于开发近红外吸收和发射的共轭聚合物材料以实现更为广泛的生物应用，如红外生物成像和近红外光激活的光学治疗。目前为止，尚未见有关近红外光激发下的共轭聚合物纳米粒子在调控基因表达方面的报道。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中没有共轭聚合物纳米粒子在红外光激发下调控基因表达的缺陷，提供了一种多肽修饰的纳米粒子及其制备方法以及一种控制细胞中基因表达的方法。采用本发明提供的多肽修饰的纳米粒子，能够实现在红外光激发下调控基因的表达，对深层组织的基因治疗提供了基础。
具体的，本发明提供了一种多肽修饰的纳米粒子，该多肽修饰的纳米粒子包括式(a)和式(b)所示化合物构成的主体结构以及修饰于主体结构上的多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述多肽通过末端半胱氨酸的巯基与式(b)所示的化合物的马来酰亚胺基团进行共价连接；
n为15-40的整数；
本发明还提供了多肽修饰的纳米粒子的制备方法，该制备方法包括：
(1)提供或制备式(a)和(b)所示的化合物；
(2)将式(a)和(b)所示的化合物进行混合自组装；
(3)在迈克尔加成反应的条件下，将步骤(2)得到的混合自组装的产物与所述多肽进行接触。
本发明还提供了上述方法制备得到的多肽修饰的纳米粒子。
本发明还提供了一种控制细胞中基因表达的方法，该方法包括：
(i)使用含有热启动子的外源基因转染细胞；
(ii)将上述本发明提供的多肽修饰的纳米粒子与步骤(i)的含有外源基因的细胞进行接触；
(iii)使用红外光照射步骤(ii)中与多肽修饰的纳米粒子接触后的细胞。
本发明的多肽修饰的纳米粒子用于近红外光调控细胞基因表达的原理可能为：纳米粒子的主体聚合物(PDPP-DBT)为缺电子吡咯并吡咯二酮与富电子的芳香杂环共聚得到，使得共轭聚合物的吸收扩展到近红外区域。同时聚合物没有荧光发射，说明非辐射衰变是其主要的能量耗散形式，即聚合物具备将近红外光转化为热的能力。由该聚合物作为主体合成的纳米粒子依然具有良好的光热响应性质。同时将该纳米粒子修饰上细胞穿透肽Tat，可增加其进入细胞的能力。细胞通过转染技术引入外源基因后，再与纳米粒子作用引入纳米粒子，此时施加近红外光源照射，可使纳米粒子产热并迅速传到胞内质粒。由于质粒构建为热启动基因表达，所以光照即产热即可引发基因的表达，从而实现近红外光调控的胞内基因表达。
本发明提供的多肽修饰的纳米粒子具有良好的光热性质，可将近红外光转化为热量进一步应用到生物领域，从而实现对深层组织细胞中基因表达的高时空分辨和远程遥控。本发明可应用在深层组织进行基因治疗，避免紫外光、磁场等对正常组织的损伤。同时本发明也会在生理活动等基础理论研究方面发挥重要作用。
本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1为实施例2中主体结构PDPP-DBT的水合半径图。
图2为实施例2中主体结构PDPP-DBT的透射电镜图。
图3为实施例2中多肽修饰的纳米粒子PDPP-DBT/Tat在多肽修饰前后表面电荷的变化图。
图4为实施例3中近红外光激发纳米粒子PDPP-DBT/Tat的升温曲线。
图5为实施例3中多肽修饰的纳米粒子PDPP-DBT/Tat与细胞的相互作用的结果图。
图6为实施例6中激光扫描共聚焦显微镜观察目的基因EGFP的表达情况图。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明提供了一种多肽修饰的纳米粒子，该纳米粒子包括式(a)和式(b)所示化合物构成(混合自组装而获得)的主体结构以及修饰于主体结构上的多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1(RKKRRQRRRC)所示，所述多肽通过末端半胱氨酸的巯基与式(b)所示的化合物的马来酰亚胺基团进行共价连接；
n为15-40的整数；
在本发明中，尽管将n控制在上述范围内即可实现本发明的目的，为了实现更好的调控基因的效果，所述n优选为20-35的整数。
在本发明中，所述多肽通过末端半胱氨酸的巯基与式(b)所示的化合物的马来酰亚胺基团进行共价连接，作为有利于进入细胞的其他结构的穿透肽。
根据本发明，在所述多肽修饰的纳米粒子中，所述式(a)所示的化合物、式(b)所示的化合物和多肽的含量可以在较大范围内变动，例如，所述式(a)所示的化合物、式(b)所示的化合物和多肽的重量比可以为1：5-15：5-15，优选为1：8-12：8-12，更优选为1：9-11：9-11。
在本发明中，所述式(a)所示的化合物的摩尔数可以根据其质量和聚合度n来确定，具体可以为本领域的常规选择，为本领域技术人员所熟知。
本发明还提供了一种多肽修饰的纳米粒子的制备方法，该方法包括：
(1)提供或制备式(a)和(b)所示的化合物；
(2)将式(a)和(b)所示的化合物进行混合自组装；
(3)在迈克尔加成反应的条件下，将步骤(2)得到的混合自组装的产物与所述多肽进行接触。
在本发明中，所述“提供式(a)和(b)所示的化合物”可以是直接称取或选取式(a)和(b)所示的化合物，也可以是制备式(a)和(b)所示的化合物。所述式(a)和(b)所示的化合物可以根据常规化学合成的方法进行合成。
根据本发明，在步骤(1)中，式(a)所示的化合物的制备步骤可以包括：在Stille偶联反应的条件下，在催化剂存在下，将式(I)和式(II)所示的化合物进行接触。
在本发明中，所述Stille偶联反应的条件可以为本领域的常规选择。例如，所述Stille偶联反应的条件包括：惰性气氛，温度可以为100-130℃，优选为105-115℃；时间可以为20-30小时，优选为20-25小时。所述惰性气氛可以为氮气或零族气体中的至少一种，优选为氮气。
在本发明中，所述Stille偶联反应所使用的催化剂没有特别的限定，可以为各种能够催化Stille偶联反应的催化剂。例如，所述催化剂可以为常规的钯催化剂，优选为Pd(PPh3)4。
在本发明中，所述式(I)和式(II)所示的化合物的用量的摩尔比可以在较大范围内变动，例如，式(I)和式(II)所示的化合物的用量摩尔比可以为1:1-1.2，优选为1:1.05-1.2。
根据本发明，在步骤(2)中，所述混合自组装的条件包括：温度可以为15-30℃，优选为20-25℃；时间可以为10-24小时，优选为12-18小时。
在本发明中，所述混合自组装优选在溶剂存在下进行，所述溶剂可以为四氢呋喃和水的混合物。更优选地，所述溶剂中四氢呋喃和水的体积比可以为1：8-10，优选为1：8.5-9.5。
在本发明中，进行混合自组装的式(a)和(b)所示的化合物的用量可以在较大范围内变动且可以根据纳米粒子中二者的重量比确定，例如，进行混合自组装的式(a)和(b)所示的化合物的用量的重量比可以为1：5-15，优选为1：8-12。
根据本发明，在步骤(3)中，所述迈克尔加成反应的条件包括：温度可以为15-30℃，优选为20-25℃；时间可以为10-24小时，优选为12-18小时；pH为7.2-7.8。
在本发明中，步骤(2)得到的混合自组装的产物与所述多肽的用量可以在较大范围内变动且可以根据纳米粒子中二者的重量比确定，例如，所述混合自组装的产物与所述多肽用量的重量比可以为1：0.8-1.2，优选为1：0.9-1.1。
本发明还提供了由上述制备方法制备得到的多肽修饰的纳米粒子。
本发明还提供了一种(在体外)控制细胞中基因表达的方法，该方法包括：
(i)使用含有热启动子的外源基因转染细胞；
(ii)将本发明提供的上述多肽修饰的纳米粒子与步骤(i)的含有外源基因的细胞进行接触；
(iii)使用红外光照射步骤(ii)中与多肽修饰的纳米粒子接触后的细胞。
根据本发明，在步骤(i)中，所述外源基因可以为各种承载目的基因的形式，例如可以为质粒。所述目标基因可以为各种需要研究的目的基因。例如可以为各种荧光蛋白、通道蛋白和酶。为了便于观察，本发明选用目的基因为EGFP(绿色荧光蛋白)。所述热启动子指的是在热激条件下被活化产生功能的启动子，具体可以为本领域的各种常规选择，例如可以为hsp70。根据本发明一种优选的实施方式，可以通过分子生物学的方法构建含有热启动子hsp70以及目的基因EGFP的质粒，该质粒受热时启动表达，产生绿色荧光蛋白。
根据本发明，在步骤(i)中，外源基因转染细胞的操作和条件可以为本领域的常规选择。所述转染可以指使用脂质体包裹外源基因如质粒形成DNA-脂质体的复合物，然后将上述复合物加入无血清细胞培养基培养的细胞中，使上述复合物进入细胞。转染的DNA的浓度可以根据需要进行选择。根据本发明一种优选的实施方式，步骤(i)包括：收集对数生长期的细胞，按合适的细胞密度接种至细胞培养皿中。培养至细胞融合度为80％时准备进行转染。将含有血清的培养基替换为无血清培养基(例如opti-MEM培养基)37℃孵育30分钟，配制质粒与脂质体(例如lipofectamine 2000)的复合物，室温孵育30分钟，然后将复合物加入至培养皿中，在37℃的培养箱中培养。
在本发明中，所使用的细胞可以为本领域各种常规使用的细胞，例如可以为Hela细胞等。
根据本发明，在步骤(ii)中，所述多肽修饰的纳米粒子与步骤(i)的含有外源基因的细胞进行接触的条件包括：温度可以为37±0.5℃，时间可以为10-15小时，优选为11-13小时。根据本发明的一种优选的实施方式，所述步骤(ii)包括：转染后的细胞培养12小时后，弃去培养基，加入含有纳米粒子的新鲜培养基，继续培养一段时间。
根据本发明，在步骤(ii)中，所述多肽修饰的纳米粒子的浓度可以在较大范围内变动，例如可以为10-30μg/mL。
根据本发明，在步骤(iii)中，使用红外光照射的条件包括：温度可以为15-30℃，时间可以为10-20分钟，光强可以为0.5-1.5W/cm2，红外波长可以为700-900nm。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述
在以下实施例中，室温指“25℃”；HeLa细胞购自中国医学科学院基础医学研究所细胞中心，货号为3111C0001CCC000011；纳米粒子的尺寸、形貌和表面电荷变化的表征在动态光散射仪(购自马尔文厂家，牌号为Nano ZS90)和透射电子显微镜上(购自Hitachi厂家，牌号为HT7700)进行；
红外光激发的温度变化采用热成像仪(购自Fluke厂家，牌号为Ti400)进行检测；
荧光成像在激光扫描共聚焦显微镜(日本奥林巴斯Olympus，型号FV1000-IX81)上进行；
式(I)所示的化合物2,6-二(三甲基锡)-4,8-二(5-(2-乙基己基)噻吩基-2-)-苯并二噻吩购自TCI厂家，牌号为B4437；式(II)所示的化合物3,6-双(5-溴-2-噻吩基)-2,5-双(2-己基癸基)吡咯并[3,4-c]吡咯-1,4-二酮购自韶远科技(上海)有限公司厂家，牌号为SY033917；式(b)所示的化合物购自Avanti Polar Lipids厂家，牌号为880126。
100kDa超滤管购自Merck Millipore厂家，牌号为UFC810096。
其余的化学和生物试剂均可以通过商购获得。
实施例1
本实施例用于说明式(a)所示化合物的制备方法
90mg的2,6-二(三甲基锡)-4,8-二(5-(2-乙基己基)噻吩基-2-)-苯并二噻吩和100mg的3,6-双(5-溴-2-噻吩基)-2,5-双(2-己基癸基)吡咯并[3,4-c]吡咯-1,4-二酮加入两口烧瓶中，并加入10mL甲苯溶解单体，通氮气20分钟以除去溶剂中的氧气。然后加入催化剂Pd(PPh3)4(20mg)到上述脱气的反应液中并通氮气10分钟。反应升温至110℃并在氮气保护下剧烈搅拌反应24小时。待冷却至室温后，所得聚合物采用50mL甲醇沉淀。离心收集的沉淀物分别用甲醇、正己烷、氯仿进行索氏提取。所得聚合物继续采用甲醇/水进行进一步纯化。真空干燥得到暗蓝色固体(120mg,81％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ(ppm)9.38-8.72(b,2H),7.58-6.46(bm,4H),4.32-3.23(m,4H),2.51-0.49(bm,78H).GPC:Mn＝52.8kDa,PDI＝2.9。结合红外和质谱分析可知，所得聚合物的结构如式(a)所示且n＝30。
实施例2
本实施例用于说明多肽修饰的纳米粒子的制备方法
(1)式(a)和式(b)所示化合物构成的主体结构的制备
将0.5mg实施例1制备得到的式(a)所示化合物与5mg式(b)所示化合物溶解在1mL的THF中并利用超声使其完全溶解，然后将上述THF溶液滴入9mL的超纯水中并进行超声分散。超声分散五分钟后继续在通风橱中搅拌过夜得到式(a)和式(b)所示化合物构成的主体结构，然后利用0.22μm滤膜过滤，在滤液中得到上述目标主体结构PDPP-DBT。
(2)多肽修饰
将上述得到的滤液中添加5mg的多肽(多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)，在pH＝7.4的PBS缓冲液中室温反应4小时。待反应完成后，采用100kDa超滤管进行超滤离心分离未反应的多肽分子。得到多肽修饰的纳米粒子PDPP-DBT/Tat。多肽修饰的纳米粒子置于4℃保存以备后续使用。
实施例3
本实施例用于说明多肽修饰的纳米粒子PDPP-DBT/Tat的表征
(1)采用动态光散射仪和透射电子显微镜对得到的主体结构PDPP-DBT的结构进行表征。将上述多肽修饰的纳米粒子PDPP-DBT/Tat使用动态光散射仪表征表面电荷变化。
图1为主体结构PDPP-DBT的水合半径图。从图中可以看出，纳米粒子PDPP-DBT分布均一，水合半径在100nm左右。
图2为主体结构PDPP-DBT的透射电镜图。从图中可以看出，纳米粒子PDPP-DBT呈分散均匀的球状粒子。
图3为多肽修饰的纳米粒子PDPP-DBT/Tat在多肽修饰前后表面电荷的变化图。从图中可以看出，修饰了多肽后，纳米粒子的表面电荷由原来的负性变为正性，说明修饰成功。
(2)采用热成像仪检测纳米粒子PDPP-DBT/Tat的光热性质
配制一系列浓度(0，3，6，9，12，15μg/mL)的PDPP-DBT/Tat纳米粒子溶液置于96孔板中，分别用808nm激光照射5分钟，光强为1W/cm2。近红外光激发的温度变化采用热成像仪(准确度为±0.1℃)检测，根据温度变化绘制升温曲线，如图4所示。从图4中可以看出，随照射时间的延长，溶液温度逐渐升高，且纳米粒子浓度越大，能到达的温度越高。说明纳米粒子能将吸收的光转换为热量，即具有良好的光热转换能力。
(3)多肽修饰的纳米粒子PDPP-DBT/Tat与细胞的相互作用
将HeLa细胞在含10％牛血清的DMEM培养基放入37℃含5％二氧化碳的恒温培养箱培养。细胞培养2天待细胞达到80％左右的融合时，用0.25％的胰酶消化一传三传代培养，使用对数生长期细胞用于接下来的生物实验。
由于纳米粒子PDPP-DBT/Tat没有荧光发射，所以为了进行后续成像实验，可在该纳米粒子制备时添加荧光指示剂，本发明中采用了蓝光发射的疏水共轭聚合物(简称PFP，n1为12-30的整数，结构如下所示)作为荧光指示剂与PDPP-DBT掺杂，PFP仅仅起到荧光指示的作用而无其他。该掺杂纳米粒子的制备方法同实施例2中(1)所述，只是PDPP-DBT用量减半，另一半用PFP补足，即各取0.25mg，其它条件不变。之后进行多肽修饰同实施例2中(2)。
收集对数生长期的细胞，以每孔1.0×105个细胞接种于含石英玻片的培养皿中并保证每孔含有1mL培养基。培养12h后，弃去培养基，加入含有PFP和纳米粒子PDPP-DBT/Tat的混合物的新鲜培养基，纳米粒子浓度为10μg/mL。对照组为未使用多肽进行修饰的纳米粒子(即式(a)和式(b)所示化合物构成的主体结构)，其他操作同实验组。培养12h后弃去上清培养基，并用PBS溶液洗2-3次，加入新鲜培养基。然后用激光扫描共聚焦显微镜观察，结果如图5所示。通过软件(Image J)统计分析可得对照组细胞的平均荧光强度为446881，而实验组的数值为1975442。从图5中可以看出，实验组的蓝色荧光强于对照组，说明多肽修饰后的纳米粒子进入细胞情况明显多于未修饰的纳米粒子，增加了粒子进入细胞的能力。
实施例4
本实施例用于说明含有热启动子的外源基因转染细胞的方法
构建含有热启动子hsp70以及目的基因EGFP的质粒DNA(简称pCDNA3.1-hsp70-EGFP，长沙赢润生物技术有限公司)，其特征为热启动下游基因表达。
转染前一天，收集对数生长期的HeLa细胞，以每孔1.0×105个细胞接种含石英玻片的培养皿内并保证每孔含有1mL培养基。转染时细胞融合度达到80％以上；预先采用无血清培养基预孵育细胞30分钟并配制DNA-脂质体的复合物(DNA：脂质体的比例为1：1.5)。室温孵育30min后，将上述0.5mL含有复合物的新鲜培养基溶液加入6孔板的细胞悬液中，DNA终浓度为2μg/mL。在培养箱中培养12h后，弃去上清培养基，换为正常培养基。
实施例5
本实施例用于说明本发明的控制细胞中基因表达的方法
(1)多肽修饰的纳米粒子PDPP-DBT/Tat与转染后细胞的作用
转染后的细胞培养12h后，弃去培养基，加入含有多肽修饰的纳米粒子PDPP-DBT/Tat的新鲜培养基，纳米粒子的浓度为20μg/mL。没有加纳米粒子的对照组操作同上述。作用12h后弃去上清培养基，并用PBS溶液洗2-3次，加入新鲜培养基。
(2)红外光照射细胞
用808nm激光光源照射步骤(1)中实验组和对照组细胞15分钟，功率为1W/cm2。激光照射后继续培养24h。步骤(2)中的对照组为不进行光照，其余操作同实验组。
(3)细胞成像
将与纳米粒子作用后的并光照的细胞(实验组)、与纳米粒子作用后未光照的细胞(对照组)、未与纳米粒子作用后光照的细胞(对照组)以及未与纳米粒子作用也未光照的细胞(空白对照组)培养24小时候后，换上新鲜培养基，进行激光扫描共聚焦显微镜的细胞成像实验，观察目的基因EGFP的表达情况。如图6所示。
从图6中可以看出，只有实验组细胞观察到绿色荧光蛋白，说明只有纳米粒子在近红外光的照射下产热才能启动EGFP基因的表达，单独的纳米粒子和单独近红外光都不能使转染细胞的基因得到表达。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国科学院化学研究所
<120> 多肽修饰的纳米粒子及其制备方法和控制细胞中基因表达的方法
<130> I43464ICAS
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> The sequence is synthesized
<400> 1
Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Cys
1 5 10
Claims (10)
1.一种多肽修饰的纳米粒子，其特征在于，该多肽修饰的纳米粒子包括式(a)和式(b)所示化合物构成的主体结构以及修饰于主体结构上的多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQID NO:1所示，所述多肽通过末端半胱氨酸的巯基与式(b)所示的化合物的马来酰亚胺基团进行共价连接；
n为15-40的整数；
2.根据权利要求1所述的多肽修饰的纳米粒子，其中，n为20-35的整数；
优选地，所述式(a)所示的化合物、式(b)所示的化合物和多肽的重量比为1：5-15：5-15。
3.一种多肽修饰的纳米粒子的制备方法，其特征在于，该制备方法包括：
(1)提供或制备式(a)和(b)所示的化合物；
(2)将式(a)和(b)所示的化合物进行混合自组装；
(3)在迈克尔加成反应的条件下，将步骤(2)得到的混合自组装的产物与所述多肽进行接触。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其中，在步骤(1)中，式(a)所示的化合物的制备步骤包括：在Stille偶联反应的条件下，在催化剂存在下，将式(I)和式(II)所示的化合物进行接触；
优选地，所述Stille偶联反应的条件包括：惰性气氛，温度为100-130℃，时间为20-30小时；所述催化剂为Pd(PPh3)4；
优选地，所述式(I)和式(II)所示的化合物的用量的重量比为1:1-1.2。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其中，在步骤(2)中，所述混合自组装的条件包括：温度为15-30℃，时间为10-24小时；
优选地，所述混合自组装在溶剂存在下进行，更优选地，所述溶剂为四氢呋喃和水的混合物；进一步优选地，所述溶剂中四氢呋喃和水的体积比为1：8-10。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其中，在步骤(3)中，所述迈克尔加成反应的条件包括：温度为15-30℃，时间为3-5小时，pH为7.2-7.8。
7.由权利要求3-6中任意一项所述的制备方法制备得到的多肽修饰的纳米粒子。
8.一种控制细胞中基因表达的方法，其特征在于，该方法包括：
(i)使用含有热启动子的外源基因转染细胞；
(ii)将权利要求1-2和7中任意一项所述的多肽修饰的纳米粒子与步骤(i)的含有外源基因的细胞进行接触；
(iii)使用红外光照射步骤(ii)中与多肽修饰的纳米粒子接触后的细胞。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，在步骤(ii)中，所述多肽修饰的纳米粒子与步骤(i)的含有外源基因的细胞进行接触的条件包括：温度为37±0.5℃，时间为10-15小时；
优选地，在步骤(ii)中，所述多肽修饰的纳米粒子的浓度为10-30μg/mL。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其中，在步骤(iii)中，使用红外光照射的条件包括：温度为15-30℃，时间为10-20分钟，光强为0.5-1.5W/cm2，红外波长为700-900nm。
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| CN103705465A (zh) * | 2012-10-09 | 2014-04-09 | 复旦大学 | 一种微酸环境靶向多肽修饰的肿瘤靶向纳米给药系统及其制备方法 |
| CN106085416A (zh) * | 2016-06-02 | 2016-11-09 | 华南理工大学 | 一种聚集诱导发光纳米粒子及其制备方法和应用 |
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2017
- 2017-02-10 CN CN201710073590.4A patent/CN106749680A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103705465A (zh) * | 2012-10-09 | 2014-04-09 | 复旦大学 | 一种微酸环境靶向多肽修饰的肿瘤靶向纳米给药系统及其制备方法 |
| CN106085416A (zh) * | 2016-06-02 | 2016-11-09 | 华南理工大学 | 一种聚集诱导发光纳米粒子及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (7)
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108567765A (zh) * | 2018-06-14 | 2018-09-25 | 中国科学院宁波材料技术与工程研究所 | 一种基于天然多糖的肿瘤微环境双重响应性药物控释微胶囊及其应用 |
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