CN106728210A - 一种广陈皮多甲氧基黄酮有效部位及在治疗高脂血症中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种广陈皮多甲氧基黄酮有效部位及在治疗高脂血症中的应用，该有效部位由如下步骤制备而成：步骤S1，提取：将广陈皮粉碎后用醇水溶液提取，浓缩；步骤S2，除杂：将步骤S1所得浓缩液上样于大孔树脂，用体积百分浓度40‑45％的乙醇水溶液洗脱除杂，所述大孔树脂型号为D101型；步骤S3，洗脱：用体积百分浓度90％以上的乙醇水溶液洗脱大孔树脂，收集洗脱液，浓缩即得所述广陈皮多甲氧基黄酮有效部位。本发明提供的广陈皮多甲氧基黄酮有效部位可以有效降低高血脂模型小鼠的血脂水平，且没有毒性，安全有效，可以用于预防或治疗高脂血症。

Description

一种广陈皮多甲氧基黄酮有效部位及在治疗高脂血症中的 应用

技术领域

本发明属于医药领域，涉及生药有效部位的制备和应用，具体涉及一种广陈皮多甲氧基黄酮有效部位及在治疗高脂血症中的应用。

背景技术

高脂血症是一种脂质紊乱导致机体代谢失衡的慢性疾病，常表现为血清总胆固醇或甘油三酯水平过高和高密度脂蛋白过低等。高脂血症与许多慢性疾病如脂肪肝、糖尿病、动脉粥样硬化、高血压及心血管疾病的形成有密切的联系。近年来，随着生活水平的提高、饮食结构的改变，患高脂血症的人群不断增加。目前治疗高脂血症的药物主要有他汀类、烟酸类、贝特类、胆酸整合剂等，其中他汀类药物是应用最广泛的降脂药物。尽管他汀类药物能够有效降低患心血管疾病的风险，但是会引起肝酶增高、肌痛、消化道不适等副作用。

陈皮是不可多得的药食同源、食养俱佳的著名地方特产，它是广东道地药材，乃广东三宝(陈皮、老姜、禾秆草)之首和广东十大中药材之一。陈皮为芸香科植物橘及其栽培变种的干燥成熟果皮。采摘成熟果实，剥取果皮，晒干或低温干燥。药材广陈皮主产于广东新会。

陈皮主要含有黄酮类、挥发油、生物碱、肌醇、微量元素等物质，其中黄酮和挥发油是研究最多的活性成分。黄酮类化合物主要有橙皮苷、新橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、蜜桔黄酮等，其中橙皮苷是陈皮中含量最高的黄酮类物质。吴宏伟对陈皮的黄酮类化合物进行分离，除川陈皮素外，还分离出3,5,6,7,8,3’,4’-七甲氧基黄酮和3-羟基-5,6,7,8,3’,4’-六甲氧基黄酮。郑国栋采用传统分离纯化方法从广陈皮中分离得到个黄酮类化合物，分别为橙皮苷、5-羟基-6,7,8,3’,4’-五甲氧基黄酮、橘皮素、川陈皮素、橙皮素、新橙皮苷和柚皮苷；并采用高速逆流色谱法制备分离得到3,5,6,7,8,3’,4’-七甲氧基黄酮和5,7,8,4’-四甲氧基黄酮这两种常规柱层析未能分离得到的黄酮类化合物(郑国栋等，高速逆流色谱分离制备广陈皮中多甲氧基黄酮类成分的研究，中草药第41卷第1期2010年1月)。

上述3,5,6,7,8,3’,4’-七甲氧基黄酮、3-羟基-5,6,7,8,3’,4’-六甲氧基黄酮、5-羟基-6,7,8,3’,4’-五甲氧基黄酮等多种化合物都属于多甲氧基黄酮类化合物。多甲氧基黄酮(PMFs)是苯基色原酮结构上的3,4,5,6,7,8,2’,3’,4’,5’,6’等位置处连有4个或4个以上甲氧基的黄酮类化合物。现代药理研究证实，PMFs具有抗病原微生物、抗诱变、抗血小板聚集、抗癌、抗炎、保护胃黏膜、神经保护、预防心脑血管疾病等方面的药理活性(宋家玲等，多甲氧基黄酮类化合物研究进展，中国实验方剂学杂志第18卷第17期2012年9月)。

现有技术未有广陈皮多甲氧基黄酮有效部位用于治疗高脂血症的报道。

发明内容

本发明第一目的在于提供一种用于治疗高脂血症的广陈皮多甲氧基黄酮有效部位；本发明第二目的在于提供该广陈皮多甲氧基黄酮有效部位的定性分析方法；本发明第三目的在于提供该广陈皮多甲氧基黄酮有效部位的定量分析方法。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

一种广陈皮多甲氧基黄酮有效部位，由如下步骤制备而成：

步骤S1，提取：将广陈皮粉碎后用醇水溶液提取，浓缩；

步骤S2，除杂：将步骤S1所得浓缩液上样于大孔树脂，用体积百分浓度40-45％的乙醇水溶液洗脱除杂，所述大孔树脂型号为D101型；

步骤S3，洗脱：用体积百分浓度90％以上的乙醇水溶液洗脱大孔树脂，收集洗脱液，浓缩即得所述广陈皮多甲氧基黄酮有效部位。

优选地，步骤S1所述醇水溶液为体积百分浓度90％以上的乙醇水溶液。

更优选地，步骤S1将广陈皮粉碎后用体积百分浓度95％的乙醇水溶液提取一至多次，合并提取液，浓缩。

优选地，步骤S2用体积百分浓度40-45％的乙醇水溶液洗脱8-12个柱体积除杂。

优选地，步骤S3用体积百分浓度90％以上的乙醇水溶液洗脱6-10个柱体积。

一种液质定性分析上述广陈皮多甲氧基黄酮有效部位的方法，参数如下：

HPLC色谱柱：Waters Symmetry C18analytical column(2.1mm×100mm,3.5μm)；

HPLC流动相：A相为0.1％(v/v)甲酸水溶液，B相为0.1％(v/v)甲酸乙腈溶液；

HPLC流速：0.3mL/min；

HPLC梯度洗脱程序：0-9min，10-23％B；9-13min,23％B；13-28min，23-40％B；28-32min,40-50％B；32-37min,50-100％B；

质谱离子源：ESI离子源，正离子模式；

质谱检测范围：m/z 200-1000Da；

质谱参数：干燥气温度，350℃；干燥气N₂流速，10L/min；鞘气温度，350℃；鞘气He流速，11L/min；雾化器压力，35psi；毛细管电压，3500V；一级裂解电压120V。

一种HPLC定量分析上述广陈皮多甲氧基黄酮有效部位中多甲氧基黄酮的方法，包括：

色谱柱：Aglient Zorbax-Extend C18柱(4.5×250mm，5μm)

流动相：A相为0.1％(v/v)甲酸水溶液；B相为乙腈；

梯度洗脱程序：0-3min，25-50％B；3-7min，50-58％B；7-11min，58-58％B；11-16min，58-70％B；16-18min,70-76％B；

流速：1mL/min；检测波长：283nm和330nm。

上述广陈皮多甲氧基黄酮有效部位在治疗高脂血症中的应用。

本发明对现有技术的贡献：

本发明提供的广陈皮多甲氧基黄酮有效部位可以有效降低高血脂模型小鼠的血脂水平，长期毒性试验证明其对小鼠无明显毒性，安全有效，可以用于预防或治疗高脂血症。

附图说明

图1为实施例1所得有效部位在HPLC-QTOF-MS正离子模式检测下的总离子流图；

图2为小鼠血浆中总胆固醇(TC)测定结果；

图3为小鼠血浆中甘油三酯(TG)测定结果；

图4为小鼠血浆中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定结果；

图5为小鼠血浆中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定结果；

图6为大鼠体重在0-12周的动态变化。

具体实施方式

下面结合实施例具体介绍本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。实验中未详述的试验操作均为本领域技术人员所熟知的常规试验操作。

实施例1广陈皮多甲氧基黄酮有效部位的制备

由如下步骤制备而成：

步骤S1，提取：将广陈皮药材粉碎至粗颗粒，按固液比1:4的比例，用体积百分含量为95％的乙醇水溶液加热回流提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏；

步骤S2，除杂：将步骤S1所得浸膏用体积百分含量为25％的乙醇水溶液溶解后，过滤取滤液上样于D101大孔树脂，然后用体积百分浓度43％的乙醇水溶液洗脱10个柱体积除杂；

步骤S3，洗脱：除杂后用体积百分浓度为95％的乙醇水溶液洗脱8个柱体积，收集洗脱液，浓缩即得所述广陈皮多甲氧基黄酮有效部位。

实施例2广陈皮多甲氧基黄酮有效部位的制备

由如下步骤制备而成：

步骤S1，提取：将广陈皮药材粉碎至粗颗粒，按固液比1:4的比例，用体积百分含量为90％的乙醇水溶液加热回流提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏；

步骤S2，除杂：将步骤S1所得浸膏用体积百分含量为20％的乙醇水溶液溶解后，过滤取滤液上样于D101大孔树脂，然后用体积百分浓度40％的乙醇水溶液洗脱12个柱体积除杂；

步骤S3，洗脱：除杂后用体积百分浓度为90％的乙醇水溶液洗脱12个柱体积，收集洗脱液，浓缩即得所述广陈皮多甲氧基黄酮有效部位。

实施例3广陈皮多甲氧基黄酮有效部位的制备

由如下步骤制备而成：

步骤S1，提取：将广陈皮药材粉碎至粗颗粒，按固液比1:4的比例，用无水乙醇加热回流提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏；

步骤S2，除杂：将步骤S1所得浸膏用体积百分含量为30％的乙醇水溶液溶解后，过滤取滤液上样于D101大孔树脂，然后用体积百分浓度45％的乙醇水溶液洗脱8个柱体积除杂；

步骤S3，洗脱：除杂后用无水乙醇洗脱6个柱体积，收集洗脱液，浓缩即得所述广陈皮多甲氧基黄酮有效部位。

实施例4广陈皮多甲氧基黄酮有效部位的制备

由如下步骤制备而成：

步骤S1，提取：将广陈皮药材粉碎至粗颗粒，按固液比1:4的比例，用体积百分含量为95％的乙醇水溶液加热回流提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏；

步骤S2，除杂：将步骤S1所得浸膏用体积百分含量为25％的乙醇水溶液溶解后，过滤取滤液上样于D101大孔树脂，然后用体积百分浓度43％的乙醇水溶液洗脱10个柱体积除杂；

步骤S3，洗脱：除杂后用体积百分浓度为90％的乙醇水溶液洗脱8个柱体积，收集洗脱液，浓缩即得所述广陈皮多甲氧基黄酮有效部位。

实施例5广陈皮多甲氧基黄酮有效部位的制备

由如下步骤制备而成：

步骤S1，提取：将广陈皮药材粉碎至粗颗粒，按固液比1:4的比例，用体积百分含量为95％的乙醇水溶液加热回流提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏；

步骤S2，除杂：将步骤S1所得浸膏用体积百分含量为25％的乙醇水溶液溶解后，过滤取滤液上样于D101大孔树脂，然后用体积百分浓度43％的乙醇水溶液洗脱10个柱体积除杂；

步骤S3，洗脱：除杂后用无水乙醇洗脱8个柱体积，收集洗脱液，浓缩即得所述广陈皮多甲氧基黄酮有效部位。

实施例6广陈皮多甲氧基黄酮部位的制备(对比实施例)

由如下步骤制备而成：

步骤S1，提取：将广陈皮药材粉碎至粗颗粒，按固液比1:4的比例，用体积百分含量为95％的乙醇水溶液加热回流提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏；

步骤S2，除杂：将步骤S1所得浸膏用体积百分含量为25％的乙醇水溶液溶解后，过滤取滤液上样于D101大孔树脂，然后用体积百分浓度43％的乙醇水溶液洗脱10个柱体积除杂；

步骤S3，洗脱：除杂后用体积百分浓度为80％的乙醇水溶液洗脱8个柱体积，收集洗脱液，浓缩得广陈皮多甲氧基黄酮有效部位。

实施例7多甲氧基黄酮有效部位的定性和定量分析

为明确广陈皮中多甲氧基黄酮有效部位的化学成分，我们采用HPLC-QTOF/MS技术对其进行定性表征。色谱分析采用Agilent 1290高效液相串联Agilent 6530(ESI离子源)Q-TOF质谱(Santa Clara,CA,USA)。色谱柱为Waters Symmetry C18analytical column(2.1mm×100mm,3.5μm；Waters,Wexford,Ireland)。流速0.3mL/min。流动相系统A为0.1％(v/v)甲酸水溶液，流动相B为0.1％(v/v)甲酸乙腈溶液。梯度洗脱程序：0-9min，10-23％B；9-13min,23％B；13-28min，23-40％B；28-32min,40-50％B；32-37min,50-100％B。35min后流入废液。所有样品均在正离子模式下检测，质谱的检测范围为m/z 200-1000Da。质谱的参数为：干燥气温度，350℃；干燥气(N2)流速，10L/min；鞘气温度，350℃；鞘气(He)流速，11L/min；雾化器压力，35psi；毛细管电压，3500V；一级裂解电压120V。按照设定的HPLC-QTOF-MS分析条件，使用自动二级扫描模式获得化合物的MS/MS数据，碰撞能力设置为30V和40V。总离子流图见图1。

实施例1广陈皮中多甲氧基黄酮有效部位的化学成分鉴定结果如下表：

上表中，*代表该化合物经标准品比对。

根据定性结果，以及色谱峰的高度，发现实施例1制备的广陈皮多甲氧基黄酮有效部位中主要含有如下8种多甲氧基黄酮：

用HPLC法对实施例1多甲氧基黄酮有效部位中这8种多甲氧基黄酮进行定量分析，色谱分离采用Aglient Zorbax-Extend C18柱(4.5×250mm，5μm)；流动相：0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B)；梯度洗脱程序：0-3min，25-50％B；3-7min，50-58％B；7-11min，58-58％B；11-16min，58-70％B；16-18min,70-76％B；柱后运行时间8min回到起始梯度；流速：1mL/min；检测波长：283nm，330nm；进样量：4μL。

8种多甲氧基黄酮的含量以及占有效部位的总含量如下表所示：

实施例2-6制备的广陈皮多甲氧基黄酮有效部位也主要含有该8种多甲氧基黄酮，该8种多甲氧基黄酮在实施例1-6有效部位中的总含量如下表所示：

由文献(大孔树脂分离纯化陈皮中多甲氧基黄酮类化合物，天然产物研究与开发2014年26卷1562-1567页)可知，使用D101大孔树脂富集陈皮中多甲氧基黄酮类化合物时，80％乙醇洗脱6个柱体积就已经将多甲氧基黄酮类化合物洗脱完全。上述实施例中，实施例6使用80％乙醇洗脱8个柱体积时，洗脱物中多甲氧基黄酮类化合物的含量最高，实施例4、1、5分别使用90％、95％和100％乙醇洗脱8个柱体积，洗脱物中多甲氧基黄酮类化合物的含量依次降低，这是因为随着乙醇比例的升高，洗脱液的洗脱强度增大，洗脱物中比多甲氧基黄酮类化合物极性小的杂质陆续从D101大孔树脂上洗脱下来。

实施例8多甲氧基黄酮有效部位降血脂药效学实验

1、动物模型的建立

C57BL/6J雄性小鼠，体重18-20g，6周龄。小鼠适应一周后随机分为7组：正常饲料组(Chow)，高脂饮食组(High fat diet，HFD)，高脂饮食+实施例1低剂量组(HFD-LD-1)，高脂饮食+实施例1高剂量组(HFD-HD-1)，高脂饮食+实施例6低剂量组(HFD-LD-6)和高脂饮食+实施例6高剂量组(HFD-HD-6)，高脂饮食+阳性药洛伐他汀组(HFD-LOV)。

高脂饲料配方为：1.25％胆固醇、20％猪油、5％蔗糖、0.5％胆酸。

2、给药剂量和给药方式

实施例1和实施例6所得多甲氧基黄酮部位分别用0.5％CMC-Na溶液配置成混悬液。HFD-LD-1组灌胃给予60mg/kg的实施例1所得PMFs部位；HFD-HD-1组灌胃给予120mg/kg的实施例1所得PMFs部位；HFD-LD-6组灌胃给予60mg/kg的实施例6所得PMFs部位；HFD-HD-6组灌胃给予120mg/kg的实施例6所得PMFs部位；HFD-LOV组灌胃给予30mg/kg的洛伐他汀；Chow组和HFD组给予同体积的0.5％CMC-Na空白溶剂。以上各组动物每日上午灌胃给药一次，给药时间持续八周。

3、血浆制备

实验结束前，小鼠禁食12h，期间自由饮水。眼眦静脉取血，放入离心管中，4000rpm，4℃，离心10min，上清-80℃保存。

4、血浆生化指标测定

血浆甘油三酯、总胆固醇、血浆低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇指标委托江苏省中西医结合医院测定。仪器设备名称为Cobas 8000全自动生化分析仪。

5、动物血浆生化指标测定结果

总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血浆高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定结果如下表和图2-5所示。测定结果可以发现：HFD诱导8周后，模型组与空白组相比较，TG、TC、LDL-C显著增加(P＜0.001)，说明小鼠高脂血症模型造模成功；与模型组相比，HFD-LD-1、HFD-HD-1、HFD-LD-6、HFD-HD-6组小鼠血浆中TG、TC、LDL-C水平均明显降低，HDL-C升高。以上结果表明实施例1和实施例6制备的广陈皮的多甲氧基黄酮部位具有显著的降血脂作用，能预防或治疗高脂血症，且具有量效差异性。

实施例6多甲氧基黄酮部位降血脂效果略优于实施例1和阳性药洛伐他汀。

实施例2-5制备的多甲氧基黄酮有效部位与实施例1的降血脂效果基本一致。

实施例9多甲氧基黄酮有效部位对大鼠的长期毒性实验

1、实验动物

清洁级Wistar大鼠，雌雄各半，体重120±20g，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司(中国，上海)，购买后进行适应性饲养一周。

2、给药剂量和给药方式

健康Wistar大鼠分笼饲养，适应性饲养一周后，按性别随机分成5组：正常对照组(BL)15只，每天以同体积0.5％CMC-Na空白溶剂灌胃；给药LD-1组20只，每天以150mg/kg实施例1制备的PMFs部位灌胃；给药HD-1组20只，每天以300mg/kg实施例1制备的PMFs部位灌胃；给药LD-6组20只，每天以150mg/kg实施例6制备的PMFs部位灌胃；给药HD-6组20只，每天以300mg/kg实施例6制备的PMFs部位灌胃。

以上各组每日上午灌胃给药一次，连续用药84d。

3、检测项目

试验期间密切观察大鼠给药前后的行为情况，每周记录动物体重变化；每周计算动物的日均摄入量；给药至84d时，空腹16h腹主动脉采血，观察各组动物血液学指标及血液生化指标；处死动物后对动物各脏器进行病理组织学检，同时主要脏器按动物体重计算脏器系数。

4、实验结果

4.1对大鼠一般情况的影响

与空白组相比，实施例1低剂量和高剂量组对动物行为活动、饮食、大小便、精神状态等均无明显差异；实施例6低剂量和高剂量组在84d用药期间动物出现怠动，流涎及轻微稀便等现象，试验期间无大鼠出现异常死亡。

HD-6组与空白组在体重增长中有统计学差异P>0.05，见图6。

4.2对大鼠血液学指标的影响

由下表可以看出，与空白组相比，实施例1低剂量和高剂量组给药84d，各组血液生化学指标外周血象未见明显异常；实施例6低剂量和高剂量组红细胞计数未出现显著性差异，但白细胞、淋巴细胞计数显著增加，网织红细胞、血红蛋白，血小板计数显著降低。

4.3对大鼠血液生化指标的影响

由下表可知，与空白组相比，实施例1低剂量和高剂量组给药84d，血液生化学指标未见明显异常；实施例6低剂量和高剂量组总蛋白升高，白蛋白降低，总胆红素、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、尿素、血肌酐均升高，提示有肝肾毒性，其余血液指标未见异常。

4.4对大鼠脏器指数的影响

与空白组相比，实施例1低剂量和高剂量组给药84d，对大鼠脏器指数的影响没有统计学差异。实施例6低剂量和高剂量组的肝脏指数、脾脏指数、肾脏指数均升高。

长期毒性实验发现，实施例1制备的多甲氧基黄酮部位比实施例6制备的多甲氧基黄酮部位具有更高的安全性。实施例1低剂量和高剂量给药84d对大鼠体重、外周血象、血液生化指标及各脏器指数的影响并未出现统计学差异，对大鼠的正常生长、发育无不利影响，未出现明显蓄积性毒性反应；而实施例6高剂量会导致动物精神状态欠佳，毛色、行为活动、粪便性状等出现异常，网织红细胞计数下降提示可能产生造血功能障碍；白细胞、淋巴细胞计数增加等可能有炎症反应。在血液生化指标中，实施例6低剂量和高剂量组ALT、AST及肝脏指数均明显升高，可能会对肝脏造成损伤；尿素、血肌酐也出现升高，提示可能有肾脏毒性。从主要脏器指数来看，实施例6低剂量和高剂量组肝脏、脾脏、肾脏肿大增生，提示可能会导致大鼠体内出现炎症或器官代偿性增生、肥大。以上结果说明实施例1制备的多甲氧基黄酮部位比实施例6制备的多甲氧基黄酮部位具有更高的安全性。实施例2-5制备的多甲氧基黄酮部位与实施例1制备的多甲氧基黄酮部位具有相同的安全性。

上述实施例仅用于解释本发明技术方案，但本发明要求保护的范围不局限于上述实施例。

Claims (8)

1.一种广陈皮多甲氧基黄酮有效部位，其特征在于，由如下步骤制备而成：

步骤S1，提取：将广陈皮粉碎后用醇水溶液提取，浓缩；

步骤S2，除杂：将步骤S1所得浓缩液上样于大孔树脂，用体积百分浓度40-45％的乙醇水溶液洗脱除杂，所述大孔树脂型号为D101型；

步骤S3，洗脱：用体积百分浓度90％以上的乙醇水溶液洗脱大孔树脂，收集洗脱液，浓缩即得所述广陈皮多甲氧基黄酮有效部位。

2.根据权利要求1所述的广陈皮多甲氧基黄酮有效部位，其特征在于：步骤S1所述醇水溶液为体积百分浓度90％以上的乙醇水溶液。

3.根据权利要求2所述的广陈皮多甲氧基黄酮有效部位，其特征在于：步骤S1将广陈皮粉碎后用体积百分浓度95％的乙醇水溶液提取一至多次，合并提取液，浓缩。

4.根据权利要求1所述的广陈皮多甲氧基黄酮有效部位，其特征在于：步骤S2用体积百分浓度40-45％的乙醇水溶液洗脱8-12个柱体积除杂。

5.根据权利要求1所述的广陈皮多甲氧基黄酮有效部位，其特征在于：步骤S3用体积百分浓度90％以上的乙醇水溶液洗脱6-10个柱体积。

6.权利要求1-5任一所述广陈皮多甲氧基黄酮有效部位的液质分析方法，其特征在于：

HPLC色谱柱：Waters Symmetry C18analytical column(2.1mm×100mm,3.5μm)；

HPLC流动相：A相为0.1％(v/v)甲酸水溶液，B相为0.1％(v/v)甲酸乙腈溶液；

HPLC流速：0.3mL/min；

HPLC梯度洗脱程序：0-9min，10-23％B；9-13min,23％B；13-28min，23-40％B；28-32min,40-50％B；32-37min,50-100％B；

质谱离子源：ESI离子源，正离子模式；

质谱检测范围：m/z 200-1000Da；

质谱参数：干燥气温度，350℃；干燥气N₂流速，10L/min；鞘气温度，350℃；鞘气He流速，11L/min；雾化器压力，35psi；毛细管电压，3500V；一级裂解电压120V。

7.权利要求1-5任一所述广陈皮多甲氧基黄酮有效部位的HPLC定量方法，其特征在于：

色谱柱：Aglient Zorbax-Extend C18柱(4.5×250mm，5μm)

流动相：A相为0.1％(v/v)甲酸水溶液；B相为乙腈；

梯度洗脱程序：0-3min，25-50％B；3-7min，50-58％B；7-11min，58-58％B；11-16min，58-70％B；16-18min,70-76％B；

流速：1mL/min；检测波长：283nm和330nm。

8.权利要求1-5任一所述广陈皮多甲氧基黄酮有效部位在治疗高脂血症中的应用。