CN106721677A - 一种跳虫着床培养液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种跳虫着床培养液，每升跳虫着床培养液中含有：380‑420ml土壤衣藻溶液、0.47‑0.53μg维生素B12、23.8‑25.2mg维生素C、60.8‑67.2mg磷酸氢二钾、189.5‑220.5mg磷酸氢钙、69.3‑76.7mg七水硫酸镁、124.4‑137.6mg谷氨酸钠、13.3‑14.7mgL‑赖氨酸、95‑105mg蔗糖，溶剂为凉开水。此外，本发明还提供了一种跳虫着床培养液的制备方法。本发明的跳虫着床培养液能提高培养体系的抗环境干扰能力，稳定培养系统，从而显著提高野生种驯化成功率，此外，跳虫着床培养液可代替酵母等传统饲料，显著降低成本。

Description

一种跳虫着床培养液及其制备方法

技术领域

本发明属于昆虫饲料技术领域，具体涉及一种跳虫着床培养液及其制备方法。

背景技术

目前，随着资源开发利用往深层次发展，微饲料的需求量越来越大，跳虫作为一种新型微饲料，是蜥蜴、螳螂、蝎、蜈蚣、蜘蛛、蛙、壁虎等的重要高蛋白食物来源，但是由于野生跳虫的驯化目前没有得到技术突破，全球报道的1万2千多种跳虫目前仅白符跳1种得以人工饲养成功。

而白符跳在实验室培养时一般使用石膏-木炭或经灭菌后的土壤做为保水基质，使用酵母菌等高蛋白饲料作为主要饲养食物，并且在培养过程中对水分和食物的添加量要求较严，人工饲养时，水分和食物添加量的变化对培养系统的稳定性冲击很大，容易导致培养崩溃，甚至种群团灭。此外，酵母菌等食物的成本过高，限制了跳虫的大规模培养，因此，从根本上解决跳虫的稳定性营养问题是决定能否驯化培养出更多种类的野生跳虫以及能否对驯化培养出的跳虫进行大规模培养的关键技术。

发明内容

本发明提供的一种跳虫着床培养液，解决了野生种驯化以及饲养种扩充时，迁移到新的培养环境下易出现死亡，以及跳虫人工培养过程中保水调菌难以控制，尤其是白符跳等跳虫培养过程因细菌爆发容易导致培养崩溃的问题。

本发明的第一个目的是提供一种跳虫着床培养液，每升所述跳虫着床培养液中含有：380-420ml的土壤衣藻溶液、0.47-0.53μg的维生素B12、23.8-25.2mg的维生素C、60.8-67.2mg的磷酸氢二钾、189.5-220.5mg的磷酸氢钙、69.3-76.7mg的七水硫酸镁、124.4-137.6mg的谷氨酸钠、13.3-14.7mg的L-赖氨酸、95-105mg的蔗糖，溶剂为凉开水。

优选的，每升所述跳虫着床培养液中含有：380ml的土壤衣藻溶液、0.47μg的维生素B12、25.2mg的维生素C、67.2mg的磷酸氢二钾、189.5mg的磷酸氢钙、69.3mg的七水硫酸镁、137.6mg的谷氨酸钠、14.7mg的L-赖氨酸、95mg的蔗糖，溶剂为凉开水。

优选的，每升所述跳虫着床培养液中含有：400ml的土壤衣藻溶液、0.5μg的维生素B12、24mg的维生素C、64mg的磷酸氢二钾、210mg的磷酸氢钙、73.0mg的七水硫酸镁、131mg的谷氨酸钠、14mg的L-赖氨酸、100mg的蔗糖，溶剂为凉开水。

优选的，每升所述跳虫着床培养液中含有：420ml的土壤衣藻溶液、0.53μg的维生素B12、23.8mg的维生素C、60.8mg的磷酸氢二钾、220.5mg的磷酸氢钙、76.7mg的七水硫酸镁、124.4mg的谷氨酸钠、13.3mg的L-赖氨酸、105mg的蔗糖，溶剂为凉开水。

优选的，所述土壤衣藻溶液中土壤衣藻细胞个数大于8×10⁶cells.ml^-1。

优选的，所述凉开水为蒸馏水沸腾5min以上，然后冷却至室温后得到的。

本发明的第二个目的是提供一种跳虫着床培养液的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，培养土准备：选取带土壤衣藻种源的森林土壤，去除土壤表层凋落物，取地面以下0-3cm处的表层腐殖土，并剔除表层腐殖土中树根、石头以及其它杂物，得到培养土；

步骤2，土壤衣藻种源袋准备：称取30-50g的培养土，置于500目的无菌袋中，得到土壤衣藻种源袋；

步骤3，培养液准备：将透明大口瓶用蒸汽高温灭菌5-10min后冷却至室温，然后按照1000：1的质量比往大口瓶中分别添加凉开水和氮型复合肥，摇匀，得到培养液；

其中，所述氮型复合肥中有效氮的质量百分比含量为28％，有效磷的质量百分比含量为15％，有效钾的质量百分比含量为12％；

步骤4，制备土壤衣藻种源：往培养液中添加步骤2中的土壤衣藻种源袋，再用无菌过滤透气封口膜封住培养容器口，然后将培养容器置于25-30℃、3000-5000Lx的光照强度下培养，当培养液的颜色由无色变为淡绿色时，取培养液10ml，于光学显微镜下检测土壤衣藻活力，当检测到土壤衣藻细胞饱满、运动活跃时结束培养，得到土壤衣藻种源；

步骤5，制备母种：取100ml土壤衣藻种源置于透明容器中，然后往其中添加400ml的SE培养基，并用无菌过滤透气封口膜封住容器口，然后将容器置于25-30℃、3000-5000Lx的光照强度下培养，当容器内液体颜色变为深绿色时，再往其中添加500ml的SE培养基，继续培养三天后结束培养，得到母种；

步骤6，制备衣藻培养基：选取不带土壤衣藻种源的森林土壤，去除土壤表层凋落物，取地面以下0-5cm处的表层腐殖土，剔除表层腐殖土中树根、石头以及其它杂物后过60目筛，得到无衣藻培养土，称取50g无衣藻培养土，用凉开水润湿至含水率为50％，然后置于30-35℃下密封发酵46-50h，发酵完毕后发酵土置于80℃下微波灭菌2-5min，然后冷却至室温，用500目网袋包装，得到土壤衣藻培养基；

步骤7，培养土壤衣藻：将透明桶用蒸汽高温灭菌5-10min后冷却至室温，往其中加入4500ml凉开水，然后再添加0.9g氮型复合肥，摇匀，得到培养液，再往其中加入500ml步骤5中得到的母种，摇匀后静置5min，然后往其中加入步骤6中得到的土壤衣藻培养基，用无菌过滤透气封口膜封住容器口，再将容器置于25-30℃、3000-5000Lx的光照强度下培养，直至透明桶内液体颜色变为深绿色时结束培养，得到土壤衣藻溶液；

步骤8，配制着床营养液：取380-420ml的土壤衣藻溶液，往其中加入凉开水，摇匀，静置5min后，再加入0.47-0.53μg的维生素B12、23.8-25.2mg的维生素C、60.8-67.2mg的磷酸氢二钾、189.5-220.5mg的磷酸氢钙、69.3-76.7mg的七水硫酸镁、124.4-137.6mg的谷氨酸钠、13.3-14.7mg的L-赖氨酸、95-105mg的蔗糖，混合均匀后，继续加凉开水至1L定容，然后于15-35℃、3000-5000Lx的光照强度下培养72小时，然后再摇匀，静置10min，即得到跳虫着床营养液。

优选的，每升所述SE培养基中包含下述组分：0.25g的NaNO₃、0.075g的K₂HPO₄·3H₂O、0.075g的MgSO₄·7H₂O、0.025g的CaCl₂·2H₂O、0.175g的KH₂PO₄、0.025g的NaCl、40ml的土壤提取液、0.005g的FeCl₃·6H₂O、1ml的Fe-EDTA、1ml的A5溶液，溶剂为蒸馏水；

其中，每升所述A5溶液中包含下述组分：2860mg的H₃BO₃、220mg的ZnSO₄·7H₂O、1810mg的MnCl₂·4H₂O、79mg的CuSO₄·5H₂O、39mg的(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O，溶剂为蒸馏水。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

1)本发明的跳虫着床培养液能提高培养体系的抗环境干扰能力，稳定培养系统，从而能够显著提高野生种驯化成功率，已驯化跳虫迁移到新环境的培养成功率接近100％，培养系统崩溃的发生概率接近为0。

2)本发明的跳虫着床培养液可以直接代替酵母等传统跳虫饲料，成本显著降低。

具体实施方式

为了使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案能予以实施，下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但所举实施例不作为对本发明的限定。

本发明各实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

实施例1

一种跳虫着床培养液，每升跳虫着床培养液中含有：380ml土壤衣藻细胞个数大于8×10⁶cells.ml^-1的土壤衣藻溶液、0.47μg的维生素B12、25.2mg的维生素C、67.2mg的磷酸氢二钾、189.5mg的磷酸氢钙、69.3mg的七水硫酸镁、137.6mg的谷氨酸钠、14.7mg的L-赖氨酸、95mg的蔗糖，溶剂为凉开水，其中，凉开水为蒸馏水沸腾5min以上，然后冷却至室温后得到的。

具体按照以下步骤实施：

步骤1，培养土准备：选取带土壤衣藻种源的森林土壤，去除土壤表层凋落物，取地面以下2cm处的表层腐殖土，并剔除表层腐殖土中树根、石头以及其它杂物，得到培养土；

步骤2，土壤衣藻种源袋准备：称取40g的培养土，置于500目的无菌袋中，得到土壤衣藻种源袋；

步骤3，培养液准备：将透明大口瓶用蒸汽高温灭菌5min后冷却至室温，然后按照1000：1的质量比往大口瓶中分别添加凉开水和氮型复合肥，摇匀，得到培养液；

其中，氮型复合肥中有效氮的质量百分比含量为28％，有效磷的质量百分比含量为15％，有效钾的质量百分比含量为12％；

步骤4，制备土壤衣藻种源：往培养液中添加步骤2中的土壤衣藻种源袋，再用无菌过滤透气封口膜封住培养容器口，然后将培养容器置于25℃、5000Lx的光照强度下培养，当培养液的颜色由无色变为淡绿色时，取培养液10ml，于光学显微镜下检测土壤衣藻活力，当检测到土壤衣藻细胞饱满、运动活跃时结束培养，得到土壤衣藻种源；

步骤5，制备母种：取100ml土壤衣藻种源置于透明容器中，然后往其中添加400ml的SE培养基，并用无菌过滤透气封口膜封住容器口，然后将容器置于25℃、5000Lx的光照强度下培养，当容器内液体颜色变为深绿色时，再往其中添加500ml的SE培养基，继续培养三天后结束培养，得到母种；

其中，每升SE培养基中包含下述组分：0.25g的NaNO₃、0.075g的K₂HPO₄·3H₂O、0.075g的MgSO₄·7H₂O、0.025g的CaCl₂·2H₂O、0.175g的KH₂PO₄、0.025g的NaCl、40ml的土壤提取液、0.005g的FeCl₃·6H₂O、1ml的Fe-EDTA、1ml的A5溶液，溶剂为蒸馏水；

其中，每升A5溶液中包含下述组分：2860mg的H₃BO₃、220mg的ZnSO₄·7H₂O、1810mg的MnCl₂·4H₂O、79mg的CuSO₄·5H₂O、39mg的(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O，溶剂为蒸馏水；

步骤6，制备衣藻培养基：选取不带土壤衣藻种源的森林土壤，去除土壤表层凋落物，取地面以下3cm处的表层腐殖土，剔除表层腐殖土中树根、石头以及其它杂物后过60目筛，得到无衣藻培养土，称取50g无衣藻培养土，用凉开水润湿至含水率为50％，然后置于30℃下密封发酵46h，发酵完毕后发酵土置于80℃下微波灭菌2min，然后冷却至室温，用500目网袋包装，得到土壤衣藻培养基；

步骤7，培养土壤衣藻：将透明桶用蒸汽高温灭菌5min后冷却至室温，往其中加入4500ml凉开水，然后再添加0.9g氮型复合肥，摇匀，得到培养液，再往其中加入500ml步骤5中得到的母种，摇匀后静置5min，然后往其中加入步骤6中得到的土壤衣藻培养基，用无菌过滤透气封口膜封住容器口，再将容器置于25℃、5000Lx的光照强度下培养，直至溶液颜色变为深绿色时结束培养，得到土壤衣藻溶液；

步骤8，配制着床营养液：取380ml的土壤衣藻溶液，往其中加入的凉开水，摇匀，静置5min后，再加入0.47μg的维生素B12、25.2mg的维生素C、67.2mg的磷酸氢二钾、189.5mg的磷酸氢钙、69.3mg的七水硫酸镁、137.6mg的谷氨酸钠、14.7mg的L-赖氨酸、95mg的蔗糖，混合均匀后，继续加凉开水至1L定容，然后于15℃、5000Lx的光照强度下培养72小时，然后再摇匀，静置10min，即得到跳虫着床营养液。

实施例2

一种跳虫着床培养液，每升跳虫着床培养液中含有：400ml土壤衣藻细胞个数大于8×10⁶cells.ml^-1的土壤衣藻溶液、0.5μg的维生素B12、24mg的维生素C、64mg的磷酸氢二钾、210mg的磷酸氢钙、73.0mg的七水硫酸镁、131mg的谷氨酸钠、14mg的L-赖氨酸、100mg的蔗糖，溶剂为凉开水，其中，凉开水为蒸馏水沸腾5min以上，然后冷却至室温后得到的。

具体按照以下步骤实施：

步骤1，培养土准备：选取带土壤衣藻种源的森林土壤，去除土壤表层凋落物，取地面以下1cm处的表层腐殖土，并剔除表层腐殖土中树根、石头以及其它杂物，得到培养土；

步骤2，土壤衣藻种源袋准备：称取30g的培养土，置于500目的无菌袋中，得到土壤衣藻种源袋；

步骤3，培养液准备：将透明大口瓶用蒸汽高温灭菌8min后冷却至室温，然后按照1000：1的质量比往大口瓶中分别添加凉开水和氮型复合肥，摇匀，得到培养液；

其中，氮型复合肥中有效氮的质量含量为28％，有效磷的质量含量为15％，有效钾的质量含量为12％；

步骤4，制备土壤衣藻种源：往培养液中添加步骤2中的土壤衣藻种源袋，再用无菌过滤透气封口膜封住培养容器口，然后将培养容器置于28℃、4000Lx的光照强度下培养，当培养液的颜色由无色变为淡绿色时，取培养液10ml，于光学显微镜下检测土壤衣藻活力，当检测到土壤衣藻细胞饱满、运动活跃时结束培养，得到土壤衣藻种源；

步骤5，制备母种：取100ml土壤衣藻种源置于透明容器中，然后往其中添加400ml的SE培养基，并用无菌过滤透气封口膜封住容器口，然后将容器置于28℃、4000Lx的光照强度下培养，当容器内液体变为深绿色时，再往其中添加500ml的SE培养基，继续培养三天后结束培养，得到母种；

其中，SE培养基的组分同实施例1；

步骤6，制备衣藻培养基：选取不带土壤衣藻种源的森林土壤，去除土壤表层凋落物，取地面以下2cm处的表层腐殖土，剔除表层腐殖土中树根、石头以及其它杂物后过60目筛，得到无衣藻培养土，称取50g无衣藻培养土，用凉开水润湿至含水率为50％，然后置于32℃下密封发酵48h，发酵完毕后发酵土置于80℃下微波灭菌3min，然后冷却至室温，用500目网袋包装，得到土壤衣藻培养基；

步骤7，培养土壤衣藻：将透明桶用蒸汽高温灭菌8min后冷却至室温，往其中加入4500ml凉开水，然后再添加0.9g氮型复合肥，摇匀，得到培养液，再往其中加入500ml步骤5中得到的母种，摇匀后静置5min，然后往其中加入步骤6中得到的土壤衣藻培养基，用无菌过滤透气封口膜封住容器口，再将容器置于28℃、4000Lx的光照强度下培养，直至透明桶内溶液颜色变为深绿色时结束培养，得到土壤衣藻溶液；

步骤8，配制着床营养液：取400ml的土壤衣藻溶液，往其中加入的凉开水，摇匀，静置5min后，再加入0.5μg的维生素B12、24mg的维生素C、64mg的磷酸氢二钾、210mg的磷酸氢钙、73mg的七水硫酸镁、131mg的谷氨酸钠、14mg的L-赖氨酸、100mg的蔗糖，混合均匀后，继续加凉开水至1L定容，然后于25℃、4000Lx的光照强度下培养72小时，然后再摇匀，静置10min，即得到跳虫着床营养液。

实施例3

一种跳虫着床培养液，每升跳虫着床培养液中含有：420ml土壤衣藻细胞个数大于8×10⁶cells.ml^-1的土壤衣藻溶液、0.53μg的维生素B12、23.8mg的维生素C、60.8mg的磷酸氢二钾、220.5mg的磷酸氢钙、76.7mg的七水硫酸镁、124.4mg的谷氨酸钠、13.3mg的L-赖氨酸、105mg的蔗糖，溶剂为凉开水，其中，凉开水为蒸馏水沸腾5min以上，然后冷却至室温后得到的。

具体按照以下步骤实施：

步骤1，培养土准备：选取带土壤衣藻种源的森林土壤，去除土壤表层凋落物，取地面以下3cm处的表层腐殖土，并剔除表层腐殖土中树根、石头以及其它杂物，得到培养土；

步骤2，土壤衣藻种源袋准备：称取50g的培养土，置于500目的无菌袋中，得到土壤衣藻种源袋；

步骤3，培养液准备：将透明大口瓶用蒸汽高温灭菌10min后冷却至室温，然后按照1000：1的质量比往大口瓶中分别添加凉开水和氮型复合肥，摇匀，得到培养液；

其中，氮型复合肥中有效氮的质量含量为28％，有效磷的质量含量为15％，有效钾的质量含量为12％；

步骤4，制备土壤衣藻种源：往培养液中添加步骤2中的土壤衣藻种源袋，再用无菌过滤透气封口膜封住培养容器口，然后将培养容器置于30℃、3000Lx的光照强度下培养，当培养液的颜色由无色变为淡绿色时，取培养液10ml，于光学显微镜下检测土壤衣藻活力，当检测到土壤衣藻细胞饱满、运动活跃时结束培养，得到土壤衣藻种源；

步骤5，制备母种：取100ml土壤衣藻种源置于透明容器中，然后往其中添加400ml的SE培养基，并用无菌过滤透气封口膜封住容器口，然后将容器置于30℃、3000Lx的光照强度下培养，当容器内液体变为深绿色时，再往其中添加500ml的SE培养基，继续培养三天后结束培养，得到母种；

其中，SE培养基的组分同实施例1；

步骤6，制备衣藻培养基：选取不带土壤衣藻种源的森林土壤，去除土壤表层凋落物，取地面以下5cm处的表层腐殖土，剔除表层腐殖土中树根、石头以及其它杂物后过60目筛，得到无衣藻培养土，称取50g无衣藻培养土，用凉开水润湿至含水率为50％，然后置于35℃下密封发酵50h，发酵完毕后发酵土置于80℃下微波灭菌5min，然后冷却至室温，用500目网袋包装，得到土壤衣藻培养基；

步骤7，培养土壤衣藻：将透明桶用蒸汽高温灭菌10min后冷却至室温，往其中加入4500ml凉开水，然后再添加0.9g氮型复合肥，摇匀，得到培养液，再往其中加入500ml步骤5中得到的母种，摇匀后静置5min，然后往其中加入步骤6中得到的土壤衣藻培养基，用无菌过滤透气封口膜封住容器口，再将容器置于30℃、3000Lx的光照强度下培养，直至透明桶内溶液颜色变为深绿色时结束培养，得到土壤衣藻溶液；

步骤8，配制着床营养液：取420ml的土壤衣藻溶液，往其中加入的凉开水，摇匀，静置5min后，再加入0.53μg的维生素B12、23.8mg的维生素C、60.8mg的磷酸氢二钾、220.5mg的磷酸氢钙、76.7mg的七水硫酸镁、124.4mg的谷氨酸钠、13.3mg的L-赖氨酸、105mg的蔗糖，混合均匀后，继续加凉开水至1L定容，然后于35℃、3000Lx的光照强度下培养72小时，然后再摇匀，静置10min，即得到跳虫着床营养液。

本发明实施例1-3均制备出了跳虫着床培养液，利用本发明实施例1-3制备出的跳虫着床培养液来驯化与培养跳虫，具体实验过程及结果如下：

1、野生等节跳的驯化

等节跳是生活在森林凋落物层和草地土壤表层的常见跳虫，目前全球报道有100种等节跳，在中国分布有23种，但由于野生条件非常复杂，难以模拟，等节跳尽管个体大，繁殖快，但仅偶尔有在实验室得以短暂培养成功的报道，目前还没有驯化成功进入饲料类经济昆虫的先例。

实验中，在常绿阔叶林内于等节跳出没区域内挖取表层土，用实施例1制备出的跳虫着床培养液浸润后，用凋落物叶覆盖表层以作遮掩，然后在气温23℃，1000Lx光照条件下，敞口培养2周。选择内表面经过粗糙加工，容量为2L的塑料盒，用栲树树皮作为攀爬基质，往其中添加100ml实施例1中制备出的着床培养液，润湿基质，然后将从表层土中孵化出的等节跳转移到培养盒子内基质表面，在23℃，2000Lx光照条件下，连续培养3代，即驯化成功，历时约4个月。驯化成功的等节跳转移到大容器内，容器内放置木条或树皮以供等节跳攀爬与产卵，容器内的等节跳直接用着床培养液饲养即可，不需其他食物来源，经2年连续长期培养观察，种群密度维持在每平方米10万-50万头，种群无任何退化现象，完全达到市场用饲养需求。

2、野生长跳的驯化

长跳也是生活在森林凋落物层和草地土壤表层的常见跳虫，目前全球报道有412种长跳，在中国分布有70种，由于野生条件非常复杂且难以模拟，目前偶尔有在实验室得以短暂培养成功的报道，还没有驯化成功进入饲料类经济昆虫的先例。

实验中，在白三叶草草地内于长跳出没区域内挖取表层土，用实施例2制备出的跳虫着床培养液浸润后，用枯三叶草覆盖表层以作遮掩，然后在气温23℃，1000Lx光照条件下，敞口培养2周。选择内表面经过粗糙加工，容量为3L的塑料瓶，往其中添加500ml实施例2中制备出的着床培养液，将从表层土中孵化出的长跳转移到瓶内着床液表面上，在23℃，2000Lx光照条件下，连续培养5代，即驯化成功，历时约7个月。驯化成功的长跳转移到大容器内，容器内放置木条以供长跳攀爬，容器内的长跳直接以着床培养液饲养即可，不需其他食物来源，经2年连续长期培养观察，种群密度维持在每平方米10万-50万头，种群无任何退化现象，完全达到市场用饲养需求。

3、白符跳的培养

白符跳是一个全球广泛分布的物种，适合于实验室培养，并且其在农药和环境污染生态方面做为标准检测动物的培养已经超过40年的历史。白符跳一般以酵母菌、霉菌为食物，繁殖温度为15-28℃，不能长时间暴露在太阳光下，适合于阴暗处培养，并且白符跳对湿度要求较高，一般要求培养环境呈湿润状态。

实验中，选择带盖的保鲜盒为培养容器，清洗干净后用灭菌处理过的木炭粉作为培养基质填充于培养容器中，且培养基质的填充量添加到培养容器的1/3深度处，然后用喷壶将实施例3制备出的跳虫着床培养液喷洒到基质表层，使基质表层完全湿润，再用实施例3制备出的跳虫着床培养液把白符跳冲入培养基质中进行接种，接种完毕后，静置1小时，盖上盖子，然后在15-20℃、散射弱光或无光照环境下密闭培养，培养过程中可揭盖喂食培养液，不需添加其他饲料。经过实验室422次迁移培养后，未失败一例，迁移成功率接近100％，种群密度维持在每平方米20万-50万头，完全达到市场用饲养需求。

由此可见，本发明的跳虫着床培养液适合于多种跳虫的驯化与培养，并且在驯化和培养的过程中能够供给跳虫生长繁殖所需要的营养，不需要额外添加任何营养物质，节约了成本，此外，跳虫的培养环境不受外界干扰，一直维持稳定，有利于跳虫的生长繁殖，从而能够使很好的培养驯化各种跳虫，使其迁移到新环境的驯化培养成功率接近100％。

尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (8)

1.一种跳虫着床培养液，其特征在于，每升所述跳虫着床培养液中含有：380-420ml的土壤衣藻溶液、0.47-0.53μg的维生素B12、23.8-25.2mg的维生素C、60.8-67.2mg的磷酸氢二钾、189.5-220.5mg的磷酸氢钙、69.3-76.7mg的七水硫酸镁、124.4-137.6mg的谷氨酸钠、13.3-14.7mg的L-赖氨酸、95-105mg的蔗糖，溶剂为凉开水。

2.根据权利要求1所述的跳虫着床培养液，其特征在于，每升所述跳虫着床培养液中含有：380ml的土壤衣藻溶液、0.47μg的维生素B12、25.2mg的维生素C、67.2mg的磷酸氢二钾、189.5mg的磷酸氢钙、69.3mg的七水硫酸镁、137.6mg的谷氨酸钠、14.7mg的L-赖氨酸、95mg的蔗糖，溶剂为凉开水。

3.根据权利要求1所述的跳虫着床培养液，其特征在于，每升所述跳虫着床培养液中含有：400ml的土壤衣藻溶液、0.5μg的维生素B12、24mg的维生素C、64mg的磷酸氢二钾、210mg的磷酸氢钙、73.0mg的七水硫酸镁、131mg的谷氨酸钠、14mg的L-赖氨酸、100mg的蔗糖，溶剂为凉开水。

4.根据权利要求1所述的跳虫着床培养液，其特征在于，每升所述跳虫着床培养液中含有：420ml的土壤衣藻溶液、0.53μg的维生素B12、23.8mg的维生素C、60.8mg的磷酸氢二钾、220.5mg的磷酸氢钙、76.7mg的七水硫酸镁、124.4mg的谷氨酸钠、13.3mg的L-赖氨酸、105mg的蔗糖，溶剂为凉开水。

5.根据权利要求1-4任一项所述的跳虫着床培养液，其特征在于，所述土壤衣藻溶液中土壤衣藻细胞个数大于8×10⁶cells.ml^-1。

6.根据权利要求1-4任一项所述的跳虫着床培养液，其特征在于，所述凉开水为蒸馏水沸腾5min以上，然后冷却至室温后得到的。

7.根据权利要求1所述的跳虫着床培养液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，培养土准备：选取带土壤衣藻种源的森林土壤，去除土壤表层凋落物，取地面以下0-3cm处的表层腐殖土，并剔除表层腐殖土中树根、石头以及其它杂物，得到培养土；

步骤2，土壤衣藻种源袋准备：称取30-50g的培养土，置于500目的无菌袋中，得到土壤衣藻种源袋；

步骤3，培养液准备：将透明大口瓶用蒸汽高温灭菌5-10min后冷却至室温，然后按照1000：1的质量比往大口瓶中分别添加凉开水和氮型复合肥，摇匀，得到培养液；

其中，所述氮型复合肥中有效氮的质量百分比含量为28％，有效磷的质量百分比含量为15％，有效钾的质量百分比含量为12％；

步骤4，制备土壤衣藻种源：往培养液中添加步骤2中的土壤衣藻种源袋，再用无菌过滤透气封口膜封住培养容器口，然后将培养容器置于25-30℃、3000-5000Lx的光照强度下培养，当培养液的颜色由无色变为淡绿色时，取培养液10ml，于光学显微镜下检测土壤衣藻活力，当检测到土壤衣藻细胞饱满、运动活跃时结束培养，得到土壤衣藻种源；

步骤5，制备母种：取100ml土壤衣藻种源置于透明容器中，然后往其中添加400ml的SE培养基，并用无菌过滤透气封口膜封住容器口，再将容器置于25-30℃、3000-5000Lx的光照强度下培养，当容器内液体颜色变为深绿色时，再往其中添加500ml的SE培养基，继续培养三天后结束培养，得到母种；

步骤6，制备衣藻培养基：选取不带土壤衣藻种源的森林土壤，去除土壤表层凋落物，取地面以下0-5cm处的表层腐殖土，剔除表层腐殖土中的树根、石头以及其它杂物后过60目筛，得到无衣藻培养土，称取50g无衣藻培养土，用凉开水润湿至含水率为50％，然后将其置于30-35℃下密封发酵46-50h，发酵完毕后将发酵土置于80℃下微波灭菌2-5min，然后冷却至室温，用500目网袋包装，得到土壤衣藻培养基；

步骤7，培养土壤衣藻：将透明桶用蒸汽高温灭菌5-10min后冷却至室温，往其中加入4500ml凉开水，然后再添加0.9g氮型复合肥，摇匀，得到培养液，再往其中加入500ml步骤5中得到的母种，摇匀后静置5min，再往其中加入步骤6中得到的土壤衣藻培养基，用无菌过滤透气封口膜封住容器口，再将容器置于25-30℃、3000-5000Lx的光照强度下培养，直至透明桶内液体颜色变为深绿色时结束培养，得到土壤衣藻溶液；

步骤8，配制着床营养液：取380-420ml的土壤衣藻溶液，往其中加入凉开水，摇匀，静置5min后，再加入0.47-0.53μg的维生素B12、23.8-25.2mg的维生素C、60.8-67.2mg的磷酸氢二钾、189.5-220.5mg的磷酸氢钙、69.3-76.7mg的七水硫酸镁、124.4-137.6mg的谷氨酸钠、13.3-14.7mg的L-赖氨酸、95-105mg的蔗糖，混合均匀后，继续加凉开水至1L定容，然后于15-35℃、3000-5000Lx的光照强度下培养72小时，然后再摇匀，静置10min，即得到跳虫着床营养液。

8.根据权利要求7所述的跳虫着床培养液的制备方法，其特征在于，每升所述SE培养基中包含下述组分：0.25g的NaNO₃、0.075g的K₂HPO₄·3H₂O、0.075g的MgSO₄·7H₂O、0.025g的CaCl₂·2H₂O、0.175g的KH₂PO₄、0.025g的NaCl、40ml的土壤提取液、0.005g的FeCl₃·6H₂O、1ml的Fe-EDTA、1ml的A5溶液，溶剂为蒸馏水；

其中，每升所述A5溶液中包含下述组分：2860mg的H₃BO₃、220mg的ZnSO₄·7H₂O、1810mg的MnCl₂·4H₂O、79mg的CuSO₄·5H₂O、39mg的(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O，溶剂为蒸馏水。