CN105565912A - 利用枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣生产的生物有机肥及其应用 - Google Patents

利用枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣生产的生物有机肥及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN105565912A
CN105565912A CN201610079809.7A CN201610079809A CN105565912A CN 105565912 A CN105565912 A CN 105565912A CN 201610079809 A CN201610079809 A CN 201610079809A CN 105565912 A CN105565912 A CN 105565912A
Authority
CN
China
Prior art keywords
subtilis
organic fertilizer
plant cultivation
buabn
application
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610079809.7A
Other languages
English (en)
Inventor
张国庆
韩鹏
陈青君
李相阳
李云乐
张宇轩
赵天健
王寿南
李天正
李兵
李春瑶
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Moshiwu Biotechnology Co Ltd
Beijing University of Agriculture
Original Assignee
Beijing Moshiwu Biotechnology Co Ltd
Beijing University of Agriculture
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Moshiwu Biotechnology Co Ltd, Beijing University of Agriculture filed Critical Beijing Moshiwu Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201610079809.7A priority Critical patent/CN105565912A/zh
Publication of CN105565912A publication Critical patent/CN105565912A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F5/00—Fertilisers from distillery wastes, molasses, vinasses, sugar plant or similar wastes or residues, e.g. from waste originating from industrial processing of raw material of agricultural origin or derived products thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F11/00—Other organic fertilisers
    • C05F11/08—Organic fertilisers containing added bacterial cultures, mycelia or the like
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/20—Fertilizers of biological origin, e.g. guano or fertilizers made from animal corpses

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了利用枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣生产的生物有机肥及其应用。本发明提供了枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣在制备生物有机肥中的应用，所述枯草芽孢杆菌的菌株号为BUABN-01，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC？No.9754。本发明的生物有机肥及植物栽培基质使用方法操作简单、方便可行、易于掌握，既可以节约土壤，又不会污染环境；本发明的生物有机肥及植物栽培基质种植的阳台绿植具有干净整洁、外观质量优、根系活力好。本发明的生物有机肥及植物栽培基质原料容易获得、组分安全、使用方法简单、易于操作，既能具有良好的持水力、包含植物生长所需要的营养成分，又可以节约土壤。

Description

利用枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣生产的生物有机肥及其应用
技术领域
本发明涉及生物领域中利用枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣生产的生物有机肥及其应用。
背景技术
生物有机肥是指特定功能微生物与主要以动植物残体为来源并经无害化处理、腐熟的有机物料复合而成的一类兼具微生物肥料和有机肥效应的肥料。生物有机肥减少环境污染，对人、畜、环境安全、无毒，是一种环保型肥料。
阳台植物栽培已经非常普遍，阳台植物栽培可以美化家居，种植的蔬菜水果不施用农药，满足家庭对蔬菜、水果安全、绿色的需求。
目前，阳台植物栽培常用的固体栽培基质主要有：(1)天然有机基质，如：草炭、腐叶、苔藓等；(2)天然或再加工的矿物质基质，如：珍珠岩、蛭石、云母、沙等。目前，草炭是国际上用量最大的固体栽培基质。但是，草炭是不可再生的资源，储存量有限，且价格逐年上涨，大量开采还会使空气中二氧化碳浓度升高，气候变暖，造成生态环境的破坏，所以其应用受到一定限制。目前很多国家，甚至是一些富草炭国家，开始限制草炭的开采和使用。因此，草炭替代品的研究成为基质研究的热点。
菌渣是食用菌产业的废弃物，是食用菌栽培中采收食用菌子实体后剩余的物质，如剩余的培养料和覆土。
发明内容
本发明所要解决的一个技术问题是如何制备生物有机肥。
为了解决上述技术问题，本发明提供了枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣在制备生物有机肥中的应用，所述枯草芽孢杆菌的菌株号为BUABN-01，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo.9754。
上述应用中，所述枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣的配比可为107～108cfu所述枯草芽孢杆菌：1g所述食用菌菌渣，所述食用菌菌渣的质量以含水量为15％～20％(如15％)计。上述应用中，所述枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣的配比具体可为2×107cfu枯草芽孢杆菌BUABN-01：1g双孢蘑菇菌渣。
为了解决上述技术问题，本发明还提供了所述枯草芽孢杆菌在制备生物有机肥中的应用。
为了解决上述技术问题，本发明提供了生物有机肥。
本发明所提供的生物有机肥，由枯草芽孢杆菌菌剂和食用菌菌渣组成，所述枯草芽孢杆菌菌剂的活性成分为枯草芽孢杆菌BUABN-01，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo.9754。
上述生物有机肥中，所述枯草芽孢杆菌菌剂的质量份满足所述生物有机肥中所述枯草芽孢杆菌BUABN-01的含量为107～108cfu/g。
上述生物有机肥中，所述枯草芽孢杆菌菌剂可在所述枯草芽孢杆菌BUABN-01经发酵培养后，或直接使用或浓缩使用或经载体吸附而制成活菌制品。
上述生物有机肥中，所述枯草芽孢杆菌菌剂的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
上述生物有机肥中，所述枯草芽孢杆菌菌剂还可包括载体。所述载体可为固体载体和/或液体载体。所述固体载体为矿物材料、生物材料和/或高分子化合物；所述矿物材料可为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石、草炭土和硅藻土中的至少一种；所述生物材料为各类作物的秸秆、松壳、稻草、花生壳、玉米粉、豆粉、淀粉、草炭和动物的粪便中的至少一种；所述高分子化合物为聚乙烯醇和/或聚二醇。所述液体载体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水；所述有机溶剂为癸烷和/或十二烷。
上述生物有机肥中，所述枯草芽孢杆菌菌剂中的所述枯草芽孢杆菌BUABN-01可以以活细胞的发酵液、被培养的活细胞、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。
含有所述生物有机肥的植物栽培基质也属于本发明的保护范围。
所述枯草芽孢杆菌在上述植物栽培基质中的含量为2×107至4×107cfu/g。
所述植物栽培基质在栽培植物(如阳台植物)中的应用也属于本发明的保护范围。
本发明所要解决的另一个技术问题是如何促进植物生长。
为了解决上述技术问题，本发明提供了所述枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣在促进植物生长中的应用。
上述应用中，所述枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣的配比可为107～108cfu所述枯草芽孢杆菌：1g所述食用菌菌渣，所述食用菌菌渣的质量以含水量为15～20％计。
为了解决上述技术问题，本发明还提供了所述枯草芽孢杆菌在促进植物生长中的应用。
本申请中，所述植物和所述阳台植物可为单子叶植物也可为双子叶植物，如菊科植物、凤仙花科植物、紫茉莉科植物，所述菊科植物具体可为生菜、向日葵。
本申请中，所述食用菌菌渣具体可为双孢蘑菇菌渣。所述双孢蘑菇菌渣可为由双孢蘑菇栽培中双孢蘑菇子实体采收后剩余的培养料和双孢蘑菇出菇前所覆盖的土组成的混合物。
实验证明，含有本发明的生物有机肥的植物栽培基质2整株生菜鲜重是含有双孢蘑菇菌渣、但不含枯草芽孢杆菌BUABN-01的植物栽培基质3的1.4倍，是不含生物有机肥1的植物栽培基质4的7.3倍。植物栽培基质2上的奶油生菜口感比其它4种植物栽培基质上的奶油生菜滑嫩，更加可口。本发明的植物栽培基质和生物有机肥栽培其它植物(凤仙花、紫茉莉、向日葵)长势好。本发明的生物有机肥及植物栽培基质使用方法操作简单、方便可行、易于掌握，既可以节约土壤，又不会污染环境；本发明的生物有机肥及植物栽培基质种植的阳台绿植具有干净整洁、外观质量优、根系活力好等特点。本发明的生物有机肥及植物栽培基质原料容易获得、组分安全、使用方法简单、易于操作，既能具有良好的持水力、包含植物生长所需要的营养成分，又可以节约土壤、不污染环境。
附图说明
图1为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BUABN-01CGMCCNo.9754菌株的菌落形态。
图2为光学显微镜下枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BUABN-01CGMCCNo.9754菌株的细胞形态(10*40)。
图3为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BUABN-01CGMCCNo.9754菌株的生长曲线。
图4为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BUABN-01CGMCCNo.9754菌株的16SrDNA基因的PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图。图中S为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BUABN-01CGMCCNo.9754菌株的16srDNA基因的PCR扩增产物；M为DNAMarker。
图5为奶油生菜移栽入植物栽培基质1、植物栽培基质2、植物栽培基质3、植物栽培基质4和植物栽培基质5在阳台栽培40天后的照片。
图5中，从左至右依次为植物栽培基质1、植物栽培基质2、植物栽培基质3、植物栽培基质4和植物栽培基质5。
图6为奶油生菜移栽入植物栽培基质2在露天栽培40天后的照片。
图7为利用植物栽培基质2露天栽培凤仙花的照片。
图8为利用生物有机肥2露天栽培紫茉莉的照片。
图9为利用生物有机肥2露天栽培向日葵的照片。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂20g，pH7.0-7.2，蒸馏水1000mL，121℃湿热灭菌30min，主要用于菌种分离与保藏。
牛肉膏蛋白胨液体培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，pH7.0-7.2，蒸馏水1000mL，121℃湿热灭菌30min。
发酵培养基：葡萄糖15g，酵母提取物5g，硫酸镁5g，磷酸氢二钾2g，磷酸二氢钾2g，氯化钙1.2g，pH值7.0-7.2，蒸馏水l000mL，121℃湿热灭菌30min。主要用于发酵。
实施例1、利用枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣生产生物有机肥
本实施例提供了2种生物有机肥，分别为生物有机肥1和生物有机肥2。具体制备方法如下：
1、制备双孢蘑菇菌渣
1.1、二次发酵制备培养料
双孢蘑菇培养料由以下成分发酵而成：麦秸600kg、干鸡粪400kg、石膏13kg。麦秸含水量为17％，用轧草机进行处理，得到草料。将干鸡粪加水充分搅拌后放置7天以上，让其自然降解，含水量为83％。将草料和水混匀，预湿5天，堆成1个大堆闷堆13小时，使其发热温度到45℃；将草料和鸡粪混合，再加入石膏混合均匀得到堆体物料。堆体物料在发酵仓中进行堆腐发酵，发酵仓底下纵向平均分布两道长×宽×高＝6m×0.15m×0.13m的通风槽，在每道通风槽上铺设带孔不锈钢钢板一块，每块不锈钢钢板的长×宽×厚＝6m×0.19m×0.003m，在每块不锈钢钢板上平均分布400个直径为0.012m的通气孔以利于通风透气，在通风槽上铺好不锈钢钢板后，钢板上部刚好与仓底平齐。将堆体物料填入发酵仓，填料宽度为5m，填料高度为3.5m，在温度为30-35℃，相对湿度为60％的环境中静置发酵7天，得到第一次发酵堆体物料1，将第一次发酵堆体物料1转入另一个发酵仓，在温度为30-35℃，相对湿度为60％的环境中静置发酵6天，得到第一次发酵堆体物料2，将第一次发酵堆体物料2翻倒入第三个发酵仓，在温度为30-35℃，相对湿度为60％的环境中静置发酵5天，得到第一次发酵物料。将第一次发酵物料转入另一个发酵仓，通62℃蒸汽6-8小时，每隔4小时换气一次，在温度为49-51℃，相对湿度为60％的环境中静置发酵7天，45℃通气降温，得到培养料。
1.2将培养料倒入菇床，以每吨培养料5～7kg菌种的接种量进行播种，菌种一般选用美国Sylvan公司的双孢蘑菇S130、双孢蘑菇S608或中国的双孢蘑菇As2796。本实施选用双孢蘑菇As2796进行双孢蘑菇栽培，播种后常规管理20～30天，菌丝长到料底，以灭菌的草炭土作为覆土材料进行覆土，含水量70％，厚度3～5cm。进行常规出菇管理，采收三茬鲜菇(约60～90d)后，结束出菇管理过程。清理菇床获得的培养料和覆土，即为双孢蘑菇菌渣。
1.3、将步骤1.2中收集的双孢蘑菇菌渣在60℃条件下，鼓风烘干6-8小时(烘干处理期间每1小时翻动一次，使之受热均匀)，得到烘干样品；将烘干样品放入高速粉碎机中粉碎，过60目筛，获得双孢蘑菇菌渣干粉。
2、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BUABN-01CGMCCNo.9754菌株的分离及鉴定
2.1、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BUABN-01CGMCCNo.9754的分离
采取山西省大同市煤矿地区土壤，通过稀释土壤样品，利用加热稀释土壤溶液至亚致死温度和培养基中的高pH值作为筛选条件，初筛出具有一定抗逆性的菌株。将初筛获得的具有一定抗逆性的菌株，根据枯草芽孢杆菌能分泌纳豆激酶的特性，制作纤维蛋白平板，复筛出具有溶纤活性的菌株，编号为BUABN-01。
2.2、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BUABN-01CGMCCNo.9754的鉴定
2.2.1、形态学鉴定
将枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BUABN-01CGMCCNo.9754(简称BUABN-01菌株)在牛肉膏蛋白胨培养基上进行培养，BUABN-01菌株的菌落形态如图1所示，菌落表面初期光滑，后期粗糙不透明，白色至污白色，边缘初期光滑后变粗糙。
将BUABN-01菌株在光学显微镜下观察，具体实验步骤如下：
1)涂片：取两块载玻片，各滴一小滴蒸馏水于玻片中央，用接种环以无菌操作分别从培养14-16h的枯草芽孢杆菌斜面上挑取少量菌苔加入到水滴中，混匀并涂成薄膜。载玻片要洁净无油迹；滴蒸馏水和取菌不宜过多；涂片要均匀，不宜过厚。
2)干燥：室温(20-25℃)自然干燥。
3)固定：固定时通过火焰2-3次即可，此过程称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。热固定温度不易过高，以载玻片背面不烫手为宜，否则会改变甚至破坏细胞形态。
4)染色：滴加染液于涂片上(染液刚好覆盖涂片薄膜为宜)，先用吕氏碱性美蓝染色1-2min，再用石炭酸复红或草酸铵结晶紫染色约1min。
5)水洗：倾去染液，用自来水冲洗，直至涂片上流下的水无色为止。水洗时，不要直接冲洗液面，而应使水从载玻片的一端流下，水流不易过急过大，以免涂片薄膜脱落。
6)干燥：自然干燥或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。
7)镜检：涂片干燥后镜检。
结果如图2所示，BUABN-01菌株细胞大小为(0.7-0.8)μm×(2-3)μm，着色均匀。培养24小时以上大量形成芽孢。无荚膜，周生鞭毛，能运动。
2.2.2、生长曲线的测定
将BUABN-01菌株在牛肉膏蛋白胨培养基上37℃活化24h，然后接种到含有10mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的试管中，37℃在摇床中以180rpm的转速进行恒温培养，每隔4h取菌液进行OD600的测量，绘制菌株的生长曲线。
结果如表1和图3所示，BUABN-01菌株在牛肉膏蛋白胨液体培养基中经过9h的对数增长期后，达到稳定期。
表1、BUABN-01菌液不同时间点的OD600值
时间(h) 0 4 8 12 16
OD600 0 0.15 0.29 0.30 0.32
2.2.3、生理生化测定
1)糖醇利用试验
用生长18-24h的幼龄菌接种至4种不同碳源(D-葡萄糖、果糖、D-木糖和D-甘露醇)的培养基中，30℃培养7-14d观察指示剂颜色的变化，若变黄，则表示发酵产酸，试验重复三次。
2)生长温度范围试验
取新鲜菌划线接种于牛肉膏蛋白胨培养基平板上，分别置于温度为4℃、20℃、30℃、40℃、45℃和50℃的培养箱中进行培养，以在30℃培养箱中进行培养的菌株为阳性对照，观察菌株能否生长，试验重复三次。
3)耐盐试验
将牛肉膏蛋白胨液体培养基中NaCl的质量浓度分别调至2％、5％、7％和10％，各取100μL菌液等量接种到含有不同质量浓度NaCl的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，30℃培养3-7d，接种到含有不同质量浓度NaCl的牛肉膏蛋白胨液体培养基中的菌株分别以不接种的含有与接种菌株相同质量浓度NaCl的牛肉膏蛋白胨液体培养基为阴性对照，观察菌株生长情况，试验重复三次。
4)生长pH值范围试验
将牛肉膏蛋白胨液体培养基用pH计分别调节pH值至5.0、6.0、7.0和8.0，分装试管，每管5mL，灭菌备用。各取100μL菌液等量接种到不同pH值的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，30℃培养7d，接种到不同pH值的牛肉膏蛋白胨液体培养基中的菌株分别以不接种的与接种菌株相同pH值的牛肉膏蛋白胨液体培养基为阴性对照，观察其生长情况，试验重复三次。
5)柠檬酸盐利用试验
取新鲜菌划线接种于柠檬酸盐培养基斜面上，30℃培养3-7d后观察结果。培养基呈现碱性颜色(指示剂蓝色或桃红色)表明菌株利用了有机酸，记为阳性，否则为阴性，试验重复三次。
6)V-P试验(甲基乙酰甲醇试验)
取100μL菌液接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基中，30℃培养7d，以不接种的磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基为阴性对照。检测时与质量浓度为40％的NaOH溶液等体积混合，再滴入200μL质量浓度为0.3％的肌酸溶液，猛烈振荡2-10min后，若培养液出现红色，即为V-P阳性反应，如未变色则为阴性，试验重复三次。
7)接触酶试验
取新鲜菌体划线接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，30℃培养24h，将体积百分浓度为3％的双氧水直接滴加于菌苔上，观察有无气泡产生，若30s内有气泡产生则为阳性，无气泡产生即为阴性，试验重复三次。
8)吲哚反应试验
取100μL菌液接种于胰蛋白胨水培养基中，30℃培养2-4d，检测时加入3-5mL的对二甲基氨基苯甲醛试剂，若在液层界面形成红色圆环，则表明有吲哚产生，记为阳性，否则记为阴性，试验重复三次。
9)淀粉水解试验
取新鲜菌以点接法接种于淀粉水解培养基平板上，30℃培养1-2d，检测时在平板上滴加碘液，覆盖到整个菌落，若菌落周围有无色透明圈出现，则说明淀粉被水解，记为阳性，试验重复三次。
10)卵磷脂酶试验
用75％的乙醇将新鲜鸡蛋表面消毒，并用经火焰灭菌的镊子将鸡蛋打一个孔，倾去蛋清，然后用5mL无菌吸管吸出卵黄，加入到融化后冷却至50℃左右的琼脂培养基中，使卵黄体积含量为培养基总体积的2-3％，混匀后倒平板，点接菌种，30℃培养24h后观察，若菌落边缘出现浑浊圈者为卵磷脂酶阳性，试验重复三次。
11)苯丙氨酸脱氨酶试验
取新鲜菌划线接种于苯丙氨酸琼脂培养基斜面上，于37℃培养8-24h观察结果。检测时在斜面上滴加4-5滴质量浓度为10％的FeCl3溶液，若培养基呈现出绿色，表明有苯丙酮酸产生，记为阳性，颜色不变记为阴性，试验重复三次。
12)酪氨酸试验
将待测菌以点接法接种于酪氨酸试验培养基平板上，30℃培养1-2d后观察，若酪氨酸变透明记为阳性，否则记为阴性，试验重复三次。
13)酪素水解试验
取新鲜菌以点接法接种于酪素培养基平板上，30℃培养24-48h，检测时观察有无水解圈产生，若有记为阳性，否则记为阴性，试验重复三次。
BUABN-01菌株的生理生化结果如表2所示。
表2、BUABN-01菌株的生理生化特征
注：“+”代表阳性或生长，“-”代表阴性或不生长。
2.2.4、分子鉴定
将BUABN-01菌株培养后提取DNA，进行16srDNA的PCR扩增，具体步骤如下：用枪头挑取活化菌落，溶于100μL无菌水中，混匀后取1μL作为模板，并加入如下引物、dNTP、Taq酶和去离子水进行PCR扩增反应，引物序列如下：16(+)F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAGAACGAACGCT-3’，16(-)R：5’-TACGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCC-3’。反应体系如下：
PCR反应条件如下：
将BUABN-01菌株的16SrDNA序列的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果如图4所示：得到约1.5Kb的DNA片段。测序后，通过Blast进行序列比对分析，枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BUABN-01CGMCCNo.9754与枯草芽孢杆菌属(Bacillussubtilis)GenBankAccessionNumber为AB018486.1的菌株相似性为99.7％，根据枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BUABN-01CGMCCNo.9754的形态特征和16SrDNA序列，将其鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。BUABN-01菌株的16SrDNA序列如SEQIDNo.1所示，核苷酸序列长度为1445bp。
枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BUABN-01CGMCCNo.9754已于2014年10月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo.9754，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，下文简称枯草芽孢杆菌BUABN-01。
3、将枯草芽孢杆菌BUABN-01接一环于发酵培养基中，37℃培养24h得到种子液，以3％的接种量将种子液接到装有100mL发酵培养基的500mL的三角瓶中，37℃、180rpm(旋转半径20mm)振荡培养48h，得到枯草芽孢杆菌BUABN-01发酵液。该枯草芽孢杆菌BUABN-01发酵液中枯草芽孢杆菌BUABN-01的菌体含量为109cfu/ml。
4、生物有机肥的制备
将步骤1.3的双孢蘑菇菌渣干粉和步骤3的枯草芽孢杆菌BUABN-01发酵液混合均匀，得到生物有机肥1和生物有机肥2。该生物有机肥1中的枯草芽孢杆菌BUABN-01的菌体含量为5×107cfu/g。该生物有机肥2中的枯草芽孢杆菌BUABN-01的菌体含量为1×108cfu/g。
实施例2、利用植物栽培基质在阳台栽培奶油生菜
将实施例1的生物有机肥1、黄土和蛭石按照1：1：2的体积比均匀混合，得到植物栽培基质1。植物栽培基质1中，枯草芽孢杆菌BUABN-01和双孢蘑菇菌渣的配比为107cfu枯草芽孢杆菌BUABN-01：1g双孢蘑菇菌渣，该双孢蘑菇菌渣的质量以含水量为15％计。植物栽培基质1中，枯草芽孢杆菌BUABN-01的菌体含量为2×107cfu/g。
将实施例1的生物有机肥2、黄土和蛭石按照1：1：2的体积比均匀混合，得到植物栽培基质2。植物栽培基质2中，枯草芽孢杆菌BUABN-01和双孢蘑菇菌渣的配比为2×107cfu枯草芽孢杆菌BUABN-01：1g双孢蘑菇菌渣，该双孢蘑菇菌渣的质量以含水量为15％计。植物栽培基质2中，枯草芽孢杆菌BUABN-01的菌体含量为4×107cfu/g。
将实施例1的双孢蘑菇菌渣干粉、黄土和蛭石按照1：1：2的体积比均匀混合，得到植物栽培基质3。
将黄土和蛭石按照1：1的体积比均匀混合，得到植物栽培基质4。
将草炭土和蛭石按照1：1的体积比均匀混合，得到植物栽培基质5。
上述植物栽培基质1、植物栽培基质2、植物栽培基质3和植物栽培基质4中的黄土均相同，上述植物栽培基质1、植物栽培基质2、植物栽培基质3、植物栽培基质4和植物栽培基质5中的蛭石均相同。
利用上述植物栽培基质1、植物栽培基质2、植物栽培基质3、植物栽培基质4和植物栽培基质5这五种植物栽培基质中任一种植物栽培基质在阳台栽培奶油生菜，具体方法如下：
将奶油生菜种子拌上细沙，置容器中搅拌均匀，再撒到植物栽培基质3上，覆薄薄一层的植物栽培基质3,约0.5～1厘米，放在阳台上，15～20℃约3～5天发芽。保持基质湿润，2-3片真叶时间苗，株距5-8厘米。长到5-6片真叶时移苗，移前先浇透水，连根上的基质一起移到装有上述植物栽培基质1、植物栽培基质2、植物栽培基质3、植物栽培基质4和植物栽培基质5这五种植物栽培基质中任一种植物栽培基质的花盆(直径250mm)里，每盆1株。浇透水，在阳台中，先放在阴凉处缓苗，1周左右根站稳了脚了，正常太阳光照。每种植物栽培基质种植30盆，每盆种植1株。移栽40天后称取地上部分鲜重，并进行方差分析和多重比较。
表3、奶油生菜在各种植物栽培基质中的生长情况
注：相同字母的处理差异不显著，字母不相同的处理差异显著。
栽培实验结果如表3所示，植物栽培基质2上的奶油生菜长势最好，显著好于其它4种植物栽培基质。含有生物有机肥2(含有双孢蘑菇菌渣和枯草芽孢杆菌BUABN-01)的植物栽培基质整株生菜鲜重是不含生物有机肥2的植物栽培基质4的7.3倍。含有生物有机肥2(含有双孢蘑菇菌渣和枯草芽孢杆菌BUABN-01)的植物栽培基质整株生菜鲜重是不含生物有机肥2的植物栽培基质3(含有双孢蘑菇菌渣，但不含枯草芽孢杆菌BUABN-01)的1.4倍(图5)。植物栽培基质2上的奶油生菜口感比其它4种植物栽培基质上的奶油生菜滑嫩，更加可口。
将奶油生菜种子拌上细沙，置容器中搅拌均匀，再撒到植物栽培基质3上，覆薄薄的一层植物栽培基质3,约0.5～1厘米，放在阳台上，15～20℃约3～5天发芽。保持基质湿润，2～3片真叶时间苗，株距5～8厘米。长到5～6片真叶时移苗，移前先浇透水，连根上的基质一起移到装有上述植物栽培基质2的栽培筐里，每筐5株，株距15厘米，行距30厘米。浇透水，在露天环境中，先放在阴凉处缓苗，1周左右根站稳了脚了，正常太阳光照。移栽40天后拍照。结果表明奶油生菜在植物栽培基质2长势非常旺盛，滑嫩可口(图6)。
实施例3、利用植物栽培基质露天栽培凤仙花
实验设两个处理：植物栽培基质2处理和植物栽培基质4处理。植物栽培基质2处理和植物栽培基质4处理中除了栽培基质不同外，其它栽培条件完全相同，具体方法如下：
将凤仙花的种子分别播入装有实施例2的植物栽培基质2的花盆(植物栽培基质2处理)和装有实施例2的植物栽培基质4的花盆(植物栽培基质4处理)中，长出第一对真叶时间苗，每个花盆留一株苗。每个处理10个花盆。结果表明凤仙花在植物栽培基质2枝干粗壮、叶片翠绿、长势良好，凤仙花在植物栽培基质4中生长缓慢、瘦弱、叶片淡黄色，长至15～20天左右死亡(图7)。
实施例4、利用生物有机肥2露天栽培紫茉莉和向日葵
在露天移栽紫茉莉时，在每棵紫茉莉幼苗根际周围穴施实施例1的生物有机肥2，每穴10克，再覆土定植，正常管理至花期，结果表明紫茉莉长势良好，花色艳丽(图8)。
在露天土壤中穴施实施例1的生物有机肥2，每穴10克，每穴播种1粒向日葵种子，正常管理至花期，结果表明向日葵长势良好，花色艳丽(图9)。

Claims (10)

1.枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣在制备生物有机肥中的应用，所述枯草芽孢杆菌的菌株号为BUABN-01，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo.9754。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣的配比为107～108cfu所述枯草芽孢杆菌：1g所述食用菌菌渣，所述食用菌菌渣的质量以含水量为15％～20％计。
3.枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣在促进植物生长中的应用，所述枯草芽孢杆菌的菌株号为BUABN-01，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo.9754。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣的配比为107～108cfu所述枯草芽孢杆菌：1g所述食用菌菌渣，所述食用菌菌渣的质量以含水量为15％～20％计。
5.枯草芽孢杆菌在制备生物有机肥中的应用，所述枯草芽孢杆菌的菌株号为BUABN-01，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo.9754。
6.枯草芽孢杆菌在促进植物生长中的应用，所述枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的菌株号为BUABN-01，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo.9754。
7.生物有机肥，由枯草芽孢杆菌菌剂和食用菌菌渣组成，所述枯草芽孢杆菌菌剂的活性成分为枯草芽孢杆菌BUABN-01，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo.9754。
8.根据权利要求1-4中任一所述的应用或权利要求7所述的生物有机肥，其特征在于：所述食用菌菌渣为双孢蘑菇菌渣。
9.含有权利要求7所述生物有机肥的植物栽培基质。
10.权利要求9所述的植物栽培基质在栽培植物中的应用。
CN201610079809.7A 2016-02-04 2016-02-04 利用枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣生产的生物有机肥及其应用 Pending CN105565912A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610079809.7A CN105565912A (zh) 2016-02-04 2016-02-04 利用枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣生产的生物有机肥及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610079809.7A CN105565912A (zh) 2016-02-04 2016-02-04 利用枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣生产的生物有机肥及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105565912A true CN105565912A (zh) 2016-05-11

Family

ID=55876628

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610079809.7A Pending CN105565912A (zh) 2016-02-04 2016-02-04 利用枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣生产的生物有机肥及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105565912A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106495902A (zh) * 2016-10-25 2017-03-15 天津农学院 一种利用食用菌废弃培养料的生物肥料及其制备
CN106518389A (zh) * 2016-10-25 2017-03-22 天津农学院 一种食用菌菌渣为原料的生物肥料及其制备
CN108329070A (zh) * 2018-03-09 2018-07-27 淮阴工学院 菌糠有机肥及其制备方法和应用
CN109554312A (zh) * 2018-12-19 2019-04-02 江苏沿江地区农业科学研究所 一种耐盐菌qm、包含该耐盐菌qm的林木育苗基质及制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103242083A (zh) * 2013-05-24 2013-08-14 常熟市润丰农业有限公司 一种微生物有机肥料
CN103483020A (zh) * 2013-09-13 2014-01-01 成都天星农业科技有限公司 一种防治地下害虫的生物有机肥及制备方法
CN104961509A (zh) * 2015-06-26 2015-10-07 绥化学院 用食用菌废料发酵制备育苗基质和有机肥的方法
CN105237249A (zh) * 2015-11-24 2016-01-13 济南昊泽环保科技有限公司 促进玉米增产增收的复合肥料

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103242083A (zh) * 2013-05-24 2013-08-14 常熟市润丰农业有限公司 一种微生物有机肥料
CN103483020A (zh) * 2013-09-13 2014-01-01 成都天星农业科技有限公司 一种防治地下害虫的生物有机肥及制备方法
CN104961509A (zh) * 2015-06-26 2015-10-07 绥化学院 用食用菌废料发酵制备育苗基质和有机肥的方法
CN105237249A (zh) * 2015-11-24 2016-01-13 济南昊泽环保科技有限公司 促进玉米增产增收的复合肥料

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吕选忠编著: "《现代绿色化学技术》", 31 October 2005, 中国环境科学出版社 *
洪坚平，来航线主编: "《应用微生物学》", 28 February 2011, 中国林业出版社 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106495902A (zh) * 2016-10-25 2017-03-15 天津农学院 一种利用食用菌废弃培养料的生物肥料及其制备
CN106518389A (zh) * 2016-10-25 2017-03-22 天津农学院 一种食用菌菌渣为原料的生物肥料及其制备
CN108329070A (zh) * 2018-03-09 2018-07-27 淮阴工学院 菌糠有机肥及其制备方法和应用
CN109554312A (zh) * 2018-12-19 2019-04-02 江苏沿江地区农业科学研究所 一种耐盐菌qm、包含该耐盐菌qm的林木育苗基质及制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8518428B2 (en) Antagonistic bacteria for controlling the Fusarium wilt of continuous cropping banana and their microbial organic fertilizer
CN100390272C (zh) 一株荧光假单胞菌及其发酵培养方法与应用
CN103627662B (zh) 一种花生慢生根瘤菌及其用途
CN109182172A (zh) 一种促根养根、增产提质复合微生物菌剂及其制备方法
CN103484396B (zh) 一种嗜热一氧化碳链霉菌新菌株及其应用
CN104164394A (zh) 一株拮抗植物病原菌的菌株及其应用
CN101914445B (zh) 土著益生微生物固体菌剂及其制备方法和应用
CN106222118B (zh) 一株链霉菌属放线菌及其用途
CN104818233B (zh) 一株含死谷芽孢杆菌及其制备的功能型蔬菜育苗生物基质
CN104911129A (zh) 防治番茄青枯病的解淀粉芽孢杆菌菌株及其微生物有机肥
CN104232532B (zh) 一种植物内生短小芽孢杆菌及其菌剂、制法与应用
CN105565912A (zh) 利用枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣生产的生物有机肥及其应用
CN105481486B (zh) 利用秸秆和滤泥生产木霉生物有机肥的方法及获得的产品
CN101519644A (zh) 一株根瘤菌及其应用
CN107628894A (zh) 提高土壤肥力的复合生物菌剂及其制备方法和应用
CN105439657B (zh) 一种草莓专用抗重茬生物有机肥的制备方法
CN102835288A (zh) 土传病害鉴定病圃的建立方法
CN108048360B (zh) 一种具有降解有机磷和防病双重作用的枯草芽孢杆菌
CN105400717A (zh) 一株橡胶树根际促生菌株hbrm-16及其应用
CN106148250B (zh) 一株哥斯达黎加链霉菌属放线菌及其用途
CN110229757B (zh) 一株有效促进作物生长的桔绿木霉js84及其研制的生物有机肥
CN104498413B (zh) 一种含枯草芽孢杆菌g10的功能型蔬菜育苗生物基质及其制备方法
CN107602222A (zh) 一种茶叶专用肥及其制备方法
CN113913344B (zh) 一种有机物料腐熟剂及其制备方法
CN110257277A (zh) 一种复合菌剂zlm-11及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160511

RJ01 Rejection of invention patent application after publication