CN106718901A - 一种生长基质及用其无性繁殖药用植物重楼的方法 - Google Patents

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杨淑梅
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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
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    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
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    • A—HUMAN NECESSITIES
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Abstract

本发明公开了一种生长基质及用其无性繁殖药用植物重楼的方法，生长基质由如下重量份的成分制备而成：园土，120‑160份；高钙粉煤灰，30‑50份；铁矾土，20‑30份；凹凸棒石黏土，10‑20份；腐植酸钠，8‑12份；水溶性锌盐，2‑4份；水溶性镁盐，1‑3份；水溶性钾盐，1‑3份；水溶性铵盐，1.5‑2.5份；水，30‑50份；番泻叶提取物，6‑10份；所述番泻叶提取物的制备方法为：将番泻叶用体积百分含量为70％‑90％的乙醇溶液热回流提取2‑4次，合并提取液，减压浓缩后喷雾干燥即得。本发明提供的生长基质及无性繁殖重楼的方法稳定高效，成活率高，且种苗的基础总皂苷含量明显升高，有利于生长出总皂苷含量丰富的药用重楼。

Description

一种生长基质及用其无性繁殖药用植物重楼的方法
技术领域
本发明属于植物栽培领域，具体涉及一种生长基质及用其无性繁殖药用植物重楼的方法。
背景技术
重楼是百合科(Liliaceae)重楼属(Paris L.)植物的统称，是多年生草本植物，多生于海拔600-3600m的林下阴湿处、沟谷边或草丛中，在我国主要分布于云南、四川等地。重楼味苦，性微寒，有小毒，以根茎入药，其活性成分为总皂苷。常用于疮疡肿毒、毒蛇咬伤、乳腺炎、扁桃体炎、小儿惊风抽搐等病症的治疗，是夺命丹、总皂苷片、云南白药、宫血宁以及其他制剂等中成药的重要原料。
从20世纪80年代开始，科研工作者便展开重楼有性和无性繁殖的研究，而“二次休眠”(第1年10月份至第3年5月份前后)的生理特性决定了重楼有性繁殖的局限性，自然条件下种子繁殖需经过两冬一夏才能出土成苗，且从种植到收获需要8-10年的时间，加之近年来重楼需求量的逐年增加导致了重楼野生种质资源的掠夺性破坏，因此，重楼的有性繁殖已无法满足市场的需求。
为了加强重楼资源的保护力度和解决重楼的供需矛盾，无性繁殖技术再次成为重楼资源可持续发展的焦点，且无性繁殖技术的研究主要集中在根茎切块繁殖和组织培养两个方面。
发明内容
本发明的目的在于提供一种生长基质及用其无性繁殖药用植物重楼的方法。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
一种生长基质，由如下重量份的成分制备而成：园土，120-160份；高钙粉煤灰，30-50份；铁矾土，20-30份；凹凸棒石黏土，10-20份；腐植酸钠，8-12份；水溶性锌盐，2-4份；水溶性镁盐，1-3份；水溶性钾盐，1-3份；水溶性铵盐，1.5-2.5份；水，30-50份；番泻叶提取物，6-10份；所述番泻叶提取物的制备方法为：将番泻叶用体积百分含量为70％-90％的乙醇溶液热回流提取2-4次，合并提取液，减压浓缩后喷雾干燥即得。
优选地，所述水溶性锌盐选用硫酸锌、硝酸锌中的一种或多种，所述水溶性镁盐选用硫酸镁、硝酸镁、氯化镁中的一种或多种。
优选地，所述水溶性钾盐选用硫酸钾、硝酸钾、氯化钾中的一种或多种，水溶性铵盐选用硫酸铵、硝酸铵、碳酸铵中的一种或多种。
上述生长基质的制备方法，包括如下步骤：
步骤A，将高钙粉煤灰、铁矾土和凹凸棒石黏土混合研磨至80-120目；
步骤B，将步骤A所得混合粉末与园土拌匀；
步骤C，用水溶解腐植酸钠、水溶性锌盐、水溶性镁盐、水溶性钾盐、水溶性铵盐和番泻叶提取物，搅拌均匀；
步骤D，将步骤C所得水溶液均匀喷洒在步骤B所得混合固体上，边翻动边喷洒。
一种使用上述生长基质无性繁殖药用植物重楼的方法，包括外植体的选取、外植体的消毒、丛生芽的诱导、丛生芽的增殖、生根培养、炼苗移栽，炼苗移栽使用上述生长基质。
优选地，外植体选取重楼根茎带顶芽的切段；消毒方法为：将外植体表面清洗干净，先用75％酒精消毒，再用0.1％氯化汞消毒两次，吸干即可。
优选地，丛生芽的诱导方法为：将消毒后的外植体切成0.5cm大接入芽诱导培养基，芽诱导培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素2mg/L BA和0.4mg/L NAA；当无菌苗长至5-6厘米后，切取上部2-2.5厘米长顶芽茎段进行丛生芽的增殖。
优选地，丛生芽的增殖方法为：将顶芽茎段接入芽增殖培养基，芽增殖培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素1mg/L BA和0.05mg/L NAA；当增殖的丛生芽长至3-4厘米后，将健壮的芽单切，并进行生根培养。
优选地，生根培养方法为：将健壮的芽单切后接入生根培养基，生根培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素0.8mg/L NAA和75mg/L肌醇。
优选地，炼苗移栽方法为：经生根培养基培养后，将发育良好，具有2-3片展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3-4天后取出小苗，用清水洗去根部培养基，在有70％-80％遮荫度的大棚内，移栽到所述生长基质中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气30分钟，喷水雾保持空气湿度80％以上，10天后揭去薄膜，按常规管理。
本发明的优点：
本发明提供的生长基质及无性繁殖重楼的方法稳定高效，成活率高，且种苗的基础总皂苷含量明显升高，有利于生长出总皂苷含量丰富的药用重楼。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容。本领域的普通技术人员应当理解，对本发明技术方案的简单修改或者等同替换不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
实施例1：药用重楼的无性繁殖
生长基质的制备：
由如下重量份的成分制备而成：园土，140份；高钙粉煤灰，40份；铁矾土，25份；凹凸棒石黏土，15份；腐植酸钠，10份；水溶性锌盐，3份；水溶性镁盐，2份；水溶性钾盐，2份；水溶性铵盐，2份；水，40份；番泻叶提取物，8份.
所述番泻叶提取物的制备方法为：将番泻叶用体积百分含量为80％的乙醇溶液热回流提取3次，合并提取液，减压浓缩后喷雾干燥即得。
其中，所述水溶性锌盐选用硫酸锌，也可以选用硝酸锌，所述水溶性镁盐选用硫酸镁，也可以选用硝酸镁或氯化镁；所述水溶性钾盐选用硫酸钾，也可以选用硝酸钾或氯化钾，水溶性铵盐选用硫酸铵，也可以选用硝酸铵或碳酸铵。
制备方法包括如下步骤：
步骤A，将高钙粉煤灰、铁矾土和凹凸棒石黏土混合研磨至80-120目；
步骤B，将步骤A所得混合粉末与园土拌匀；
步骤C，用水溶解腐植酸钠、水溶性锌盐、水溶性镁盐、水溶性钾盐、水溶性铵盐和番泻叶提取物，搅拌均匀；
步骤D，将步骤C所得水溶液均匀喷洒在步骤B所得混合固体上，边翻动边喷洒。
无性繁殖方法：包括外植体的选取、外植体的消毒、丛生芽的诱导、丛生芽的增殖、生根培养、炼苗移栽，炼苗移栽使用上述生长基质。
其中，外植体选取重楼根茎带顶芽的切段；消毒方法为：将外植体表面清洗干净，先用75％酒精消毒，再用0.1％氯化汞消毒两次，吸干即可。
其中，丛生芽的诱导方法为：将消毒后的外植体切成0.5cm大接入芽诱导培养基，芽诱导培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素2mg/L BA和0.4mg/L NAA；当无菌苗长至5-6厘米后，切取上部2-2.5厘米长顶芽茎段进行丛生芽的增殖。
其中，丛生芽的增殖方法为：将顶芽茎段接入芽增殖培养基，芽增殖培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素1mg/L BA和0.05mg/L NAA；当增殖的丛生芽长至3-4厘米后，将健壮的芽单切，并进行生根培养。
其中，生根培养方法为：将健壮的芽单切后接入生根培养基，生根培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素0.8mg/L NAA和75mg/L肌醇。
其中，炼苗移栽方法为：经生根培养基培养后，将发育良好，具有2-3片展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3-4天后取出小苗，用清水洗去根部培养基，在有70％-80％遮荫度的大棚内，移栽到所述生长基质中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气30分钟，喷水雾保持空气湿度80％以上，10天后揭去薄膜，按常规管理。
实施例2：药用重楼的无性繁殖
生长基质的制备：
由如下重量份的成分制备而成：园土，120份；高钙粉煤灰，30份；铁矾土，20份；凹凸棒石黏土，10份；腐植酸钠，8份；水溶性锌盐，2份；水溶性镁盐，1份；水溶性钾盐，1份；水溶性铵盐，1.5份；水，30份；番泻叶提取物，6份。
所述番泻叶提取物的制备方法为：将番泻叶用体积百分含量为70％的乙醇溶液热回流提取4次，合并提取液，减压浓缩后喷雾干燥即得。
其中，所述水溶性锌盐选用硫酸锌，也可以选用硝酸锌，所述水溶性镁盐选用硫酸镁，也可以选用硝酸镁或氯化镁；所述水溶性钾盐选用硫酸钾，也可以选用硝酸钾或氯化钾，水溶性铵盐选用硫酸铵，也可以选用硝酸铵或碳酸铵。
制备方法包括如下步骤：
步骤A，将高钙粉煤灰、铁矾土和凹凸棒石黏土混合研磨至80-120目；
步骤B，将步骤A所得混合粉末与园土拌匀；
步骤C，用水溶解腐植酸钠、水溶性锌盐、水溶性镁盐、水溶性钾盐、水溶性铵盐和番泻叶提取物，搅拌均匀；
步骤D，将步骤C所得水溶液均匀喷洒在步骤B所得混合固体上，边翻动边喷洒。
无性繁殖方法：包括外植体的选取、外植体的消毒、丛生芽的诱导、丛生芽的增殖、生根培养、炼苗移栽，炼苗移栽使用上述生长基质。
其中，外植体选取重楼根茎带顶芽的切段；消毒方法为：将外植体表面清洗干净，先用75％酒精消毒，再用0.1％氯化汞消毒两次，吸干即可。
其中，丛生芽的诱导方法为：将消毒后的外植体切成0.5cm大接入芽诱导培养基，芽诱导培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素2mg/L BA和0.4mg/L NAA；当无菌苗长至5-6厘米后，切取上部2-2.5厘米长顶芽茎段进行丛生芽的增殖。
其中，丛生芽的增殖方法为：将顶芽茎段接入芽增殖培养基，芽增殖培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素1mg/L BA和0.05mg/L NAA；当增殖的丛生芽长至3-4厘米后，将健壮的芽单切，并进行生根培养。
其中，生根培养方法为：将健壮的芽单切后接入生根培养基，生根培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素0.8mg/L NAA和75mg/L肌醇。
其中，炼苗移栽方法为：经生根培养基培养后，将发育良好，具有2-3片展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3-4天后取出小苗，用清水洗去根部培养基，在有70％-80％遮荫度的大棚内，移栽到所述生长基质中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气30分钟，喷水雾保持空气湿度80％以上，10天后揭去薄膜，按常规管理。
实施例3：药用重楼的无性繁殖
生长基质的制备：
由如下重量份的成分制备而成：园土，160份；高钙粉煤灰，50份；铁矾土，30份；凹凸棒石黏土，20份；腐植酸钠，12份；水溶性锌盐，4份；水溶性镁盐，3份；水溶性钾盐，3份；水溶性铵盐，2.5份；水，50份；番泻叶提取物，10份。
所述番泻叶提取物的制备方法为：将番泻叶用体积百分含量为90％的乙醇溶液热回流提取2次，合并提取液，减压浓缩后喷雾干燥即得。
其中，所述水溶性锌盐选用硫酸锌，也可以选用硝酸锌，所述水溶性镁盐选用硫酸镁，也可以选用硝酸镁或氯化镁；所述水溶性钾盐选用硫酸钾，也可以选用硝酸钾或氯化钾，水溶性铵盐选用硫酸铵，也可以选用硝酸铵或碳酸铵。
制备方法包括如下步骤：
步骤A，将高钙粉煤灰、铁矾土和凹凸棒石黏土混合研磨至80-120目；
步骤B，将步骤A所得混合粉末与园土拌匀；
步骤C，用水溶解腐植酸钠、水溶性锌盐、水溶性镁盐、水溶性钾盐、水溶性铵盐和番泻叶提取物，搅拌均匀；
步骤D，将步骤C所得水溶液均匀喷洒在步骤B所得混合固体上，边翻动边喷洒。
无性繁殖方法：包括外植体的选取、外植体的消毒、丛生芽的诱导、丛生芽的增殖、生根培养、炼苗移栽，炼苗移栽使用上述生长基质。
其中，外植体选取重楼根茎带顶芽的切段；消毒方法为：将外植体表面清洗干净，先用75％酒精消毒，再用0.1％氯化汞消毒两次，吸干即可。
其中，丛生芽的诱导方法为：将消毒后的外植体切成0.5cm大接入芽诱导培养基，芽诱导培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素2mg/L BA和0.4mg/L NAA；当无菌苗长至5-6厘米后，切取上部2-2.5厘米长顶芽茎段进行丛生芽的增殖。
其中，丛生芽的增殖方法为：将顶芽茎段接入芽增殖培养基，芽增殖培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素1mg/L BA和0.05mg/L NAA；当增殖的丛生芽长至3-4厘米后，将健壮的芽单切，并进行生根培养。
其中，生根培养方法为：将健壮的芽单切后接入生根培养基，生根培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素0.8mg/L NAA和75mg/L肌醇。
其中，炼苗移栽方法为：经生根培养基培养后，将发育良好，具有2-3片展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3-4天后取出小苗，用清水洗去根部培养基，在有70％-80％遮荫度的大棚内，移栽到所述生长基质中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气30分钟，喷水雾保持空气湿度80％以上，10天后揭去薄膜，按常规管理。
对比实施例：
生长基质的制备：
由如下重量份的成分制备而成：园土，140份；高钙粉煤灰，40份；铁矾土，25份；凹凸棒石黏土，15份；腐植酸钠，10份；水溶性锌盐，3份；水溶性镁盐，2份；水溶性钾盐，2份；水溶性铵盐，2份；水，40份。
其中，所述水溶性锌盐选用硫酸锌，也可以选用硝酸锌，所述水溶性镁盐选用硫酸镁，也可以选用硝酸镁或氯化镁；所述水溶性钾盐选用硫酸钾，也可以选用硝酸钾或氯化钾，水溶性铵盐选用硫酸铵，也可以选用硝酸铵或碳酸铵。
制备方法包括如下步骤：
步骤A，将高钙粉煤灰、铁矾土和凹凸棒石黏土混合研磨至80-120目；
步骤B，将步骤A所得混合粉末与园土拌匀；
步骤C，用水溶解腐植酸钠、水溶性锌盐、水溶性镁盐、水溶性钾盐和水溶性铵盐，搅拌均匀；
步骤D，将步骤C所得水溶液均匀喷洒在步骤B所得混合固体上，边翻动边喷洒。
无性繁殖方法：包括外植体的选取、外植体的消毒、丛生芽的诱导、丛生芽的增殖、生根培养、炼苗移栽，炼苗移栽使用上述生长基质。
其中，外植体选取重楼根茎带顶芽的切段；消毒方法为：将外植体表面清洗干净，先用75％酒精消毒，再用0.1％氯化汞消毒两次，吸干即可。
其中，丛生芽的诱导方法为：将消毒后的外植体切成0.5cm大接入芽诱导培养基，芽诱导培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素2mg/L BA和0.4mg/L NAA；当无菌苗长至5-6厘米后，切取上部2-2.5厘米长顶芽茎段进行丛生芽的增殖。
其中，丛生芽的增殖方法为：将顶芽茎段接入芽增殖培养基，芽增殖培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素1mg/L BA和0.05mg/L NAA；当增殖的丛生芽长至3-4厘米后，将健壮的芽单切，并进行生根培养。
其中，生根培养方法为：将健壮的芽单切后接入生根培养基，生根培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素0.8mg/L NAA和75mg/L肌醇。
其中，炼苗移栽方法为：经生根培养基培养后，将发育良好，具有2-3片展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3-4天后取出小苗，用清水洗去根部培养基，在有70％-80％遮荫度的大棚内，移栽到所述生长基质中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气30分钟，喷水雾保持空气湿度80％以上，10天后揭去薄膜，按常规管理。
效果实施例：
统计炼苗移栽10天后种苗成活率及总皂苷含量(地上部分，以薯蓣皂苷元对照品)。
结果如下表：
成活率 总皂苷含量
实施例1 100％ 15.1％
实施例2 100％ 12.8％
实施例3 100％ 13.6％
对比实施例 91％ 3.9％
上述结果表明，本发明提供的生长基质及无性繁殖重楼的方法稳定高效，成活率高，且种苗的基础总皂苷含量明显升高，有利于生长出总皂苷含量丰富的药用重楼。
本领域的普通技术人员应当理解，对本发明技术方案的简单修改或者等同替换不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。

Claims (10)

1.一种生长基质，其特征在于，由如下重量份的成分制备而成：园土，120-160份；高钙粉煤灰，30-50份；铁矾土，20-30份；凹凸棒石黏土，10-20份；腐植酸钠，8-12份；水溶性锌盐，2-4份；水溶性镁盐，1-3份；水溶性钾盐，1-3份；水溶性铵盐，1.5-2.5份；水，30-50份；番泻叶提取物，6-10份；所述番泻叶提取物的制备方法为：将番泻叶用体积百分含量为70％-90％的乙醇溶液热回流提取2-4次，合并提取液，减压浓缩后喷雾干燥即得。
2.根据权利要求1所述的生长基质，其特征在于：所述水溶性锌盐选用硫酸锌、硝酸锌中的一种或多种，所述水溶性镁盐选用硫酸镁、硝酸镁、氯化镁中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的生长基质，其特征在于：所述水溶性钾盐选用硫酸钾、硝酸钾、氯化钾中的一种或多种，水溶性铵盐选用硫酸铵、硝酸铵、碳酸铵中的一种或多种。
4.权利要求1-3任一所述生长基质的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤A，将高钙粉煤灰、铁矾土和凹凸棒石黏土混合研磨至80-120目；
步骤B，将步骤A所得混合粉末与园土拌匀；
步骤C，用水溶解腐植酸钠、水溶性锌盐、水溶性镁盐、水溶性钾盐、水溶性铵盐和番泻叶提取物，搅拌均匀；
步骤D，将步骤C所得水溶液均匀喷洒在步骤B所得混合固体上，边翻动边喷洒。
5.一种使用权利要求1-3任一所述生长基质无性繁殖药用植物重楼的方法，其特征在于：包括外植体的选取、外植体的消毒、丛生芽的诱导、丛生芽的增殖、生根培养、炼苗移栽，炼苗移栽使用权利要求1-3任一所述生长基质。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：外植体选取重楼根茎带顶芽的切段；消毒方法为：将外植体表面清洗干净，先用75％酒精消毒，再用0.1％氯化汞消毒两次，吸干即可。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：丛生芽的诱导方法为：将消毒后的外植体切成0.5cm大接入芽诱导培养基，芽诱导培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素2mg/L BA和0.4mg/L NAA；当无菌苗长至5-6厘米后，切取上部2-2.5厘米长顶芽茎段进行丛生芽的增殖。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，丛生芽的增殖方法为：将顶芽茎段接入芽增殖培养基，芽增殖培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素1mg/L BA和0.05mg/L NAA；当增殖的丛生芽长至3-4厘米后，将健壮的芽单切，并进行生根培养。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，生根培养方法为：将健壮的芽单切后接入生根培养基，生根培养基以MS培养基为基础培养基，附加5％蔗糖和1.2％琼脂，调节pH至6.3；基础培养基中还添加有激素0.8mg/L NAA和75mg/L肌醇。
10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，炼苗移栽方法为：经生根培养基培养后，将发育良好，具有2-3片展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3-4天后取出小苗，用清水洗去根部培养基，在有70％-80％遮荫度的大棚内，移栽到所述生长基质中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气30分钟，喷水雾保持空气湿度80％以上，10天后揭去薄膜，按常规管理。
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