CN106689215A - 一种防治蔬菜根结线虫的微生物制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及防治蔬菜根结线虫的微生物制剂及其制备方法，原料重量份组成包括：抗生素菌渣70‑80、豆类丝核菌发酵液45‑50、绿色木霉5‑10、海洋放线菌N331 5‑10、伊维菌素10‑15、中药浓缩液10‑15、钙镁磷肥50‑60、羧甲基淀粉钠8‑15、泥炭土15‑20、粘土10‑15。本发明微生物制剂通过抗生素菌渣、豆类丝核菌发酵液、绿色木霉、海洋放线菌、伊维菌素、中药浓缩液等混用，不仅提高了杀根结线虫毒力，因微生物药剂对线虫的穿透性，更有利于植物吸收，提高了蔬菜根部对线虫的防御能力，增效更为显著，各原料复配得到微生物制剂将能够有效提高防治根结线虫的效果，可明显提高经济和社会效益。

Description

一种防治蔬菜根结线虫的微生物制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及微生物及农药领域，特别是涉及一种防治蔬菜根结线虫的微生物制剂及其制备方法。
背景技术
根结线虫是寄生植物的主要线虫之一，体形微小，在土壤中或植物幼根中生活，主要靠土、苗、灌水等途径传播。其寄主主要为番茄、芹菜、莴笋、菜豆、茄子、苦瓜多种蔬菜，还可危害烟草、生姜、山药、花生等多种农作物。随着我国农业生产和农村经济的发展，保护地蔬菜播种面积和复种指数不断提高，而由于种植品种单一，耕地面积有限，造成轮作和倒茬困难，根结线虫病危害日趋严重，每年造成的危害轻者可减产10％～20％，重者60％以上甚至绝产，严重影响了蔬菜的产量和质量。此外，花生和烟草也因根结线虫危害，给生产带来较大不利影响。
目前，根结线虫病通常以防为主，采用化学剂杀虫。化学剂虽见效快，但成本高，严重污染环境，对人、畜不安全。而生物防治能够有效防治根结线虫病，且不污染环境，具有很大的发展潜力，通过将真菌、细菌等微生物引入有害线虫生活环境，借助竞争、捕食、寄生、拮抗等作用机制控制线虫。但单一生物菌在田间应用中防效不稳，混和菌剂对植物病原物不同阶段发生作用的、具多种方式和作用位点的生防菌，可在植物不同生育期发挥作用的生防菌可能是解决上述问题的一个重要途径。但纯生物制剂虽防效显著，同样存在对发病作物杀虫效果不佳，且菌种混合不当亦会使防效下降等缺点，因此，获得新的、防治结合的、效果稳定的根结线虫微生物制剂，具有重要的实际意义。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术中存在的上述不足，提出一种防治蔬菜根结线虫的微生物制剂，以提高对植物根结线虫的防治效果。
同时，本发明还提供了上述防治蔬菜根结线虫的微生物制剂的制备方法。
本发明技术方案如下：
一种防治蔬菜根结线虫的微生物制剂，原料重量份组成包括：抗生素菌渣70-80、豆类丝核菌发酵液45-50、绿色木霉5-10、海洋放线菌N331 5-10、伊维菌素10-15、中药浓缩液10-15、钙镁磷肥50-60、羧甲基淀粉钠8-15、泥炭土15-20、粘土10-15。
所述的抗生素菌渣为氨基糖甙类菌渣、大环内酯类菌渣和喹诺酮类菌渣中的一种或几种混合。
所述的豆类丝核菌发酵液制备方法为：菌种在液体培养基中培养5-7天，打散菌丝并摇碎摇匀，然后继续培养5天，期间每隔8h摇动一次，培养结束后滤除菌丝，滤液加热至75-80℃保温2h，得豆类丝核菌发酵液；
所述的液体培养基组分为：土豆浸出液 200g/L，葡萄糖20g/L，乙酸钠 1g/L， KH2PO42g/L，MgSO4 0.25g/L，FeSO4 1g/L，CaCl2 0.1g/L，MnSO4 5mg/L，VB1 5mg/L，酒石酸铵0.2g/L。
所述的中药浓缩液：其中药原料重量份组成为蓖麻25-30、万寿菊15-18、紫草15-18、夹竹桃8-10、孔雀草5-8、青蒿5-8、胜红蓟5-8；
所述的中药浓缩液制备方法为：取蓖麻、万寿菊、紫草、夹竹桃、孔雀草、青蒿和胜红蓟，粉碎后混合，加入药材2倍体积的水，浸泡2h，过滤，得滤液A，滤渣按1-2％质量浓度的添加量加入乳化剂 T-20，然后采用水蒸气蒸馏法，用挥发油提取器提取6h，得提取物，剩余固体以体积浓度85％的乙醇水溶液，70℃浸提3-4h，每隔0.5h超声5min，过滤，滤液与滤液A和提取物合并，浓缩至相对密度为1.25，得中药浓缩液；
所述的泥炭土为低位泥炭土，有机质含量多为60-70%，pH值6.0-7.0；
上述防治蔬菜根结线虫的微生物制剂的制备方法，步骤包括：
1）取抗生素菌渣，雾化喷淋同体积的浓度为95%的双氧水，搅拌均匀，密封静置5-6h，调节含水量为65%后注入臭氧并搅拌30min，使臭氧与抗生素菌渣充分混合，搅拌过程臭氧浓度保持1.5g/m3，加热至50-60℃保温2h，降至室温， 通风放置10-15天后，调节含水量至40%，加入蛋白水解酶，加入浓度为0.8-1.0g/m3，28-32℃发酵7天，再次加热至50-60℃保温2h，杀菌烘干，备用；
2）抗生素菌渣、豆类丝核菌发酵液混合均匀，表面喷洒占混合料重量5%的酵母菌发酵液，密封，35-37℃厌氧发酵15-20天，100℃的蒸汽常压灭菌，烘干，备用；
3）将所有原料混合、造粒、干燥，得防治蔬菜根结线虫的微生物制剂。
步骤1）中，所述的蛋白水解酶为丝氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶中的一种或几种混合。
步骤2）中，所述的酵母菌发酵液中酵母菌质量浓度为0.4-0.5%。
本发明防治蔬菜根结线虫的微生物制剂，通过抗生素菌渣、豆类丝核菌发酵液、绿色木霉、海洋放线菌、伊维菌素、中药浓缩液等混用，不仅提高了杀根结线虫毒力，因微生物药剂对线虫的穿透性，更有利于植物吸收，提高了蔬菜根部对线虫的防御能力，增效更为显著。抗生素菌渣经预处理后，失活变性，可完全去除抗生素效价，解决了药残问题对人体伤害的难题，充分利用其高蛋白、高能量的同时，还具有很好的抗病和抗线虫能力。豆类丝核菌(Rhizoctonia leguminicola)发酵代谢产物中含有生物碱、苦马豆素等成分，配合海洋放线菌N331、中药浓缩液等，可抑制根结线虫的胚胎发育与胚后发育，并通过抑制根结线虫的乙酰胆碱酯酶活性，阻碍线虫生长与繁殖，对根结线虫有极强的毒杀活性，上述原料复配得到微生物制剂将能够有效提高防治根结线虫的效果，可明显提高经济和社会效益。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进一步详细说明。
下述实施例所用微生物菌种可自行分离得到，或通过购买得到。
实施例1
一种防治蔬菜根结线虫的微生物制剂，原料重量份组成包括：抗生素菌渣75、豆类丝核菌发酵液48、绿色木霉7、海洋放线菌N331 8、伊维菌素14、中药浓缩液13、钙镁磷肥55、羧甲基淀粉钠12、泥炭土18、粘土12；抗生素菌渣为氨基糖甙类菌渣；泥炭土为低位泥炭土，有机质含量多为60-70%，pH值6.0-7.0。
防治蔬菜根结线虫的微生物制剂制备方法，步骤包括：
1）制备豆类丝核菌发酵液：豆类丝核菌菌种在液体培养基中培养6天，打散菌丝并摇碎摇匀，然后继续培养5天，期间每隔8h摇动一次，培养结束后滤除菌丝，滤液加热至75-80℃保温2h，得豆类丝核菌发酵液；液体培养基组分为：土豆浸出液 200g/L，葡萄糖20g/L，乙酸钠 1g/L， KH2PO4 2g/L，MgSO4 0.25g/L，FeSO4 1g/L，CaCl2 0.1g/L，MnSO4 5mg/L，VB1 5mg/L，酒石酸铵 0.2g/L；
2）制备中药浓缩液：取重量份组成为蓖麻30、万寿菊18、紫草18、夹竹桃10、孔雀草8、青蒿8、胜红蓟8的中药原料，粉碎后混合，加入药材2倍体积的水，浸泡2h，过滤，得滤液A，滤渣按1-2％质量浓度的添加量加入乳化剂 T-20，然后采用水蒸气蒸馏法，用挥发油提取器提取6h，得提取物，剩余固体以体积浓度85％的乙醇水溶液，70℃浸提4h，每隔0.5h超声5min，过滤，滤液与滤液A和提取物合并，浓缩至相对密度为1.25，得中药浓缩液；
3）取抗生素菌渣，雾化喷淋同体积的浓度为95%的双氧水，搅拌均匀，密封静置6h，调节含水量为65%后注入臭氧并搅拌30min，使臭氧与抗生素菌渣充分混合，搅拌过程臭氧浓度保持1.5g/m3，加热至50-60℃保温2h，降至室温， 通风放置12天后，调节含水量至40%，加入蛋白水解酶，加入浓度为1.0g/m3，28-32℃发酵7天，再次加热至50-60℃保温2h，杀菌烘干，备用；所述的蛋白水解酶为质量比1:1的丝氨酸蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶混合；
4）抗生素菌渣、豆类丝核菌发酵液混合均匀，表面喷洒占混合料重量5%的酵母菌发酵液，密封，35-37℃厌氧发酵16天，100℃的蒸汽常压灭菌，烘干，备用；所述的酵母菌发酵液中酵母菌质量浓度为0.4-0.5%；
5）将所有原料混合、造粒、干燥，得防治蔬菜根结线虫的微生物制剂。
实施例2
一种防治蔬菜根结线虫的微生物制剂，原料重量份组成包括：抗生素菌渣70、豆类丝核菌发酵液45、绿色木霉5、海洋放线菌N331 5、伊维菌素10、中药浓缩液10、钙镁磷肥50、羧甲基淀粉钠8、泥炭土15、粘土10；抗生素菌渣为大环内酯类菌渣；泥炭土为低位泥炭土，有机质含量多为60-70%，pH值6.0-7.0。
防治蔬菜根结线虫的微生物制剂制备方法，步骤包括：
1）制备豆类丝核菌发酵液：同实施例1；
2）制备中药浓缩液：中药原料重量份组成为蓖麻25、万寿菊15、紫草15、夹竹桃8、孔雀草5、青蒿5、胜红蓟5，方法同实施例1；
3）取抗生素菌渣，雾化喷淋同体积的浓度为95%的双氧水，搅拌均匀，密封静置5h，调节含水量为65%后注入臭氧并搅拌30min，使臭氧与抗生素菌渣充分混合，搅拌过程臭氧浓度保持1.5g/m3，加热至50-60℃保温2h，降至室温， 通风放置10天后，调节含水量至40%，加入蛋白水解酶，加入浓度为0.8g/m3，28-32℃发酵7天，再次加热至50-60℃保温2h，杀菌烘干，备用；所述的蛋白水解酶为质量比1:1:1的丝氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶混合；
4）抗生素菌渣、豆类丝核菌发酵液混合均匀，表面喷洒占混合料重量5%的酵母菌发酵液，密封，35-37℃厌氧发酵15天，100℃的蒸汽常压灭菌，烘干，备用；所述的酵母菌发酵液中酵母菌质量浓度为0.4-0.5%；
5）将所有原料混合、造粒、干燥，得防治蔬菜根结线虫的微生物制剂。
实施例3
一种防治蔬菜根结线虫的微生物制剂，原料重量份组成包括：抗生素菌渣80、豆类丝核菌发酵液50、绿色木霉10、海洋放线菌N331 10、伊维菌素15、中药浓缩液15、钙镁磷肥60、羧甲基淀粉钠15、泥炭土20、粘土15；抗生素菌渣为氨基糖甙类菌渣、大环内酯类菌渣和喹诺酮类菌渣混合；泥炭土为低位泥炭土，有机质含量多为60-70%，pH值6.0-7.0。
防治蔬菜根结线虫的微生物制剂制备方法，步骤同实施例1：
2）中药原料重量份组成为蓖麻30、万寿菊18、紫草18、夹竹桃10、孔雀草8、青蒿8、胜红蓟8；
3）蛋白水解酶为同质量的丝氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶的混合。
田间土壤栽培条件下杀根结线虫试验：
蔬菜品种：番茄、土豆、黄瓜、生姜。
供试土壤事消毒，经检查无线虫存活，每个蔬菜品种地块随机分为5组，实验组1-3，对照组1-2。
供试药物：实验组1-3，本发明实施例1-3微生物制剂， 用量为2-3kg /667m2；对照组1，噻唑磷，参照正常用量；对照组2杜邦克安勃，参照正常用量。使用方法为：在番茄、黄瓜、和生姜等蔬菜种植期，施于种植沟或种植穴中，然后移栽或播种即可。
供试线虫为分别为番茄根结线虫、南方根结线虫、北方根结线虫的二龄幼虫。
不同种类的根结线虫按每类线虫100条/1000克土壤的比例接种到土壤中。温室温度为线虫生长的适宜温度28℃，施药3天后检查土壤和作物根部的线虫虫密度，计算相对防效，实验结果见表1。
表1 田间土壤栽培条件下杀根结线虫试验药效
通过表1可以发现，本发明微生物制剂对结线虫2龄幼虫具有较高的毒力，对番茄根结线虫的幼虫作用十分显著。
大棚蔬菜或露地蔬菜田间试验证明，防治根结线虫病，用本发明制成的微生物制剂， 用量为2-3kg /667m2，对根结线虫的防治效果均可达90%以上，于番茄、黄瓜等移栽时撒施于移栽穴（沟）内，可完全控制根结线虫危害，且对蔬菜生长无不利影响。
以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。。

Claims (10)

1.一种防治蔬菜根结线虫的微生物制剂，其特征在于，原料重量份组成包括：抗生素菌渣70-80、豆类丝核菌发酵液45-50、绿色木霉5-10、海洋放线菌N331 5-10、伊维菌素10-15、中药浓缩液10-15、钙镁磷肥50-60、羧甲基淀粉钠8-15、泥炭土15-20、粘土10-15。
2.根据权利要求1所述的微生物制剂，其特征在于：所述的抗生素菌渣为氨基糖甙类菌渣、大环内酯类菌渣和喹诺酮类菌渣中的一种或几种混合。
3.根据权利要求1所述的微生物制剂，其特征在于：所述的豆类丝核菌发酵液制备方法为：菌种在液体培养基中培养5-7天，打散菌丝并摇碎摇匀，然后继续培养5天，期间每隔8h摇动一次，培养结束后滤除菌丝，滤液加热至75-80℃保温2h，得豆类丝核菌发酵液。
4.根据权利要求3所述的微生物制剂，其特征在于：所述的液体培养基组分为：土豆浸出液 200g/L，葡萄糖20g/L，乙酸钠1g/L， KH2PO4 2g/L，MgSO4 0.25g/L，FeSO41g/L，CaCl20.1g/L，MnSO4 5mg/L，VB1 5mg/L，酒石酸铵0.2g/L。
5.根据权利要求1所述的微生物制剂，其特征在于：所述的中药浓缩液：其中药原料重量份组成为蓖麻25-30、万寿菊15-18、紫草15-18、夹竹桃8-10、孔雀草5-8、青蒿5-8、胜红蓟5-8。
6.根据权利要求1或5所述的微生物制剂，其特征在于：所述的中药浓缩液制备方法为：取蓖麻、万寿菊、紫草、夹竹桃、孔雀草、青蒿和胜红蓟，粉碎后混合，加入药材2倍体积的水，浸泡2h，过滤，得滤液A，滤渣按1-2％质量浓度的添加量加入乳化剂 T-20，然后采用水蒸气蒸馏法，用挥发油提取器提取6h，得提取物，剩余固体以体积浓度85％的乙醇水溶液，70℃浸提3-4h，每隔0.5h超声5min，过滤，滤液与滤液A和提取物合并，浓缩至相对密度为1.25，得中药浓缩液。
7.根据权利要求1所述的微生物制剂，其特征在于：所述的泥炭土为低位泥炭土，有机质含量多为60-70%，pH值6.0-7.0。
8.权利要求1-7任一项所述的防治蔬菜根结线虫的微生物制剂的制备方法，其特征在于，步骤包括：
1）取抗生素菌渣，雾化喷淋同体积的浓度为95%的双氧水，搅拌均匀，密封静置5-6h，调节含水量为65%后注入臭氧并搅拌30min，使臭氧与抗生素菌渣充分混合，搅拌过程臭氧浓度保持1.5g/m3，加热至50-60℃保温2h，降至室温， 通风放置10-15天后，调节含水量至40%，加入蛋白水解酶，加入浓度为0.8-1.0g/m3，28-32℃发酵7天，再次加热至50-60℃保温2h，杀菌烘干，备用；
2）抗生素菌渣、豆类丝核菌发酵液混合均匀，表面喷洒占混合料重量5%的酵母菌发酵液，密封，35-37℃厌氧发酵15-20天，100℃的蒸汽常压灭菌，烘干，备用；
3）将所有原料混合、造粒、干燥，得防治蔬菜根结线虫的微生物制剂。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：步骤1）中，所述的蛋白水解酶为丝氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶中的一种或几种混合。
10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：步骤2）中，所述的酵母菌发酵液中酵母菌质量浓度为0.4-0.5%。
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