CN106680230B - 一种富勒烯油中c60或c70的含量测定方法 - Google Patents
一种富勒烯油中c60或c70的含量测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106680230B CN106680230B CN201710010555.8A CN201710010555A CN106680230B CN 106680230 B CN106680230 B CN 106680230B CN 201710010555 A CN201710010555 A CN 201710010555A CN 106680230 B CN106680230 B CN 106680230B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fullerene
- solution
- oil
- toluene
- reference substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229910003472 fullerene Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 149
- XMWRBQBLMFGWIX-UHFFFAOYSA-N C60 fullerene Chemical compound C12=C3C(C4=C56)=C7C8=C5C5=C9C%10=C6C6=C4C1=C1C4=C6C6=C%10C%10=C9C9=C%11C5=C8C5=C8C7=C3C3=C7C2=C1C1=C2C4=C6C4=C%10C6=C9C9=C%11C5=C5C8=C3C3=C7C1=C1C2=C4C6=C2C9=C5C3=C12 XMWRBQBLMFGWIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 148
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 45
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 159
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 69
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 60
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims abstract description 39
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims abstract description 25
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims abstract description 25
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 20
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims abstract description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000003068 static effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000013461 design Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000004064 recycling Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 21
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 14
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 13
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 7
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 37
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical group CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 24
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 12
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- ATLMFJTZZPOKLC-UHFFFAOYSA-N C70 fullerene Chemical compound C12=C(C3=C4C5=C67)C8=C9C%10=C%11C%12=C%13C(C%14=C%15C%16=%17)=C%18C%19=C%20C%21=C%22C%23=C%24C%21=C%21C(C=%25%26)=C%20C%18=C%12C%26=C%10C8=C4C=%25C%21=C5C%24=C6C(C4=C56)=C%23C5=C5C%22=C%19C%14=C5C=%17C6=C5C6=C4C7=C3C1=C6C1=C5C%16=C3C%15=C%13C%11=C4C9=C2C1=C34 ATLMFJTZZPOKLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 5
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 5
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 235000014443 Pyrus communis Nutrition 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 4
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 description 4
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical group CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 125000003944 tolyl group Chemical group 0.000 description 3
- -1 use UV detector Substances 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical group ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- WSGYTJNNHPZFKR-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxypropanenitrile Chemical compound OCCC#N WSGYTJNNHPZFKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HXYXTCJDWHHCBW-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;toluene Chemical compound CC#N.CC1=CC=CC=C1 HXYXTCJDWHHCBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TZIQWQARHPGHIG-UHFFFAOYSA-N anthrarobin Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=C(O)C(O)=CC=C3C(O)=C21 TZIQWQARHPGHIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003026 anti-oxygenic effect Effects 0.000 description 1
- BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N antipyrene Natural products C1=CC=C2C=CC3=CC=CC4=CC=C1C2=C43 BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000008157 edible vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 231100000613 environmental toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 239000004210 ether based solvent Substances 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N fluoranthrene Natural products C1=CC(C2=CC=CC=C22)=C3C2=CC=CC3=C1 GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002804 graphite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010439 graphite Substances 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 125000001484 phenothiazinyl group Chemical group C1(=CC=CC=2SC3=CC=CC=C3NC12)* 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 125000005581 pyrene group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 239000012087 reference standard solution Substances 0.000 description 1
- 102220154434 rs186214874 Human genes 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
- G01N21/33—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry using ultraviolet light
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
本发明公开了一种富勒烯油中C60或C70含量测定方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)对照品标准溶液制备：取富勒烯C60或C70溶解于甲苯溶液中即可；(2)供试品溶液制备：取富勒烯油、水、乙醚加入到分液漏斗中萃取，静止分层，吸出上层液I离心得沉淀物；用乙醚洗涤分液漏斗2‑4次，再加入甲苯萃取，静止分层，取上层液II；将沉淀物、上层液II置于圆底烧瓶中回收溶剂，残留物定容至甲苯溶液中即可；(3)用紫外分光光度法或高效液相色谱法测定，该方法能够真实可靠检测出富勒烯油中富勒烯的产品含量，适合产业化日常检验。
Description
技术领域
本发明涉及一种化学领域，特别涉及一种富勒烯油中C60或C70的含量测定方法。
背景技术
1985年科学家Kroto、Smalley、Curl等人在研究太空深处的碳元素时发现了C60富勒烯，1996年三人因此而获得诺贝尔化学奖。富勒烯与金刚石、石墨同为碳的同素异形体。C60是由60个碳原子组成的球形分子，由12个五边形和20个六边形组成，每个碳原子和相邻的三个碳原子通过SP2杂化成键，因形似足球而被称为―足球烯”。
具有笼状碳原子团簇结构的系列分子被统称为—富勒烯，主要有空心富勒烯、内嵌富勒烯、富勒烯衍生物及杂环富勒烯等。常见的C60、C70、C76、C84等种类。
富勒烯的多个P轨道构成的大π键共轭体系，使得其具有较强的接受电子的能力，因其独特的结构和理化性质，使其具有优异的清除自由基性能，被称为―自由基海绵”，同时还表现出了优异的抗氧化性能。使其在化妆品材料、生物医药等方面得到广泛关注。
萃取，又称溶剂萃取或液夜萃取，利用物质在两种互不相容或微溶的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使物质从一种溶剂内转移到另一种溶剂中。
高校液相色谱能够快速高效的对所做样品进行检测分离，使用紫外检测器，进样量为μL量级。紫外检测适用于有机分子具紫外或可见吸收基团，有紫外或可见吸收能力的物质检测，富勒烯C60/70具有明显的紫外吸收，可采用紫外检测器能够快速准确得到物质中富勒烯含量。
Biomaterials,Volume 33,Issue 19,June 2012,Pages 4936-4946，文章中提出采用HPLC检测小鼠内脏中富勒烯含量，所用流动相溶剂为甲苯和甲醇，组织中提取富勒烯溶剂为乙腈和甲苯，因此文章中萃取和检测方法仅适用于生物组织内提取富勒烯的含量测试。CN201410026246公开一种金属富勒烯定量分析方法，采用紫外可见分光光度法分别测定其吸光度，绘制吸光度-浓度标准曲线，测定未知浓度的待测金属富勒烯有机试剂溶液的吸光度，根据所述标准曲线得出待测金属富勒烯溶液浓度。此技术注重金属富勒烯的检测，只适用于检测溶于有机试剂中金属富勒烯的含量，属于金属富勒烯制备分离纯化过程中的一个步骤。而且金属富勒烯在低浓度情况下紫外吸收峰很弱，高浓度范围时的紫外吸收容易背离朗格缪尔定律，通过紫外检测容易产生较大误差。因此利用紫外检测金属富勒烯的方法只能作为碳灰中金属富勒烯含量的一个粗略估算，不能适用于真正产品的严格检测。Environmental Toxicology and Chemistry,Vol.27,No.9,pp.1852–1859,2008文章中提出的是化妆品中富勒烯的检测方法，是针对水溶性富勒烯产品中富勒烯含量的检测方法，所用溶剂为甲苯和乙腈，文章中指出所检测出的产品中富勒烯的含量与产品标注的含量有非常大的差值，因为准确性较差。
富勒烯优异的抗氧化特性使得它在生物医药领域应用潜力巨大，将富勒烯分散到高品质食用油中是一种简单有效的剂型给药方式，已经被广泛应用，目前还没检索到油溶性富勒烯产品的含量精确测定方法，尤其适用于空心富勒烯C60，C70的含量测定，因此建立一套简便科学合理的富勒烯油中富勒烯的精确检测方法就显得尤为重要。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种富勒烯油中C60或C70的含量测定方法，该方法能够真实、准确、可靠检测出产品含量且方法具有重复性好，操作简便的优点。
本发明是通过下述技术方案实现的：
一种富勒烯油中C60或C70含量测定方法，包括如下步骤：
(1)对照品标准溶液制备：取富勒烯C60或C70溶解于甲苯溶液中即可；
(2)供试品溶液制备：取富勒烯油、水、乙醚加入到分液漏斗中萃取，静止分层，吸出上层液I离心得沉淀物；用乙醚洗涤分液漏斗，再加入甲苯萃取，静止分层，取上层液II；将沉淀物、上层液II置于圆底烧瓶中回收溶剂，残留物定容至甲苯溶液中即可；
(3)用紫外分光光度法或高效液相色谱法测定。
所述步骤(1)对照品标准溶液为3-15组浓度呈阶梯分布的溶液，对照品标准溶液浓度为0.001-1.0mg/ml。
进一步优选，步骤(1)对照品标准溶液为7-10组浓度呈阶梯分布的溶液，对照品标准溶液浓度为0.005-1.0mg/ml。
本发明步骤(1)采用先配制母液，然后将母液稀释成不同浓度的标准溶液。
进一步优选，步骤(1)对照品标准溶液：取富勒烯C60或C70对照品分别配制成0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml的甲苯标准溶液；
或0.005mg/ml、0.01mg/ml、0.015mg/ml、0.02mg/ml、0.025mg/ml、0.03mg/ml、0.035mg/ml、0.04mg/ml、0.045mg/ml、0.05mg/ml的甲苯标准溶液。
上述步骤(1)对照标准溶液的制备呈7-10组阶梯浓度的目的取多个点测试后，标准曲线精度更高，测试范围更广。
本发明所述步骤(2)中富勒烯油、水、乙醚的体积比为(2-6):(0.5-2):(1-3)。优选富勒烯油、水、乙醚的体积比为4:1:2。该比例在保证富勒烯全部萃取的情况下尽量少用乙醚溶剂，从而减少溶剂的浪费及降低乙醚使用过多对人体的伤害。
本发明步骤(2)所述乙醚可用氯仿或乙酸乙酯代替。
进一步优选，步骤(2)供试品溶液的制备：取富勒烯油、水、乙醚体积比4:2:1至于分液漏斗中，充分振摇，放气，静止分层，待上层溶液澄清后，吸出上层液I后离心得沉淀物；再用乙醚洗涤分液漏斗2-4次后加入甲苯充分振摇，静止分层，取上层液II；将沉淀物、上层液II置于圆底烧瓶中旋蒸回收溶剂，残留物定容至甲苯溶液中即可。
本发明步骤(3)测定法中所述的紫外分光光度法，包括测定步骤(1)的标准溶液吸光度，并绘制标准曲线；测定步骤(2)供试品溶液的吸光度；根据标准曲线得出供试品溶液中C60或C70的含量，其中波长300nm-500nm。进一步优选波长为335nm和470nm。
本发明步骤(3)测定法中所述的高效液相色谱法，包括HPLC测定步骤(1)对照品各个浓度的积分峰面积，绘制富勒烯标准曲线；测定步骤(2)高效液相测定供试品溶液得其峰面积，利用已制定标准曲线来标定富勒烯浓度；其中色谱柱PYE柱，流动相为甲苯溶液，流速0.3-1.5ml/min，紫外检测器波长300nm-400nm，温度15-35℃。进一步优选，所述流速0.5ml/min，紫外检测器波长310nm、温度25℃，进样量20μL。
本发明的高效液相色谱法中对照品标准溶液和供试品溶液，进样前需要滤膜滤过，所述滤膜为0.22μm。
本发明所述的富勒烯油为现有技术，例如专利CN103826472A、
CN101283080A、CN104997646A中公开的富勒烯油的制备或者所用富勒烯油根据Biomaterials Volume 33,Issue 19,June 2012,Pages 4936-4946的制备方法制备。
本发明所述的富勒烯为空心富勒烯。富勒烯C60或C70由于结构上的高度对称性，没有重叠的分子轨道，因而是一种稳定的分子，在低浓度富勒烯甲苯溶液的情况下，通过紫外分光光度法或HPLC能够快速准确的得到溶液内富勒烯含量。通过本发明将富勒烯油中的富勒烯充分萃取，得到杂质少、纯度高、溶解性好的富勒烯固体。采用紫外分光光度法或高效液相色谱法对得到的富勒烯进行检测，得到的数据准确可靠、重复性好，操作简便。本方法优点在于使用化学试剂量小、污染小、快速准确的检测出富勒烯的含量。
本发明的富勒烯油中富勒烯C60或C70含量测定方法是通过大量试验获得的，通过下述试验例进行阐述：
试验例一、供试品溶液提取溶剂筛选试验
1.方法：本发明供试品溶液制备中将表1中有机试剂加入分液漏斗后均加入水溶液，富勒烯油，有机相与水相分层，进行萃取处理。
表1萃取试剂及结果
| 试剂 | 富勒烯油状态 | 富勒烯状态 | 测试周期 |
| 甲苯 | 互溶 | 未析出 | 无 |
| 甲醇 | 互溶 | 析出 | 2Day |
| 乙醇 | 分相 | 析出 | 7Day |
| 乙腈 | 分相 | 析出 | 7Day |
| 乙醚 | 互溶 | 析出 | 30min |
| 甲苯和乙腈 | 互溶 | 未析出 | 无 |
2.结果：
甲苯：选择甲苯是因为富勒烯易溶于甲苯溶液中(常温下最大溶解度3mg/ml)，经过萃取未能够直接将富勒烯萃取出。甲醇：甲醇相对于测试溶液是不良溶液，稀释后降低富勒烯在植物油中的溶解度，从而析出，但测试周期长。乙醇：乙醇相对于测试溶液是不良溶液，稀释后降低富勒烯在植物油中的溶解度，从而析出，但测试周期长。乙腈：乙腈相对于测试溶液是不良溶液，稀释后降低富勒烯在植物油中的溶解度，从而析出，但测试周期长。乙醚：乙醚经过萃取富勒烯植物油后，富勒烯能够快速析出，测试周期短。乙腈和甲苯：乙腈和甲苯按体积比5:5进行混合使用，经过萃取未能够直接将富勒烯萃取出。
3.结论：通过上述分析，本发明采用乙醚做为富勒烯油的萃取溶剂最佳。
试验例二:高效液相色谱法色谱柱的选择
本发明在色谱柱筛选过程中选择三种色谱柱进行分析，结果如下：
Buckyprep-M吩噻嗪基键合硅胶柱是专为分离金属富勒烯而设计的吩噻嗪基键合硅胶柱，金属富勒烯比其他富勒烯在此柱上的滞留尤为强烈，但对空心富勒烯检测精度较低。
Buckyprep芘基丙基键合硅胶色谱柱，主要制备分离富勒烯及金属富勒烯，100％甲苯为流动相检测精度相对较低。
Cosmosil芘基乙基色谱柱PYE是一种2-(1-芘)乙基键合硅胶填料的反相柱，此柱利用平面芘环结构相互作用来分离同分异构体，分离精确。
试验例三:高效液相色谱法流动相的选择
在试验过程中单独使用甲醇-水、乙腈-水后，检测结果没有色谱峰；二甲苯毒性较大，不适合产业化检验；甲苯出峰时间适中且峰型对称；甲苯-乙腈和甲醇-乙腈混合溶剂虽然也能够出峰，但是峰型不好，峰形偏宽，分离度低，有前沿峰或拖尾现象，而且混合液需要配置特殊比例才能够互溶，产业检验比较繁琐。综上，对于本发明富勒烯油中富勒烯C60、C70的的流动相选择单相甲苯溶剂。
试验例四：富勒烯C60MALDI-TOF图分析
1、取少量萃取所得固体(实施例1中所述残留物)，甲苯完全溶解得溶液I，待用。
2、用毛细管蘸取少量蒽三酚基质，甲苯完全溶解，得溶液II待用。
3、10ul移液枪分别移取4ul溶液I和4ul溶液II于0.5ml试管内，移液枪吹打均匀得溶液III。
4、质谱板上选取一点后，用毛细管蘸取溶液III，点到所选点位。
5、放于质谱检测器内检测，即得。
结果：通过图1可见，本发明方法最终萃取的富勒烯纯度高，没有其他杂质残留。
试验例五：本发明供试品制备的富勒烯固体元素分析
方法：萃取所得固体(实施例4残留物)真空干燥过夜，称取30mg干燥后固体放于锡舟内，置于C、H、N元素分析仪检测，即得。有机化学样品在氦气作为载气的石英反应管中加氧的状态下，瞬间燃烧，燃烧后的气体产物经过氧化、还原随载气进入色谱柱进行分离，按照保留时间的不同，先后分离出N峰、CO2峰、H2O峰，再经热导检测器进行检测。
结果：图2最终萃取的富勒烯纯度高，没有其他杂质残留(例如植物油中的物质)
表2
试验例六：本发明供试品溶液稳定性及重复性试验
1、稳定性试验：本发明经过萃取后得到的富勒烯甲苯溶液，放于10ml样品瓶中密封，于25℃保存放置，24h、48h、72h、一周后，甲苯溶液中未有富勒烯析出，能够稳定存在。
2、重复性试验
取6份富勒烯油按照本发明方法操作，紫外法测定富勒烯油中富勒烯C60含量，结果见表3
表3紫外法测定富勒烯C60含量
取6份富勒烯油按本发明的方法操作，HPLC法测定富勒烯油中富勒烯C70含量，结果见表4
表4高效液相检测富勒烯C70
通过表3、4可见，本发明的重复性RSD％＜3％，该方法的重复性好。
试验例七：紫外吸收回收率试验
方法：制备含有C60和C70的富勒烯油，质量比；C60：C70＝5：1采用本发明的萃取过程，甲苯完全溶解最终所得固体残留物，进行紫外检测方法，即可。
结果：见图11，本发明的萃取方法所得回收率100％。
综上所述，与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明适用于富勒烯油溶性产品中富勒烯含量的精确检测，尤其适用于空心富勒烯。C60，C70由于结构上的高度对称性，没有重叠的分子轨道，因而是一种稳定的分子。通过本发明将富勒烯油中的富勒烯充分萃取，得到杂质少、纯度高、溶解性好的富勒烯固体。采用紫外分光光度法或高效液相色谱法对得到的富勒烯进行检测，得到的数据准确可靠、重复性好，操作简便且时间短，适合日常产业化检验等优点。
附图说明
图1：富勒烯C60MALDI-TOF图
图2：油溶液萃取得到富勒烯固体元素分析图
图3：富勒烯C60紫外吸收曲线
图4：富勒烯C60紫外吸收标准曲线
图5：富勒烯C70紫外吸收曲线
图6：富勒烯C70紫外吸收标准曲线
图7：富勒烯C60HPLC标准曲线
图8：富勒烯C60HPLC图
图9：富勒烯C70HPLC标准曲线
图10：富勒烯C70HPLC图
图11：紫外吸收回收率曲线
图12：本发明供试品制备的流程图
具体实施方式
下面结合附图，对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语―包括”或其变换如―包含”或―包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
实施例1紫外分光光度法测定
对照品标准溶液制备：分别精密称取5mg富勒烯C60溶于50ml甲苯溶液中，加入100ml容量瓶中，超声30min使得富勒烯全部溶解后，分别配制成浓度为0.005mg/ml、0.01mg/ml、0.015mg/ml、0.02mg/ml、0.025mg/ml、0.03mg/ml、0.035mg/ml、0.04mg/ml、0.045mg/ml、0.05mg/ml的甲苯溶液。
供试品溶液制备：所用富勒烯油根据Biomaterials Volume 33,Issue 19,June2012,Pages 4936-4946的制备方法制备。准确量取富勒烯油5ml、乙醚10ml、蒸馏水20ml，分别加入100ml梨形分液漏斗中，充分震摇、放气(乙醚挥发性强)，静置待溶液分层(上层溶液澄清后)，利用吸管吸出上层溶液I于离心管内，进行离心分离(10000r/min、5min)得到沉淀物；用乙醚反复洗涤分液漏斗3次后，向分液漏斗内加入甲苯溶液，充分震摇后分层，取上层溶液II；将上层溶液II和沉淀物，加入到100ml圆底烧瓶中，旋蒸蒸干后将所得沉淀用甲苯溶液定容10ml容量瓶中。
测定法：利用分光光度计在波长335nm处测定对照品标准溶液和供试品溶液吸收度。
结果：见附图3、4，富勒烯C60：A＝0.0746C，R2＝0.9999，富勒烯油中富勒烯C60含量1.5mg/ml。
实施例2
对照品标准溶液制备：分别精密称取5mg富勒烯C60溶于50ml甲苯溶液中，加入100ml容量瓶中，超声30min使得富勒烯全部溶解后，分别配制成浓度为0.005mg/ml、0.01mg/ml、0.015mg/ml、0.02mg/ml、0.025mg/ml、0.03mg/ml、0.035mg/ml、0.04mg/ml、0.045mg/ml、0.05mg/ml的甲苯溶液。
供试品溶液制备：所用富勒烯油根据Biomaterials Volume 33,Issue 19,June2012,Pages 4936-4946的制备方法制备。准确量取富勒烯油5ml、乙醚10ml、蒸馏水20ml，分别加入100ml梨形分液漏斗中，充分震摇、放气(乙醚挥发性强)，静止待溶液分层(上层溶液澄清后)，利用吸管吸出上层溶液I于离心管内，离心分离(10000r/min、5min)得到沉淀物；用乙醚反复洗涤分液漏斗3次后，向分液漏斗内加入甲苯溶液，充分震摇后分层，取上层溶液II；将上层溶液II和沉淀物，加入到100ml圆底烧瓶中，旋蒸蒸干后将所得沉淀用甲苯溶液定容于10ml容量瓶中。
测定法：利用紫外分光光度计在波长470nm处测定对照品标准溶液和供试品溶液吸收度。
结果：见附图5，6富勒烯C70：A＝0.021C，R2＝0.9999富勒烯油中富勒烯C70含量1.5mg/ml.
实施例3高效液相色色谱法测定
对照品标准溶液制备：分别精密称取5mg富勒烯C60溶于50ml甲苯溶液中，加入100ml容量瓶中，超声30min使得富勒烯全部溶解后，分别配制成浓度为0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1mg/ml的甲苯溶液即可。
供试品溶液制备：所用富勒烯油根据Biomaterials Volume 33,Issue 19,June2012,Pages 4936-4946的制备方法制备。准确量取富勒烯油5ml、乙醚10ml、蒸馏水20ml，分别加入100ml梨形分液漏斗中，充分震摇、放气(乙醚挥发性强)，静止待溶液分层(上层溶液I澄清后)，利用吸管吸出上层溶液于离心管内，进行离心分离(10000r/min、5min)得到沉淀物；用乙醚反复洗涤分液漏斗3次后，向分液漏斗内加入甲苯溶液，充分震摇后分层，取上层溶液II；将上层溶液II和离心所得沉淀物，加入到100ml圆底烧瓶中，旋蒸蒸干后将所得沉淀用甲苯溶液定容10ML容量瓶中。
测定法：分别取对照品标准溶液、供试品溶液各20μL注入高效液相色谱仪，色谱柱为PYE柱，流动相为甲苯溶液，流速0.5ml/min，紫外检测器波长310nm，温度25℃。
结果：见附图7，8富勒烯油中富勒烯C60含量1.5mg/ml
实施例4高效液相色谱法测定
对照品标准溶液制备：分别精密称取5mg富勒烯C60溶于50ml甲苯溶液中，加入100ml容量瓶中，超声30min使得富勒烯全部溶解后，分别配制成浓度为0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1mg/ml的甲苯溶液即可。
供试品溶液制备：所用富勒烯油根据Biomaterials Volume 33,Issue 19,June2012,Pages 4936-4946的制备方法制备。准确量取富勒烯油5ml、乙醚10ml、蒸馏水20ml，分别加入100ml梨形分液漏斗中，充分震摇、放气(乙醚挥发性强)，静置待溶液分层(上层溶液I澄清后)，利用吸管吸出上层溶液于离心管内，进行离心分离(10000r/min、5min)得到沉淀物；用乙醚反复洗涤分液漏斗3次后，向分液漏斗内加入甲苯溶液，充分震摇后分层，取上层溶液II；将上层溶液II和离心所得沉淀物，加入到100ml圆底烧瓶中，旋蒸蒸干后将所得沉淀用甲苯溶液定容于10ml容量瓶中。
测定法：分别取对照品标准溶液、供试品溶液各20μL注入高效液相色谱仪，色谱柱为PYE柱，流动相为甲苯溶液，流速0.5ml/min，紫外检测器波长310nm，温度25℃。
结果：见附图9,10富勒烯油中富勒烯C70含量1.5mg/ml。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。
Claims (7)
1.一种富勒烯油中C60或C70含量测定方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)对照品标准溶液制备：取富勒烯C60或C70对照品溶解于甲苯溶液中即可；(2)供试品溶液制备：取富勒烯油、水、乙醚加入到分液漏斗中萃取，静止分层，吸出上层液I离心得沉淀物；用乙醚洗涤分液漏斗，再加入甲苯萃取，静止分层，取上层液II；将沉淀物、上层液II置于圆底烧瓶中回收溶剂，残留物定容至甲苯溶液中即可；所述步骤(2)中富勒烯油、水、乙醚的体积比为2-6:0.5-2:1-3；
(3)测定法：包括紫外分光光度法或高效液相色谱法测定。
2.如权利要求1所述的一种富勒烯油中C60或C70含量测定方法，其特征在于：所述步骤(1)对照品标准溶液为3-15组浓度呈阶梯分布的溶液，对照品标准溶液浓度为0.001-1.0mg/ml。
3.如权利要求2所述的一种富勒烯油中C60或C70含量测定方法，其特征在于：所述步骤(1)对照品标准溶液：取富勒烯C60或C70分别配制成0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml的甲苯标准溶液；
或0.005mg/ml、0.01mg/ml、0.015mg/ml、0.02mg/ml、0.025mg/ml、0.03mg/ml、0.035mg/ml、0.04mg/ml、0.045mg/ml、0.05mg/ml的甲苯标准溶液。
4.如权利要求1所述的一种富勒烯油中C60或C70含量测定方法，其特征在于：所述步骤(2)中富勒烯油、水、乙醚的体积比为4:1:2。
5.如权利要求1所述的一种富勒烯油中C60或C70含量测定方法，其特征在于：步骤(3)所述的紫外分光光度法，包括测定步骤(1)的标准溶液吸光度，并绘制标准曲线；测定步骤(2)供试品溶液的吸光度；根据标准曲线得出供试品溶液中C60或C70的含量，其中波长300nm-500nm。
6.如权利要求1所述的一种富勒烯油中C60或C70含量测定方法，其特征在于：步骤(3)所述的高效液相色谱法，包括HPLC测定步骤(1)对照品各个浓度的积分峰面积，绘制富勒烯标准曲线；测定步骤(2)供试品溶液过高效液相测定其峰面积，利用已制定标准曲线来标定富勒烯浓度；其中，色谱柱PYE柱、流动相：甲苯溶液、流速：0.3-1.5ml/min、温度15-35℃、紫外检测器波长300nm-400nm。
7.如权利要求6所述的一种富勒烯油中C60或C70含量测定方法，其特征在于：所述流速是0.5ml/min、紫外检测器波长是310nm、温度是25℃，所述对照品、供试品溶液的进样量是20μL。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710010555.8A CN106680230B (zh) | 2017-01-06 | 2017-01-06 | 一种富勒烯油中c60或c70的含量测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710010555.8A CN106680230B (zh) | 2017-01-06 | 2017-01-06 | 一种富勒烯油中c60或c70的含量测定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106680230A CN106680230A (zh) | 2017-05-17 |
| CN106680230B true CN106680230B (zh) | 2019-10-22 |
Family
ID=58849309
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710010555.8A Active CN106680230B (zh) | 2017-01-06 | 2017-01-06 | 一种富勒烯油中c60或c70的含量测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106680230B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110963480A (zh) * | 2018-09-29 | 2020-04-07 | 蔡蓼芸 | 一种富勒烯衍生物、制备方法及其应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101283080A (zh) * | 2005-06-27 | 2008-10-08 | Uni药物控股股份公司 | 富勒烯c60作为油稳定剂的用途 |
| CN102944528A (zh) * | 2012-11-14 | 2013-02-27 | 上海交通大学 | 一种水介质中c60纳米晶体颗粒浓度测定的方法 |
| CN103712937A (zh) * | 2013-12-17 | 2014-04-09 | 南京信息工程大学 | 一种测定c60稳定分散水溶液浓度的方法 |
| CN103826472A (zh) * | 2011-06-30 | 2014-05-28 | 法特希·穆萨 | 富勒烯及其保持哺乳动物身体健康和延长哺乳动物预期寿命的用途 |
-
2017
- 2017-01-06 CN CN201710010555.8A patent/CN106680230B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101283080A (zh) * | 2005-06-27 | 2008-10-08 | Uni药物控股股份公司 | 富勒烯c60作为油稳定剂的用途 |
| CN103826472A (zh) * | 2011-06-30 | 2014-05-28 | 法特希·穆萨 | 富勒烯及其保持哺乳动物身体健康和延长哺乳动物预期寿命的用途 |
| CN102944528A (zh) * | 2012-11-14 | 2013-02-27 | 上海交通大学 | 一种水介质中c60纳米晶体颗粒浓度测定的方法 |
| CN103712937A (zh) * | 2013-12-17 | 2014-04-09 | 南京信息工程大学 | 一种测定c60稳定分散水溶液浓度的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 高效液相色谱分析富勒烯中C60和C70的新方法;黄克武等;《中南矿冶学院学报》;19941031;第25卷(第5期);第660-664页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106680230A (zh) | 2017-05-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | Sample preparation and instrumental methods for illicit drugs in environmental and biological samples: A review | |
| Yin et al. | Determination of hyperoside and isoquercitrin in rat plasma by membrane‐protected micro‐solid‐phase extraction with high‐performance liquid chromatography | |
| CN205374391U (zh) | 一种毒素检测用固相萃取小柱 | |
| Ji et al. | Preparation of the high purity gingerols from ginger by dummy molecularly imprinted polymers | |
| CN102520079B (zh) | 一种利用uplc快速测定烟叶中茄尼醇含量的方法 | |
| CN103399099A (zh) | 一种同时检测九种有机磷农药的方法 | |
| Jiang et al. | A novel dispersive micro-solid phase extraction method combined with gas chromatography for analysis of organochlorine pesticides in aqueous samples | |
| CN113376305A (zh) | 一种水体中咔唑及多卤咔唑的固相膜萃取气相色谱质谱检测方法 | |
| Ma et al. | Preparation and characterization of dummy molecularly imprinted polymers for separation and determination of farrerol from Rhododendron aganniphum using HPLC | |
| CN106680230B (zh) | 一种富勒烯油中c60或c70的含量测定方法 | |
| CN107199012A (zh) | 一种磁性富勒烯纳米材料及其在固相萃取中的应用 | |
| Gao et al. | Molecularly imprinted polymers for the selective extraction of tiliroside from the flowers of Edgeworthia gardneri (wall.) Meisn | |
| CN108802230A (zh) | 生物样品中丹参素及其代谢产物的检测方法 | |
| Hermans-Lokkerbol et al. | Preparative separation and isolation of three α bitter acids from hop, Humulus lupulus L., by centrifugal partition chromatography | |
| CN106093268A (zh) | 一种双甲脒含量的检测方法 | |
| CN103207256B (zh) | 坛紫菜中红藻糖苷和异红藻糖苷含量的检测方法 | |
| CN114755338B (zh) | 一种藿香及其制剂的检测方法 | |
| CN106324121A (zh) | 一种虫草类药材样品中两种微量核苷的检测方法 | |
| CN115980249A (zh) | 一种虎耳草药材质量检测方法 | |
| Wei et al. | In‐situ preparation of porous monolithic polymer inside hollow fiber as a micro‐solid phase extraction device for glucocorticoids in cosmetics | |
| CN113533608B (zh) | 适合于大批量食用油样品中黄曲霉毒素快速检测的方法 | |
| CN114646690B (zh) | 一种枳实薤白桂枝汤中化学成分的检测方法及指纹图谱的建立方法 | |
| Ling et al. | Polymeric monolith column composited with multiwalled carbon nanotubes‐β‐cyclodextrin for the selective extraction of psoralen and isopsoralen | |
| Brooks et al. | An Adsorption System for the Fractionation of Nitrocellulose with Respect to Molecular Weight1, 2 | |
| CN110274980B (zh) | 一种林下山参与园参新的区分鉴别方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20180426 Address after: 100064, room 5, 523, room 5, Haidian District trail Road, Beijing Applicant after: BEIJING FULLCAN BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: 100064 Beijing Haidian District Haidian District Zhongguancun north 2 Street No. Applicant before: Institute of Chemistry, Chinese Academy of Sciences Applicant before: BEIJING FULLCAN BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20191213 Address after: 100064 room, room 5, No. 5, Haidian District Road, Beijing, China Co-patentee after: Chifeng Funakang Biotechnology Co.,Ltd. Patentee after: BEIJING FULLCAN BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: 100064 room, room 5, No. 5, Haidian District Road, Beijing, China Patentee before: BEIJING FULLCAN BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20230412 Address after: 100064, room 5, 523, room 5, Haidian District trail Road, Beijing Patentee after: BEIJING FULLCAN BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Patentee after: Chifeng Funakang Biotechnology Co.,Ltd. Patentee after: Funakang (Jilin) Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 100064, room 5, 523, room 5, Haidian District trail Road, Beijing Patentee before: BEIJING FULLCAN BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Patentee before: Chifeng Funakang Biotechnology Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20230728 Address after: A-205, the second floor of the Art Museum [Suzhou High tech Zone Culture and Sports Center], No. 999, the Taihu Lake Avenue, Technopole, Suzhou Hi tech Zone, Jiangsu 215100 Patentee after: Suzhou Rensheng Zefa Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 100064, room 5, 523, room 5, Haidian District trail Road, Beijing Patentee before: BEIJING FULLCAN BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Patentee before: Chifeng Funakang Biotechnology Co.,Ltd. Patentee before: Funakang (Jilin) Biotechnology Co.,Ltd. |