CN106632341A

CN106632341A - 一种d‑叶酸的合成方法

Info

Publication number: CN106632341A
Application number: CN201611222411.0A
Authority: CN
Inventors: 张磊
Original assignee: Tianjin Alta Technology Co Ltd
Current assignee: Tianjin Alta Technology Co Ltd
Priority date: 2016-12-27
Filing date: 2016-12-27
Publication date: 2017-05-10

Abstract

本发明创造提供了一种D‑叶酸的合成方法，包含如下步骤：(1)将原料蝶酸1、原料D‑谷氨酸叔丁酯盐酸盐2和缩合剂加入二甲基甲酰胺溶剂中，室温下搅拌过夜，质谱检测直到反应完成，将反应液倒入去离子水中，析出的固体经过滤、洗涤，得到粗品化合物3；(2)将所得粗品化合物3溶于三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶剂中，于室温下搅拌1‑24小时，反应完成后，将反应液浓缩，加入活性炭脱色，过滤，析出黄色固体，经蒸馏水洗涤，真空干燥后重新溶解于三氟乙酸中，再次加入蒸馏水，析出的固体经过滤、蒸馏水洗涤，真空干燥后的得黄色固体D‑叶酸。

Description

一种D-叶酸的合成方法

技术领域

本发明创造属于精细化学品合成领域，尤其是涉及一种D-叶酸的合成方法。

背景技术

叶酸是大多数生物体内一碳单位的供体，是核酸、氨基酸及泛酸生物合成所必需的。人体特别是孕妇体内叶酸的缺乏会引起氨基酸合成减少从而导致严重的疾病，包括婴儿的巨幼细胞性贫血、神经管缺陷和心血管疾病等症。动物体内缺少叶酸时，则生长受阻，食欲减退，羽毛发育不良等。

植物和微生物可在体内从头合成叶酸，而动物则不能，对人类而言，植物是人类最主要的叶酸来源。研究表明，世界上大多数国家的人群叶酸的摄入量都不理想，因此，利用基因工程改造植物，使其体内叶酸含量显著提高，就成为解决世界范围内叶酸缺乏症的最新选择。

四氢叶酸(THF)及其衍生物通常都称为叶酸,叶酸分子由喋呤、对氨基苯甲酸(PABA)和谷氨酸三部分组成。在不同的氧化条件下一碳单位连接于喋呤的N-5位置或是对氨基苯甲酸的N-10位置，或是连接在二者之间。通常人们所说的叶酸为L-构型(L-Folicacid)，常见的叶酸杂质包括D-叶酸(D-Folic acid)、叶酸杂质-E(6-蝶呤基叶酸，6-Pterinyl Folic Acid)、高叶酸(Homofolic acid)、异高叶酸(Isohomofolic acid)等，在检测叶酸时要确定含有哪些杂质，才可以更加快速有效的将叶酸分离出来。

发明内容

有鉴于此，本发明创造旨在提出一种D-叶酸的合成方法，进而获得一种叶酸杂质的高纯度标准品，以便更加快速有效的将叶酸分离出来。

为达到上述目的，本发明创造的技术方案是这样实现的：

一种D-叶酸的合成方法，包含如下步骤：

(1)将原料蝶酸1、原料D-谷氨酸叔丁酯盐酸盐2和缩合剂加入二甲基甲酰胺溶剂中，室温下搅拌过夜，质谱检测直到反应完成，质谱显示反应完成后，将反应液倒入去离子水中，析出的固体经过滤、用水洗涤，得到固体粗品，滤液用乙酸乙酯萃取，干燥，除去溶剂，得到固体粗品，将两部分固体合并，真空干燥，得粗品化合物3；

(2)将所得粗品化合物3溶于三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶剂中，于室温下搅拌1-24小时，液质联用显示反应完成后，将反应液进行浓缩，加入活性炭脱色，过滤，将滤液再次浓缩，然后在搅拌下将再次浓缩后的滤液缓慢加入蒸馏水中，析出黄色固体，固体过滤，蒸馏水洗涤，真空干燥后重新溶解于三氟乙酸中，再次加入蒸馏水，析出的固体经过滤、蒸馏水洗涤，真空干燥后的得黄色固体D-叶酸；

其化学方程式为：

其中所述缩合剂为HBTU(苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯)、HOBt(1-羟基苯并三唑)、HATU(2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯)，HCTU(6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯)、DCC(二环己基碳二亚胺)、DIC(N,N'-二异丙基碳二亚胺)、EDCI((1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺))、DIPEA(二异丙基乙基胺)、DMAP(4-二甲氨基吡啶)、TEA(三乙胺)中的至少一种。

进一步的，所述步骤(1)中原料1和原料2的物质的摩尔比为1:(1-10)，所述缩合剂为HBTU、HOBt和DIPEA的混合物，其中，所述HBTU的用量为1-10当量、HOBt的用量为1-10当量，DIPEA的用量为1-50当量。

进一步的，所述步骤(2)中化合物3与三氟乙酸和二氯甲烷混合溶剂的加入比例为1：(1-100)，其中，所述混合溶剂中三氟乙酸的体积含量为20-100％。

进一步的，所述步骤(2)所得黄色固体D-叶酸纯度≤95％，经进一步纯化后得到纯度≥98％的金黄色固体粉末。

进一步的，用于叶酸的质谱检测杂质标准品。

相对于现有技术，本发明创造所述的D-叶酸的合成方法具有以下优势：本发明的合成方法可用于大量制备叶酸杂质D-叶酸的标准品，收率达到70％以上；后处理步骤简单且处理精度较高，处理后产品纯度可达到95％以上，可用于叶酸杂质质量控制标准品。

附图说明

图1为本发明实施例1所述的D-叶酸的制备路线。

具体实施方式

除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明创造所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下面结合实施例及附图来详细说明本发明创造。

实施例1

(1)D-叶酸中间体3的合成：于蝶酸1(8.55mmol)的二甲基甲酰胺(DMF，50～200ml)溶液中，加入羧基保护的D-谷氨酸叔丁酯盐酸盐2(10.2mmol)、HBTU(11mmol)、HOBt(12mmol)和二异丙基乙基胺(DIPEA，42.75mmol)。该混合物在室温搅拌过夜，质谱显示反应完成。将反应液倒入去离子水中(1000ml)，析出的固体经过滤、用水洗涤，得到固体粗品。滤液用乙酸乙酯萃取，干燥，除去溶剂，得到固体粗品。将两部分固体合并，真空干燥，得粗品化合物3，2.68g，收率56.7％。

(2)D-叶酸的合成：将上述化合物3溶于三氟乙酸(30ml)和二氯甲烷(15ml)的混合溶剂中，混合物于室温搅拌4小时，LCMS(液质联用)显示反应完成。将溶剂浓缩至约15ml，加入活性炭脱色，过滤，滤液浓缩至约5ml，搅拌下慢慢加入蒸馏水(200ml)，析出黄色固体。固体过滤，蒸馏水洗涤，真空干燥后重新溶解于三氟乙酸中(5ml)，再次加入蒸馏水，析出的固体经过滤、蒸馏水洗涤，真空干燥后的得黄色固体D-叶酸，1.57g，收率73.4％，纯度达到95％。该产品经进一步纯化后的纯度98％的金黄色固体粉末，1.24g，用于叶酸的质谱检测杂质标准品。

以上所述仅为本发明创造的较佳实施例而已，并不用以限制本发明创造，凡在本发明创造的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明创造的保护范围之内。

Claims

1.一种D-叶酸的合成方法，其特征在于：包含如下步骤：

其化学方程式为：

其中所述缩合剂为HBTU、HOBt、HATU，HCTU、DCC、DIC、EDCI、DIPEA、DMAP、TEA中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的D-叶酸的合成方法，其特征在于：所述步骤(1)中原料1和原料2的物质的摩尔比为1:(1-10)，所述缩合剂为HBTU、HOBt和DIPEA的混合物，其中，所述HBTU的用量为1-10当量、HOBt的用量为1-10当量，DIPEA的用量为1-50当量。

3.根据权利要求1或2所述的D-叶酸的合成方法，其特征在于：所述步骤(2)中化合物3与三氟乙酸和二氯甲烷混合溶剂的加入比例为1：(1-100)，其中，所述混合溶剂中三氟乙酸的体积含量为20-100％。

4.根据权利要求1所述的D-叶酸的合成方法，其特征在于：所述步骤(2)所得黄色固体D-叶酸纯度≤95％，经进一步纯化后得到纯度≥98％的金黄色固体粉末。

5.采用权利要求1或2或4任一项所述的合成方法制备的D-叶酸的用途，其特征在于：用于叶酸的质谱检测杂质标准品。