CN106591138A - 蛋白核小球藻培养基组合物 - Google Patents

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王兆伟
王弢
杜学星
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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Abstract

本发明公开了一种蛋白核小球藻培养基组合物，包括如下组分：KNO3：100mg/L；KH2PO4：10mg/L；FeSO4·7H2O：2.5mg/L；MnSO4：0.25g/L；MgSO4：0.075g/L；EDTA‑Na2：10mg/L；VB1:6mg/L；VB12:50ug/L；植物生长调节剂：0.1‑1mg/L；添加剂：0.5‑3mg/L和渗透调节剂：0.1‑1mg/L。采用本发明的技术方案后，在培养蛋白核小球藻时，使蛋白核小球藻具有生长速率快、细胞密度大、叶绿素含量高的特点。

Description

蛋白核小球藻培养基组合物
技术领域
本发明属于海洋微藻养殖领域，尤其涉及一种蛋白核小球藻培养基组合物。
背景技术
小球藻属于单细胞真核微藻，是绿藻门(Chlorophyta)绿球藻目(Chlorococcales)小球藻科(Chlorellaceae)中重要的一个属。常见的小球藻有普通小球藻(C.vulgaris)、蛋白核小球藻(C.pyrenoidosa)和椭圆小球藻(C.ellipoidea)等，小球藻是地球上最早的活性单细胞物种，有极强的繁衍能力。在良好的生态环境中，它能高效吸取阳光和水体能量，转化为蛋白质、叶绿素、生物素、纤维素、氨基酸及各种微量元素，有效成分达50余种，被FAO列为21世纪人类的健康食品。除此之外，小球藻还含有一种具有诱发干扰素，激发人体防御和免疫功能，又能促进对有害物质解毒和排泄作用的“促生长因子(Chlorlla Growth Factor，CGF)”，近些年来已经在健康食品、环境污染治理、医疗保健等领域广泛的应用。蛋白核小球藻由于细胞内蛋白质含量高，具有丰富的营养价值，因此是小球藻属中研究较多的一个种属。我国卫生部已于2012年批准蛋白核小球藻为新资源食品。
本申请的发明人在实际使用MAV培养液对蛋白核小球藻进行养殖时发现，蛋白核小球藻的藻细胞生长速度慢且细胞密度较低。如何通过改变蛋白核小球藻培养基组合物来提高蛋白核小球藻的藻细胞生长速度和增大细胞密度是申请人一致致力于研究的方向。
发明内容
为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种可以提高提高蛋白核小球藻的藻细胞生长速度和增大细胞密度的蛋白核小球藻培养基组合物。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种蛋白核小球藻培养基组合物，包括如下组分：KNO3：100mg/L；KH2PO4：10mg/L；FeSO4·7H2O：2.5mg/L；MnSO4：0.25g/L；MgSO4：0.075g/L；EDTA-Na2：10mg/L；VB1:6mg/L；VB12:50ug/L；植物生长调节剂：0.1-1mg/L；添加剂：0.5-3mg/L和渗透调节剂：0.1-1mg/L。
进一步的改进，所述植物生长调节剂为GA3。
进一步的改进，所述添加剂为甘氨酸。
进一步的改进，所述渗透调节剂为脯氨酸。
将蛋白核小球藻培养基组合物用1000ML过滤后的海水进行稀释后使用，通过在其中添加有机碳化合物，并调整培养基中其他元素含量，包括添加硫酸镁，获得适用于小球藻通过异养优化混合培养的培养基。使该培养基可实现小球藻的高密度高品质培养。本发明提供的蛋白核小球藻培养基有利于藻细胞生长，培养出的蛋白核小球藻的细胞密度较大，添加了Mg2+、植物生长刺激素GA3、有机碳化合物甘氨酸和渗透调节物脯氨酸，合理调整和丰富了培养基的营养配比，一方面促进了藻细胞的分裂增殖，另一方面，提高藻细胞的抗氧化能力，增加了对环境的适应性。利于促进藻细胞快速增殖，使得藻细胞浓度增大，更适于小球藻的规模化培养生产，满足市场需求。培养基中增加有机碳化合物甘氨酸，改变小球藻光合自养的生长方式，能提高藻细胞生长速度。以前蛋白核小球藻培养基中是不加镁盐的，本技术方案中添加适量的MgSO4后，有利于混合培养中小球藻的生长以及叶绿素的合成。
附图说明
图1为本发明的实施例1、实施例2、实施例3与MAV培养基的对比试验结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明提供的绿色巴夫藻培养基组合物进行详细的说明。
实施方式一
一种蛋白核小球藻培养基组合物，包括如下组分：KNO3：100mg/L；KH2PO4：10mg/L；FeSO4·7H2O：2.5mg/L；MnSO4：0.25g/L；MgSO4：0.075g/L；EDTA-Na2：10mg/L；VB1:6mg/L；VB12:50ug/L；植物生长调节剂：0.5mg/L；添加剂：2mg/L和渗透调节剂：0.5mg/L。其中优选采用植物生长调节剂为GA3，添加剂为甘氨酸，渗透调节剂为脯氨酸。
培养基组合物的制备方法：
a.植物生长激素GA3为白色结晶粉末，不易溶解于水，可先用酒精充分溶解，一般每克用50ml酒精或60°白酒溶解1h以上，再按所需浓度兑水稀释。
b.加营养盐的过程中需不断搅水，而且各种营养盐按配比中提供的顺序加入，以免提前发生化学反应。
c.各种营养盐特别是甘氨酸、脯氨酸溶液和维生素溶液均需预先配成母液备用。
d.全部营养盐加完后要充分的搅拌均匀方可接种。
需要注意的是：所有药品纯度均需化学纯级别；采用半配方制成的蛋白核小球藻培养基组合物对小球藻各培养阶段都适用。
将上述方案配比制成的蛋白核小球藻培养基组合物与1000ml过滤之后的海水进行配置。取对数生长期的蛋白核小球藻接种到该培养基中进行培养，每天光照12小时，光照强度约为50μmol/(m2·s)，培箱温度控制在25℃，每隔一段时间记录培养基中藻的细胞浓度。
实施方式二
一种蛋白核小球藻培养基组合物，包括如下组分：KNO3：100mg/L；KH2PO4：10mg/L；FeSO4·7H2O：2.5mg/L；MnSO4：0.25g/L；MgSO4：0.075g/L；EDTA-Na2：10mg/L；VB1:6mg/L；VB12:50ug/L；植物生长调节剂：0.1mg/L；添加剂：0.5mg/L和渗透调节剂：0.1mg/L。其中优选采用植物生长调节剂为GA3，添加剂为甘氨酸，渗透调节剂为脯氨酸。
将上述方案配比制成的蛋白核小球藻培养基组合物与1000ml过滤之后的海水进行配置。取对数生长期的蛋白核小球藻接种到该培养基中进行培养，每天光照12小时，光照强度约为50μmol/(m2·s)，培箱温度控制在25℃，每隔一段时间记录培养基中藻的细胞浓度。
实施方式三
一种蛋白核小球藻培养基组合物，包括如下组分：KNO3：100mg/L；KH2PO4：10mg/L；FeSO4·7H2O：2.5mg/L；MnSO4：0.25g/L；MgSO4：0.075g/L；EDTA-Na2：10mg/L；VB1:6mg/L；VB12:50ug/L；植物生长调节剂：1mg/L；添加剂：3mg/L和渗透调节剂：1mg/L。其中优选采用植物生长调节剂为GA3，添加剂为甘氨酸，渗透调节剂为脯氨酸。
将上述方案配比制成的蛋白核小球藻培养基组合物与1000ml过滤之后的海水进行配置。取对数生长期的蛋白核小球藻接种到该培养基中进行培养，每天光照12小时，光照强度约为50μmol/(m2·s)，培箱温度控制在25℃，每隔一段时间记录培养基中藻的细胞浓度。
为了更好地体现本技术方案相对于传统的MAV培养基足有生长速度快和产量高的优点，将海水MAV培养基作为对照培养基，取对数生长期的蛋白核小球藻接种到该培养基中进行培养，每天光照12小时，光照强度约为50μmol/(m2·s)，培箱温度控制在25℃，每隔一段时间记录培养基中蛋白核小球藻的细胞浓度。
下表为：不同培养基培养的蛋白核小球藻的细胞浓度对比表
通过上表的实验数据可以看出，实验表明通过使用本发明所提供的培养基比使用MAV培养基可以更快速地使小球藻细胞增殖，优化后的小球藻细胞浓度高于对照培养基，与此同时，藻细胞的叶绿素含量也明显得到了提升。由此说明本发明提供的蛋白核小球藻培养基具有明显的培养优势，更利于小球藻细胞的快速生长和物质积累。
以上所述仅为本发明示意性的具体实施方式，并非用以限定本发明的范围。任何本领域的技术人员，在不脱离本发明的构思和原则的前提下所作出的等同变化与修改，均应属于本发明保护的范围。

Claims (4)

1.一种蛋白核小球藻培养基组合物，其特征在于：包括如下组分：
KNO3：100mg/L；KH2PO4：10mg/L；FeSO4·7H2O：2.5mg/L；MnSO4：0.25g/L；MgSO4：0.075g/L；EDTA-Na2：10mg/L；VB1:6mg/L；VB12:50ug/L；植物生长调节剂：0.1-1mg/L；添加剂：0.5-3mg/L和渗透调节剂：0.1-1mg/L。
2.如权利要求1所述的蛋白核小球藻培养基组合物，其特征在于：所述植物生长调节剂为GA3。
3.如权利要求1所述的蛋白核小球藻培养基组合物，其特征在于：所述添加剂为甘氨酸。
4.如权利要求1所述的蛋白核小球藻培养基组合物，其特征在于：所述渗透调节剂为脯氨酸。
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