CN106577409A - 一种诱导桡足类产生滞育卵的方法 - Google Patents
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Abstract
一种诱导桡足类产生滞育卵的方法，涉及水产养殖。提供一种诱导桡足类产生滞育卵的方法。藻液培养；海水处理；对太平洋纺锤水蚤先进行2个世代驯化培养，将已驯化后的太平洋纺锤水蚤所产卵孵化得无节幼体，在解剖镜下挑选活力好的待用；诱导条件设置；滞育卵筛选与收集，每组100只无节幼体放置于1L结晶皿中，按照步骤4)的诱导条件进行试验，每组均隔天换水，当太平洋纺锤水蚤开始产卵时，用48μm的筛绢收集卵，每24h收集一次，共收集5天，记录总产卵个数，在解剖镜下观察每天收集卵，外膜粗糙不平整且带有刺状突起的卵为滞育卵，筛选出形态完整实心的滞育卵，并记录滞育卵个数。
Description
技术领域
本发明涉及水产养殖，尤其是涉及一种诱导桡足类产生滞育卵的方法。
背景技术
多年来，轮虫和卤虫作为鱼、虾育苗的开口饵料取得了很好的成效，得到了广泛的应用。但是，轮虫和卤虫并非所有鱼、虾幼苗开口的良好饵料。已有研究表明，桡足类是极佳的生物饵料，可使仔稚鱼的生长和存活率提高，成功培养了很多难以培养的经济水产生物，如红鲷、天使鱼、海马等(Zhang D.,Lin T.,Liu X.A.Comparison of Growth,Survival,and Fatty Acid Composition of the Lined Seahorse,Hippocampus erectus,Juveniles Fed Enriched Artemia and a Calanoid Copepod,Schmackeriadubia.J.World Aquacult.Soc.,2015,46(6):608-616)。然而，桡足类在大规模世代培养上有诸多困难，使它们在海洋养殖业中受到了极大的限制。
众所周知，轮虫和卤虫之所以能够作为生物饵料大规模应用于水产养殖业，一个很大的原因是轮虫和卤虫的休眠卵能随时孵化出无节幼体供育苗使用。这一点对于大规模生产至关重要。如果能使桡足类滞育卵和轮虫卤虫休眠卵一样，大量孵化无节幼体用作育苗的饵料，在水产养殖业将具有广阔的前景。但是，现阶段我们获得桡足类滞育卵的方式通常是通过野外采集，显然无法满足现代水产养殖业的需要，且不易分离病毒和细菌的污染等问题，无法保证桡足类数量、质量的稳定和及时供应。
桡足类滞育卵作为一种潜在的饵料资源，具有很大的开发价值，至今已发现大约有50种桡足类能产生滞育卵(Engel,M,.H.J.Hirche.2004.Seasonal variability andinter-specific differences in hatching of calanoid copepod resting eggs formsediments of German Bright.J.Plankton Res.26:1083-1093.)，但尚未有在实验室条件下，诱导太平洋纺锤水蚤产生滞育卵最佳条件的探索，本发明能简便、经济收集到太平洋纺锤水蚤滞育卵，为对其进行深入研究以及在水产生物饵料开发方面具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种诱导桡足类产生滞育卵的方法。
本发明包括以下步骤：
1)藻液培养；
2)海水处理；
3)太平洋纺锤水蚤的培养；
对太平洋纺锤水蚤先进行2个世代驯化培养，将已驯化后的太平洋纺锤水蚤所产卵孵化得无节幼体(T<12h)，在解剖镜下挑选活力好的待用；
4)诱导条件设置，具体方法如下：
最佳诱导条件如下：水温31℃，光照周期为12L:12D，饵料为球等鞭金藻和海洋原甲藻混合液，微藻细胞密度为6.5×107+1.3×105(个/ml)，设置10个平行；太平洋纺锤水蚤产滞育卵时节主要为春末夏初，影响其产滞育卵的主要因素为温度和光照周期；
5)滞育卵筛选与收集，具体方法如下：
每组100只无节幼体放置于1L结晶皿中，按照步骤4)的诱导条件进行试验，每组均隔天换水，当太平洋纺锤水蚤开始产卵时，用48μm的筛绢收集卵，每24h收集一次，共收集5天，记录总产卵个数，在解剖镜下观察每天收集卵，外膜粗糙不平整且带有刺状突起的卵为滞育卵，筛选出形态完整实心的滞育卵，并记录滞育卵个数。
在步骤1)中，所述藻液培养的具体方法可为：
将微藻接种于f/2培养液中培养至对数生长期，待用；所述微藻可采用球等鞭金藻和海洋原甲藻，所述培养的条件可为盐度27±1、光照周期12L︰12D、温度22～24℃。
在步骤2)中，所述海水可采用天然海水，所述海水处理的方法可用20μm筛绢筛去浮沙与杂物，灭菌并连续充气24h，后调配至盐度27±1。
在步骤3)中，所述进行2个世代驯化培养的饵料为球等鞭金藻和海洋原甲藻混合投喂，水温28±0.5℃，光照周期12L︰12D，光照强度2045lux，盐度27±1。
以下给出数据分析：
在最佳诱导条件下，10组太平洋纺锤水蚤在5天中，产滞育卵平均百分数为(27.95±0.21)％，最佳诱导条件下太平洋纺锤水蚤产滞育卵百分数与产卵量参见表1。
表1
| 诱导条件 | 产滞育卵百分数(％) | 产卵量(个) |
| 31℃，2L:12D | 27.95±0.21 | 240.88±113.57 |
本发明通过设定不同培养条件诱导太平洋纺锤水蚤产生滞育卵，通过对比滞育卵产生百分比来确定最佳诱导产滞育卵的培养条件。
本发明所指不同培养条件如下：水温分别为25℃、28℃、31℃；光照周期分别为12L:12D，16L︰8D。饵料为球等鞭金藻和海洋原甲藻混合液，饵料浓度为1.70μg·C/mL。
本发明所指培养条件设计原理：温度和光照周期是诱导滞育的两个最重要的非生物因子，太平洋纺锤水蚤最适培养水温约为22℃，本发明通过设置温度、光照周期与饵料配比三个因素，探究对比得出最佳产生滞育卵的培养条件。
本发明所指滞育卵是指：在体视显微镜下观察，外膜粗糙不平整且带有刺突状突起的卵。
本发明与已有技术相比可产生如下积极效果：
1.解决了目前太平洋纺锤水蚤滞育卵的获得主要通过野外采集，而面临的时效性、稳定性与质量问题，提供了一种实验室内收获桡足类滞育卵简单、便捷方法；
2.本发明提供的最佳诱导条件下，太平洋纺锤水蚤产滞育卵平均百分率可达(27.95±0.21)％，显著高于其他诱导条件下滞育卵百分率。因个体间产滞育卵的差异，最高组产滞育卵百分率可达70％。
3.太平洋纺锤水藻休眠卵有两种生理状态，滞育和静止，它们在形态上有明显的不同，目前对于静止状态的研究较多，对于滞育状态的统计数据则较少，且滞育比静止状态更稳定，更利于实现水产养殖中生物饵料的计划供应，本发明首次提出太平洋纺锤水蚤诱导产生滞育卵的最佳培养条件，是对人工培育水产幼苗所需生物饵料数据库的重要补充。
附图说明
图1为本发明实施例的太平洋纺锤水蚤2种卵型。
具体实施方式
下面结合附图与具体实施方式进一步说明，但并不是对本发明进一步限定。在实施过程中，本发明可采用如下的具体步骤：
1、藻液培养
将微藻(球等鞭金藻和海洋原甲藻)接种于f/2培养液中，盐度27±1、光照周期12L︰12D、室温下(22～24℃)培养至对数生长期待用。
2、海水处理
本发明用海水均为天然海水，用20μm筛绢筛去浮沙与杂物，高温灭菌并连续充气24h，后调配至盐度27±1。
3、太平洋纺锤水蚤的培养
本发明用太平洋纺锤水蚤为厦门海区采样获得，并成功在实验室纯化培养。在实验前进行2个世代驯化培养，饵料为球等鞭金藻和海洋原甲藻混合投喂，水温28±0.5℃，光照周期12L︰12D，光照强度2045lux，盐度27±1。将已驯化后太平洋纺锤水蚤所产卵孵化得无节幼体(T<12h)。在解剖镜下挑选活力好的待用。
4、诱导条件设置
太平洋纺锤水蚤产滞育卵时节主要为春末夏初，影响其产滞育卵的主要因素为温度和光照周期。太平洋纺锤水蚤较适培养水温约为22℃，本发明中最佳诱导条件如下：水温31℃，光照周期为12L︰12D。饵料为球等鞭金藻和海洋原甲藻混合液，微藻细胞密度为6.5×107+1.3×105(个/ml)，设置10个平行。
5、滞育卵筛选与收集
每组100只无节幼体放置于1L结晶皿中，按照上述诱导条件进行试验，每组均隔天换水，当太平洋纺锤水蚤开始产卵时，用48μm的筛绢收集卵，每24h收集一次，共收集5天，记录总产卵个数。在解剖镜下观察每天收集卵，外膜粗糙不平整且带有刺状突起的卵为滞育卵(如图1)，筛选出形态完整实心的滞育卵，并记录滞育卵个数。
6、数据分析
在最佳诱导条件下，10组太平洋纺锤水蚤在5天中，产滞育卵平均百分数为(27.95±0.21)％。
表1
| 诱导条件 | 产滞育卵百分数(％) | 产卵量(个) |
| 31℃，2L︰12D | 27.95±0.21 | 240.88±113.57 |
最佳诱导条件下太平洋纺锤水蚤产滞育卵百分数与产卵量参见表1。
Claims (4)
1.一种诱导桡足类产生滞育卵的方法，其特征在于包括以下步骤：
1)藻液培养；
2)海水处理；
3)太平洋纺锤水蚤的培养；
对太平洋纺锤水蚤先进行2个世代驯化培养，将已驯化后的太平洋纺锤水蚤所产卵孵化得无节幼体T<12h，在解剖镜下挑选活力好的待用；
4)诱导条件设置，具体方法如下：
诱导条件如下：水温31℃，光照周期为12L︰12D，饵料为球等鞭金藻和海洋原甲藻混合液，微藻细胞密度为6.5×107+1.3×105个/ml，设置10个平行；太平洋纺锤水蚤产滞育卵时节主要为春末夏初，影响其产滞育卵的主要因素为温度和光照周期；
5)滞育卵筛选与收集，具体方法如下：
每组100只无节幼体放置于1L结晶皿中，按照步骤4)的诱导条件进行试验，每组均隔天换水，当太平洋纺锤水蚤开始产卵时，用48μm的筛绢收集卵，每24h收集一次，共收集5天，记录总产卵个数，在解剖镜下观察每天收集卵，外膜粗糙不平整且带有刺状突起的卵为滞育卵，筛选出形态完整实心的滞育卵，并记录滞育卵个数。
2.如权利要求1所述的一种诱导桡足类产生滞育卵的方法，其特征在于在步骤1)中，所述藻液培养的具体方法为：
将微藻接种于f/2培养液中培养至对数生长期，待用；所述微藻采用球等鞭金藻和海洋原甲藻，所述培养的条件为盐度27±1、光照周期12L︰12D、温度22～24℃。
3.如权利要求1所述的一种诱导桡足类产生滞育卵的方法，其特征在于在步骤2)中，所述海水为天然海水，所述海水处理的方法用20μm筛绢筛去浮沙与杂物，灭菌并连续充气24h，后调配至盐度27±1。
4.如权利要求1所述的一种诱导桡足类产生滞育卵的方法，其特征在于在步骤3)中，所述进行2个世代驯化培养的饵料为球等鞭金藻和海洋原甲藻混合投喂，水温28±0.5℃，光照周期12L︰12D，光照强度2045lux，盐度27±1。
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