CN111802290A - 一种自由产卵桡足类纯种分离和培养方法及其装置 - Google Patents

一种自由产卵桡足类纯种分离和培养方法及其装置 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种自由产卵桡足类纯种分离和培养方法及其装置，所述方法包括：步骤1：将野外采集的桡足类样本放在暂养缸，定向分选获得桡足类个体；步骤2：将上步获得的桡足类个体放入细胞培养板中，筛选出产卵的个体继续培养；步骤3：将装有产卵个体的细胞培养板放置平板光源上方，形成底部平面光源照射条件，在显微镜下观察细胞培养板中所述桡足类个体的增殖情况及其存活数量；步骤4：扩大培养；步骤5：培养至成体并孵化出下一代幼体时，转移到水族箱内进行培养，并进行成体分类鉴定或生长观测。上述方法可以较快分离纯化获得自由产卵的桡足类，进行保种和规模化培养，个体存活率高，从而为海水鱼虾贝幼体发育提供丰富的营养供应。

Description

一种自由产卵桡足类纯种分离和培养方法及其装置
技术领域
本发明涉及水产养殖技术，尤其是一种自由产卵桡足类纯种分离和培养方法及其装置。
背景技术
传统的生物活饵料轮虫和丰年虫无节幼虫，易保种或购买商品休眠卵，可高密度培养，在水产育苗过程中被广泛应用。然而这两类饵料缺乏不饱和脂肪酸，生产过程中往往需要强化或配合添加剂使用。很多海水鱼幼鱼发育过程中，对不饱和脂肪酸需求较高，强化后的轮虫仍难以满足其幼体发育对不饱和脂肪酸的营养需求。此外，小型海水神仙鱼仔鱼口裂约30-100μm，即使是最小的SS轮虫也难以满足较小口裂仔鱼开口。因此，迫切需要开发粒径小且富含不饱和脂肪酸的生物活饵料。
桡足类(copepod)隶属于节肢动物门(Arthropoda)，甲壳纲(Crustacea)[颚足纲(Maxillopoda)]，桡足亚纲(Copepoda)，是一类低等的小型甲壳动物。小型桡足类如强额拟哲水蚤等，个体粒级小，营养丰富，富含多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acid，PUFA)、二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid，DHA)和二十碳五烯酸(EicosapentaenoicAcid，EPA)(占总脂肪酸的60％)，富含抗氧化剂，虾青素，维生素C、D、E等，营养价值高于轮虫和卤虫，其卵和早期幼体更适合做鱼类的开口饵料。而且，桡足类特殊的游泳方式还有助于诱发幼鱼强烈的摄食反应。目前生产育苗的桡足类基本源自野生采集，种类混杂且难以保证质量，极易携带病原生物。为了更好的发挥桡足类作为生物活饵料的作用，分离纯种进行规模化培养是必经之路。本专利发明了针对小型自由产卵哲水蚤桡足类的分离纯化和培养方法，可获得纯种并在实验生态条件下保种培养，满足小型海水神仙鱼仔鱼开口及后期发育的需要。
桡足类按产卵发育方式，分为挂卵囊和自由产卵两类。挂卵囊种类较容易分离获得纯种。自由产卵的种类，常规的分离方法一般将桡足类经灯诱转移至培养皿中，再将其转移至适合放入解剖镜下观察的容器中，进行单个个体分离，分离的个体在显微镜下用巴斯德吸管转移至烧杯中，再放入培养箱中培养。上述分离过程中依靠肉眼显微镜下操作，吸管极易带入非目标生物，很难达到纯种分类，甚至由于引入优势种或肉食性种类，导致目标种后期培养困难。另外，桡足类无节幼虫因趋光性强，常常趋光于水表面，而水表面常常会积聚油膜，影响其存活。尤其是一些小型的哲水蚤桡足类，如强额拟哲水蚤、厦门矮隆水蚤、拟矮隆水蚤等，体长在1mm以下，所产的卵大小在55-75μm，个体小，常规的分离方法不便于观察，不能及时掌握所分离桡足类增殖的情况，以及分离容器中无节幼虫存活的情况，严重影响分离的效率。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有自由产卵桡足类个体纯种分离困难以及分离出的桡足类个体存活率低等问题，提供一种高效的桡足类纯种分离和培养方法，该方法利用细胞培养板、烧杯，采用底部光源等进行分离培养，满足了桡足类不同生长发育阶段的要求，既保证纯种的获得，又提高了分离纯化的效率。
本发明还提供一种桡足类纯种分离和培养的装置，包括细胞培养板分离培养装置、烧杯分离培养装置和水族箱，该装置可以从野外采集的桡足类中分离出纯种，并完成所筛选纯种的扩大培养，培养过程中桡足类的存活率较高。
具体方案如下：
一种桡足类纯种分离和培养方法，包括以下步骤：
步骤1：将野外采集的桡足类样本放在暂养缸，从中选择趋光性强和活性好的个体转移至培养皿中，根据桡足类外形特征进行定向分选，获得桡足类个体；
步骤2：将上步获得的桡足类个体放入细胞培养板中，每孔只放一个个体，孔内事先装入球等鞭金藻和过滤海水混合成的藻液，观察桡足类个体是否产卵，筛选出产卵的个体继续培养，其余个体返回暂养缸；
步骤3：将装有产卵个体的细胞培养板放置平板光源上方，形成底部平面光源照射条件，控制光照强度和光照周期，在显微镜下观察细胞培养板中桡足类个体的增殖情况及其存活数量；
步骤4：培养一段时间后，将细胞培养板中的桡足类转移到烧杯内进行扩大培养，所述烧杯事先装入过滤海水，每天用新鲜的所述藻液更换所述烧杯内部分原有的藻液，更换前先将桡足类灯诱到一侧，在另一侧用虹吸方式转移出部分原有的藻液；所述烧杯放置平板光源上方，形成底部平面光源照射条件，控制光照强度和光照周期，观察烧杯中所述桡足类个体的增殖情况及其存活数量；
步骤5：培养至成体并孵化出下一代幼体时，将烧杯中的桡足类转移到水族箱内进行培养，转移方法为将原烧杯中的藻液倒入事先备好藻液的水族箱中，微充气培养，配置一个水族灯，控制水表面光照强度和培养水体中藻类密度，并进行成体分类鉴定或生长观测。
进一步的，步骤1中根据桡足类外形特征，选择矮胖型，或者纺锤型桡足类，继续从中分选生殖节凸起的桡足类雌性个体，转移至细胞培养板中。
进一步的，所述细胞培养板具有多个孔，在所述细胞培养板中，将单个桡足类依次转移至装有新鲜过滤海水的邻近孔中，缓慢浸洗3-5次，以完成单个桡足类的清洗，保证获得单个完好的个体。
进一步的，所述藻液是将指数生长期的球等鞭金藻，和经过0.01μm孔径滤材过滤的海水混合后，使其藻液浓度为0.1-1×105cell/mL，海水盐度范围为25-35；
任选的，步骤2中室温控制在25±3℃，每隔20-30min镜检一次，观察是否产卵，筛选出产卵的个体继续培养，其余个体返回暂养缸。
进一步的，步骤3中底部平面光源照射控制光照强度为500-800Lux；
任选的，步骤3中可在显微镜下观察细胞培养板中所述桡足类增殖情况及其存活数量，也可在观察细胞培养板中所述桡足类个体时辅助灯诱条件，灯诱时环境光照强度为100±10Lux，选用可切换光强的照明装置进行灯诱，照明装置的光照强度为3000-3500Lux时，桡足类趋光性较好，便于观察增殖情况及其存活数量。
进一步的，步骤4中底部平面光源照射控制光照强度为500-800Lux；
任选的，步骤4中控制光照周期为12h黑暗和12h光照循环；
任选的，步骤4中虹吸时采用300目的筛绢，对虹吸出的藻液进行前端过滤，以截留下烧杯中的桡足类；
任选的，步骤4中观察烧杯中所述桡足类个体时辅助灯诱条件，灯诱时环境光照强度为100±10Lux，选用可切换光强的照明装置进行灯诱，照明装置的光照强度为3000-3500Lux时，桡足类趋光性较好，便于观察增殖情况及其存活数量。
进一步的，步骤5中水族灯使水表面光照强度为5000-6000Lux，培养水体中光照强度控制在3000-6000Lux，培养水体中藻类密度控制在0.1-1×105cells/mL。
本发明还保护一种桡足类纯种分离和培养的装置，运用所述方法进行桡足类纯种分离和培养，所述桡足类纯种分离和培养的装置包括细胞培养板分离培养装置、烧杯分离培养装置和水族箱，所述细胞培养板分离培养装置用于纯种分离，所述烧杯分离培养装置和所述水族箱用于扩大培养，其中：
所述细胞培养板分离培养装置包括第一光源、第一平板、第二平板和细胞培养板，所述第一光源位于所述第一平板和所述第二平板之间，所述第二平板固定在所述第一平板上方，所述细胞培养板放置在所述二平板表面，使得所述第一光源发出的光，透过所述第二平板照射到所述细胞培养板的底部；所述细胞培养板为多孔细胞培养板；
所述烧杯分离培养装置包括第二光源、第三平板、第四平板和若干烧杯，所述第二光源位于所述第三平板和所述第四平板之间，所述第四平板固定在所述第三平板上方，所述烧杯放置在所述四平板表面，使得所述第二光源发出的光，透过所述第四平板照射到所述烧杯的底部。
进一步的，所述第一光源和/或所述第二光源为LED平板光源。
进一步的，所述第一光源和/或所述第二光源通过定时插座连接电源，所述定时插座控制通电时间从而实现对光源的点亮和关闭的切换。
有益效果：
本发明中，所述桡足类纯种分离和培养方法所需的材料和工具容易获取，环境因素易于人为控制，操作性强。
进一步的，在分离纯化培养中，采用底部光源装置从底部给予光照，使得桡足类无节幼虫趋向于水底，避免了浮在水面受到水面油膜张力的不利影响，提高了桡足类无节幼虫的存活率。
再则，本发明在步骤2和步骤3中采用细胞培养板培养桡足类个体，可以将细胞培养板放入显微镜下观察或者灯诱观察桡足类的生殖情况，便于筛选纯种和观察生长情况。在烧杯分离培养阶段，采用灯诱方法，既能及时地观察桡足类的增殖情况，又保障了分离后的纯化培养，幼体的存活率高。
另外，本发明在换水过程中，采用“灯诱+筛绢隔离”方法换水，既减少分离纯化过程中桡足类的损失，又能实时同步观察桡足类生长的情况，便于人工控制。
总之，本发明所述桡足类纯种分离和培养方法及其装置，可以较快分离出桡足类纯种，采用本发明的操作方法已分离获得强额孔雀水蚤、厦门矮隆水蚤、拟矮隆水蚤等自由产卵的小型哲水蚤桡足类，并实现对其人工培养；同时按本发明的操作方法也能获得小型带卵囊桡足类的纯种。
附图说明
为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅涉及本发明的一些实施例，而非对本发明的限制。
图1是本发明一个实施例2提供的细胞培养板分离培养装置结构示意图；
图2是本发明一个实施例2提供的烧杯分离培养装置结构示意图。
具体实施方式
下面将更详细地描述本发明的优选实施方式。虽然以下描述了本发明的优选实施方式，然而应该理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施方式所限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。在下面的实施例中，如未明确说明，“％”均指重量百分比。
实施例1
一种桡足类纯种分离和培养方法，包括以下步骤：
将野外采集的样本转移至暂养缸，通过灯诱的方式，将趋光性强和活性好的个体用吸管转移至培养皿中，根据所要分离的桡足类外形特征进行定向分选，如“矮胖型”、“纺锤型”等，分选生殖节凸起的桡足类雌性个体，转移至细胞培养板中进行挑选，将单个桡足类依次转移至装有新鲜过滤海水的邻近孔中，缓慢浸洗3-5次，如将一个桡足类从孔A1依次转移浸洗至孔A3，保证获得单个完好的个体。
将浸洗后的桡足类单独转移至6、12、24细胞培养细胞培养板中，每个孔事先装有藻液浓度为1×105cells/mL的球等鞭金藻，海水为0.01μm过滤海水，盐度范围25-35，室温控制在25℃，每隔30min镜检一次，看是否产卵，一般野外采集的桡足类，及时转移至细胞培养板中，雌性成体隔一段时间就会产卵，将产卵的个体留下，其余个体返回野采缸，将细胞培养板放在底部光源装置上培养，光照强度为500-800Lux。每天灯诱观察幼体增殖情况及其存活数量；灯诱时应在环境光照强度100Lux左右的区域，选用可切换光强的强光手电进行灯诱，光照强度在3000-3500Lux时，桡足类趋光性较好。
无节幼虫在细胞培养板中存活3天，且个体数达到每个孔10只以上，将其转移到事先备好装有过滤海水的100ml烧杯中，每天定时用已配好的1×105cells/mL藻液换1/2的水，换水前先将桡足类灯诱到一侧，再虹吸出1/2的水，每天灯诱时观察幼体增殖情况及其存活数量。
培养至5天后，将其转移到300ml的烧杯中，转移方法为先将桡足类灯诱至一侧，采用虹吸管配合300目的筛绢，虹吸出3/4的水，并且利用筛绢隔离留下桡足类，然后将剩余含有桡足类的部分藻水轻轻倒入事先备好藻液的300ml的烧杯中；每隔2天用已配好的1×105cells/mL藻液换1/2的水，换水前先将桡足类灯诱到一侧，再虹吸出1/2的水，采用300目的筛绢隔离过滤出藻水，以将桡足类保留在烧杯中，每天灯诱时观察幼体增殖情况及其存活数量。
培养至10天后，将其转移到1000ml的烧杯中，转移方法为先将桡足类灯诱至一侧，采用虹吸管配合300目的筛绢，虹吸出3/4的水，然后将剩余的部分轻轻倒入事先备好藻液的1000ml的烧杯中，藻液浓度不变；每隔2天用已配好的藻液换1/2的水，换水前先将桡足类灯诱到一侧，再虹吸出1/2的水，采用300目的筛绢隔离过滤出藻水，以将桡足类保留在烧杯中，每天灯诱时观察幼体增殖情况及其存活数量。
培养至成体并孵化出下一代幼体时，将其转移到20L的水族箱中，转移方法为将原1000ml烧杯中的水轻轻倒入事先备好藻液的20L的水族箱中，微充气培养，配置一个水族灯，使水表面光照强度为5500Lux左右，培养水体中光照强度控制在3000-6000Lux，培养水体中藻类密度控制在1×105cells/mL。此时挑选部分成体进行分类鉴定，测定其体长。
通过上述方法，在一个月内成功分离获得强额孔雀水蚤、厦门矮隆水蚤、拟矮隆水蚤等自由产卵的小型哲水蚤桡足类，并实现对其人工培养。
采用本发明分离培养的强额孔雀水蚤、厦门矮隆水蚤、拟矮隆水蚤3种桡足类经过3天的细胞培养培养板阶段，强额孔雀水蚤个体增殖数量为自然光源培养方法的14.42倍(P＜0.001)，厦门矮隆水蚤个体增殖数量为自然光源培养方法的11.93倍(P＜0.001)，拟矮隆水蚤个体增殖数量为自然光源培养方法的12.63倍(P＜0.001)。表明在早期孔板分离阶段，本发明的底部光源培养显著提升桡足类个体增殖达12-14倍。
继续经过12天的烧杯培养阶段后，本发明的底部光源培养方法优势更加显著，3种桡足类的无节幼虫、桡足幼体和成体增殖数量都极显著高于自然光源培养的增殖数量，最高可达41倍。采用本发明的底部光源培养厦门矮隆水蚤增殖个体总量是自然光源培养的21倍(P＜0.001)；从种群结构来看，厦门矮隆水蚤增殖的无节幼虫数、桡足幼体数和成体数都显著高于自然光源培养的，分别为30、13和16倍(P＜0.01)。强额孔雀水蚤底部光源培养所增殖的无节幼虫数是自然光源培养的15倍(，P＜0.05)，桡足幼体数和成体数分别为5和10倍(P＜0.001)。拟矮隆水蚤底部光源培养所增殖的无节幼虫数是自然光源培养方法的41倍(P＜0.05)，桡足幼体数和成体数分别为17和20倍(P＜0.001)。
实施例2
一种桡足类纯种分离和培养的装置，包括细胞培养板分离培养装置、烧杯分离培养装置和水族箱，所述细胞培养板分离培养装置用于纯种分离，所述烧杯分离培养装置和所述水族箱用于扩大培养，其中：
所述细胞培养板分离培养装置参见图1，包括第一光源10、第一平板11、第二平板12和细胞培养板13，所述第一光源10位于所述第一平板11和所述第二平板12之间，所述第二平板12固定在所述第一平板11上方，第一平板11四个边角设置的支撑座15对第二平板12进行支持，所述细胞培养板13放置在所述二平板12表面，使得所述第一光源10发出的光，透过所述第二平板12照射到所述细胞培养板13的底部；所述细胞培养板13为多孔细胞培养板，包括基座31和设置在基座31上表面的多个凹槽32。
所述烧杯分离培养装置参见图2，包括第二光源20、第三平板21、第四平板22和若干烧杯23，所述第二光源20位于所述第三平板21和所述第四平板22之间，所述第四平板22固定在所述第三平板21上方，第三平板21四个边角设置的支撑座25对第四平板22进行支持，所述烧杯23放置在所述第四平板22表面，使得所述第二光源20发出的光，透过所述第四平板22照射到所述烧杯23的底部。
优选地，第一光源10和第二光源20为LED平板光源；该LED平板光源可进一步通过定时插座连接电源，所述定时插座控制通电时间从而实现对光源的点亮和关闭的切换。
实施例3
一种桡足类纯种分离和培养方法，包括以下步骤：
将野外采集的样本转移至暂养缸，通过灯诱的方式，将趋光性强和活性好的个体用吸管转移至培养皿中，根据所要分离的桡足类外形特征进行定向分选，如“矮胖型”、“纺锤型”等，分选生殖节凸起的桡足类雌性个体，转移至细胞培养板中进行挑选，将单个桡足类依次转移至装有新鲜过滤海水的邻近细胞培养板中，缓慢浸洗3-5次，如将一个桡足类从孔A1依次转移浸洗至孔A3，保证获得单个完好的个体。
将浸洗后的桡足类单独转移至6、12、24细胞培养细胞培养板中，每个孔中事先装有藻液浓度为0.1×105cells/mL的球等鞭金藻，海水为0.01μm过滤海水，盐度范围25-35，室温控制在25±5℃，每隔30min镜检一次，看是否产卵，一般野外采集的桡足类，及时转移至细胞培养板中，雌性成体隔一段时间就会产卵，将产卵的个体留下，其余个体返回野采缸，将细胞培养板放在底部光源装置上培养，光照强度为500-800Lux。每天灯诱观察幼体增殖情况及其存活数量；灯诱时应在环境光照强度100Lux左右的区域，选用可切换光强的强光手电进行灯诱，光照强度在3000-3500Lux时，桡足类趋光性较好。
无节幼虫在细胞培养板中存活3天，且个体数达到每个孔10只以上，将其转移到事先备好装有过滤海水的100ml烧杯中，每天定时用已配好的0.1×105cells/mL藻液换1/2的水，换水前先将桡足类灯诱到一侧，再虹吸出1/2的水，每天灯诱时观察幼体增殖情况及其存活数量。
培养至5天后，将其转移到300ml的烧杯中，转移方法为先将桡足类灯诱至一侧，采用虹吸管配合300目的筛绢，虹吸出3/4的水，并且利用筛绢隔离留下桡足类，然后将剩余含有桡足类的部分藻水轻轻倒入事先备好藻液的300ml的烧杯中；每隔2天用已配好的0.1×105cells/mL藻液换1/2的水，换水前先将桡足类灯诱到一侧，再虹吸出1/2的水，采用300目的筛绢隔离过滤出藻水，以将桡足类保留在烧杯中，每天灯诱时观察幼体增殖情况及其存活数量。
培养至10天后，将其转移到1000ml的烧杯中，转移方法为先将桡足类灯诱至一侧，采用虹吸管配合300目的筛绢，虹吸出3/4的水，然后将剩余的部分轻轻倒入事先备好藻液的1000ml的烧杯中，藻液浓度不变；每隔2天用已配好的藻液换1/2的水，换水前先将桡足类灯诱到一侧，再虹吸出1/2的水，采用300目的筛绢隔离过滤出藻水，以将桡足类保留在烧杯中，每天灯诱时观察幼体增殖情况及其存活数量。
培养至成体并孵化出下一代幼体时，将其转移到20L的水族箱中，转移方法为将原1000ml烧杯中的水轻轻倒入事先备好藻液的20L的水族箱中，微充气培养，配置一个水族灯，使水表面光照强度为5000Lux左右，培养光照强度在3000-5000Lux，培养水体中藻类密度控制在1×105cells/mL。此时挑选部分成体进行分类鉴定，测定其体长。
实施例4
一种桡足类纯种分离和培养方法，包括以下步骤：
将野外采集的样本转移至暂养缸，通过灯诱的方式，将趋光性强和活性好的个体用吸管转移至培养皿中，根据所要分离的桡足类外形特征进行定向分选，如“矮胖型”、“纺锤型”等，分选生殖节凸起的桡足类雌性个体，转移至细胞培养板中进行挑选，将单个桡足类依次转移至装有新鲜过滤海水的邻近细胞培养板中，缓慢冲洗3-5次，如将一个桡足类从孔A1依次转移冲洗至孔A3，保证获得单个完好的个体。
将冲洗后的桡足类单独转移至6、12、24细胞培养细胞培养板中，每个细胞培养板中事先装有藻液浓度为0.5×105cells/mL的球等鞭金藻，海水为0.01μm过滤海水，盐度范围25-35，室温控制在25±5℃，每隔30min镜检一次，看是否产卵，一般野外采集的桡足类，及时转移至细胞培养板中，雌性成体隔一段时间就会产卵，将产卵的个体留下，其余个体返回野采缸，将细胞培养板放在底部光源装置上培养，光照强度为500-800Lux。每天灯诱观察幼体增殖情况及其存活数量；灯诱时应在环境光照强度100Lux左右的区域，选用可切换光强的强光手电进行灯诱，光照强度在3000-3500Lux时，桡足类趋光性较好。
无节幼虫在细胞培养板中存活3天，且个体数达到每个孔10只以上，将其转移到事先备好装有过滤海水的100ml烧杯中，每天定时用已配好的0.5×105cells/mL藻液换1/2的水，换水前先将桡足类灯诱到一侧，再虹吸出1/2的水，每天灯诱时观察幼体增殖情况及其存活数量。
培养至5天后，将其转移到300ml的烧杯中，转移方法为先将桡足类灯诱至一侧，采用虹吸管配合300目的筛绢，虹吸出3/4的水，并且利用筛绢隔离留下桡足类，然后将剩余含有桡足类的部分藻水轻轻倒入事先备好藻液的300ml的烧杯中；每隔2天用已配好的0.5×105cells/mL藻液换1/2的水，换水前先将桡足类灯诱到一侧，再虹吸出1/2的水，采用300目的筛绢隔离过滤出藻水，以将桡足类保留在烧杯中，每天灯诱时观察幼体增殖情况及其存活数量。
培养至10天后，将其转移到1000ml的烧杯中，转移方法为先将桡足类灯诱至一侧，采用虹吸管配合300目的筛绢，虹吸出3/4的水，然后将剩余的部分轻轻倒入事先备好藻液的1000ml的烧杯中，藻液浓度不变；每隔2天用已配好的藻液换1/2的水，换水前先将桡足类灯诱到一侧，再虹吸出1/2的水，采用300目的筛绢隔离过滤出藻水，以将桡足类保留在烧杯中，每天灯诱时观察幼体增殖情况及其存活数量。
培养至成体并孵化出下一代幼体时，将其转移到10L的水族箱中，转移方法为将原1000ml烧杯中的水轻轻倒入事先备好藻液的10L的水族箱中，微充气培养，配置一个水族灯，使水表面光照强度为6000Lux左右，培养水体中光照强度控制在4000-6000Lux，培养水体中藻类密度控制在1×105cells/mL。此时挑选部分成体进行分类鉴定，测定其体长。
实施例5
一种桡足类纯种分离和培养方法，包括以下步骤：
将野外采集的样本转移至暂养缸，通过灯诱的方式，将趋光性强和活性好的个体用吸管转移至培养皿中，根据所要分离的桡足类外形特征进行定向分选，如“矮胖型”、“纺锤型”等，分选生殖节凸起的桡足类雌性个体，转移至细胞培养板中进行挑选，将单个桡足类依次转移至装有新鲜过滤海水的邻近细胞培养板中，缓慢浸洗3-5次，如将一个桡足类从孔A1依次转移浸洗至孔A3，保证获得单个完好的个体。
将浸洗后的桡足类单独转移至6、12、24细胞培养细胞培养板中，每个细胞培养板中事先装有藻液浓度为1×105cells/mL的球等鞭金藻，海水为0.01μm过滤海水，盐度范围25-35，室温控制在25±5℃，每隔30min镜检一次，看是否产卵，一般野外采集的桡足类，及时转移至细胞培养板中，雌性成体隔一段时间就会产卵，将产卵的个体留下，其余个体返回野采缸，将细胞培养板放在底部光源装置上培养，光照强度为500-800Lux。每天灯诱观察幼体增殖情况及其存活数量；灯诱时应在环境光照强度100Lux左右的区域，选用可切换光强的强光手电进行灯诱，光照强度在3000-3500Lux时，桡足类趋光性较好。
无节幼虫在细胞培养板中存活3天，且个体数达到每个孔10只以上，将其转移到事先备好装有过滤海水的100ml烧杯中，每天定时用已配好的1×105cells/mL藻液换1/2的水，换水前先将桡足类灯诱到一侧，再虹吸出1/2的水，每天灯诱时观察幼体增殖情况及其存活数量。
培养至5天后，将其转移到300ml的烧杯中，转移方法为先将桡足类灯诱至一侧，采用虹吸管配合300目的筛绢，虹吸出3/4的水，并且利用筛绢隔离留下桡足类，然后将剩余含有桡足类的部分藻水轻轻倒入事先备好藻液的300ml的烧杯中；每隔2天用已配好的1×105cells/mL藻液换1/2的水，换水前先将桡足类灯诱到一侧，再虹吸出1/2的水，采用300目的筛绢隔离过滤出藻水，以将桡足类保留在烧杯中，每天灯诱时观察幼体增殖情况及其存活数量。
培养至10天后，将其转移到1000ml的烧杯中，转移方法为先将桡足类灯诱至一侧，采用虹吸管配合300目的筛绢，虹吸出3/4的水，然后将剩余的部分轻轻倒入事先备好藻液的1000ml的烧杯中，藻液浓度不变；每隔2天用已配好的藻液换1/2的水，换水前先将桡足类灯诱到一侧，再虹吸出1/2的水，采用300目的筛绢隔离过滤出藻水，以将桡足类保留在烧杯中，每天灯诱时观察幼体增殖情况及其存活数量。
培养至成体并孵化出下一代幼体时，将其转移到20L的水族箱中，转移方法为将原1000ml烧杯中的水轻轻倒入事先备好藻液的20L的水族箱中，微充气培养，配置一个水族灯，使水表面光照强度为5500Lux左右，培养水体中光照强度控制在5000-6000Lux，培养水体中藻类密度控制在1×105cells/mL。此时挑选部分成体进行分类鉴定，测定其体长。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (10)

1.一种桡足类纯种分离和培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1：将野外采集的桡足类样本放在暂养缸，从中选择趋光性强和活性好的个体转移至培养皿中，根据桡足类外形特征进行定向分选，获得桡足类个体；
步骤2：将上步获得的桡足类个体放入细胞培养板中，每孔只放一个个体，孔内事先装入球等鞭金藻和过滤海水混合成的藻液，观察桡足类个体是否产卵，筛选出产卵的个体继续培养，其余个体返回暂养缸；
步骤3：将装有产卵个体的细胞培养板放置平板光源上方，形成底部平面光源照射条件，控制光照强度和光照周期，在显微镜下观察细胞培养板中桡足类个体的增殖情况及其存活数量；
步骤4：培养一段时间后，将细胞培养板中的桡足类转移到烧杯内进行扩大培养，所述烧杯事先装入过滤海水，每天用新鲜的所述藻液更换所述烧杯内部分原有的藻液，更换前先将桡足类灯诱到一侧，在另一侧用虹吸方式转移出部分原有的藻液；所述烧杯放置平板光源上方，形成底部平面光源照射条件，控制光照强度和光照周期，观察烧杯中所述桡足类个体的增殖情况及其存活数量；
步骤5：培养至成体并孵化出下一代幼体时，将烧杯中的桡足类转移到水族箱内进行培养，转移方法为将原烧杯中的藻液倒入事先备好藻液的水族箱中，微充气培养，配置一个水族灯，控制水表面光照强度和培养水体中藻类密度，并进行成体分类鉴定或生长观测。
2.根据权利要求1所述桡足类纯种分离和培养方法，其特征在于：步骤1中根据桡足类外形特征，选择矮胖型，或者纺锤型桡足类，继续从中分选生殖节凸起的桡足类雌性个体，转移至细胞培养板中。
3.根据权利要求2所述桡足类纯种分离和培养方法，其特征在于：所述细胞培养板具有多个孔，在所述细胞培养板中，将单个桡足类依次转移至装有新鲜过滤海水的邻近孔中，缓慢浸洗3-5次，以完成单个桡足类的清洗，保证获得单个完好的个体。
4.根据权利要求1所述桡足类纯种分离和培养方法，其特征在于：所述藻液是将指数生长期的球等鞭金藻，和经过0.01μm孔径滤材过滤的海水混合后，使其藻液浓度为0.1-1×105cell/mL，海水盐度范围为25-35；
任选的，步骤2中室温控制在25±3℃，每隔20-30min镜检一次，观察是否产卵，筛选出产卵的个体继续培养，其余个体返回暂养缸。
5.根据权利要求1所述桡足类纯种分离和培养方法，其特征在于：步骤3中底部平面光源照射控制光照强度为500-800Lux；
任选的，步骤3中可在显微镜下观察细胞培养板中所述桡足类增殖情况及其存活数量，也可在观察细胞培养板中所述桡足类个体时辅助灯诱条件，灯诱时环境光照强度为100±10Lux，选用可切换光强的照明装置进行灯诱，照明装置的光照强度为3000-3500Lux时，桡足类趋光性较好，便于观察增殖情况及其存活数量。
6.根据权利要求1所述桡足类纯种分离和培养方法，其特征在于：步骤4中底部平面光源照射控制光照强度为500-800Lux；
任选的，步骤4中控制光照周期为12h黑暗和12h光照循环；
任选的，步骤4中虹吸时采用300目的筛绢，对虹吸出的藻液进行前端过滤，以截留下烧杯中的桡足类；
任选的，步骤4中观察烧杯中所述桡足类个体时辅助灯诱条件，灯诱时环境光照强度为100±10Lux，选用可切换光强的照明装置进行灯诱，照明装置的光照强度为3000-3500Lux时，桡足类趋光性较好，便于观察增殖情况及其存活数量。
7.根据权利要求1所述桡足类纯种分离和培养方法，其特征在于：步骤5中水族灯使水表面光照强度为5000-6000Lux，培养水体中光照强度控制在3000-6000Lux，培养水体中藻类密度控制在0.1-1×105cells/mL。
8.一种桡足类纯种分离和培养的装置，运用权利要求1-7任一项所述方法进行桡足类纯种分离和培养，其特征在于：所述桡足类纯种分离和培养的装置包括细胞培养板分离培养装置、烧杯分离培养装置和水族箱，所述细胞培养板分离培养装置用于纯种分离，所述烧杯分离培养装置和所述水族箱用于扩大培养，其中：
所述细胞培养板分离培养装置包括第一光源、第一平板、第二平板和细胞培养板，所述第一光源位于所述第一平板和所述第二平板之间，所述第二平板固定在所述第一平板上方，所述细胞培养板放置在所述二平板表面，使得所述第一光源发出的光，透过所述第二平板照射到所述细胞培养板的底部；所述细胞培养板为多孔细胞培养板；
所述烧杯分离培养装置包括第二光源、第三平板、第四平板和若干烧杯，所述第二光源位于所述第三平板和所述第四平板之间，所述第四平板固定在所述第三平板上方，所述烧杯放置在所述四平板表面，使得所述第二光源发出的光，透过所述第四平板照射到所述烧杯的底部。
9.根据权利要求8所述桡足类纯种分离和培养的装置，其特征在于：所述第一光源和/或所述第二光源为LED平板光源。
10.根据权利要求8或9所述桡足类纯种分离和培养的装置，其特征在于：所述第一光源和/或所述第二光源通过定时插座连接电源，所述定时插座控制通电时间从而实现对光源的点亮和关闭的切换。
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Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2069946A1 (zh) * 1969-12-12 1971-09-10 Cie Gle Transatlantique
WO2004032610A2 (en) * 2002-10-08 2004-04-22 The Oceanic Institute The isolation, culture, and use of marine copepods in aquaculture
CN1596630A (zh) * 2004-08-23 2005-03-23 中国海洋大学 一种培养装置及其在甲壳动物桡足类培养中的应用
JP2007236280A (ja) * 2006-03-08 2007-09-20 Oriental Yeast Co Ltd 底棲性二枚貝と匍匐性櫂脚類を混合飼育する方法
CN101692805A (zh) * 2009-10-13 2010-04-14 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 一种轮虫类、枝角类与桡足类浮游动物的采集方法
CN104621017A (zh) * 2015-01-13 2015-05-20 宁波大学 一种温剑水蚤的筛选纯化与规模化培育方法
CN104654131A (zh) * 2015-02-04 2015-05-27 中国海洋大学 用于甲壳动物、海参、鱼类养殖实验的智能光照系统
CN106577409A (zh) * 2016-12-21 2017-04-26 厦门大学 一种诱导桡足类产生滞育卵的方法
CN107960350A (zh) * 2017-12-14 2018-04-27 浙江海洋大学 一种桡足类卵的保存方法
CN111387100A (zh) * 2019-09-12 2020-07-10 浙江海洋大学 一种纺锤水蚤分离纯化及规模化培养方法

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2069946A1 (zh) * 1969-12-12 1971-09-10 Cie Gle Transatlantique
WO2004032610A2 (en) * 2002-10-08 2004-04-22 The Oceanic Institute The isolation, culture, and use of marine copepods in aquaculture
CN1596630A (zh) * 2004-08-23 2005-03-23 中国海洋大学 一种培养装置及其在甲壳动物桡足类培养中的应用
JP2007236280A (ja) * 2006-03-08 2007-09-20 Oriental Yeast Co Ltd 底棲性二枚貝と匍匐性櫂脚類を混合飼育する方法
CN101692805A (zh) * 2009-10-13 2010-04-14 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 一种轮虫类、枝角类与桡足类浮游动物的采集方法
CN104621017A (zh) * 2015-01-13 2015-05-20 宁波大学 一种温剑水蚤的筛选纯化与规模化培育方法
CN104654131A (zh) * 2015-02-04 2015-05-27 中国海洋大学 用于甲壳动物、海参、鱼类养殖实验的智能光照系统
CN106577409A (zh) * 2016-12-21 2017-04-26 厦门大学 一种诱导桡足类产生滞育卵的方法
CN107960350A (zh) * 2017-12-14 2018-04-27 浙江海洋大学 一种桡足类卵的保存方法
CN111387100A (zh) * 2019-09-12 2020-07-10 浙江海洋大学 一种纺锤水蚤分离纯化及规模化培养方法

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