CN106519072B - 可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶及其制备方法和应用 - Google Patents

可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶及其制备方法和应用，属于整形、美容生物材料领域。该方法特征在于将环辛炔修饰的玻尿酸（HA）溶液和叠氮修饰的聚乙二醇（PEG）溶液混合，形成具有良好流动性的水凝胶前体溶液，将其注射入体内后即可通过环张力促进的点击化学反应快速交联而形成水凝胶，起到保水、整形等作用。该材料的制备过程简单，无需外加交联剂、无需加热、无需紫外或辐射等，一步交联，无毒无刺激，因此所制的水凝胶生物相容性好，炎症反应低微。同时该凝胶降解速度较慢，机械性能优异，因此该材料的长久性和塑形性好，非常适用于作为抗皱、丰乳、隆鼻、充垫等领域的整容填充材料。

Description

可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种可注射玻尿酸/聚乙二醇水凝胶的制备方法及应用，属于整形、美容材料领域。
背景技术
注射美容是利用注射的方法将生物材料或人工合成的生物兼容性材料注射入真皮层或皮下，通过不同的作用机理达到减少皮肤皱褶或塑型的一大类整形手术的方法。该方法无需开刀手术，无痛苦，见效快，无副作用，安全可靠，深受大家的欢迎。其中最常见的整容填充剂有自体脂肪、玻尿酸(又名透明质酸，HA)和胶原蛋白。自体脂肪的安全性较好，但是由于脂肪存活有限，所以难以达到理想效果。胶原蛋白会被人体吸收所以维持时间短，并且会有过敏感染等副作用。玻尿酸材料由于其快速降解而难以长久维持，需要多次填充以达到修复效果，对患者造成了一定的经济负担和痛苦。在如今这种人人都追求高颜值的时代，注射美容仍不能大众化，其中最重要的原因就是填充剂的安全性和持久性仍有待提高。因此，寻找一种安全性、塑形性和持久性都好的可注射填充材料具有重要的意义。
交联的玻尿酸由于其生物性能优异，降解周期较长，近年来受到广泛地关注。玻尿酸经过修饰改性或者引入交联剂交联获得了一些毒性稍小的水凝胶，但是残留的交联剂或多或少会引起体内的炎症。聚乙二醇(PEG)无抗原性，它的生物相容性已经得到了FDA认证，且PEG分子量范围大，可以通过调节其分子量来改善水凝胶的性能来满足各种需要。并且将天然高分子HA和合成高分子PEG共混，能够取长补短，这也是研究的热门课题。在各类交联反应方式中，环张力促进的叠氮-炔基环加成(SPAAC)反应脱颖而出。首先该反应不需要催化剂，不需要加热光照辐射等外在条件，反应速度快；并且叠氮基或炔基不会与生物体内的氨基、羧基、羟基等发生交叉反应。因此，SPAAC反应是真正的生物正交反应。本发明在玻尿酸分子链上进行环辛炔基修饰，采用叠氮化的PEG为交联剂，通过SPAAC反应交联得到水凝胶。除了玻尿酸固有的优异的生物相容性和保水性等优点之外，该HA/PEG水凝胶还具有以下特点：交联反应发生在将材料注射到体内之后，能够在体内原位固化成形；由于PEG的引入和较高的交联密度，能有效地延缓在体内的降解速度，提高材料的耐久性；可以通过改变凝胶前体的组成、分子量、浓度、功能基密度等调节材料的机械强度和降解速度，以适应不同应用场合的需要。因此，本发明提出的HA/PEG水凝胶是一种兼具安全性、塑形性和持久性的美容整形材料。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种可注射玻尿酸/聚乙二醇水凝胶的制备方法及应用，克服现有玻尿酸注射剂塑形性和持久性差的缺陷。为达到上述目的，本发明利用环辛炔基和叠氮基之间的环张力促进的叠氮-炔基环加成(SPAAC)反应对注射人体内的玻尿酸/聚乙二醇水溶液进行交联，使其原位凝胶化而固化成形。
本发明采用的技术方案包括以下步骤：(1)分别制备环辛炔修饰的玻尿酸(式I)和叠氮修饰的PEG衍生物(式II)作为水凝胶前体；(2)将环辛炔修饰的玻尿酸溶于生理盐水或pH＝7.4的PBS缓冲溶液得到浓度为1％～10wt％的溶液A，将叠氮修饰的聚乙二醇(PEG)衍生物溶于生理盐水或pH＝7.4的PBS缓冲溶液得到浓度为1～30wt％的溶液B；(3)在使用前将溶液A和溶液B混合制得凝胶前体混合溶液，然后将其注入体内，原位形成所述水凝胶。
一种环辛炔修饰的玻尿酸，具有式I所示的结构：
其中，X＝OH或环辛炔的摩尔取代度为1～30％，环辛炔修饰的玻尿酸的分子量为1万～20万道尔顿。
一种环辛炔修饰的玻尿酸的制备方法，包括以下步骤：将玻尿酸溶于缓冲溶液中，加入缩合剂活化后再加入氨乙氧基环辛炔进行反应，得到环辛炔修饰的玻尿酸；所述的缩合剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐或4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐。
所述缓冲溶液的pH＝5.5；所述氨乙氧基环辛炔溶于二甲基亚砜或二甲基甲酰胺中后加入反应体系；玻尿酸上的羧基、氨乙氧基环辛炔与缩合剂的摩尔比为10～2：1：2。
一种叠氮修饰的聚乙二醇，具有式II所示的结构：
其分子量为400～10000道尔顿。
一种制备叠氮修饰的聚乙二醇的方法，包括以下步骤：将化合物溶于有机溶剂中，加入三乙胺，再逐滴加入甲基磺酰氯，同时避免滴入太快引起温度骤然升高；室温搅拌，纯化，得到化合物将和NaN3溶于有机溶剂中，80℃反应，冷却至室温后过滤除去过量的叠氮钠，用截留分子量1000的透析袋透析，冻干后得到上述叠氮修饰的聚乙二醇。
一种可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶前体溶液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将环辛炔修饰的玻尿酸溶于生理盐水或pH＝7.4的PBS缓冲溶液中，得到浓度为1wt％～10wt％的溶液D；
(2)将叠氮修饰的聚乙二醇溶于生理盐水或pH＝7.4的PBS缓冲溶液中，得到浓度为1wt％～30wt％的溶液E；
(3)将溶液D和溶液E混合均匀，制得可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶前体溶液，其中，可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶前体溶液中叠氮基和环辛炔基的摩尔比为1:3～3:1。
一种可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶前体溶液，通过上述制备方法制备得到。
一种玻尿酸/聚乙二醇水凝胶，通过以下方式制备得到：将上述可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶前体溶液置体外温和环境中或注入体内，，环辛炔基和叠氮基由于环张力进行叠氮-炔基环加成反应，原位交联形成玻尿酸/聚乙二醇水凝胶。
上述可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶前体溶液用于抗皱、丰乳、隆鼻。
上述玻尿酸/聚乙二醇水凝胶作为整形美容材料的应用。
本发明制备的可注射玻尿酸/聚乙二醇水凝胶水凝胶作为皮下整容填充物的应用时，其水凝胶前体溶液流动性好，能够很方便地通过注射器注入指定部位，并在体内快速固化成水凝胶，是一种兼具安全性、塑形性和持久性的美容整形材料。
由于上述技术方案的应用，本发明具有如下优点和有益效果：
(1)本发明公开的可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶前体溶液制备方法简单，产率高，无毒无刺激，在生物体内不会发生交叉反应。
(2)本发明制备玻尿酸/聚乙二醇水凝胶的方法为SPAAC反应，不需要催化剂，不需要加热、光照、辐射等外在条件，快速高效、选择性好、能在体内固化。
(3)本发明制备玻尿酸水凝胶过程中未使用有毒交联剂，水凝胶的细胞毒性低。
(4)本方法制备的水凝胶通过改变两种水凝胶前体的浓度、聚合物中官能团的取代度、分子量和反应配比，可以获得不同耐酶性的水凝胶，改变水凝胶在体内的存留时间。
(5)本发明使用的原料玻尿酸和聚乙二醇均具有良好的生物相容性，制备出的水凝胶具有良好的力学性能，优异的生物相容性，炎症反应微弱，能有效的抗酶解，在体内的存留时间长，十分适用于整容填充。
附图说明
图1是实施例3凝胶化前后的对比图；其中，图1a代表凝胶化前，图1b代表凝胶化后。
图2是实施例4中水凝胶的流变曲线；其中，图2a代表水凝胶浓度为5wt％，图2b代表水凝胶浓度为3wt％。
图3是实施例5中水凝胶的溶胀降解图。
图4是实施例6中水凝胶内部的COS-7细胞增殖率图。
图5是实施例6中水凝胶内的活死细胞染色图；其中，图5A代表0天，图5B代表3天。
图6是实施例7中注入水凝胶之后小鼠的照片(图6A)、注入三月之后小鼠的照片(图6B)、小鼠内取出的水凝胶照片(图6C)以及小鼠内水凝胶及其周围组织的H&E染色切片图(图6D)。
图7是环辛炔修饰的玻尿酸溶液和叠氮修饰的聚乙二醇溶液的反应示意图。
图8是环辛炔修饰的玻尿酸的合成示意图。
具体实施方式
下面通过结合附图和实施例对本发明作进一步的描述，其目的在于帮助更好的理解本发明的内容，但这些具体实施例不以任何方式限制本发明的保护范围。以下具体实施例中所用的原料均为已知化合物，可在市场上购得，或可用本领域已知的方法合成。
实施例1：叠氮修饰的聚乙二醇的合成
(1)端基双环氧PEG的合成
端基双环氧PEG
将20.2g PEG(Mn＝6000)置于500mL烧瓶中，在120℃油浴加热条件下用油泵抽真空干燥3h，然后加入200mL无水四氢呋喃，溶解至澄清透明后加入1.35g氢化钠。室温搅拌过夜后加入5.3mL环氧氯丙烷，室温反应20h后过滤，滤液浓缩并在乙醚中沉淀，将所得固体真空干燥，得到19.0g白色固体端基双环氧PEG，产率为94％。1H NMR(400MHz,CDCl3,TMS):δ3.57-3.74(m,CH2of PEG chain),3.39(m,2H),3.1(m,2H),2.72(m,2H),2.54(m,2H)；13CNMR(100MHz,CDCl3,TMS),δ70.5,72.8,50.4,44.2。
(2)端基四羟基PEG的合成
端基四羟基PEG
将12.2g端基双环氧PEG溶于120mL 0.1M的氢氧化钠溶液中，并在60℃的油浴中搅拌10h；然后用1M的盐酸溶液中和，旋干水后，将固体溶于50mL二氯甲烷，用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干后得到11.8g白色固体端基四羟基PEG，产率为97％。1H NMR(400MHz,CDCl3,TMS):δ3.57-3.74(m,CH2of PEG chain),3.39(m,2H),2.65(OH).13C NMR(100MHz,CDCl3,TMS):δ70.5,72.8,63.7。
(3)端基四甲磺酰基PEG的合成
端基四甲磺酰基PEG
将2.77g端基四羟基PEG溶于20mL二氯甲烷中，加入1.4mL三乙胺，再逐滴加入2.8mL甲基磺酰氯，同时避免滴入太快引起温度骤然升高；室温搅拌5h后，旋干二氯甲烷，加入100mL乙酸乙酯，为了促进产物在乙酸乙酯中的溶解，可以加热到40℃超声；然后过硅藻土除去甲磺酸盐，滤液浓缩并在乙醚中沉淀，将所得固体真空干燥，得到2.72g淡黄色粉末端基四甲磺酰基PEG，产率为98％。1H NMR(400MHz,CDCl3,TMS):δ4.91(m,2H),4.35(m,4H),3.57-3.74(m,CH2of PEG chain),3.39(m,2H),3.08(s,6H),3.03(s,6H),2.65(OH)；13C NMR(100MHz,CDCl3,TMS):δ70.5,72.8,69.2,67.8,38.6,37.6。
(4)叠氮修饰的聚乙二醇的合成
叠氮修饰的聚乙二醇
向25mL圆底烧瓶中加入0.370g端基四甲磺酰基PEG、0.08g NaN3、5mL DMF，80℃油浴搅拌过夜，冷却至室温后过滤除去过量的叠氮钠，溶于水中并用截留分子量1000的透析袋透析2天，冻干后得到0.320g白色蓬松的固体叠氮修饰的聚乙二醇，产率为86.5％。1HNMR(400MHz,DMSO,TMS):δ3.88-3.94(m,2H),3.50-3.69(m,CH2of PEG chain)；13C NMR(100MHz,CDCl3,TMS):δ70.5,72.7,72.5,53.2,50.1。
实施例2：环辛炔修饰玻尿酸的合成
(1)N-(2-((Z)-2-溴环辛-2-烯氧基)乙基)三氟乙酰胺的合成
N-(2-((Z)-2-溴环辛-2-烯氧基)乙基)三氟乙酰胺
首先将4.31g三氟甲磺酸银置于50mL三口烧瓶中，抽空充氩气三次；在氩气保护下向烧瓶中注入8mL甲苯，然后将10.81g N-(2-羟基乙基)三氟乙酰胺和1.50g 8,8-二溴双环[5.1.0]辛烷的混合溶液搅拌下逐滴加入烧瓶中。避光反应一天后加入50mL饱和食盐水淬灭反应，抽滤，滤液用二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干溶剂得到粗产品5.14g。粗产品以乙酸乙酯：石油醚＝1:7(v/v)的乙酸乙酯/石油醚混合液为淋洗液进行柱层析，旋干得到1.40g棕黄色固体N-(2-((Z)-2-溴环辛-2-烯氧基)乙基)三氟乙酰胺，产率为72.8％。1H NMR(400MHz,CDCl3,TMS):δ7.05(s,1H),6.22(dd,1H),3.89(dd,1H),3.67-3.48(m,4H),2.73(m,1H),2.35-2.28(m,1H),2.07-1.84(m,2H),1.77-1.68(m,2H),1.55-1.43(m,1H),1.33-1.20(m,2H),0.9-0.75(m,1H)；13C NMR(100MHz,CDCl3,TMS):157.3,132.5,132.0,114.2,84.7,66.0,39.7,39.4,36.4,33.3,28.0,26.2。
(2)2-(环辛-2-炔氧基)乙胺的合成
2-(环辛-2-炔氧基)乙胺
取0.684g N-(2-((Z)-2-溴环辛-2-烯氧基)乙基)三氟乙酰胺置于50mL的烧瓶中，抽空充氩气三次后于氩气保护下注入5mL DMSO，搅拌溶解均匀后注入0.9mL DBU，油浴60℃搅拌反应2h后补加2.7mL DBU，反应一天。冷却至室温，然后加入含有18mL 5wt％的碳酸钾水溶液和36mL甲醇的混合溶液，室温下搅拌过夜，然后旋除甲醇，用二氯甲烷萃取(30mL×3)。合并有机相，无水硫酸镁干燥之后过滤，旋干溶剂，真空干燥后得到299mg棕色液体2-(环辛-2-炔氧基)乙胺，产率为90％。1H NMR(400MHz,CDCl3,TMS):δ4.20(m,1H),3.60(m,1H),3.36(m,1H)；2.87(m,2H),2.26-2.15(m,3H),2.07-1.96(m,2H),1.87(m,2H),1.71-1.33(m,5H)；13C NMR(100MHz,CDCl3,TMS):99.2,91.6,72.6,69.0,41.2,40.3,33.2,28.7,25.2,19.7。
(3)环辛炔修饰的玻尿酸的合成
环辛炔修饰的玻尿酸
称取0.726g玻尿酸(Mn＝35000)溶解于50mL的MES缓冲溶液(100mM,pH＝5.5)，然后加入0.276g DMTMM，搅拌约一小时后，加入溶于6mL DMF的103mg 2-(环辛-2-炔氧基)乙胺，室温搅拌一天。然后用截留分子量3500的透析袋透析。先用0.1mol/L的氯化钠溶液透析一天，然后用超纯水透析三天。冻干得到709mg白色蓬松状固体环辛炔修饰的玻尿酸。核磁氢谱见图2。1H NMR(400MHz,CDCl3,TMS):δ4.47-4.44(m,2H),4.28(m,1H),3.82-3.27(m,HA)，2.20-1.0(m,炔环上的氢)。
实施例3：SPAAC反应制备水凝胶
将实施例1制备的叠氮修饰的聚乙二醇、实施例2制备的环辛炔修饰的玻尿酸分别溶于pH＝7.4的PBS缓冲溶液中，配制浓度范围为1wt％～10wt％的环辛炔修饰的玻尿酸溶液以及浓度按照炔基官能团的摩尔量改变的叠氮修饰的聚乙二醇溶液。将环辛炔修饰的玻尿酸溶液和叠氮修饰的聚乙二醇溶液混合后涡旋半分钟，置入37℃的恒温水浴中，静置3～50min，可得到不同浓度、摩尔比炔基/叠氮＝1:0.5、1:1、1:2、1:3的水凝胶。图1是水凝胶前后的对比图。
实施例4：流变性能测试
对实施例3的水凝胶进行震荡流变测试，考察交联的过程以及所形成水凝胶的强度。流变测试使用HAAKE RS6000应变控制流变仪进行水凝胶的震荡流变测试。夹具为4°椎角的40mm椎板，频率为1rad/s，振幅为1％，温度设定为37℃。将将环辛炔修饰的玻尿酸溶液和叠氮修饰的聚乙二醇溶液按炔基/叠氮为固定的摩尔比混合后涡旋30s，加入流变仪中。2min后样品温度上升至37℃，记录弹性模量G′和粘性模量G″。结果如图2所示。弹性模量G′描述水凝胶对弹性形变的物理抵抗性方面的凝胶强度，粘性模量G″描述水凝胶对粘性形变的物理抵抗性方面的凝胶强度。G′和G″的相交位置即为凝胶点，凝胶点的横坐标就是凝胶时间。可以看出凝胶前体浓度越大凝胶时间越短。
实施例5：水凝胶的溶胀与降解性的测试
溶胀降解实验观察水凝胶在不同pH条件下水凝胶的溶胀、降解行为以及在透明质酸酶存在条件下的降解行为，判断交联玻尿酸的对pH的敏感性以及抗酶解能力。具体如下：120μL水凝胶样品中加入不含透明质酸酶或者含50U透明质酸酶的中性PBS缓冲溶液，置于37℃的水浴摇床中，震荡速率为60rpm。在设定的时间点，小心倒出水凝胶上层的溶液，滤干，称重，然后再加入新鲜的培养液；重复这一过程直至水凝胶消失。每次试验重复三次。用如下公式计算：
其中，Δw代表水凝胶重量变化，w0和wi分别代表水凝胶溶胀前的重量、溶胀后的重量。50U的透明质酸酶浓度远远高于体内的透明质酸酶浓度，由图3可以看出该水凝胶的酶降解速率低，抗酶解能力优异。调节水凝胶前体的浓度可以获得不同耐酶性的水凝胶。该水凝胶的长久性凸显了其用于皮下注射整容的优势。
实施例6：水凝胶的细胞相容性测试
首先配制无菌的含10％(v/v)胎牛血清(FBS)的DMEM培养基溶液，然后用该培养基配制两水凝胶前体溶液，过0.22um的微孔滤膜过滤除菌。然后将环辛炔修饰的玻尿酸溶液和叠氮修饰的聚乙二醇溶液混匀，然后混入COS-7细胞，制得细胞密度为2.5×105细胞/mL的混合溶液。将此包载细胞的混合溶液加入96孔板中，每孔加样64uL，然后将培养板放入37℃、5％CO2(v/v)的细胞培养箱中培养30min，形成厚度约2mm的细胞-水凝胶复合物(3wt％，1:1)。然后向每孔中加入100uL培养基，放入培养箱中培养。在第0、1、2、3天用CCK-8试剂测定水凝胶内部细胞增殖率。方法为：每孔中加入10uL的CCK-8溶液，再培养4h后取出，用Multiskan GO microplate spectrophoto meter酶标仪(Thermo Scientific，USA)测定450nm处的吸光度。将不加细胞的水凝胶作为空白背景，初始细胞数作为对照，细胞增殖率＝[(OD样品-OD空白背景)/(OD初始细胞-OD空白背景)]×100％。所有实验组进行四个独立的平行样，测试结果取平均值±标准偏差(SD)。水凝胶内部的活死细胞状况通过采用Live-Dead试剂染色之后用激光共聚焦荧光显微镜观察，操作方法参考试剂操作手册。图4为水凝胶内部的COS-7细胞增殖率，可以看出细胞在水凝胶内增殖很快，存活率高。图5为水凝胶内部的活死细胞情况，亮点代表活细胞，可以看出活细胞随着时间推移不断增加，证明了细胞在水凝胶内部生长良好。
实施例7：水凝胶的体内生物相容性实验
ICR小鼠后背去毛，消毒，将240μL环辛炔修饰的玻尿酸溶液和叠氮修饰的聚乙二醇溶液快速混合后，将得到的水凝胶前体溶液通过24G针头注射到小鼠后背的皮下部位；注射30分钟后将一只小鼠实施安乐死，观察水凝胶在小鼠体内形成情况及形貌；余下的小鼠继续饲养，分别在水凝胶前体溶液注射后的1周、2周、4周、8周各将两只小鼠实施安乐死，并马上将水凝胶及周围组织取出，浸入4wt％的多聚甲醛溶液中固定；固定足够时间后，将样品包埋于石蜡中，切成厚度约为4微米的薄片；切片用苏木精-曙红(HE)试剂染色，在倒置荧光显微镜下观察免疫反应。
将水凝胶前体溶液皮下注射到小鼠的背部，在注射部位形成圆形的突起部分如图6A所示。注射30分钟后将一只小鼠处死，可以观察到在小鼠体内形成的透明水凝胶，取出的水凝胶见图6C。这证明了注射到生物体内的水凝胶前体溶液能够发生快速的点击化学反应，原位生成水凝胶。三个月后在老鼠背部皮下仍能看到明显的鼓包，见图6B，表明水凝胶仍然存在，取出水凝胶时，发现水凝胶保持完整的形貌与组织相融，稍有变小，没有破碎解体。说明该水凝胶的体内存在周期较长。注射4周后，取出的水凝胶及其周围组织的H&E染色结果如图6D所示，只有极其微弱的炎症。整个过程未出现如变色、化脓或浮肿等不良反应。因此，实验结果证明了该可注射水凝胶对生物体有良好的生物相容性。

Claims (5)

1.一种可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶前体溶液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将环辛炔修饰的玻尿酸溶于生理盐水或pH＝7.4的PBS缓冲溶液中，得到浓度为1wt％～10wt％的溶液D；所述的环辛炔修饰的玻尿酸具有式I所示的结构：
其中，X＝OH或环辛炔的摩尔取代度为1～30％，环辛炔修饰的玻尿酸的分子量为1万～20万道尔顿；
(2)将叠氮修饰的聚乙二醇溶于生理盐水或pH＝7.4的PBS缓冲溶液中，得到浓度为1wt％～30wt％的溶液E；所述的叠氮修饰的聚乙二醇具有式II所示的结构：
其分子量为400～10000道尔顿；
(3)将溶液D和溶液E混合均匀，制得可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶前体溶液，其中，可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶前体溶液中叠氮基和环辛炔基的摩尔比为1:3～3:1。
2.一种可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶前体溶液，其特征在于：通过权利要求1所述的制备方法制备得到。
3.一种玻尿酸/聚乙二醇水凝胶，其特征在于，通过以下方式制备得到：将权利要求2所述的可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶前体溶液置于体外温和环境中或注入体内，环辛炔基和叠氮基由于环张力进行叠氮-炔基环加成反应，原位交联形成玻尿酸/聚乙二醇水凝胶。
4.权利要求2所述的可注射型玻尿酸/聚乙二醇水凝胶前体溶液用于抗皱、丰乳、隆鼻。
5.权利要求3所述的玻尿酸/聚乙二醇水凝胶作为整形美容材料的应用。
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