CN106479963A - 一种猪胚成纤维细胞的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种猪胚成纤维细胞的制备方法，以严格的步骤来制备猪胚成纤维细胞，本发明的有益成果是：本发明扩增了猪胚成纤维细胞，通过完善的实验步骤对整个制备过程进行限定，并严格规定其中的参数，使制备方法的结果更加完善。

Description

一种猪胚成纤维细胞的制备方法
技术领域
本发明涉及生物细胞领域，涉及一种猪胚成纤维细胞的制备方法。
背景技术
成纤维细胞(fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞(mesenchymal cell)分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。根据不同功能活动状态，可将细胞划分成成纤维细胞和纤维细胞，成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损以及骨创伤的修复有着十分重要的作用。猪胚成纤维细胞是成纤维细胞重要的一种，有很高的医用价值，因此，需要对其进行制备以满足现今的需要。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种解决或部分解决上述问题的猪胚成纤维细胞的制备方法。
为达到上述技术方案的效果，本发明的技术方案为：一种猪胚成纤维细胞的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
取38℃孵化至1-2年的猪胚，碘酒消毒8分钟，酒精脱碘后，无菌操作分离胚体，用无菌的D-Hank’s液轻轻洗涤8次，加入3～8ml的0.28％胰酶，于37℃的温度下，消化20～30分钟，消化过程中轻轻吹打数次，以使消化后的胚体尽量地分散单个细胞，然后用台盼蓝进行活细胞计数，按照480～500万细胞/瓶的浓度分装于100ml细胞培养瓶中，置于37℃的8％浓度的二氧化碳培养箱中，待细胞长成单层后以备接种，所述猪胚的细胞生长液为含5％犊牛血清、3ul/ml两性霉素、青霉素和链霉素混合而成。
本发明的有益成果是：本发明扩增了猪胚成纤维细胞，通过完善的实验步骤对整个制备过程进行限定，并严格规定其中的参数，使制备方法的结果更加完善。
具体实施方式
为了使本发明所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行详细的说明。应当说明的是，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明，能实现同样功能的产品属于等同替换和改进，均包含在本发明的保护范围之内。具体方法如下：
成纤维细胞(fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞(mesenchymal cell)分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。根据不同功能活动状态，可将细胞划分成成纤维细胞和纤维细胞，成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质弱嗜碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损以及骨创伤的修复有着十分重要的作用。
在胚胎发育中，成纤维细胞和其他的结缔组织一样来源于中胚层。
分泌细胞外间质的前体，以维持结缔组织结构的完整性。成纤维细胞分泌各类基质和多种纤维。基质的组成决定结缔组织的物理特性。
在形态学上，成纤维细胞具多样性，其形态取决于其所处的位置和活动性。与上皮细胞不同，成纤维细胞不形成细胞单层。还可以缓慢地迁移。
成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。
根据不同功能活动状态，可将细胞划分成成纤维细胞和纤维细胞，成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质弱嗜碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损以及骨创伤的修复有着十分重要的作用。
以上所述仅为本发明之较佳实施例，并非用以限定本发明的权利要求保护范围。同时以上说明，对于相关技术领域的技术人员应可以理解及实施，因此其他基于本发明所揭示内容所完成的等同改变，均应包含在本权利要求书的涵盖范围内。
本发明的有益成果是：本发明扩增了猪胚成纤维细胞，通过完善的实验步骤对整个制备过程进行限定，并严格规定其中的参数，使制备方法的结果更加完善。

Claims (1)

1.一种猪胚成纤维细胞的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
取38℃孵化至1-2年的猪胚，碘酒消毒8分钟，酒精脱碘后，无菌操作分离胚体，用无菌的D-Hank’s液轻轻洗涤8次，加入3～8ml的0.28％胰酶，于37℃的温度下，消化20～30分钟，消化过程中轻轻吹打数次，以使消化后的胚体尽量地分散单个细胞，然后用台盼蓝进行活细胞计数，按照480～500万细胞/瓶的浓度分装于100ml细胞培养瓶中，置于37℃的8％浓度的二氧化碳培养箱中，待细胞长成单层后以备接种，所述猪胚的细胞生长液为含5％犊牛血清、3ul/ml两性霉素、青霉素和链霉素混合而成。
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CN101580816A (zh) * 2009-04-23 2009-11-18 中国科学院广州生物医药与健康研究院 诱导多能性干细胞快速高效产生的新型无血清培养基以及使用其的方法
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周珍辉主编: "《动物细胞培养技术》", 31 August 2006 *

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