CN106479953A - 一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4‑D 0.5mg/L，植物激素6‑BA 1mg/L，水解酪蛋白100～150mg/L，茉莉酸甲酯10～20μmol/L，水杨酸0.1～0.5mg/L，过氧化氢10～50μl/L。在此基础上，本发明尝试通过添加植物提取的方式以提升培养效果，具体来看，以物理压榨的方式获取剪刀草、筋骨草、苦地胆、辣蓼草等新鲜中草药中的液体成分，直接加入至上述配方的培养基中，取得了良好的培养效果，细胞生长速度和终密度得到显著提升，同时黄芪多糖的分泌量也明显增长。本发明以创新性的技术改进实现了良好的技术效果，同时其成本较低、易于实现，因此具有良好的推广前景。

Description

一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基
技术领域
本发明涉及植物细胞培养技术，进一步涉及植物细胞的营养条件设计，具体涉及一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基。
背景技术
植物细胞培养技术是以离体植物细胞或原生质体为对象，以细胞量扩增和目标代谢产物累积为目的的培养工艺。对于以获得特定代谢产物为目的的细胞培养而言，其主要工艺环节不仅在于细胞量的扩增，同时，目标代谢产物的诱导合成对培养效益更为重要。在植物细胞的培养过程中，培养条件和营养条件是影响产量的最重要因素，其中培养条件是指温度、溶氧、光照、pH等环境条件的控制，而营养条件主要指植物细胞的培养基。由于在封闭培养环境中培养基是植物细胞的唯一营养来源，因此培养基的成分对植物细胞的生长水平、代谢产物类别具有极其重要的影响，尤其对于以获得特定代谢产物为目的的细胞培养而言，培养基往往是影响培养效率的关键因素。
黄芪是豆科多年生草本植物，根是中药的中药材，主产于黑龙江、内蒙和山西等地。传统中医学认为，黄芪具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、行滞通痹、托毒排脓、敛疮生肌等功能。现代药理研究表明，黄芪具有增强机体免疫功能、强心降压、降血糖、利尿、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤、抗病毒、镇静、镇痛等作用。黄芪被广泛应用于临床配伍或日常保健，位列40种大宗药材品种的前10名。黄芪含有皂苷、黄酮、多糖和氨基酸等多种成分，其中黄芪多糖(APS)是含量最多的主要活性成分，在黄芪药理作用中起决定性作用。APS具有促进免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗辐射、抗衰老、抗寄生虫等多种生物活性。近年来，由于人类对黄芪掠夺性开发，有限的野生资源远不能满足人们的需求，而传统栽培又受季节、气候、病虫害的影响，不能满足黄芪市场需求，黄芪资源短缺严重制约其广泛应用。采用植物细胞培养技术生产植物有效成分，具有高效、迅速和季节限制性小及保护生态环境等优点，是解决药材资源问题的有效途径之一。目前，关于黄芪组织培养研究的报道比较多，已建立了稳定的愈伤组织培养体系。而利用诱导子的添加对黄芪悬浮细胞中黄芪多糖含量影响的研究，目前仍未取得理想的效果，在悬浮培养体系下无论黄芪自身的生长还是黄芪多糖的积累都处于较低水平
发明内容
本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，以解决现有技术中黄芪细胞在悬浮培养条件下生物量积累缓慢的技术问题。
本发明要解决的另一技术问题是现有技术中黄芪细胞浮培养条件下黄芪多糖产率较低。
为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：
一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 0.5mg/L，植物激素6-BA 1mg/L，水解酪蛋白100～150mg/L，茉莉酸甲酯10～20μmol/L，水杨酸0.1～0.5mg/L，过氧化氢10～50μl/L。
作为优选，该培养基还含有4mg/L的硝酸银。
作为优选，该培养基还含有1g/L的剪刀草压榨汁。
作为优选，该培养基还含有1g/L的筋骨草压榨汁。
作为优选，该培养基还含有1g/L的苦地胆压榨汁。
作为优选，该培养基还含有1g/L的辣蓼草压榨汁。
作为优选，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 0.5mg/L，植物激素6-BA 1mg/L，水解酪蛋白125mg/L，茉莉酸甲酯15μmol/L，水杨酸0.3mg/L，过氧化氢30μl/L，硝酸银4mg/L，剪刀草压榨汁1g/L，筋骨草压榨汁1g/L，苦地胆压榨汁1g/L，辣蓼草压榨汁1g/L。
在以上技术方案中，所述MS培养基可以依据本领域的一般技术常识进行配制，当然也可以采用以下具体配方的MS培养基：NH4NO3 1650mg/L，KNO3 1900mg/L，CaCl2·2H2O440mg/L，MgSO4·7H2O 370mg/L，KH2PO4 170mg/L，KI 0.83mg/L，H3BO3 6.2mg/L，MnSO4·4H2O22.3mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，CuSO4·5H2O 0.025mg/L，CoCl2·6H2O 0.025mg/L，FeSO4·7H2O 27.8mg/L，Na2-EDTA·2H2O 37.3mg/L，肌醇100mg/L，烟酸0.5mg/L，维生素B6 0.5mg/L，维生素B1 0.1mg/L，甘氨酸2mg/L，水余量。
在以上技术方案中，剪刀草、筋骨草、苦地胆、辣蓼草分别指其新鲜全草。本发明中所述的压榨汁，是指利用物理方法获取的各原料的新鲜汁液，包括但不限于压榨、粉碎离心等常规方法。
本发明提供了一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 0.5mg/L，植物激素6-BA 1mg/L，水解酪蛋白100～150mg/L，茉莉酸甲酯10～20μmol/L，水杨酸0.1～0.5mg/L，过氧化氢10～50μl/L。在此基础上，本发明尝试通过添加植物提取的方式以提升培养效果，具体来看，以物理压榨的方式获取剪刀草、筋骨草、苦地胆、辣蓼草等新鲜中草药中的液体成分，直接加入至上述配方的培养基中，取得了良好的培养效果，细胞生长速度和终密度得到显著提升，同时黄芪多糖的分泌量也明显增长。本发明以创新性的技术改进实现了良好的技术效果，同时其成本较低、易于实现，因此具有良好的推广前景。
具体实施方式
以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。
实施例1
一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 0.5mg/L，植物激素6-BA 1mg/L，水解酪蛋白100mg/L，茉莉酸甲酯10μmol/L，水杨酸0.1mg/L，过氧化氢10μl/L。
实施例2
一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 0.5mg/L，植物激素6-BA 1mg/L，水解酪蛋白150mg/L，茉莉酸甲酯20μmol/L，水杨酸0.5mg/L，过氧化氢50μl/L。
实施例3
一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 0.5mg/L，植物激素6-BA 1mg/L，水解酪蛋白125mg/L，茉莉酸甲酯15μmol/L，水杨酸0.3mg/L，过氧化氢30μl/L，硝酸银4mg/L。
实施例4
一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 0.5mg/L，植物激素6-BA 1mg/L，水解酪蛋白125mg/L，茉莉酸甲酯15μmol/L，水杨酸0.3mg/L，过氧化氢30μl/L，剪刀草压榨汁1g/L。
实施例5
一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 0.5mg/L，植物激素6-BA 1mg/L，水解酪蛋白125mg/L，茉莉酸甲酯15μmol/L，水杨酸0.3mg/L，过氧化氢30μl/L，筋骨草压榨汁1g/L。
实施例6
一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 0.5mg/L，植物激素6-BA 1mg/L，水解酪蛋白125mg/L，茉莉酸甲酯15μmol/L，水杨酸0.3mg/L，过氧化氢30μl/L，苦地胆压榨汁1g/L。
实施例7
一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 0.5mg/L，植物激素6-BA 1mg/L，水解酪蛋白125mg/L，茉莉酸甲酯15μmol/L，水杨酸0.3mg/L，过氧化氢30μl/L，辣蓼草压榨汁1g/L。
实施例8
一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 0.5mg/L，植物激素6-BA 1mg/L，水解酪蛋白125mg/L，茉莉酸甲酯15μmol/L，水杨酸0.3mg/L，过氧化氢30μl/L，硝酸银4mg/L，剪刀草压榨汁1g/L，筋骨草压榨汁1g/L，苦地胆压榨汁1g/L，辣蓼草压榨汁1g/L。
实施例9
本实施例用于评价以上实施例1～8所提供的培养基作为合成培养基时对黄芪细胞的黄芪多糖产量的影响，实验结果如表1所示。
表1不同培养基作为合成培养基时对黄芪细胞的黄芪多糖产量的影响
由此可见，利用本发明所提供的培养基作为合成培养基培养黄芪细胞时，对其黄芪多糖产量具有确切的促进作用。
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，其特征在于该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 0.5mg/L，植物激素6-BA 1mg/L，水解酪蛋白100～150mg/L，茉莉酸甲酯10～20μmol/L，水杨酸0.1～0.5mg/L，过氧化氢10～50μl/L。
2.根据权利要求1所述的一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，其特征在于该培养基还含有4mg/L的硝酸银。
3.根据权利要求1所述的一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，其特征在于该培养基还含有1g/L的剪刀草压榨汁。
4.根据权利要求1所述的一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，其特征在于该培养基还含有1g/L的筋骨草压榨汁。
5.根据权利要求1所述的一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，其特征在于该培养基还含有1g/L的苦地胆压榨汁。
6.根据权利要求1所述的一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，其特征在于该培养基还含有1g/L的辣蓼草压榨汁。
7.根据权利要求1所述的一种诱导黄芪细胞高产黄芪多糖的合成培养基，其特征在于该培养基含有MS培养基的成分，同时还含有植物激素2.4-D 0.5mg/L，植物激素6-BA 1mg/L，水解酪蛋白125mg/L，茉莉酸甲酯15μmol/L，水杨酸0.3mg/L，过氧化氢30μl/L，硝酸银4mg/L，剪刀草压榨汁1g/L，筋骨草压榨汁1g/L，苦地胆压榨汁1g/L，辣蓼草压榨汁1g/L。
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