CN106474487A - 一种靶向荧光载药纳米分子探针及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种靶向荧光载药纳米分子探针及其制备方法和应用,所述靶向荧光载药纳米分子探针为由连接有靶向分子的载体包裹治疗动脉硬化的小分子激动剂和荧光染料形成的纳米颗粒,所述靶向分子为骨桥蛋白单克隆抗体。本发明的靶向荧光载药纳米分子探针可以特异性地靶向于动脉粥样硬化斑块中的平滑肌细胞,形成的纳米胶束体系稳定性好,被细胞吞噬后,所述纳米分子探针在细胞内具有缓慢降解的作用,是一种良好的可用于诊断治疗动脉粥样硬化的纳米分子探针,可应用于生物或医学研究中。并且本发明所述荧光分子探针的制备方法简单易行,不涉及复杂的操作和苛刻条件,并且成本较低,稳定性好。
Description
技术领域
本发明属于纳米材料技术领域,涉及一种靶向荧光载药纳米分子探针及其制备方法和应用。
背景技术
动脉粥样硬化的发生发展是一个复杂的多因素参与的血管壁炎症过程。其中平滑肌细胞的迁移、表型转换、凋亡等行为对动脉硬化的进程发挥了巨大作用。近年来,对PPAR(过氧化物酶体增殖物激活受体)类激动剂的研究对防治产生动脉硬化斑块发挥了巨大作用,其中新型的PPAR-δ激动剂具有抑制动脉硬化斑块微环境导致的平滑肌细胞的增殖、迁移与凋亡的作用,但其目前仍然存在一些弊端如较强的疏水性、半衰期较短等限制了其应用。由于PPAR-δ不具有靶向性,除了对动脉粥样硬化起到治疗作用外,还具有降血糖效应,因此对于血糖正常的动脉硬化患者是不利的。在现阶段的生物医学研究中,人们常常需要把PPAR-δ的激动剂溶于DMSO中去治疗相应的疾病,然而现有的方法没有靶向性,常常带来对人体不利的药物小分子其他效应,而且DMSO的毒性也限制了其应用,无法满足科学研究的需求。
CN 105833299A公开了用于动脉粥样硬化易损斑块诊断的MRI/optical双模态纳米探针的制备方法,所述纳米探针由OPN(骨桥蛋白)抗体和二巯基丁二酸修饰的磁性四氧化三铁纳米颗粒缩合而成,OPN抗体的活性氨基与纳米颗粒表面DMSA的活性羧基通过缩合反应稳定连接。其可以提高诊断的敏感性和特异性。然而该纳米探针只是一种诊断探针,对于动脉粥样硬化的治疗作用并不明显。
因此,在本领域中,期望得到一种可以具有诊断和治疗双重作用的纳米分子探针。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明的目的在于提供一种靶向荧光载药纳米分子探针及其制备方法和应用。
为达此目的,本发明采用以下技术方案:
一方面,本发明提供一种靶向荧光载药纳米分子探针,所述靶向荧光载药纳米分子探针为由连接有靶向分子的载体包裹抗动脉粥样硬化的小分子激动剂和荧光染料形成的纳米颗粒,所述靶向分子为骨桥蛋白(OPN)单克隆抗体。
在本发明中,所述靶向荧光载药纳米分子探针中骨桥蛋白单克隆抗体可以靶向于动脉硬化斑块中平滑肌细胞高表达的骨桥蛋白,被细胞吞噬后,所述纳米分子探针在细胞内具有缓慢降解的作用,是一种能够用于动脉硬化疾病模型以特定细胞为靶点的载药纳米分子探针。
在本发明中,所述载体为两亲性聚合物,优选马来酰亚胺修饰的聚己内酯-聚乙二醇(PCL-PEG-MAL)。在本发明中,如果利用马来酰亚胺修饰的其他两亲性聚合物例如DSPE-PEG、PLGA-PEG或PDLLA-PEG,虽然能够与骨桥蛋白单克隆抗体连接,但是用这样的载体材料会使得形成的纳米胶束不够稳定。
优选地,所述抗动脉粥样硬化的小分子激动剂为PPARδ激动剂(例如GW501516)、肝孤核受体激动剂(LXR激动剂)、SIRT1激动剂(Sirtuin 1)、IP6K激动剂或大麻素受体激动剂中的任意一种或至少两种的组合。这些小分子激动剂均具有较强的疏水性,只能溶于DMSO等有机溶剂中,而不溶于水中,使得其在体内循环时不稳定难以到达靶标部位,而运用本发明的纳米分子探针可以成功解决疏水性小分子激动剂的溶解问题以及在体内循环的稳定性问题,提高药物的生物利用度以及治疗效果。
优选地,所述荧光染料为近红外波段荧光染料,优选N-羟基琥珀酰亚胺酯(Cy5.5)。包裹在本发明所述胶束中的荧光染料可以对该靶向荧光载药纳米分子探针进行视踪,观察期达到动物模型的部位。本发明所述靶向荧光载药纳米探针不但具有靶向性,而且有无毒性,稳定性强,较高的载药量等优点,载药量最高可达8.2%左右。
优选地,所述靶向分子与载体的连接使通过化学键连接,优选酰胺键、酯键或醚键,进一步优选硫醚键。当然,也包括其他共价键连接类型。
优选地,本发明所述靶向荧光载药纳米分子探针中所述靶向分子通过巯基与载体上的马来酰亚胺反应连接来实现靶向分子和载体高效、稳定连接,且两部分功能不会产生干扰。
另一方面,本发明提供了如上所述靶向荧光载药纳米分子探针的制备方法,所述方法包括以下步骤:
(1)利用两亲性聚合物作为载体,包裹治疗动脉硬化的小分子激动剂和荧光染料得到纳米胶束;
(2)步骤(1)得到的纳米胶束与骨桥蛋白单克隆抗体连接得到所述靶向荧光载药纳米分子探针。
本发明采用纳米共沉淀法来制备得到靶向荧光载药纳米分子探针,由于所述靶向荧光载药纳米分子探针的所述特征结构使得其只有通过纳米共沉淀法才能形成高载药量粒径均一稳定的靶向纳米胶束体系,如果像其他聚合物纳米胶束一样,利用乳化法和旋膜超声法制备,则会使得体系不够稳定,不能成功包裹药物和荧光染料得到本发明所述靶向荧光载药纳米分子探针。
作为本发明的优选技术方案,所述靶向荧光载药纳米分子探针的制备方法具体包括以下步骤:
I、将马来酰亚胺修饰的PCL-PEG、治疗动脉硬化的小分子激动剂以及荧光染料溶于挥发性有机溶剂中,将其逐滴滴加至水中,搅拌,待有机溶剂挥发后,得到纳米胶束;
II、步骤(1)得到的纳米胶束与二硫键被还原成巯基的骨桥蛋白单克隆抗体反应,得到所述靶向荧光载药纳米分子探针。
优选地,相对于10mg步骤I所述马来酰亚胺修饰的PCL-PEG,所述治疗动脉硬化的小分子激动剂的用量为1-3mg,例如1mg、1.3mg、1.5mg、1.8mg、2mg、2.3mg、2.5mg、2.8mg或3mg。
优选地,相对于10mg步骤I所述马来酰亚胺修饰的PCL-PEG,所述荧光染料的用量为5-30μg,例如5μg、6μg、8μg、10μg、12μg、14μg、16μg、18μg、20μg、22μg、24μg、26μg、28μg或30μg。
优选地,相对于10mg步骤I所述马来酰亚胺修饰的PCL-PEG,所述挥发性有机溶剂的用量为200-500μL,例如200μL、250μL、300μL、350μL、400μL、450μL或500μL。有机溶剂或多或少会具有一定毒性,因此用量不易过多。
优选地,步骤I所述挥发性有机溶剂为四氢呋喃。
优选地,相对于10mg步骤I所述马来酰亚胺修饰的PCL-PEG,所述水的用量为2-5mL,例如2mL、2.5mL、3mL、3.5mL、4mL、4.5mL或5mL。
优选地,所述水为超纯水。
优选地,步骤I所述搅拌在避光条件下进行。
步骤II所述二硫键被还原成巯基的骨桥蛋白单克隆抗体与马来酰亚胺修饰的PCL-PEG的摩尔数之比为(50-1000):1,例如50:1、60:1、80:1、100:1、120:1、150:1、200:1、250:1、300:1、500:1、700:1、900:1或1000:1,优选(80-300):1。
优选地,步骤II所述还原时的还原剂为2-巯基乙胺(2-MEA)。即利用2-巯基乙胺作为还原剂将骨桥蛋白单克隆抗体中的二硫键还原成巯基。
将骨桥蛋白单克隆抗体中的二硫键还原成巯基时,当抗体量少于1ml时,将6mg的2-MEA溶于100μl反应液中,每10μl的抗体量对应1μl的反应体系。反应液中且必须含有(1-10)mM(例如1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM或10mM)EDTA。
优选地,步骤II所述反应的条件为在pH7.4环境下常温搅拌6-12h,例如6h、7h、8h、9h、10h、11h或12h。
在本发明中,步骤II所述反应结束时,利用葡萄凝胶柱对产物进行分离纯化得到靶向荧光载药纳米分子探针。
另一方面,本发明提供如上所述靶向荧光载药纳米分子探针在制备治疗动脉硬化的药物中的应用。
相对于现有技术,本发明具有以下有益效果:
本发明的靶向荧光载药纳米分子探针可以特异性地靶向于动脉粥样硬化中平滑肌细胞,形成的纳米胶束体系稳定性好,被细胞吞噬后,所述纳米分子探针在细胞内具有缓慢降解的作用,有望成为一种良好的可用于诊断治疗动脉粥样硬化的纳米分子探针,可应用于生物或医学研究中。并且本发明所述荧光分子探针的制备方法简单易行,不涉及复杂的操作和苛刻条件,并且成本较低,稳定性好。
附图说明
图1为本发明的靶向荧光载药纳米探针的纳米胶束结构模式图,其中星形符号代表近红外荧光物质Cy5.5,圆形代表药物小分子GW501516即PPARδ的激动剂,外周连接的矩形代表OPN抗体。
图2为本发明实施例1制备的靶向荧光载药纳米分子探针形成的纳米胶束的透射电镜图;图中标尺为100nm。
图3为本发明实施例1制备的靶向荧光载药纳米分子探针形成的纳米体系的水合粒径分布图。
图4为本发明实施例1制备的靶向荧光载药纳米分子探针形成的纳米体系的Zeta电位图。
图5为本发明实施例1中PCL-PEG构成的纳米胶束在连接OPN抗体前后的紫外吸收峰的变化图。
图6为利用本发明制备得到的靶向荧光载药纳米分子探针对动脉粥样硬化体外模型平滑肌细胞后的单光子激光共聚焦显微镜图。
图7为流式细胞技术测定的本发明的靶向荧光载药纳米分子探针Anti-OPN-PCL-PEG-GW501516与未连接靶向分子的纳米胶束PCL-PEG-GW501516以及空白对照组(PBS缓冲溶液组)对动脉粥样硬化体外模型平滑肌细胞的荧光强度对比图。第一个峰为对照,第二个峰为被动靶向组(无连接OPN抗体),第三个为主动靶向荧光纳米胶束组。
图8为流式细胞技术测定的本发明的靶向荧光载药纳米分子探针Anti-OPN-PCL-PEG-GW501516与未连接靶向分子的纳米胶束PCL-PEG-GW501516的平均荧光强度定量结果图。
图9为利用ox-LDL、GW501516(PPARδ的激动剂)、OPN-NPs-GW501516(即OPN-PCL-PEG-GW501516)以及NPs-GW501516(即PCL-PEG-GW501516)和ox-LDL-NPs(即ox-LDL-PCL-PEG)孵育平滑肌细胞后,细胞的MMP2和MMP9以及β-肌动蛋白(β-actin)表达量比较图。
图10为ox-LDL、GW501516、OPN-NPs-GW501516(即OPN-PCL-PEG-GW501516)以及NPs-GW501516(即PCL-PEG-GW501516)和ox-LDL-NPs(即ox-LDL-PCL-PEG)孵育后的平滑肌细胞的流式细胞仪测定结果图。
图11为本发明的靶向荧光载药纳米分子探针Anti-OPN-Cy5.5-NPs(Anti-OPN-Cy5.5-PCL-PEG-GW501516)与未连接靶向分子的纳米胶束Cy5.5-NPs(Cy5.5-PCL-PEG-GW501516)对小鼠的动脉粥样硬化模型在活体内的荧光成像图。
图12为对比例1-3制备得到的纳米体系OPN-DSPE-PEG-PPARδ、OPN-DSPE-PEG-PPARδ和OPN-PLGA-PEG-PPARδ与实施例1制备得到的纳米体系OPN-PCL-PEG-PPARδ的体系稳定性对比图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了,所述实施例仅仅是帮助理解本发明,不应视为对本发明的具体限制。
以下实施例中所用材料的来源:骨桥蛋白(OPN)单克隆抗体购自abcam(美国)公司,2-Mercaptoethylamine·HCl(2-MEA)购自Thermo scifntific(美国)公司,聚乙二醇(PEG)及聚己内酯(PCL)和荧光染料Cy5.5均购自西安瑞禧有限公司,四氢呋喃购自北京化工有限公司,整个实验使用的超纯水采用密理博公司的Milli-Q三蒸水(18.2MΩ·cm,Millipore System Inc.)。
实施例1
在本实施例中,通过以下方法制备得到靶向荧光载药纳米分子探针,制备方法具体包括以下步骤:
I、将10mg马来酰亚胺修饰的PCL-PEG、1mg治疗动脉硬化的小分子激动剂PPARδ(GW501516)以及10μg荧光染料Cy5.5溶于500μL四氢呋喃中,将其逐滴滴加至5mL超纯水中,搅拌24h,得到纳米胶束;
II、利用2-巯基乙胺作为还原剂将20μl骨桥蛋白单克隆抗体(OPN)中的二硫键还原成巯基,而后步骤(1)得到的纳米胶束与二硫键被还原成巯基的骨桥蛋白单克隆抗体在pH7.4环境下常温搅拌12h,其中所用骨桥蛋白单克隆抗体与马来酰亚胺修饰的PCL-PEG的摩尔量之比为50:1,得到所述靶向荧光载药纳米分子探针,得到的该靶向荧光载药纳米分子探针的载药量为7.1%。
图1为制备得到的靶向荧光载药纳米探针的纳米胶束结构模式图。
利用电镜对制备得到的纳米体系进行表征,结果如图2所示,其体系中粒径大约为70-100nm,粒径均一,呈单分散。
利用动态光散射仪对得到的纳米体系进行表征,其水合粒径分布图如图3所示,其Zeta电位图如图4所示,其水合粒径分布数据以及Zeta电位数据(ZP)如表1所示。
表1
粒径(nm) | PDI | ZP(mV) | |
PCL-PEG-GW501516 | 115.0±2.75 | 0.133±0.07 | 3.8±0.24 |
OPN-PCL-PEG-GW501516 | 142.5±3.06 | 0.159±0.04 | -18.1±0.46 |
表1中PDI表示多分散指数。
由图3、图4以及表1的数据可知,水合粒径在120nm左右,Zeta电位在-18mv,本身PCL-PEG不带电,胶束连接抗体后,Zeta电位变为负值,间接证明连接抗体成功。
由图5可知,PCL-PEG纳米胶束连接OPN抗体后成功后在280nm有吸收峰,同样证明连接抗体成功。
实施例2
在本实施例中,通过以下方法制备得到靶向荧光载药纳米分子探针,制备方法具体包括以下步骤:
I、将10mg马来酰亚胺修饰的PCL-PEG、3mg治疗动脉硬化的小分子激动剂PPARδ以及30μg荧光染料Cy5.5溶于200μL四氢呋喃中,将其逐滴滴加至2mL超纯水中,搅拌24h,得到纳米胶束;
II、利用2-巯基乙胺作为还原剂将20μl骨桥蛋白单克隆抗体中的二硫键还原成巯基,而后步骤(1)得到的纳米胶束与二硫键被还原成巯基的骨桥蛋白单克隆抗体在pH7.4环境下常温搅拌10h,其中所用骨桥蛋白单克隆抗体与马来酰亚胺修饰的PCL-PEG的摩尔量之比为80:1,得到所述靶向荧光载药纳米分子探针,得到的该靶向荧光载药纳米分子探针的载药量为8.2%。
实施例3
在本实施例中,通过以下方法制备得到靶向荧光载药纳米分子探针,制备方法具体包括以下步骤:
I、将10mg马来酰亚胺修饰的PCL-PEG、2mg治疗动脉硬化的小分子激动剂PPARδ以及5μg荧光染料Cy5.5溶于200μL四氢呋喃中,将其逐滴滴加至3mL超纯水中,搅拌24h,得到纳米胶束;
II、利用2-巯基乙胺作为还原剂将20μl骨桥蛋白单克隆抗体中的二硫键还原成巯基,而后步骤(1)得到的纳米胶束与二硫键被还原成巯基的骨桥蛋白单克隆抗体在pH7.4环境下常温搅拌8h,其中所用骨桥蛋白单克隆抗体与马来酰亚胺修饰的PCL-PEG的摩尔量之比为100:1,得到所述靶向荧光载药纳米分子探针,得到的该靶向荧光载药纳米分子探针的载药量为7.8%。
实施例4
在本实施例中,通过以下方法制备得到靶向荧光载药纳米分子探针,制备方法具体包括以下步骤:
I、将10mg马来酰亚胺修饰的PCL-PEG、3mg治疗动脉硬化的小分子激动剂PPARδ以及10μg荧光染料Cy5.5溶于400μL四氢呋喃中,将其逐滴滴加至5mL超纯水中,搅拌24h,得到纳米胶束;
II、利用2-巯基乙胺作为还原剂将20μl骨桥蛋白单克隆抗体中的二硫键还原成巯基,而后步骤(1)得到的纳米胶束与二硫键被还原成巯基的骨桥蛋白单克隆抗体在pH7.4环境下常温搅拌12h,其中所用骨桥蛋白单克隆抗体与马来酰亚胺修饰的PCL-PEG的摩尔量之比为200:1,得到所述靶向荧光载药纳米分子探针,得到的该靶向荧光载药纳米分子探针的载药量为7.6%。
实施例5
在本实施例中,通过以下方法制备得到靶向荧光载药纳米分子探针,制备方法具体包括以下步骤:
I、将10mg马来酰亚胺修饰的PCL-PEG、2mg治疗动脉硬化的小分子激动剂PPARδ以及20μg荧光染料Cy5.5溶于400μL四氢呋喃中,将其逐滴滴加至5mL超纯水中,搅拌24h,得到纳米胶束;
II、利用2-巯基乙胺作为还原剂将20μl骨桥蛋白单克隆抗体中的二硫键还原成巯基,而后步骤(1)得到的纳米胶束与二硫键被还原成巯基的骨桥蛋白单克隆抗体在pH7.4环境下常温搅拌12h,其中所用骨桥蛋白单克隆抗体与马来酰亚胺修饰的PCL-PEG的摩尔量之比为500:1,得到所述靶向荧光载药纳米分子探针,得到的该靶向荧光载药纳米分子探针的载药量为6.8%。
实施例6
以本实施例1制备得到的靶向荧光载药纳米分子探针在5μM浓度下孵育经氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激24h后的兔血管平滑肌细胞(VSMC)24h,在单光子激光共聚焦显微镜下成像,通过观察靶向荧光载药纳米分子探针的荧光信号确定该探针在细胞中的位置和形态,结果如图6所示,图6显示细胞内部的荧光信号,证明连接有OPN抗体的包载Cy5.5的纳米胶束更容易被细胞吞噬。图7为流式细胞测荧光强度图,证明细胞对本发明的靶向荧光载药纳米分子探针Anti-OPN-PCL-PEG-GW501516与未连接靶向分子的纳米胶束PCL-PEG-GW501516的吞噬能力不同,Anti-OPN-PCL-PEG-GW501516组细胞荧光强度高说明细胞更容易吞噬该靶向荧光探针。图8为图7的平均荧光强度定量图,证明相同条件下,细胞更容易吞噬连接有骨桥蛋白单克隆抗体的主动靶向纳米探针(Anti-OPN-GW501516-NPs),测得的荧光强度更高。
结果表明:靶向荧光载药纳米分子探针标记的细胞胞浆中有出现Cy5.5荧光,说明靶向荧光载药纳米分子探针出现的位置与骨桥蛋白在细胞中表达的位置具有一致性,具有良好的标记特异性。细胞形态良好,靶向荧光载药纳米分子探针本身和标记过程不会对细胞产生毒性,适用于活细胞标记。平滑肌细胞经过氧化低密度脂蛋白迁移能力受到抑制。
对利用ox-LDL、GW501516(PPARδ的激动剂)、OPN-NPs-GW501516(即OPN-PCL-PEG-GW501516)以及NPs-GW501516(即PCL-PEG-GW501516)和ox-LDL-NPs(即ox-LDL-PCL-PEG)孵育平滑肌细胞后,细胞的MMP2和MMP9表达量如图9所示,结果表明,各种干预对ox-LDL孵育平滑肌细胞后MMP2和MMP9表达量的不同,MMP2和MMP9在动脉粥样硬化斑块里对平滑肌细胞(VSMC)迁移起到促进作用,促进斑块发展,且具有增加斑块的不稳定性。在主动靶向载药纳米胶束组OPN-NPs-PPARδ抑制MMP2,MMP9作用最强,优于被动靶向组及单纯给药组。
图10为利用流失细胞仪对ox-LDL、GW501516、OPN-NPs-GW501516(即OPN-PCL-PEG-GW501516)以及NPs-GW501516(即PCL-PEG-GW501516)和ox-LDL-NPs(即ox-LDL-PCL-PEG)孵育后的平滑肌细胞进行的测定,证明本发明的纳米材料抑制此环境中平滑肌细胞凋亡的作用优于被动靶向组及单纯给药组。
利用实施例2-5制备的靶向荧光载药纳米分子探针进行如上相同的试验,得到了与实施例1的靶向荧光载药纳米分子探针相同的结果。
实施例7
在本实施例中,考察本发明的靶向荧光载药纳米分子探针在活体小鼠体内对动脉粥样硬化的影响,考察方法为:利用活体成像仪,在动脉粥样硬化模型的小鼠尾静脉注射本发明的靶向荧光载药纳米分子探针Anti-OPN-Cy5.5-NPs(Anti-OPN-Cy5.5-PCL-PEG-GW501516)与未连接靶向分子的纳米胶束Cy5.5-NPs(Cy5.5-PCL-PEG-GW501516)后,不同的时间点观察是否有特异性光学信号变化。如图11所示,说明动脉粥样硬化模型的小鼠尾静脉注射本发明的靶向荧光载药纳米分子探针Anti-OPN-Cy5.5-NPs后利用小动物活体成像仪,不同的时间点,动脉粥样硬化斑块的信号显现,可以看出箭头处信号是先增强后减弱,符合纳米胶束在体内的代谢时间规律。动脉粥样硬化模型小鼠尾静脉注射未连接靶向分子的纳米胶束Cy5.5-NPs后不同时间点测得小动物活体成像,都为非特异聚集,没有箭头处所标的特异斑块的信号。后续动脉粥样硬化小鼠分为6组,分别为持续给PBS组,单纯给GW501516药物小分子组,主动靶向纳米药物组(OPN-NPs-GW501516),被动靶向纳米药物组(NPs-GW501516),不包裹药物小分子的空壳纳米胶束组(NPs)每天给药后,持续两周后处死免疫组化观察斑块的治疗效果。预期主动靶向纳米药物治疗效果最佳,被动靶向组次之,单纯给药组治疗效果不如前两者。给PBS和空壳纳米胶束组一样基本上没有治疗效果。
对比例1
与实施例1不同之处在于,将实施例1中使用的马来酰亚胺修饰的PCL-PEG替换为马来酰亚胺修饰的脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG-MAL)。
对比例2
与实施例1不同之处在于,将实施例1中使用的马来酰亚胺修饰的PCL-PEG替换为马来酰亚胺修饰的聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇(PLGA-PEG-MAL)。
对比例3
与实施例1不同之处在于,将实施例1中使用的马来酰亚胺修饰的PCL-PEG替换为马来酰亚胺修饰的D,L-聚乳酸-聚乙二醇(PDLLA-PEG-MAL)。
对比例1-3制备的纳米体系OPN-DSPE-PEG-PPARδ、OPN-DSPE-PEG-PPARδ和OPN-PLGA-PEG-PPARδ与实施例1制备得到的纳米体系OPN-PCL-PEG-PPARδ的体系稳定性对比图如图12所示,利用纳米沉淀法能成功包载PPARδ并连接OPN抗体形成的纳米胶束的常规高分子材料的选择上只有PCL-PEG比较成功适合,且OPN-PCL-PEG-PPARδ纳米胶束稳定且丁达尔现象明显,而其余常高分子如(DSPE-PEG,PLGA-PEG,PDLLA-PEG)形成的纳米胶束过夜后均不稳定,出现沉淀。
申请人声明,本发明通过上述实施例来说明本发明的靶向荧光载药纳米分子探针及其制备方法和应用,但本发明并不局限于上述实施例,即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了,对本发明的任何改进,对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等,均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (10)
1.一种靶向荧光载药纳米分子探针,其特征在于,所述荧光载药纳米分子探针为由连接有靶向分子的载体包裹抗动脉粥样硬化的小分子激动剂和荧光染料形成的纳米颗粒,所述靶向分子为骨桥蛋白单克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的靶向荧光载药纳米分子探针,其特征在于,所述载体为两亲性聚合物,优选马来酰亚胺修饰的聚己内酯-聚乙二醇。
3.根据权利要求1或2所述的靶向荧光载药纳米分子探针,其特征在于,所述抗动脉粥样硬化的小分子激动剂为PPARδ激动剂、肝孤核受体激动剂、SIRT1激动剂、IP6K激动剂或大麻素受体激动剂中的任意一种或至少两种的组合。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的靶向荧光载药纳米分子探针,其特征在于,所述荧光染料为近红外波段荧光染料,优选N-羟基琥珀酰亚胺酯。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的靶向荧光载药纳米分子探针,其特征在于,所述靶向分子与载体的连接使通过化学键连接,优选酰胺键、酯键或醚键,进一步优选硫醚键。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的靶向荧光载药纳米分子探针的制备方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
(1)利用两亲性聚合物作为载体,包裹抗动脉粥样硬化的小分子激动剂和荧光染料得到纳米胶束;
(2)步骤(1)得到的纳米胶束与骨桥蛋白单克隆抗体连接得到所述靶向荧光载药纳米分子探针。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
I、将马来酰亚胺修饰的PCL-PEG、抗动脉粥样硬化的小分子激动剂以及荧光染料溶于挥发性有机溶剂中,将其逐滴滴加至水中,搅拌,待有机溶剂挥发后,得到纳米胶束;
II、步骤(1)得到的纳米胶束与二硫键被还原成巯基的骨桥蛋白单克隆抗体反应,得到所述靶向荧光载药纳米分子探针。
8.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于,相对于10mg步骤I所述马来酰亚胺修饰的PCL-PEG,所述治疗动脉硬化的小分子激动剂的用量为1-3mg;
优选地,相对于10mg步骤I所述马来酰亚胺修饰的PCL-PEG,所述荧光染料的用量为5-30μg;
优选地,相对于10mg步骤I所述马来酰亚胺修饰的PCL-PEG,所述挥发性有机溶剂的用量为200-500μL;
优选地,步骤I所述挥发性有机溶剂为四氢呋喃;
优选地,相对于10mg步骤I所述马来酰亚胺修饰的PCL-PEG,所述水的用量为2-5mL;
优选地,所述水为超纯水;
优选地,步骤I所述搅拌在避光条件下进行。
9.根据权利要求7或8所述的制备方法,其特征在于,步骤II所述二硫键被还原成巯基的骨桥蛋白单克隆抗体与马来酰亚胺修饰的PCL-PEG的摩尔数之比为(50-1000):1;优选(80-300):1;
优选地,步骤II所述还原时的还原剂为2-巯基乙胺(2-MEA);
优选地,步骤II所述反应的条件为在pH7.4环境下常温搅拌6-12h。
10.根据权利要求1-5中任一项所述的靶向荧光载药纳米分子探针在制备治疗动脉硬化的药物中的应用。
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CN116925763A (zh) * | 2023-07-28 | 2023-10-24 | 中国科学院赣江创新研究院 | 一种用于动脉粥样硬化斑块成像的近红外长余辉纳米探针及其制备方法和应用 |
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