CN106309911A - 抗衰老中药组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了抗衰老中药组合物及其制备方法，所述中药组合物通过以下过程制备得到：a)提供用于制备中药组合物的原料：黄芪10‑30重量份、桂花10‑30重量份、苍术5‑15重量份、白术5‑15重量份、琥珀10‑30重量份、黄精10‑30重量份，b)提取，和分离；其特征在于所述分离步骤包括微滤和/或超滤膜分离。

Description

抗衰老中药组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及天然药物化学领域和化妆品领域，具体涉及一种具有抗衰老功效的中药组合物，该中药组合物的制备方法以及应用。
背景技术
化妆品工业中抗衰老的化妆品一直被人们所关注，因为针对抵御皮肤老化的问题是大家所关注的重点，保护皮肤、延缓皮肤衰老是很多人的梦想。皮肤衰老是一种持续渐进性的生理过程，直接影响皮肤的外观和功能。研究显示，传统护肤方剂中常用的中草药，例如当归、黄芪、白术、枸杞、高良姜、佛手、茯苓和人参等，均具有维持皮肤的正常组织形态、保养皮肤及抵抗衰老的作用。中药提取物中的有效成分通过透皮吸收，改善皮肤的微循环状况，使皮肤保持旺盛的抗病和修复的能力，达到延缓皮肤衰老的目的。
高瑞英等的《中草药提取物复配化妆品乳液延缓皮肤衰老试验研究》(“医药导报”2010年7月第29卷第7期，第857页)研究了将选自当归、白术、黄芪、佛手和茯苓的单味中药提取物与常规护肤乳液基质原料复配物对小鼠皮肤的影响。结果表明当归等五味中药提取物各自复配护肤品乳液后均具有较显著的抗皮肤衰老作用。
现有技术给出了多种多样的抗衰老中草药复配使用的可能性，例如人参复方，它含有人参、菟丝子、桂花、枸杞、黄精和甘草；黄芪复方，它含有黄芪、桂花、苍术、白术、琥珀和黄精等等。
常见的从中草药中提取有效成分的方法是水提醇沉法，它是一种先以水为溶媒提取药材有效成分，再用乙醇沉淀除去杂质的方法。利用水、乙醇对有效成分和无效成分溶解度的不同使之分离精制。
郭东艳等的“不同制备工艺的健脑益智胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用”(《中成药》，第37卷第11期，2015年11月)研究了不同提取工艺对中草药药效的影响，其结论是就例如脑梗死体积比而言，醇沉法(脑梗死体积比为29％)明显优于膜分离法(脑梗死体积比为38％)。
膜技术常在水净化处理中用来除去水中的细菌、重金属和杂质等污染物，使之能达到直饮标准。与常规的离心分离、沉降、过滤、萃取等方法相比，具有明显的潜在优势：可连续生产，分离效率高，有效成分保留率高，膜分离过程没有相变，节能、高效且无二次污染，操作过程一般比较简单，经济性好，可在常温下连续操作，特别适用于热敏性物质的处理。
在化妆品领域通常要平衡活性物质的有效性及安全性，一般而言，活性物质的用量越大，则效果越好，但是其相应的安全性风险也随之提高。因此本领域存在一个最大无毒剂量的概念，它是指受试物在一定时间内，以一定方式与机体或细胞接触，未检测出对机体或细胞造成毒害损伤作用的最大剂量；通常，受试物的最大无毒剂量值越大，说明其对机体或细胞可能造成的损害作用越小，即受试物的安全性风险越低。最大无毒剂量的评价方法可采用已知的XTT比色法进行，例如吴楠等《XTT比色法在细胞活性检测中的应用》(“国外医学临床生物化学与检验学分册”，1998年第19卷第5期)介绍了XTT比色法的原理和应用方法。
黄芪复方(含有黄芪、桂花、苍术、白术、琥珀和黄精)具有良好的抗衰老作用，它可以提高机体内源性抗氧化能力的作用(激活体内抗氧化反应元件的表达，减少UV照射引起的皮肤细胞损伤)。但是其最大的缺点是最大无毒剂量值较低，仅有0.0025％。
因此，需要寻找一种黄芪复方的改性方法，用这种方法能使得到的黄芪复方具有改进的最大无毒剂量值，从而在进一步发挥其抗衰老作用的同时降低其对机体或细胞可能造成的损害。
还需要提供一种黄芪复方，它具有改进的最大无毒剂量值，从而进一步发挥其抗衰老作用。
发明内容
本发明的发明目的是提供一种黄芪复方的改性方法。用本发明方法得到的黄芪复方具有改进的安全性及有效性。
本发明的另一个发明目的是提供用本发明方法制得的黄芪复方及其在化妆品中的用途。
因此，在本发明的一方面，提供一种抗衰老的中药组合物的改性方法，它包括如下步骤：
a)提供用于制备中药组合物的原料：
黄芪10-30重量份
桂花10-30重量份
苍术5-15重量份
白术5-15重量份
琥珀10-30重量份
黄精10-30重量份
b)提取，和分离；
其特征在于所述分离步骤包括微滤和/或超滤膜分离。
本发明的另一方面是提供一种抗衰老的中药组合物，它是用如下方法制得的：
a)提供用于制备中药组合物的原料：
黄芪10-30重量份
桂花10-30重量份
苍术5-15重量份
白术5-15重量份
琥珀10-30重量份
黄精10-30重量份
b)提取，和分离；
其特征在于所述分离步骤包括微滤和/或超滤膜分离。
本发明的再一方面是提供微滤和/或超滤膜分离方法在提高黄芪复方的安全使用浓度，从而扩大有效浓度范围，提高其抗衰老作用的用途。
附图说明
下面结合附图进一步说明本发明。附图中
图1是用水提醇沉法得到的人参复方的毒性试验结果图；
图2是用膜分离法得到的人参复方的毒性试验结果图；
图3是用水提醇沉法得到的黄芪复方的毒性试验结果图；
图4是用膜分离法得到的黄芪复方的毒性试验结果图。
具体实施方式
现有的黄芪复方包含黄芪、桂花、苍术、白术、琥珀和黄精等几味中草药，复方中各药相辅相成，以达到抵抗衰老、悦泽肌肤之效。
本发明黄芪复方(也称为抗衰老中药组合物)的原料包括：
(i)10-30重量份，较好12-28重量份，更好15-25重量份，优选20-25重量份的黄芪。黄芪，是黄芪属植物膜荚黄芪[Astragalus membranaceus(Fisch.)Bunge]和蒙古黄芪[Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.Var.mongholicus(Bge.)Hsiao]的干燥根，又作绵芪、绵黄芪，为扶正固本的常用中药，古有“补药之长”之称。黄芪味甘，性微温，归脾、肺经，具有补气升阳、益卫固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功效。黄芪中主要以黄芪多糖、黄芪皂苷、黄芪黄酮类化合物为有效成分；药理研究表明，黄芪具有增强人体免疫、抗氧化、抗辐射、抗肿瘤、保肝、抗菌、抗病毒以及调节心血管和中枢神经系统等方面的作用。
(ii)10-30重量份，较好12-28重量份，更好15-25重量份，优选18-22重量份的桂花。桂花(Osmanthus fragrans Lour.)，亦称木犀、山桂、岩桂、九里香，属木犀科(Oleaceae)木犀属(Osmanthus)常绿灌木或小乔木，是我国十大传统名花之一。中医学认为，桂花性温，味辛、无毒，具有散寒破结、化痰止咳、健胃生津、健脾益肾的作用。研究表明，桂花中含有大量挥发油类的香味物质，可供药用和配制高级香料；桂花中的黄酮类物质具有抗氧化、抑菌、抗炎、抗肿瘤等药理活性；桂花多糖具有抗肿瘤、免疫调节、抗凝血、降血糖和抗病毒等作用；桂花中的苯丙素苷类化合物毛蕊花苷，更具有抗菌消炎、抗肿瘤、抗氧化和保肝等多种药理活性；桂花中的多酚类物质，亦有良好的抗氧化、抗老化等生物活性。
(iii)5-15重量份，较好5-12重量份，更好6-10重量份的苍术。苍术为菊科(Compositae)植物茅苍术[Atractylodes lancea(Thunb.)DC.]或北苍术[Atractylodeschinensis(DC.)Koidz.]的干燥根茎。苍术味辛、苦，性温，归脾、胃、肝经，具有燥湿健脾、祛风湿、明目之功效，其主要有效成分为挥发油类成分，含有苍术酮、茅术醇、β-桉叶醇、苍术内酯等物质，还含有多种苷类成分。研究表明，苍术具有抗炎、降血糖、保肝护肝、抑菌、抗病毒、抗心律失常、调节消化系统和神经系统等多种药理作用。
(iv)5-15重量份，较好8-15重量份，更好10-13重量份的白术。白术为菊科(Compositae)植物白术(Atractylodes macrocephala Koidz.)的干燥根茎，味苦、甘，性温，归脾胃经，具有补气健脾，燥湿利水，止汗，安胎之功效。白术的主要成分是挥发油，含有苍术酮、苍术醇、白术内酯及糖类等，常与苍术搭配作为药对使用和研究。
(v)10-30重量份，较好12-28重量份，更好15-25重量份，优选15-20重量份的琥珀。琥珀为古代松科松属植物的树脂埋藏地下后年久凝结而成的化石样物质，在世界的分布面极广，含有多种化学成分，其中主要是树脂和挥发油。琥珀在中医药上应用价值的研究由来已久，始载于《名医别录》，被列为上品。传统中药学理论认为，琥珀专入血分，入心肝二经，有镇惊安神，散瘀止血，利水通淋的功能，可用作化妆品。
(vi)10-30重量份，较好12-28重量份，更好15-25重量份，优选18-22重量份的黄精。黄精，亦称大黄精、鸡头黄精、姜形黄精，为百合科黄精属(Liliaceae)多年生草本植物滇黄精(Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.)、黄精(Polygonatum sibiricum Red.)或多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)的干燥根茎，是一种传统名贵中药。黄精味甘，性平，具有宽中益气、益肾填精、滋阴润肺、生津补脾之功效。研究表明，黄精含有多种化学成分，其中黄精多糖具有抗炎、抗病毒、抗衰老的作用，甾体皂苷具有抗炎、抗肿瘤、抗真菌等作用，此外还含有蒽醌类化合物、生物碱、强心苷、木脂素、维生素和多种对人体有用的氨基酸等化合物。
根据中医五行理论：黄芪属性为木，可固本扶元、补气生肌，从而启动肌肤之气，补益元气，活化肌本；桂花属性为火，可鼓舞体内的气血上行肌表，从而升腾肌肤之阳，走形肌表，绽放肌肤之鼎盛容颜；苍白二术属性为土，可燥湿健脾、运化气血，从而运化肌肤之源，推陈焕新；琥珀属性为金，可镇静安神、专入血分，从而收敛肌肤之神，定志养神，净化肌肤；黄精属性为水，可补精养血、滋阴补脾，从而蕴育肌肤之精，悦泽肌肤。以上述六味中药组方，五行相生，五维相顾，焕发肌肤气血神采滋容，以抵抗肌肤衰老之态。
在本发明一个实例中，用于制备黄芪复方的原料中黄芪：桂花：苍术：白术：琥珀粉：黄精的重量比为1-3:1-3:0.5-1.5:0.5-1.5:1-3:1-3，较好1.5-2.5:1.5-2.5:0.5-1.0:0.8-1.4:1.0-2:1.5-2.5，优选2:2:0.65:1.35:2:2。
但是现有的黄芪复方的缺点在于其最大无毒剂量值偏低，用XTT比色法测定时在0.0025％(g/g)左右，难以在化妆品组合物中更好地发挥其抗衰老的作用。
目前关于膜分离对中药药效和安全性的影响的文献报道不多，本发明的发明人经过研究发现，膜分离对抗衰老中药组合物(例如含人参、枸杞、黄精等的人参复方)的最大无毒剂量值基本无影响，但是如果对上述中药组合物(或黄芪复方)的提取物进行微滤/或超滤膜分离处理，则可显著改进其最大无毒剂量值。本发明就是在该发现的基础上完成的。
发明人在对黄芪复方的提取工艺和抗衰老功效研究时，意外发现在同样的水提工艺下，采用膜分离精制工艺得到的黄芪复方提取物对皮肤细胞的最大无毒剂量(0.25％)比常规水提醇沉精制工艺高100倍(0.0025％)；但采用化学评价法测试显示二者的干膏收率、总黄酮、总皂苷(活性物标志性成分)含量接近，说明膜分离技术可能在更微观的层面对黄芪复方的成分发生了作用。从而能使得黄芪复方提取物能在不引起安全性风险的前提下，在更高的浓度下发挥其抗衰老作用。这为中药活性添加剂的研究开发，提供了新的思路和有价值的参考。
因此，本发明抗衰老中药组合物的制备方法包括如下步骤：
(a)提取步骤
本发明抗衰老中药组合物的提取步骤无特别的限制，可以是本领域的常规提取步骤。在本发明的一个实例中，所述提取步骤包括用水加热提取。在本发明的另一个较好实例中，所述提取步骤包括在50-100℃、较好60-100℃，更好80-100℃的水中加热提取0.5-10小时、较好1-5小时，更好1.5-3小时。
b)分离
本发明方法包括对浸提得到的浸提液进行分离的步骤。所述分离步骤包括微滤和/或超滤膜分离。在本文中，术语“微滤”是指用采用指孔径为10-1,000nm，优选50-200nm的微滤膜进行过滤的方法，其中所述的微滤膜包括陶瓷膜、氧化铝无机膜、金属膜以及有机高分子聚合物微孔滤膜等。术语“超滤”是指用采用截留分子量为5000至10万道尔顿，优选1万至5万道尔顿的聚合物微孔膜进行过滤，其中所述的超滤膜包括超滤陶瓷膜、中空纤维膜、卷式膜等。
本发明微滤方法无特别的限制，可以是本领域已知的常规微滤方法。在本发明的一个实例中，使用的微滤膜是采用孔径为50-100nm的陶瓷膜。在本发明的另一个较好实例中，使用的微滤膜是采用孔径为100-200nm的陶瓷膜。
本发明超滤方法无特别的限制，可以是本领域已知的常规超滤方法。在本发明的一个实例中，使用的超滤膜是截留分子量为5,000-100,000道尔顿的卷式膜。在本发明的另一个较好实例中，使用的超滤膜是截留分子量为10,000-50,000道尔顿的卷式膜。
本发明微滤和/或膜分离步骤采用的操作压力是本领域已知的膜分离压力。在本发明的一个实例中，所述操作压力为1×105Pa-6×105Pa，较好为1.5×105Pa-5.5×105Pa，更好为2×105Pa-5×105Pa。
为了减少膜分离后提取液夹杂活性物质产生的活性物质损失，在膜分离过程中需要向待分离提取液一端补水。在本发明的一个实例中，向待分离提取液一端补水的量以最终收集得到的滤液的量为原提取液体积的1-2倍，较好为1.2-1.5倍为宜。
为防止微滤膜和超滤膜发生堵塞，延长其使用寿命以降低制造成本，在进行所述微滤和/或超滤膜分离加工前，本发明分离方法还可任选地包括常规的过滤或离心步骤。
常规的过滤步骤无特别的限制，可以是本领域已知的常规过滤步骤。其目的是除去一些大颗粒固体杂质。在本发明的一个较好实例中，对提取步骤得到的提取液进行滤纸过滤。在本发明另一个较好实例中，对提取步骤得到的提取液进行抽滤。
本发明分离方法还包括对经微滤和/或超滤膜分离的中药提取物(滤液)进行减压浓缩的步骤。所述减压浓缩步骤无特别的限制，可以是本领域已知的常规减压浓缩方法。
本发明采用微滤和/或超滤膜分离法可大大地降低了中药组合物的毒性，显著增大中药组合物提取物对表皮细胞的浓度作用范围，从而提高中草药组合物的抗衰老功效。
此外，本发明意外发现，与常规水提醇沉工艺得到的提取物相比，本发明中的抗衰老中药组合物采用微滤和/或超滤膜分离的工艺得到的提取物，在生药浓度、固含量、总皂苷、总黄酮、总糖含量等不发生明显差异的同时，能显著增大该组合物对表皮细胞作用的最大无毒剂量，提高其抗衰老功效的作用效果。
在本发明的一个实例中，本发明抗衰老中药组合物的制备方法包括称取原料(黄芪、桂花、苍术、白术、琥珀粉和黄精)，用水加热煎煮二次，每次水量为原料量的5-20倍，较好7-12倍，每次加热时间为0.5-2小时，常规过滤后合并滤液，用陶瓷膜进行微滤，对收集的滤液用卷式膜进行超滤，随后将滤液减压浓缩至1倍生药量，常规过滤后，补水，得到预定生药浓度和固含量的组合物。
本发明还涉及一种皮肤外用剂，该皮肤外用剂包含黄芪、桂花、苍术、白术、琥珀粉、黄精作为原料提取得到的中药组合物以及化妆品、皮肤病学或药学上可接受的赋形剂。
在一些优选的实施方式中，以所述皮肤外用剂的总重量计，本发明所述由黄芪、桂花、苍术、白术、琥珀粉、黄精作为原料提取得到的中药组合物的用量为0.001-20％(w/w)，优选为0.008-10％(w/w)，更优选为0.01-5％(w/w)，最优选为0.01-2％(w/w)。
所述皮肤外用剂组合物是通常用于皮肤外部的所有成分的统称概念，例如可以是化妆料组合物或药学组合物。所述化妆料组合物中可以是基础化妆料、面部妆容化妆料、身体用化妆料、头发护理用化妆料等，对其剂型无特殊限制，根据不同目的可合理选择。
这种皮肤外用剂可以配制成任何合适的产品形式。这类产品形式包括，但不限于气溶胶型喷雾剂、霜剂、乳液、固体、液体、分散体、泡沫、凝胶、化妆水、摩丝、软膏、粉剂、贴剂、润发油、溶液、手按泵型喷雾剂、棒状物、面膜和湿纸巾。可以这种皮肤外用剂通过本领域众所周知的各种方法便利地用于制备或作为化妆品、皮肤病学或药物局部施用产品。
本发明的皮肤外用剂组合物可以包括一种或多种下列成分：抗过敏剂、抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、着色剂去色素剂、润肤剂、乳化剂、表皮脱落剂、成膜剂、香料、保湿剂、昆虫驱避剂、润滑剂、药物活性剂、增湿剂、耐光剂、防腐剂、护肤剂、皮肤渗透增强剂、防晒剂、稳定剂、表面活性剂、增稠剂、粘度调节剂、维生素或其任意组合。
可以用于本发明皮肤外用剂组合物的化妆品、皮肤病学或药学上可接受的赋形剂为水相、油相、凝胶、水包蜡型乳液、水包油型乳液或油包水型乳液的形式。水相为一种或多种水溶性或分散性组分的混合物，其在室温(25℃)下可以为液体、半固体或固体。赋形剂包括或可以为在水或水-醇赋形剂中的混悬液、分散液或溶液的形式，其可以含有增稠剂或凝胶剂。本领域技术人员可以基于本领域技术人员掌握的知识选择合适的产品形式，其中包含的组分。
所述的组合物可以包括水相，该水相可以含有水或水与至少一种亲水性有机溶剂的混合物，所述的亲水性有机溶剂诸如醇，尤其是含有2-5个碳原子的直链或支链低级一元醇，如乙醇或丙醇；多元醇，如丙二醇、山梨醇、甘油、泛醇或聚乙二醇及其混合物。
当发明的组合物为乳液形式时，该组合物还可以任选包含表面活性剂。
所述的组合物还可以包含成膜聚合物，如聚氨基甲酸酯、聚丙烯酸均聚物或共聚物、聚酯、基于烃的树脂和/或硅氧烷树脂。可以将聚合物溶于或分散于化妆品可接受的赋形剂中并且任选与增塑剂合并。
本发明的组合物还可以包含油相，所述的油相含有在室温(25℃)下为液体的油溶性或油分散性组分和/或在室温下为油状或蜡状的物质，如蜡、半固体、树胶及其混合物。该油相还可以含有有机溶剂。
通常在室温下为液体，合适的油性物质包括：来源于动物的基于烃的油，如全氢化角鲨烯；基于烃的植物油，如液体的C4-10脂肪酸的甘油三酯类，例如庚酸或辛酸甘油三酯类，或油，例如向日葵油、玉米油、大豆油、葡萄籽油、蓖麻油、鳄梨油、辛酸/癸酸甘油三酯类、霍霍巴油；矿物或合成来源的直链或支链烃类，例如液体石蜡及其衍生物、凡士林；合成酯类和醚类，特别是脂肪醇的酯类，例如肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸2-乙基己酯、硬脂酸2-辛基十二烷基酯、异硬脂酸异硬脂醇酯；羟基化酯类，例如乳酸异硬脂醇酯、羟基硬脂酸辛酯、羟基硬脂酸辛酯、羟基硬脂酸辛基十二烷基酯、脂肪醇的庚酸酯类、辛酸酯类和癸酸脂类；多元醇酯类，例如丙二醇二辛酸酯、新戊二醇二庚酸酯、二甘醇二异壬酸酯和季戊四醇酯类；含有C12-26的脂肪醇类，例如辛基十二烷醇、2-丁基辛醇、2-己基癸醇、2-十一烷基十五烷醇、油醇；基于部分烃的氟油和/或氟硅油，硅油，在室温下为液体或半固体的挥发性或非挥发性的直链或环状聚甲基硅氧烷，例如环状聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷，其任选包含苯基，例如苯基三甲基硅氧烷、硅氧烷及其混合物。
本发明的组合物可以进一步包含常用于化妆品领域中的任何组分。这些组分包括防腐剂、水相增稠剂(提取物生物聚合物、合成聚合物)和脂肪相增稠剂、芳香剂、亲水性和亲脂性活性剂及其混合物。
本发明的组合物还可以包含另外的颗粒相，所述的颗粒相可以为化妆品组合物中使用的颜料和/或珠光剂和/或填充剂。
颜料可以存在于组合物中，合适的无机颜料包括氧化钛、氧化锆和氧化铈以及氧化锌、氧化铁和铁蓝；合适的有机颜料包括钡、锶、钙和铝色淀和碳黑。
珠光剂可以存在于组合物中，合适的珠光剂包括涂覆了氧化钛、氧化铁或天然颜料的云母。
填充剂可以存在于组合物中，合适的填充剂包括滑石粉、二氧化硅、硬脂酸锌、云母、高岭土、尼龙粉末、聚乙烯粉末、特氟龙、淀粉、一氮化硼、共聚物微球，例如硅氧烷树脂微珠。
本发明组合物的油相可以包含一种或多种蜡、树胶或其混合物。蜡包括基于烃的蜡、氟蜡和/或硅氧烷蜡，并且可以来源于植物、矿物、动物和/或合成来源。合适的蜡包括蜂蜡、巴西棕榈蜡、小烛树蜡、石蜡、微晶蜡、地蜡；合成蜡包括聚乙烯蜡、含有C16-45的硅氧烷蜡。树胶一般为聚二甲基硅氧烷或羧甲基纤维素钠或提取物类，并且半固体物质一般为基于烃的化合物，如羊毛脂及其衍生物。
可以将本发明的组合物配制成任何合适的产品形式。这类产品形式包括，但不限于气溶胶型喷雾剂、霜剂、乳液、固体、液体、分散体、泡沫、凝胶、化妆水、摩丝、软膏、粉剂、贴剂、润发油、溶液、手按泵型喷雾剂、棒状物、面膜和湿纸巾。可以将本发明的组合物通过本领域众所周知的各种方法便利地用于制备或作为化妆品、皮肤病学或药物局部施用产品。
本发明的皮肤外用剂组合物可以包括一种或多种下列成分：抗过敏剂、抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、着色剂去色素剂、润肤剂、乳化剂、表皮脱落剂、成膜剂、香料、保湿剂、昆虫驱避剂、润滑剂、药物活性剂、增湿剂、耐光剂、防腐剂、护肤剂、皮肤渗透增强剂、防晒剂、稳定剂、表面活性剂、增稠剂、粘度调节剂、维生素或其任意组合。
下面结合具体的实施例进一步阐述本发明。但是，应该明白，这些实施例仅用于说明本发明而不构成对本发明范围的限制。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另有说明，所有的百分比和份数按重量计。
实施例
1.原料和设备
a)微滤膜分离设备
采用购自厦门福美科技有限公司型号为CERAMEM-0100的陶瓷膜微滤设备进行实施例的微滤操作。
b)超滤膜分离设备
采用购自厦门福美科技有限公司型号为RNF-0460的多功能卷式膜进行实施例的超滤操作。
c)药材来源：
黄芪：产地：甘肃，上海德华国药制品有限公司；
桂花：产地：云南，中国毫州市京皖中药饮片厂；
苍术：产地：辽宁，上海华鹰药业有限公司；
白术：产地：浙江，上海华鹰药业有限公司；
琥珀：产地：辽宁，中国毫州市京皖中药饮片厂；
黄精：产地：浙江，上海德华国药制品有限公司；
人参：产地：吉林，上海华宇药业有限公司；
菟丝子：产地：内蒙古，中国毫州市京皖中药饮片厂；
甘草：产地：新疆，上海青浦中药饮片有限公司；
枸杞：产地：宁夏，上海青浦中药饮片有限公司。
实施例1
以2:2:0.65:1.35:2:2的重量比称取原料黄芪、桂花、苍术、白术、琥珀粉和黄精，合计500克，加水煎煮并重复两次，每次加入5000mL水并煎煮1小时。将提取液合并，并用滤纸过滤，随后用CERAMEM-0100陶瓷膜微滤设备微滤(滤膜孔径为约200nm)，收集的滤液减压浓缩至500克，过滤，补水，测得其固体含量为24.87重量％。
实施例2
以2.5:2:0.65:1.35:1.5:2的重量比称取原料黄芪、桂花、苍术、白术、琥珀粉和黄精，合计500克，加水煎煮并重复两次，每次加入5000mL水并煎煮1小时。将提取液合并并用滤纸过滤，随后用CERAMEM-0100陶瓷膜微滤设备微滤(滤膜孔径为约200nm)，收集的滤液，用RNF-0460的多功能卷式膜(截留分子量为5万道尔顿)进行超滤，得到1000克左右的超滤液。将其减压浓缩至500克，过滤，补水，测得其固体含量为固体含量22.46重量％。
实施例3
以2:2:1:1:2:2的重量比称取原料黄芪、桂花、苍术、白术、琥珀粉和黄精，合计500克，加水煎煮并重复两次，每次加入5000mL水并煎煮1小时。将提取液合并并用滤纸过滤，随后用CERAMEM-0100陶瓷膜微滤设备微滤(滤膜孔径为约50nm)，收集的滤液，用RNF-0460的多功能卷式膜(截留分子量为1万道尔顿)进行超滤，得到1000克左右的超滤液，将其减压浓缩至500克，测得其固体含量为21.02重量％。
比较例1
以2:2:0.65:1.35:2:2的重量比称取原料黄芪、桂花、苍术、白术、琥珀粉和黄精，合计500克，加水煎煮并重复两次，每次加入5000mL水并煎煮1小时。将提取液合并并用滤纸过滤，减压浓缩至500克左右。使用70％乙醇醇沉24小时，减压浓缩至基本无醇味，滤纸过滤，用水调节至500克，得到固体含量为24.99重量％的中药组合物。
比较例2
重复实施例1的步骤，但是使用2:2:0.65:1.35:2:2重量比的人参、菟丝子、桂花、枸杞、黄精和甘草500克作为原料，最终得到500克固含量为25.5重量％的中药组合物。
比较例3
重复比较例1的步骤，但是使用2:2:0.65:1.35:2:2重量比的人参、菟丝子、桂花、枸杞、黄精和甘草500克作为原料，最终得到500克固含量为21.5重量％的中药组合物。
实施例4
对表皮角质细胞(HaCaT)线粒体活性的影响
将比较例1-3和实施例1的中药组合物分别稀释成不同的浓度，进行XTT比色检测。用60℃预热的培养液将XTT溶解，配制成0.2mg/mL的溶液，将96孔板中的细胞培养液移除，每孔中加入XTT/PMS(200:1)后，于37℃条件下培养2小时，在酶标仪上450nm波长处测定吸光度值OD。以不加药正常细胞为阴性对照，以HB-EGF为阳性对照，比较不同浓度样品对细胞线粒体活力的作用效果，从而确定其最大无毒剂量，结果如下。
由XTT检测结果可知，相比阴性对照细胞OD值为1.0，比较例1-3的中药组合物和实施例1的中药组合物在超过一定浓度值之后，对表皮细胞线粒体的活力有抑制作用，即呈细胞毒性作用，且呈现浓度梯度效果。
比较例1采用水提醇沉法制备黄芪复方，其试验结果如图3所示，结果表明在0.0025％浓度下其OD值接近OD0值(比值为0.961)，即其对表皮HaCaT细胞的最大无毒剂量值为0.0025％。
实施例1采用本发明的超滤膜分离法制备黄芪复方，其试验结果如图4所示，在0.25％浓度下其OD值接近OD0值(比值为0.975)，由此确定实施例1中药组合物(即黄芪复方)对表皮HaCaT细胞的最大无毒剂量为0.25％。
比较例3采用水提醇沉法制备人参复方，其试验结果如图1所示，结果表明在0.2％浓度下其OD值接近OD0值(比值为1.03)，即其对表皮HaCaT细胞的最大无毒剂量值为0.2％。
比较例2采用本发明的超滤膜分离法制备人参复方，其试验结果如图2所示，在0.2％浓度下其OD值接近OD0值(比值为1.19)，由此确定比较例2中药组合物(即人参复方)对表皮HaCaT细胞的最大无毒剂量为0.2％。
上述试验结果表明，本发明微滤和/或超滤膜分离方法仅仅能改进黄芪复方的毒性而对人参复方无效。
实施例5
对表皮角质细胞(HaCaT)线粒体活性的影响
重复实施例4的步骤以测定实施例2和实施例3试样的最大无毒剂量值，结果如下：
样品 最大无毒剂量浓度(单位：g/g)
实施例2的中药组合物 0.25％
实施例3的中药组合物 0.25％
实施例6
对细胞内ARE激活水平的影响
本实验使用的是一种经过改造的含有报告基因的293T细胞，选择比较例1样品和实施例1样品进行对比研究。
将293T细胞接种于含DMEM培养液的培养瓶中，置于37℃、CO2(CO2体积分数为5％)恒温培养箱中培养1d，至细胞融合约达100％。在96孔板每孔加入200μL 293T细胞悬液，置于37℃、5％CO2恒温培养箱中培养24h，实验设对照组及加药组，药物孵育16h，用作ARE激活水平的检测。加药处理结束后，细胞内ARE激活水平采用碧云天荧光素酶报告基因检测试剂盒检测，操作方法按照试剂盒说明书进行。
实验结果表明，与阴性对照组相比，比较例1样品在0.025％浓度下作用于细胞后，细胞内ARE激活水平高于对照组，但效果不显著，提升比例仅10％左右；而实施例1样品在0.25％浓度下，细胞内ARE激活水平明显高于对照组(***P<0.001)，即细胞内抗氧化蛋白的表达多于对照组，较阴性对照组提升了近72％；且相同浓度(0.025％)作用下，实施例1样品对细胞内ARE激活水平的影响明显高于比较例1样品。说明，膜分离能有效提高黄芪复方对细胞内ARE激活水平的作用效果，有助于其抗氧化作用的提升。
实施例1和比较例1样品在不同浓度下对细胞内ARE激活水平的影响
实施例7
对UVA辐照后ROS含量的影响
将人皮肤成纤维细胞Fibroblast在37℃，5％CO2的恒温培养箱中，培养于含体积分数10％新生牛血清的DMEM培养基中，传代培养后的人皮肤成纤维细胞培养4h开始贴壁生长，培养48h，采用第7～10代细胞进行实验，用作ROS检测。
加药处理结束后，将96孔板中的细胞培养液移除，每孔加入100μL 20μmol·L- 1DCFH-DA溶液，37℃培养箱内孵育30～40min。吸掉DCFH-DA溶液，用PBS洗涤细胞三次，最后每孔加入50μL PBS覆盖细胞，进行UVA辐照，辐照能量为15J·cm-2，UVA照射后，立即使用荧光酶标仪检测，检测使用488nm激发波长，525nm发射波长。
比较例1样品和实施例1-3样品最终加药浓度为0.00125％。
实验结果表明，相同作用浓度条件下，比较例1的中药组合物对细胞内ROS含量的作用效果不明显，而实施例1-3的中药组合物较对照组的ROS含量均有显著差异(**P<0.01)，可以显著降低细胞内ROS的量，其降低比例高达近60％。
实施例1-3及比较例1样品对细胞内ROS含量的影响
样品 浓度(单位) ROS含量比(OD/OD0) 降低比例
阴性对照(不加药正常组) / 1 /
阳性对照(姜黄素) 5μM 0.376 62.4％
比较例1的中药组合物 0.00125％ 0.734 26.6％
实施例1的中药组合物 0.00125％ 0.405 59.5％
实施例2的中药组合物 0.00125％ 0.418 58.2％
实施例3的中药组合物 0.00125％ 0.464 53.6％
由实施例4-6的实验结果表明，与水提醇沉工艺相比，膜分离工艺可以有效减少黄芪复方提取物中的杂质，降低该中药组合物对表皮细胞线粒体活性的抑制作用，即减少中药组合物的细胞毒性作用，提高其对表皮细胞最大无毒剂量；同时，与传统的水提醇沉处理的中药组合物相比，膜分离精制工艺可以显著提高黄芪复方提取物对细胞内ARE和ROS的作用浓度范围，提高对ARE的激活水平，降低细胞内ROS的含量，从而提高黄芪复方提取物的抗氧化活性。
取实施例1-3中制备的中药组合物，用于皮肤外用剂的制备。所述皮肤外用剂优选为化妆品组合物，例如化妆水、精华液、乳霜等。所述中药组合物在皮肤外用剂中的重量百分比为0.0001％-20％(w/w)，优选的重量百分比为0.001％-10％(w/w)，更优选的重量百分比为0.01％-5％(w/w)。
以下是中药组合物在皮肤外用剂中的具体应用的实施例，及其这些剂型的配方和制备方法。以下各表中“-”表示无添加。
以下实施例8-18中所使用的中药组合物均为实施例1-3制备得到，其生药浓度为1g/g。
实施例8：面霜的制备
实施例9：乳液的制备
实施例10：啫喱的制备
实施例11：化妆水的制备
实施例12：精华液的制备
实施例13：面膜的制备
实施例14：眼霜的制备
实施例15：气雾(清洁泡)的制备
实施例16：喷雾的制备
实施例17：沐浴露的制备
实施例18：洗面奶的制备

Claims (10)

1.一种抗衰老的中药组合物的改性方法，它包括如下步骤：
a)提供用于制备中药组合物的原料：
黄芪10-30重量份
桂花10-30重量份
苍术5-15重量份
白术5-15重量份
琥珀10-30重量份
黄精10-30重量份
b)提取，和分离；
其特征在于所述分离步骤包括微滤和/或超滤膜分离。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述用于制备中药组合物的原料中黄芪：桂花：苍术：白术：琥珀粉：黄精的重量比为1-3：1-3：0.5-1.5：0.5-1.5：1-3：1-3，较好1.5-2.5:1.5-2.5:0.5-1.0:0.8-1.4:1.0-2:1.5-2.5，优选2:2:0.65:1.35:2:2。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述微滤膜分离工艺采用孔径10-1,000nm的微滤膜，优选孔径50-200nm的陶瓷膜。
4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述超滤膜分离工艺采用截留分子量为5,000-100,000道尔顿的超滤膜，优选截留分子量为10,000-50,000道尔顿的卷式膜。
5.一种抗衰老的中药组合物，它是用如下方法制得的：
a)提供用于制备中药组合物的原料：
黄芪10-30重量份
桂花10-30重量份
苍术5-15重量份
白术5-15重量份
琥珀10-30重量份
黄精10-30重量份
b)提取，和分离；
其特征在于所述分离步骤包括微滤和/或超滤膜分离。
6.如权利要求5所述的中药组合物，其特征在于，所述用于制备中药组合物的原料中黄芪：桂花：苍术：白术：琥珀粉：黄精的重量比为1-3：1-3：0.5-1.5：0.5-1.5：1-3：1-3，较好1.5-2.5:1.5-2.5:0.5-1.0:0.8-1.4:1.0-2:1.5-2.5，优选2:2:0.65:1.35:2:2。
7.如权利要求5或6所述的中药组合物，其特征在于，所述微滤膜分离工艺采用孔径10-1,000nm的微滤膜，优选孔径50-200nm的陶瓷膜。
8.如权利要求5或6所述的中药组合物，其特征在于，所述超滤膜分离工艺采用截留分子量为5,000-100,000道尔顿的超滤膜，优选截留分子量为10,000-50,000道尔顿的卷式膜。
9.微滤和/或超滤膜分离方法在改进黄芪复方的最大无毒剂量中的用途。
10.一种皮肤外用剂，它含有0.0001wt％-20wt％，较好0.001wt％-10wt％，优选0.01wt％-5wt％的如权利要求5-8中任一项所述的中药组合物。
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