CN106282266B - 一种利用柚苷酶制备浒苔寡糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种利用柚苷酶制备浒苔寡糖的方法,属于活性成分提取领域。为了克服现有技术中浒苔寡糖的收率较低,且终产品中未降解多糖含量高的技术不足,本发明提供一种以浒苔为原料利用柚苷酶制备浒苔寡糖的方法。该方法首次将柚苷酶应用于浒苔寡糖的制备方法中,采用纤维素酶和柚苷酶两段酶解,然后通过纳滤膜得到浓缩液,浓缩液经干燥即可得到浒苔寡糖,该制备方法的浒苔寡糖的收率高,产品中杂质和未降解多糖低,产品非常适合进一步加工功能型农业制品、饲料添加剂以及食品添加剂等。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用柚苷酶制备浒苔寡糖的方法,具体涉及一种以浒苔为原料利用纤维素酶和柚苷酶两步酶解制备浒苔寡糖的方法,属于活性成分提取领域。
背景技术
浒苔是一种大型绿藻,俗称苔条、青海苔等,为绿藻门石莼目、石莼科、浒苔属的藻类植物,常生长于潮间带岩石上,广泛分布于我国沿海,资源丰富。浒苔中含有丰富的多糖成分,含量可达浒苔干重的40%以上,其中可溶性多糖主要由鼠李糖和葡萄糖组成。研究显示,由浒苔中可溶性多糖制备的浒苔寡糖,具有抗凝血、抗氧化、抗菌和增强免疫力等多种活性,具有很高的开发应用前景。
CN105567762A公开了一种具有辅助降血糖作用的浒苔寡糖的制备方法。该工艺流程利用微波辅助提取浒苔硫酸多糖,经脱脂及除蛋白和色素后,依次添加多聚半乳糖醛酸酶、á-L-鼠李糖苷酶和木聚糖酶进行酶解,灭酶活后,采用乙醇去除酶和未降解多糖,离心上清液过分子筛,截留物冷冻干燥后得到浒苔活性寡糖,其经动物药效学证实,浒苔寡糖能够显著降低高血糖模型小鼠血糖值。
CN105603023A公开了一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖制备方法。浒苔干燥后超微粉碎,利用乙醇回流提取工艺,得到干燥脱脂的浒苔粉末,经微波辅助提取、脱蛋白及去除多糖和色素后获得浒苔寡糖,再将唾液酸转移酶加入到含有浒苔寡糖的反应体系中,进行糖基化反应,制备得到所述的唾液酸化浒苔寡糖,该寡糖能显著提高肠道益生菌数量,可用于制备改善肠道菌群的药品或保健品。
CN105695537A公开一种降血糖及调节肠道菌群的糖基化浒苔寡糖制备方法,其制备方法为:浒苔干燥后超微粉碎,经乙醇回流提取工艺,浓缩、干燥粉碎后得到脱脂的浒苔粉末,经脱蛋白、去除多糖及色素后,再将岩藻糖基转移酶加入含有浒苔寡糖的反应体系中,进行岩藻糖基化反应,制备得到所述的岩藻糖基化浒苔寡糖。经证实糖基化浒苔寡糖对α-葡萄糖苷酶具有强抑制活性,显著提高肠道益生菌数量,可用于制备防治糖尿病改善肠道菌群等代谢性疾病的药品或保健品。
CN 103570445 B提供了一种磷酸化浒苔寡糖粉剂肥料的制备方法,其特点是:以浒苔为主要原料,经过原料预处理、酶解、过滤、浓缩等工艺过程,有效提取浒苔中的浒苔寡糖,以此为基液,通过磷酸化试剂共价修饰,然后经过瞬时喷雾干燥得到磷酸化浒苔寡糖粉剂肥料。
上述现有技术表明,浒苔寡糖是具有多种生物活性的浒苔提取组分,目前有多名研究者已经开始对其基团进行修饰并探索其新的生物活性潜力,目前其制备方法多采用微波提取和/或酶解的方式,但基于浒苔内复杂的生物组分以及酶的局限性,使得浒苔寡糖的收率偏低,终产物中多糖的残余率以及其它组分的存在使得浒苔多糖的纯度偏低。因此,寻找一种酶促反应效率高以及能够提高浒苔多糖收率的酶用于浒苔多糖的制备工艺中具有重要的经济价值和现实意义。
柚苷酶是一种能水解柚皮苷(4,5,7-三羟基二氢黄酮-7-鼠李葡萄苷)生成鼠李糖、葡萄糖和橘皮素,起到脱苦味作用的酶,目前主要应用于蜜柚果汁的生产。常用的柚苷酶生产菌为黑曲霉、米曲霉和青霉属的一些菌种。经检索,尚未发现有柚苷酶用于制备浒苔多糖的报道。基于此,特提出本发明。
发明内容
为了克服现有技术中浒苔寡糖的收率较低,且终产品中未降解多糖含量高的技术不足,本发明的目的在于提供一种以浒苔为原料利用柚苷酶制备浒苔寡糖的方法。该方法中首次将柚苷酶应用于浒苔寡糖的制备方法中,采用纤维素酶和柚苷酶两段酶解,然后通过纳滤膜得到浓缩液,浓缩液经干燥即可得到浒苔寡糖,该制备方法的浒苔寡糖的收率高,产品中杂质和未降解多糖低,产品非常适合进一步加工功能型农业制品、饲料添加剂以及食品添加剂等。
为实现上述目的,本发明所述的一种以浒苔为原料利用柚苷酶制备浒苔寡糖的方法,其包括浒苔预处理、降解、纯化、喷雾干燥四个步骤,所述的具体步骤如下:
1)预处理:将含水量70-90%的新鲜浒苔(如含水量过低,可加入适量自来水)打浆至呈糊状,投入提取罐进行酶解反应;或者将干浒苔粉碎至20目以下,加入6-10倍重量的自来水,投入提取罐中进行酶解反应;
2)酶解:按如下三个阶段进行酶解反应:第一阶段,调节提取罐内pH为 4.5-5.5,按每公斤干浒苔300-1000个酶活力单位加入纤维素酶,搅拌并升温至45-55℃,保温2-3小时,用于降解细胞壁中的纤维素,促进多糖的提取。第二阶段,调节提取罐内pH为 3.5-5.0,按每公斤干浒苔100-600个酶活力单位加入柚苷酶,升温至50-60℃,保温10-12小时,使浒苔多糖降解为寡糖。第三阶段,调节提取罐内pH为 6.5-7.0,升温至90℃以上,保温15分钟,灭酶活,得到酶解液;
3)纯化:将酶解液过滤或离心,将得到的滤液或离心液依次通过截留分子量为2000-3500Da和300-500Da的纳滤膜,截取分子量300-2000Da的部分,并达到脱盐的目的,得到纳滤浓缩液;
4)干燥:纳滤浓缩液进一步浓缩至固形物达到25-35%,喷雾干燥,即可得到浒苔寡糖。
优选地,所述步骤2)中纤维素酶的加入量为每公斤干浒苔650个酶活力单位,所述纤维素酶的最佳酶解条件为:提取罐内pH为5.0,酶解温度为50℃,保温时间为2.5小时。
优选地,所述步骤2)中柚苷酶的加入量为每公斤干浒苔350个酶活力单位,所述柚苷酶的最佳酶解条件为:提取罐内pH为4.0,酶解温度为55℃,保温时间为11小时。
优选地,所述步骤3)中的过滤操作中滤布的目数为600-1000目;所述步骤3)中的离心操作中离心转速为3500转/分,离心时间为10min。
申请人根据上述条件的组合对本发明的制备方法进行了深入研究,申请人发现,本发明最优选的一个实施方式中,所述的具体步骤如下:
1)预处理:将含水量90%的新鲜浒苔打浆至呈糊状,投入提取罐进行酶解反应;
2)酶解:按如下三个阶段进行酶解反应:第一阶段,调节提取罐内pH为 5.0,按每公斤干浒苔300-1000个酶活力单位加入纤维素酶,搅拌并升温至50℃,保温2.5小时,用于降解细胞壁中的纤维素,促进多糖的提取。第二阶段,调节提取罐内pH为 5.0,按每公斤干浒苔350个酶活力单位加入柚苷酶,升温至55℃,保温11小时,使浒苔多糖降解为寡糖。第三阶段,调节提取罐内pH为 6.8,升温至90℃以上,保温15分钟,灭酶活,得到酶解液;
3)纯化:将酶解液过滤或离心,将得到的滤液或离心液依次通过截留分子量为2800Da和400Da的纳滤膜,截取分子量400-2800Da的部分,并达到脱盐的目的,得到纳滤浓缩液;
4)干燥:纳滤浓缩液进一步浓缩至固形物达到30%,喷雾干燥,即可得到浒苔寡糖。
本发明效果实施例显示,按照本发明制备的浒苔寡糖的收率高,且浒苔寡糖中多糖残余量少,产品的纯度高。与对比实施例1相比,本发明制备的浒苔寡糖的收率显著提高,且多糖残余量更低,其中以实施例5所述的方法的制备的产品的收率最高,为本发明的最佳实施例。
本发明还请求保护按照上述方法制备得到的浒苔寡糖。
上述浒苔寡糖还可以进一步制备成功能型农业制品、饲料添加剂以及食品添加剂,其营养含量高,用于食品添加剂或饲料添加剂时可以显著增强动物的免疫力,促进动物的快速成长。
本发明与现有技术相比技术优势在于:
1)浒苔寡糖的收率高,从而大幅度降低生产成本。本发明效果实施例显示,按照本发明制备的浒苔寡糖的收率高,其收率在38%-43%之间,远高于现有技术所制备的浒苔寡糖,且本发明制备得到的浒苔寡糖的纯度高,不低于现有技术所获得的浒苔寡糖。
2)产品中的多糖残余率低。本发明采用纤维素酶和柚苷酶结合的方式使得终产品中的多糖残余率极低,产品的品质大幅度提升。现有技术中浒苔寡糖中残留未酶解多糖,影响着产品的品质。
3)本发明浒苔寡糖还可以进一步制备成功能型农业制品、饲料添加剂以及食品添加剂,其营养含量高,用于食品添加剂或饲料添加剂时可以显著增强动物的免疫力,促进动物的快速成长。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步阐述:
实施例1:
取10kg新鲜浒苔,含水量为90%,湿料粉碎机粉碎后放入提取罐中,开启搅拌,加入17mL 1mol/L的盐酸溶液,搅拌均匀后,检测pH为5.1,升温至50℃,加入400U纤维素酶,持续搅拌并控温50℃,pH 5.0范围内,3小时后,再加入11mL 1mol/L的盐酸溶液,搅拌均匀,检测pH为4.3,升温至55℃,加入300U柚苷酶,持续搅拌并控温55℃,pH 4.3范围内,酶解10小时。升温至95℃并保温15min,灭酶活。酶解液板框过滤(750目滤布),得到7L滤液,加入7L自来水稀释,并通过截留分子量3500Da的纳滤膜,流出液13.5L通过截留分子量500DA的纳滤膜,至浓缩液体积浓缩至5L,浓缩液再用三效浓缩器进一步浓缩至固形物30%,喷雾干燥,得到380g浒苔寡糖。
实施例2:
干浒苔用粉碎机粉碎,过20目筛,取15kg投入提取罐中,加入90L自来水,开启搅拌,加入21mL浓盐酸,搅拌均匀后,检测pH为4.9,升温至50℃,加入8000U纤维素酶,持续搅拌并控温50℃,pH 5.0范围内,提取2小时,再加入16mL浓盐酸,搅拌均匀,检测pH为4.4,升温至55℃,加入4200U柚苷酶,持续搅拌并控温55℃,pH 4.3范围内,酶解12小时。升温至95℃并保温15min,灭酶活。酶解液板框过滤(750目滤布),得到85L滤液,加入80L自来水稀释,并通过截留分子量3500Da的纳滤膜,流出液147L通过截留分子量500DA的纳滤膜,至浓缩液体积浓缩至60L,浓缩液再用三效浓缩器进一步浓缩至固形物30%,喷雾干燥,得到6.1kg浒苔寡糖。
实施例3-实施例8
按照如表1所述参数制备浒苔寡糖,除下述参数不同外,实施例3-实施例5制备方法同实施例1,实施例6-实施例8同实施例2。
表1实施例3-实施例8中主要参数
对比实施例1 按照CN105567762A实施例1制备得到的浒苔活性寡糖。
分别测定按照本发明实施例1-实施例8所制备得到的浒苔寡糖的收率,浒苔寡糖中多糖残余率,其测定结果如表2所示。浒苔寡糖的收率=浒苔寡糖/干浒苔×100%,或者浒苔寡糖/(新鲜浒苔×(1-含水率))×100%。多糖的测定方法按照现有技术中所公开的方法测定,其残余率为浒苔寡糖中多糖含量除以提取前干浒苔中多糖含量。测定结果如表2所示。
浒苔寡糖收率(%) | 寡糖中多糖残余率(%) | 寡糖中杂质含量(%) | |
实施例1 | 38.00 | 0.25 | 0.65 |
实施例2 | 40.67 | 0.29 | 0.59 |
实施例3 | 43.62 | 0.19 | 0.24 |
实施例4 | 40.18 | 0.22 | 0.51 |
实施例5 | 42.61 | 0.21 | 0.43 |
实施例6 | 41.92 | 0.27 | 0.49 |
实施例7 | 43.10 | 0.24 | 0.43 |
实施例8 | 39.95 | 0.25 | 0.43 |
对比实施例1 | 18.96 | 0.95 | 0.22 |
由表2可以看出,按照本发明制备的浒苔寡糖的收率高,且浒苔寡糖中多糖残余量少,产品的纯度高。与对比实施例1相比,本发明制备的浒苔寡糖的收率显著提高,且多糖残余量更低,其中以实施例5所述的方法的制备的产品的收率最高,为本发明的最佳实施例。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其进行限制;尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的普通技术人员来说,依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
Claims (6)
1.一种利用柚苷酶制备浒苔寡糖的方法,其具体包括以下步骤:
1)预处理:将含水量70-90%的新鲜浒苔打浆至呈糊状,投入提取罐进行酶解反应;或者将干浒苔粉碎至20目以下,加入6-10倍重量的自来水,投入提取罐中进行酶解反应;
2)酶解:按如下三个阶段进行酶解反应:第一阶段,调节提取罐内pH 为4.5-5.5,按每公斤干浒苔650个酶活力单位加入纤维素酶,搅拌并升温至45-55℃,保温2-3小时;第二阶段,调节提取罐内pH为3.5-5.0,按每公斤干浒苔350个酶活力单位加入柚苷酶,升温至50-60℃,保温10-12小时;第三阶段,调节提取罐内pH为6.5-7.0,升温至90℃以上,保温15分钟,灭酶活,得到酶解液;
3)纯化:将酶解液过滤或离心,将得到的滤液或离心液依次通过截留分子量为2000-3500Da和300-500Da的纳滤膜,截取分子量300-2000Da的部分,得纳滤浓缩液;
4)干燥:纳滤浓缩液进一步浓缩至固形物含量为25-35%,喷雾干燥,即可得到浒苔寡糖。
2.根据权利要求 1所述的利用柚苷酶制备浒苔寡糖的方法,其特征在于,所述步骤3)中的过滤操作中滤布的目数为600-1000目。
3.根据权利要求 1所述的利用柚苷酶制备浒苔寡糖的方法,其特征在于,所述纤维素酶的最佳酶解条件为:提取罐内pH为5.0,酶解温度为50℃,保温时间为2.5小时。
4.根据权利要求 1所述的利用柚苷酶制备浒苔寡糖的方法,其特征在于,所述柚苷酶的最佳酶解条件为:提取罐内pH为4.0,酶解温度为55℃,保温时间为11小时。
5.根据权利要求 1所述的利用柚苷酶制备浒苔寡糖的方法,其特征在于,所述步骤3)中的离心操作中离心转速为3500转/分,离心时间为10min。
6.根据权利要求1所述的利用柚苷酶制备浒苔寡糖的方法,其特征在于,其具体包括以下步骤:
1)预处理:将含水量90%的新鲜浒苔打浆至呈糊状,投入提取罐进行酶解反应;
2)酶解:按如下三个阶段进行酶解反应:第一阶段,调节提取罐内pH为 5.0,按每公斤干浒苔300-1000个酶活力单位加入纤维素酶,搅拌并升温至50℃,保温2.5小时;第二阶段,调节提取罐内pH为 5.0,按每公斤干浒苔350个酶活力单位加入柚苷酶,升温至55℃,保温11小时;第三阶段,调节提取罐内pH为 6.8,升温至90℃以上,保温15分钟,灭酶活,得到酶解液;
3)纯化:将酶解液过滤或离心,将得到的滤液或离心液依次通过截留分子量为2800Da和400Da的纳滤膜,截取分子量400-2800Da的部分,得到纳滤浓缩液;
4)干燥:纳滤浓缩液进一步浓缩至固形物达到30%,喷雾干燥,即可得到浒苔寡糖。
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柚苷酶的生产及其在食品工业中的研究进展;朱运平;《中国食品添加剂》;20151231(第6期);摘要 * |
浒苔多糖的酶法降解及其工艺条件优化的研究;张高丽;《食品工业科技》;20160524;第37卷(第18期);第1.2.1、1.2.9节 * |
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