CN106267157B - 一种用于预防或/和治疗牙周病的组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种含有藻蓝蛋白的藻类萃取物的组合物，能有效抑制口腔病原菌包括牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)和伴放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)的生长，并降低该病原菌所造成的发炎反应，使牙周病患者的齿槽骨流失现象减缓，而达到预防及治疗牙周病的效果。

Description

一种用于预防或/和治疗牙周病的组合物及其应用

技术领域

本发明提供一种藻类萃取物的组合物，该藻类萃取物含有藻蓝蛋白，能有效抑制口腔病原菌包括牙龈卟啉单胞菌和伴放线杆菌的生长，并降低该病原菌所造成的发炎反应，使牙周病患者的齿槽骨流失现象减缓，而达到预防及治疗牙周病的效果。

背景技术

牙周病为一慢性疾病，而且在世界各地皆有很高的流行比例。根据牙周病医学会的统计，台湾成年人罹患牙周病比例高达九成以上，这些患者除了牙齿外观不美丽外，更容易引起其他口腔疾病及口臭等现象，严重影响人际关系与社交生活。造成牙周病的主要因子为细菌，其他的因素包括抽烟、遗传、压力、饮食、年龄、糖尿病、骨质疏松症、艾滋病感染、放射线的照射及抑制免疫能力药物的服用等，皆可能增加罹患牙周病的风险，并加速牙周致病菌的破坏发生的速度。

在牙龈与牙齿交接的地方有一沟槽，称之为牙龈沟，在这个地方会因为口腔卫生不良，而造成细菌滋生，逐渐形成生物膜(biofilm)。这些细菌主要是牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)以及伴放线杆菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans)，它们藉由黏连因子附着于生物膜上，并可彼此吸附与聚集，形成牙菌斑(plaque)。

牙菌斑内的细菌会入侵牙齿周围组织，并逐渐形成牙周囊袋。入侵的细菌本身及其所分泌的毒素，亦会刺激宿主细胞制造发炎前驱因子，其中包括环氧化酶(COX)的产物及诱导性一氧化氮合成酶(inducible NO synthase，iNOS)的代谢物等，直接或间接地再造成牙齿周围组织的破坏。

在临床上，观察患者牙周齿槽骨的高度是非常重要的，因为齿槽骨的高度会直接影响到牙齿的存留。体内骨质的存在乃沉积与吸收两者不断交互作用的结果，当沉积多于吸收，骨质增加，若吸收多于沉积，则骨质减少，而牙周齿槽骨高度之决定亦然。骨质的沉积与吸收决定于成骨细胞(osteoblast)与蚀骨细胞(osteoclast)，当细菌进入齿槽骨后，会破坏毛细血管，阻断营养供给，降低成骨细胞活性。另一方面，细菌所诱导的发炎因子(例如TNF-α、IL-1)及免疫细胞(例如T细胞)会促使蚀骨细胞大量产生并活化，进而造成齿槽骨萎缩、骨质流失，最终导致牙床降低、牙根暴露、牙齿松动脱落。

综观而论，牙菌斑中的细菌是造成牙周病的主要元凶，因此减少该病原菌的聚集及增生是预防及治疗牙周病的首要目标。此外，目前牙周病除外科治疗外，药物治疗仍没有很好的效果，因此值得进一步研究与开发。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种用于预防或/和治疗牙周病的组合物，所述组合物为藻类萃取物，包含有效浓度的藻蓝蛋白。

本发明实施例中，所述组合物的藻蓝蛋白的有效浓度≥50μg/ml。

本发明实施例中，其中所述组合物的藻蓝蛋白的有效浓度为50μg/ml～600μg/ml。

本发明另提供一种用于预防牙周病的藻类萃取物的组合物，其中所述组合物包含有效浓度的藻蓝蛋白。

本发明的实施例中，其中所述组合物的藻蓝蛋白的有效浓度≥50μg/ml，优选为50μg/ml～600μg/ml。

本发明提供一种藻类萃取物的组合物，能有效抑制口腔病原菌的生长。

本发明的实施例中，所述口腔病原菌为牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis)或伴放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)。

本发明提供一种藻类萃取物的组合物，能有效减缓牙周病患者齿槽骨流失的现象。

本发明提供一种藻类萃取物的组合物，能有效降低因口腔病原菌感染所导致的发炎现象。

本发明的实施例中，其中所述藻蓝蛋白是选自藻蓝素、藻红素或异藻蓝素中的一种或多种。

本发明的实施例中，其中所述藻蓝蛋白含有C-藻蓝素。

本发明的实施例中，其中所述藻类萃取物的组合物可以制作成膏状、针剂或贴片等型式使用。

本发明的实施例中，其中所述藻类萃取物的组合物能添加于洁牙产品，如牙膏、洁牙粉、漱口水或牙线等。

本发明的实施例中，其中所述藻类萃取物的组合物能涂抹于牙齿矫正工具，如牙套，或假牙上。

本发明的实施例中，其中所述藻类萃取物的组合物能添加于应用在牙套或假牙等相关的产品中，如黏着剂或洗洁液等。

本发明的实施例中，其中所述藻类萃取物的组合物能添加于补牙物料，如银粉、合成树脂等。

本发明的实施例中，其中所述藻类萃取物的组合物能混合于口香糖、薄荷锭或口腔清新剂等产品。

本发明进一步提供一种藻类萃取物的组合物用于制备治疗牙周病的用途，其中所述组合物包含有效浓度的藻蓝蛋白，且该治疗牙周病的机制系透过抑制口腔病原菌的生长。

本发明的实施例中，其中所述组合物的藻蓝蛋白的有效浓度为≥50μg/ml；优选为50μg/ml～600μg/ml。

本发明亦提供一种藻类萃取物的组合物用于制备预防牙周病的用途，其中所述组合物包含有效浓度的藻蓝蛋白，且该预防牙周病的机制是通过抑制口腔病原菌的生长。

本发明的实施例中，其中所述组合物的藻蓝蛋白的有效浓度≥50μg/ml，优选为50μg/ml～600μg/ml。

附图说明

图1A为本发明不同剂量的含藻蓝蛋白萃取物对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis)的抑制结果图；

图1B图为本发明不同剂量的含藻蓝蛋白萃取物对伴放线杆菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans)的抑制结果图；

图2A为大白鼠口腔牙齿结构示意图；

图2B为动物牙周病诱发实验操作图；

图3为诱发动物牙周病的实验的设计流程图；

图4A为断层扫描观察动物齿槽骨流失的现象的扫描图；

图4B为动物齿槽骨流失的牙釉质交接到齿槽骨的距离的统计结果图；

图4C为显示在不同条件处理下的动物的牙龈组织病理切片图，其中：d为象牙质，g为牙龈，pl为牙周韧带，ab为齿槽骨。

具体实施方式

实施例一：抗菌测试

1.牙周病主要致病菌种培养

参考Jeong et al.,2000以及Zhou et al.,2006两篇期刊，培养牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)及伴放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)两种主要牙周致病菌株。

2.抗菌试验

依据抑制50％细菌生长的实验设计指标，观察本发明不同浓度(25、50、100、150、300、600μg/ml)的含藻蓝蛋白萃取物，对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)(如图1A)及伴放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)(如图1B)的抑制现象。其中，图1A与图1B的横坐标表示加入不同浓度(μg/ml)的含藻蓝蛋白萃取物，而纵坐标则表示于波长660nm下所测到的吸光值，并以百分比例显示。由图1A的结果可知：本发明的含藻蓝蛋白萃取物抑制50％牙龈卟啉单胞菌生长的有效剂量约为150μg/ml，而图1B显示其抑制50％伴放线杆菌生长的有效剂量则大约为100μg/ml，但对大肠杆菌(E.coli),金黄色葡萄球菌(S.aureus)、变形链球菌(Streptococcus mutans)以及红色毛癣菌(T.rubrum)无抑制效果，因此本发明的含藻蓝蛋白萃取物具有抑制牙周致病菌的生长效果。

实施例二：齿槽骨流失现象的观察

1.实验动物

本发明采用Sprague Dawley(SD)品系的雄性大白鼠进行试验，每只大白鼠的体重约为280-310公克。大白鼠来源为国家动物中心(台北市南港区研究院路二段128号)，并饲养在国防医学院动物中心(台北市内湖区民权东路六段161号)，该饲养环境为温度23-25℃，光照周期控制在日夜各12小时，其中光周期的时间为8:00-20:00，并充份供应饲料与饮水。此外，饲养房调控在适当的湿度，并供给独立过滤的空气。

2.牙周病疾病动物模式建立

依据Cai et al.,2008所发表的期刊，以结扎线方式诱发牙周病模式(Ligature-induced periodontal disease model)，以下简称为ligation。首先大白鼠以腹腔注射的方式给予麻醉药后，将结扎线放置在下颚两侧第一大臼齿齿颈部及上颚第二大臼齿齿颈部，参考图第2A及2B，并将线结放置在颊侧近心面。

3.实验设计

将大白鼠随机分成五组，包括(1)正常组(control)、(2)诱发组(ligation)、(3)结扎线+本发明的含藻蓝蛋白萃取物50mg/kg、(4)结扎线+本发明的含藻蓝蛋白萃取物100mg/kg、(5)结扎线+本发明的含藻蓝蛋白萃取物200mg/kg。按照图3的操作流程进行试验，于试验开始，即给予生理食盐水(normal saline)或不同浓度的本发明含藻蓝蛋白萃取物，一直持续给予到试验第10天，其中于试验第3天以结扎线诱发牙周病产生，并于试验第11天牺牲大白鼠，观察其齿槽骨的高度改变情形。

4.齿槽骨高度测量

去除大白鼠下颚的软组织后，确认牙釉质交接(cemento-enamel junction,CEJ)的位置，并测定CEJ到齿槽骨(alveolar bone crest，ABC)的距离。图4A是断层扫描观察大白鼠齿槽骨的高度变化扫描图，结果显示在结扎线诱发牙周病的组别(Ligation)中，不管是从舌侧或颊侧观测，都有着严重骨基质吸收的情况。而在给予本发明的含藻蓝蛋白(C-PC)萃取物后，可观察到当给予剂量为100mg/kg及200mg/kg皆可降低牙釉质交接(CEJ)到齿槽骨(ABC)的距离，但此两种剂量彼此间并无差异性，如图4B所示。

另外，在牙龈组织病理切片中观察大白鼠齿槽骨流失的现象，如图4C，图中d为象牙质(dentin)的标示，g为牙龈(gingiva)的标示，pl为牙周韧带(periodontal ligament)的标示，ab为齿槽骨(alveolar bone，白色框线范围)的标示。结果显示诱发组(ligation)的牙周组织相对于正常组(Control)具有严重的齿槽骨流失现象产生，而给予本发明的含藻蓝蛋白(C-PC)萃取物100mg/kg后，相对于诱发组，齿槽骨破怀情况获得改善，因此，本发明的含藻蓝蛋白萃取物可有效改善齿槽骨流失的现象。

综合以上结果，可证明本发明的含藻蓝蛋白萃取物的组合物，能有效抑制牙周致病菌的生长，并降低该致病菌所造成的发炎反应，使牙周病患者的齿槽骨流失现象减缓，而达到预防及治疗牙周病的效果。

Claims (12)

1.一种藻类萃取物用于制备抑制病原菌为牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)或伴放线杆菌

(Actinobacillus actinomycetemcomitans)的组合物的应用，其特征是所述藻类萃取物包含有效浓度的藻蓝蛋白；

其中所述藻蓝蛋白含有C-藻蓝素。

2.如权利要求1所述的应用，其特征是所述藻蓝蛋白的有效浓度≥50μg/ml。

3.如权利要求1所述的应用，其特征是降低因病原菌感染所导致的发炎现象。

4.如权利要求1所述的应用，其特征是所述组合物制作成膏状、针剂、贴片、或敷料的形式使用。

5.如权利要求1所述的应用，其特征是所述组合物添加于洁牙产品中，其中所述洁牙产品为牙膏、粉末、漱口水或牙线。

6.如权利要求1所述的应用，其特征是所述组合物涂抹于牙齿矫正工具上，其中所述牙齿矫正工具为牙套或假牙。

7.如权利要求1所述的应用，其特征是所述组合物添加于应用在牙套或假牙相关的产品中，其中所述套或假牙相关的产品为黏着剂或洗洁液。

8.如权利要求1所述的应用，其特征是所述组合物添加于补牙物料中，其中所述补牙物料选择银粉或合成树脂。

9.如权利要求1所述的应用，其特征是所述组合物混合于口香糖、薄荷锭中。

10.如权利要求1所述的应用，其特征是所述组合物混合于口腔清新剂中。

11.如权利要求1所述的应用，其特征是所述组合物能进一步与药学上可接受的赋形剂结合。

12.如权利要求1所述的应用，其特征是所述组合物能进一步加入一般食品或药物之中。

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