CN106231923A - 类囊体降低对可口食物欲望的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及分离的类囊体或其部分的用途,所述用途用于降低对可口食物的欲望、用于降低对吸烟的需求和/或用于降低对酒精饮料的欲望。推测欲望和需求通过影响不同刺激的奖赏值而降低。
Description
技术领域
本发明涉及影响对多种类型的食物特别是可口食物的欲望,以及与此类食物的摄入相关的奖赏值的组合物的领域。此外,本发明涉及影响对尼古丁的需求和与之相关的奖赏值的组合物。
背景技术
当今全世界超过十亿成年人超重,即体重指数(body mass index,BMI)在25-30kg/m2之间,以及超过3亿人肥胖,BMI>30kg/m2。此外,超重和肥胖与高血脂、动脉粥样硬化、心血管疾病以及2型糖尿病强烈相关。
现在在西方社会中,我们对可口食物(例如甜的食物,或者通常脂肪丰富、血糖指数高的食物)的可获得性增加。这可能促进了过去几十年观察到的全球性的体重增长。世界范围的肥胖流行已提示对过度进食背后的机制的理解,以及对肥胖和进食异常的有效治疗的开发。超出代谢需要的进食是增重中的关键事件。可口食物,即甜和/或脂肪食物,通过增加奖赏值和通过增加进食的愉悦而强化其摄入。高风险进食事件是含有可口食物,例如富含脂肪和糖的食物的事件。为了帮助遭受超重和肥胖的个体,寻找强化饱足信号(satietysignal)和抑制饥饿信号的方法是关键的。
此外,人类食物消耗的增长率似乎由愉悦驱使,而不是仅仅由对卡路里的实际需求驱使(Lowe等人,Physiology&Behavior Vol.91(4),2007,p.432–439)。已认识到饥饿和进食不仅受到与能量或营养不足相关的反馈(自稳过程(homeostatic processes))控制,也受到进食的预期愉悦(享乐型饥饿(hedonic hunger))控制。各种食材具有不同的享乐等级。可口食物特别是糖的享乐等级高,即提供特别强烈的奖赏预期。此外,享乐型饥饿(在不存在能量不足的情况下进食以获得愉悦的食欲驱动力)与过度进食和对进食的失控有关(Witt等人,International Journal of Eating Disorders Vol.47(3),p.273–280,2014)。享乐型饥饿偏好富含糖和脂肪的能量密集型可口食物,例如小吃、糕点、甜点、烘焙甜品和甜食(sweets)-即通常在正餐之间摄取且妇女偏爱的食物(Drewnowski,A.(1997).Taste preferences and food intake.Annual review of nutrition,17,237–253)。
因此,除了饱足信号增加和自稳型饥饿信号抑制以外的其它因素也可能与治疗或预防肥胖相关。超重个体常常对可口食物、特别是糖的欲望增加(Ettinger L,Duizer L,Caldwell T:Body fat,sweetness sensitivity,and preference:determining therelationship.Can J Diet Pract Res 2012,73(1):45-48)和脂肪(Blundell JE,MacDiarmid JI:Fat as a risk factor for overconsumption:satiation,satiety,andpatterns of eating.J Am Diet Assoc 1997,97(7Suppl):S63-69)。
因此肥胖的有效治疗和预防应当优选包括压抑对可口食物特别是甜的食物的欲望的策略。将进一步关注抑制享乐型饥饿和对此类食物的希望(wanting),从而减少过度进食和帮助获得更健康的进食行为。此外,控制食物奖赏行为的策略也是受关注的,如Dickson等人所认识到的(J Neurosci 2012,32(14):4812-4820)。然而现在此类策略还不可得。
发明内容
本发明寻求减轻、缓和、避免或消除本领域中上述至少一种、例如一种或多种不足。
根据本发明的一个方面,相应地提供分离的类囊体(thylakoid)或其部分的用途,从而在人类中降低对可口食物的欲望。
此外,根据本发明的一个方面,提供分离的类囊体或其部分的用途,
-从而减少对吸烟的需求;
-从而减少对尼古丁的需求;
-从而帮助试图戒除使用尼古丁产品,例如戒烟的人群;
-用于吸烟中止;和/或
-从而减少尼古丁产品的使用。
此外,根据本发明的一个方面,提供分离的类囊体或其部分的用途,
-从而减少对酒精饮料的欲望;
-用于降低酒精饮料的消耗;和/或
-从而减少酒精滥用。
分离的类囊体或其部分的此类用途将包括摄入分离的类囊体或其部分以提供效果。通常摄入将提供GLP-1(glucagon-like peptide-1,胰高血糖素样肽-1)的释放增加,由此降低影响大脑中奖赏中枢的可口食物、尼古丁和/或酒精的奖赏效应。
本发明进一步的有利特征在从属权利要求中定义。此外,本发明的有利特征在本文公开的实施方案中说明。
附图说明
本发明可行的这些和其它方面、特征和优点将从下文的本发明的实施方案的记述、参照所附的附图而变得明显并得到解释,其中:
图1为图表,分别示出在人体中有和没有在先的类囊体给予的情况下的饥饿感觉(A)、对甜的食物-糖果的欲望(B)、对也含有淀粉的咸味和脂肪食物-薯条的欲望(C)和对甜和脂肪食物-巧克力的欲望(D);和
图2为示出有和没有类囊体的情况下在含有甜物的早餐期间胰高血糖素样肽1(GLP-1)的释放的图表。
图3A-C为示出有和没有类囊体的情况下膳食干预期间饥饿感觉体验的图表。
图4A-C为示出有和没有类囊体的情况下膳食干预期间对巧克力的欲望的图表。
图5A-C为示出有和没有类囊体的情况下膳食干预期间对碳水化合物小吃的欲望的图表。
图6A-D为示出摄入类囊体或安慰剂后的饥饿和饱足的图表。
图7A-H为图表,示出处理(类囊体)和安慰剂条件(对照)相比,希望咸、甜、甜和脂肪(sweet-and-fat)小吃和所有小吃组合的VAS评分。
图8示出来自下午小吃自助餐的卡路里摄入。
图9示出有和没有用类囊体处理的情况下,消耗之后对特定食品的喜爱。
图10A-B示出类囊体对希望可口食物的处理效果与情绪性进食行为得分之间的相关性。
具体实施方式
为了使本领域技术人员能够实施本发明,本发明的若干实施方案将参照附图在下文中更详细地描述。然而本发明可按很多不同的形式实施,并且不应解释为限于本文举出的实施方案;而是提供这些实施方案使得此公开将充分和完整,并将向本领域技术人员完全传达本发明的范围。这些实施方案不限制本发明,而是本发明仅受所附的专利权利要求限制。此外,在附图中说明的特定实施方案的详细描述中使用的术语不意图限制本发明。
本发明基于类囊体或其部分在人类中的用途,其中所述用途包括分离的类囊体或其部分的摄入。
类囊体是植物的叶绿体中和蓝细菌中存在的膜约束的(membrane-bound)区室。类囊体是光合作用的光依赖反应的场所。在光合作用的非光依赖反应(即卡尔文-本森循环)中(其需要光合作用的光依赖反应中形成的NADPH),二氧化碳被转化为三碳糖,三碳糖随后结合形成蔗糖和淀粉。此过程常表示碳固定。类囊体由环绕类囊体腔的类囊体膜构成。在叶绿体中,类囊体通常集合成称为基粒(grana)的盘状堆叠。
类囊体可从绿叶的叶绿体和蓝细菌中提取。其内容物包括蛋白质、脂质和色素(例如叶绿素和类胡萝卜素)。分离和富集类囊体的一般原则已在别处记述(参见PCT/SE2006/000676、WO/SE2009/000327以及Emek,SC,Szilagyi A,Akerlund H E等人,(2010)A largescale method for preparation of plant thylakoids for use in body weightregulation Prepar biochem&biotech 40(1),13–27)。简言之,机械地破坏绿叶的细胞。然后通过过滤将类囊体与细胞壁和其它大细胞碎片分离。然后通过在pH 4.7下沉淀从滤液中收集类囊体,并通过反复离心在水中洗涤。
此前已发现分离的类囊体在若干研究中在人类和动物受试者中增加饱足、减少自稳型饥饿信号并促进体重减轻(其中参见WO 2006/132586和WO 2010/008333)。由于本身即为食物,类囊体或其部分可按很多不同方式包含在食品中。它们也可如此前WO 2006/7132586中所描述地包含在不同类型的药物配方中。
本领域当前相信(参见Stenblom等人,Supplementation by thylakoids to ahigh carbohydrate meal decreases feelings of hunger,elevates CCK levels andprevents postprandial hypoglycaemia in overweight women Appetite 68(2013)118–123)分离的类囊体延缓脂解作用并提供降低的自稳型饥饿(即禁食时对进食的欲望)。已发现摄入分离的类囊体通过升高缩胆囊素(CCK)水平(饱足)和降低胃饥饿素(ghrelin)水平(饥饿)而影响自稳型饥饿信号。
虽然绿叶天然地含有类囊体,摄入新鲜绿叶并不提供与摄入分离的类囊体或其部分相同的效果。包含类囊体的植物细胞被非常厚且坚韧的细胞壁环绕。即使我们食用蔬菜时咀嚼良多也不会破坏很多细胞。为了溶解细胞壁,需要例如纤维素酶和果胶酶等特殊的酶。然而这些酶在人的胃或小肠中不存在。除非从绿叶中提取,否则类囊体在到达其中细胞壁被细菌分解的大肠之前不会在小肠中发挥任何效果。
分离的类囊体对脂解活性(lipolytic activity)以及对胰岛素敏感性和各种分子吸收的效果已在本领域中报道(参见例如WO 2006/7132586、WO 2010/008333和WO 2012/113918)。此外,完整的类囊体作为自由基清除剂的效果也已在本领域中报道(参考WO2003/004042)。然而类囊体进一步的效果仍未被探究。
如上文所解释的,肥胖的一个重要方面是肥胖个体倾向于不仅过度进食,而且优先选择可口食物,例如血糖指数高(即60以上)、通常脂肪含量高的食物,和含有甜味剂或糖的甜味食物,以及甜和脂肪食物,而不选择健康食物。快餐,例如披萨、汉堡包、薯条、软饮料等是增加过度进食风险的可口食物的典型实例。对可口食物的优先选择与食物的奖赏值关联;由此过度进食可能受获得愉悦的希望驱使。
当今社会可获得的食物的可口性逐渐削弱了正常的饱足信号,诱发不依赖于能量需求的能量摄入(参见Erlanson-Albertsson C:How palatable food disrupts appetiteregulation.Basic Clin Pharmacol Toxicol 2005,97(2):61-73)。此外,甜和脂肪食物均动员奖赏系统中的阿片类和多巴胺,建立对此类食物的欲望甚至对此类食物的渴望的通路(参见Kelley AE,Bakshi VP,Haber SN,Steininger TL,Will MJ,Zhang M:Opioidmodulation of taste hedonics within the ventral striatum.Physiol Behav 2002,76(3):365-377)。
因此,为了使减重计划成功,降低对可口食物的欲望极度重要。此外,不仅肥胖受试者应会利用提供对可口食物欲望降低的组合物,而且正常体重受试者也会。降低享乐型饥饿可帮助获得更健康的进食行为。类似地,降低可口食物的奖赏效应也可帮助获得更健康的进食行为。在经历对可口食物的渴望增加的个体中减弱享乐驱动力是避免过度进食和增重的途径。
摄入血糖指数高或甜味的食物以及摄入脂肪含量高的食物与肥胖、包括冠状动脉疾病的心血管疾病和糖尿病的风险升高相关,如若干研究所示(Johnson RK,Appel LJ,Brands M,Howard BV,Lefevre M,Lustig RH,Sacks F,Steffen LM,Wylie-Rosett J:Dietary sugars intake and cardiovascular health:a scientific statement fromthe American Heart Association.Circulation 2009,120(11):1011-1020,和JohnsonRJ,Segal MS,Sautin Y,Nakagawa T,Feig DI,Kang DH,Gersch MS,Benner S,Sanchez-Lozada LG:Potential role of sugar (fructose)in the epidemic of hypertension,obesity and the metabolic syndrome,diabetes,kidney disease,and cardiovasculardisease.Am J Clin Nutr 2007,86(4):899-906)。特别地,含有果糖的糖类可使人对此类疾病易感。
对可口食物的偏好的重要因素是与之关联的奖赏值。进食可口食物导致在过度进食中有重要作用的奖赏因子的释放。如果降低这些奖赏因子的效果,会降低对可口食物的偏好和过度进食。
此外,不仅食物,而且例如酒精和尼古丁等其它刺激物也由相同的奖赏因子驱使。鉴于试图中止吸烟的人常常增重,不仅降低可口食物的奖赏值,而且降低尼古丁的奖赏值将特别有益。与摄入可口食物类似,吸烟与心血管疾病的风险升高相关。
本发明已出乎意料地揭示,摄入分离的类囊体不仅影响脂解活性并由此影响食欲(自稳型饥饿-图1A),而且重要的是降低对可口食物的欲望(享乐型饥饿-其中图1B-D)。有趣地,此发现与食欲的压抑无关,因为效果也在饥饿个体中存在(参见图1A对图1B-D)。换言之,对可口食物的欲望降低不仅在进食后即刻观察到,也在存在饥饿时的至少6小时的餐后晚期观察到。然而,发现已给予含有分离的类囊体的组合物的饥饿个体对例如糖果、巧克力和薯条等可口食物的欲望的倾向少得多。甚至在没有类囊体的第二餐(午餐)后(参见图1B-D)也维持此效果,即使自稳型饥饿没有变化(参见图1A)。
同样,在对自稳型饥饿的效果较不明显的膳食干预的受试者中(参见图3A-C),给予分离的类囊体,获得享乐型饥饿降低(参见图4和5)。此外,分离的类囊体的给予甚至会导致甜的喜爱减少(参见图9)。
不受任何理论限制,降低对可口食物的欲望的效果相信与名为胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的激素的释放增加的此前未知的效果相关,GLP-1为特定L-细胞在远端小肠产生的激素(Holst JJ:The physiology of glucagon-like peptide 1.Physiol Rev 2007,87(4):1409-1439))。如下文所示,分离的类囊体的经口摄入增加GLP-1的释放。
有趣的是,此激素不仅涉及血糖调节,也被示出减少食物的奖赏值(Dickson SL,Shirazi RH,Hansson C,Bergquist F,Nissbrandt H,Skibicka KP:The glucagon-likepeptide 1(GLP-1)analogue,exendin-4,decreases the rewarding value of food:anew role for mesolimbic GLP-1receptors.J Neurosci 2012,32(14):4812-4820)。由此可能的是,降低对可口食物欲望的效果与GLP-1的释放增加相联系。然而,尚未揭示的其它因素也可能对本文公开的新发现是重要的。
此发现进一步有趣的是,鉴于GLP-1的释放不仅影响食物的奖赏值,也影响包括酒精在内的其它刺激物的奖赏值(Egecioglu E,Steensland P,Fredriksson I,Feltmann K,Engel JA,Jerlhag E:The glucagon-like peptide 1 analogue Exendin-4attenuatesalcohol mediated behaviors in rodents.Psychoneuroendocrinology 2013,38(8):1259-1270;和Shirazi RH,Dickson SL,Skibicka KP:Gut peptide GLP-1and itsanalogue,Exendin-4,decrease alcohol intake and reward.PLoS One 2013,8(4):e61965)。相信该机理与大脑的奖赏中枢中多巴胺的压抑(suppression)相关。
此外,对香烟和其它烟草产品的需求也与大脑奖赏中枢中尼古丁释放多巴胺相关。尼古丁的刺激作用通过GLP-1的释放而减弱,如Egecioglu等人所说明的(参见“TheGlucagon-Like Peptide 1Analogue Exendin-4Attenuates the Nicotine-InducedLocomotor Stimulation,Accumbal Dopamine Release,Conditioned Place Preferenceas well as the Expression of Locomotor Sensitization in Mice”,PloS One 201318:8e 77 284)。
出乎意料地发现摄取分离的类囊体的吸烟者实际上体验较少的对吸烟的需求(解释为对尼古丁的需求减少),由此他们每日吸较低数量的香烟。这可能是通过类囊体而使GLP-1释放增加的效果。鉴于试图戒烟的吸烟者常常增重,当试图戒烟的个体摄取分离的类囊体时,此前已知的通过摄入分离的类囊体而提供的压抑食欲的效果提供了额外的优点。
与此前依赖于肠中类囊体发挥的局部效果的类囊体用途形成对比,本用途被认为与影响大脑的奖赏中枢的由类囊体发挥的中枢效果相关。此外,此效果也与此前报道的CCK水平增加//胃饥饿素水平减少不同。
本发明的一个实施方案因此涉及分离的类囊体或其部分用于在人类中压抑、减低、减少、降低、变少和/或纾缓对可口食物的欲望的用途。此用途可为非治疗性的。此外,此用途可为治疗性的。用途包括分离的类囊体或其部分的摄入。虽然摄取分离的类囊体的人将会较不倾向于相比于更健康的可选物而选择可口食物,该人将不会突然完全不喜欢可口食物。对可口食物的欲望降低将辅助肥胖的治疗和预防,因为摄取分离的类囊体的人将较少倾向于过度进食。此外,对可口食物的欲望降低可在成功参与减重计划后辅助维持体重。
可口食物的实例包括甜食,糕点例如甜甜圈、羊角面包、酥饼曲奇和薄饼,糖果,薯条,炸薯条,软饮料例如可口可乐、芬达、雪碧、百事可乐,和能量饮料(例如红牛),巧克力例如牛奶巧克力和巧克力棒,快餐例如披萨和汉堡包,和冰淇淋。此外,可口食物通常可具有下列特征的一种或多种:
-血糖指数至少60,例如至少70;
-高糖含量,对于饮料为至少5重量%,和对于其它食物,至少为20重量%,例如至少50重量%;
-包含甜味剂,例如选自由甜菊糖(stevia)、阿斯巴甜、三氯蔗糖、纽甜、乙酰磺胺酸钾、环磺酸盐(cyclamate)、阿力甜、罗汉果苷、甘素(dulcin)、甜素(glucin)、新橙皮苷二氢查耳酮、糖精、巴西甜蛋白(brazzein)、仙茅甜蛋白(curculin)、甘草甜素(glycyrrhizin)、马比林甜蛋白(mabilin)、应乐果甜蛋白(monellin),喷塔汀(pentadin)和索马甜(thaumatin)组成的组的甜味剂;特别是选自由甜菊糖、阿斯巴甜、三氯蔗糖、纽甜、乙酰氨基磺酸钾和糖精组成的组的甜味剂;
-至少20重量%的高脂含量和至少20重量%的高糖含量;
-至少20重量%的高脂含量和至少50的血糖指数;和
-至少20重量%的高脂含量和至少1.0重量%的盐含量(NaCl)。
通常可口食物具有高的血糖指数和/或味甜。不具有高GI的甜的食物,例如含有果糖或甜味剂的食物也可引发奖赏效应并因此牵涉过度进食。如技术人员已知的,低糖软饮料(diet soft drinks)的摄入也提供对过度进食间接作出贡献的奖赏效应。低糖饮料的确导致多巴胺释放,表明它们也具有可导致过度进食的奖赏效应。此外,具有至少50的中等GI和高脂含量的食物,例如炸薯条,将引发奖赏效应并由此牵涉过度进食。甚至具有高脂含量的咸味小吃,例如咸坚果,也引发奖赏效应。
根据实施方案,以上述在此规定的量存在于可口食物中的糖选自由单糖:葡萄糖(也称为右旋糖)、果糖和半乳糖,以及二糖:蔗糖、麦芽糖和乳糖,及其混合物组成的组。
另一实施方案涉及分离的类囊体或其部分用于减少例如可口食物等食物的奖赏效应的用途。此用途可为非治疗性的。此外,此用途可为治疗性的。可口食物的实例已在上文提供。
本发明已描述为涉及分离的类囊体或其部分用于压抑、减低、减少、降低、变少和/或纾缓对可口食物的欲望的用途,与此同时根据另一实施方案,本发明也涉及压抑、减低、减少、降低、变少和/或纾缓对可口食物的欲望的方法。此方法包含向欲影响其对可口食物欲望的受试者例如人类给予分离的类囊体或其部分的步骤。
如同已经描述的,类囊体或其部分的摄入已示出在人类中降低对吸烟的需求或欲望;可能是通过影响大脑的奖赏中枢。本发明另一实施方案因此涉及分离的类囊体或其部分用于在人类中压抑、减低、减少、降低、变少和/或纾缓对吸烟的欲望或需求以及对尼古丁的欲望或需求的用途。此外,分离的类囊体或其部分可用于帮助试图戒除使用尼古丁的人们,例如戒烟。分离的类囊体或其部分可相应地用于吸烟中止。尼古丁产品不限于吸食烟草,也包括其它产品例如鼻烟(snuff)和尼古丁替代品。此外,也有人们对尼古丁替代品,例如尼古丁贴片(其经皮给予尼古丁)和尼古丁口香糖(其经口给予尼古丁)成瘾的增长的趋势。对使用此类产品的欲望或需求也可通过使用分离的类囊体或其部分而压抑、减低、减少、降低、变少和/或纾缓。此外,分离的类囊体或其部分可用于降低尼古丁产品的使用,例如减少吸烟或减少鼻吸。与尼古丁或含尼古丁的产品相关的用途可为非治疗性的。此外,此用途可为治疗性的。
分离的类囊体或其部分也可用于压抑、减低、减少、降低、变少和/或纾缓对吸烟的欲望或需求以及对尼古丁的欲望或需求的方法。在此方法中,向受试者给予分离的类囊体或其部分,由此影响对吸烟的欲望或需求,以及对尼古丁的欲望或需求。类似地,分离的类囊体或其部分可用于帮助试图戒除使用尼古丁的人们,例如戒烟的方法。在此方法中,向受试者给予分离的类囊体或其部分。此外,分离的类囊体或其部分可用于吸烟中止方法,包括分离的类囊体或其部分的给予。
另一实施方案涉及分离的类囊体或其部分用于减少尼古丁,例如烟草产品,例如香烟和鼻烟的奖赏效应的用途。此用途可为非治疗性的。此外,此用途可为治疗性的。
不仅可口食物和尼古丁影响大脑的奖赏中枢,其它刺激物例如酒精即乙醇也是如此。本发明的另一实施方案因此涉及分离的类囊体或其部分用于在人类中压抑、减低、减少、降低、变少和/或纾缓对例如啤酒、葡萄酒、气泡酒、苹果酒、伏特加、威士忌、杜松子酒、龙舌兰酒、干邑、白兰地、朗姆酒、阿夸维特(aquavit)等酒精饮料的欲望的用途。这对减低酒精饮料(通常以酒精为代表)的消耗是有用的。此外,分离的类囊体或其部分可用于压抑、限制、减低、减少、降低、和/或纾缓人类中的酒精滥用。它们可由此对于降低受试者变成酗酒者的风险有用。另一实施方案涉及分离的类囊体或其部分用于减少酒精饮料的奖赏效应的用途。
本发明的另一实施方案由此涉及压抑、减低、减少、降低、变少和/或纾缓对例如啤酒、葡萄酒、气泡酒、苹果酒、伏特加、威士忌、杜松子酒、龙舌兰酒、干邑、白兰地、朗姆酒、阿夸维特等酒精饮料的欲望的方法。在此方法中,向受试者给予分离的类囊体或其部分,由此影响对酒精饮料的欲望。此外,分离的类囊体或其部分可用于压抑、减低、减少、降低、和/或纾缓酒精滥用的方法。分离的类囊体或其部分也可用于减少酒精饮料的奖赏效应的方法。涉及酒精饮料和酒精滥用的用途可为非治疗性的。此外,此用途可为治疗性的。
如上文所解释的,分离的类囊体或其部分的摄入对包括可口食物、尼古丁和酒精等各种刺激的欲望的效果,被认为与GLP-1(胰高血糖素样肽-1)的释放增加相关联。由此,进一步的实施方案涉及分离的类囊体或其部分用于在人类中释放GLP-1(胰高血糖素样肽-1)的用途,和涉及包括给予分离的类囊体或其部分而在人类中释放GLP-1(胰高血糖素样肽-1)的方法。此用途可为非治疗性的。此外,此用途可为治疗性的。此外,已知GLP-1降低包括可口食物、尼古丁和酒精等各种刺激在大脑的奖赏中枢中的奖赏效应。分离的类囊体或其部分因此也可用于减少影响大脑中的奖赏中枢的刺激物的奖赏效应。类似地,分离的类囊体或其部分可用于降低影响大脑中奖赏中枢的刺激物的奖赏效应的方法。
类囊体可从植物以及从蓝细菌中分离。通常类囊体从绿叶或绿藻中富集。类囊体可源自任何光合作用植物例如苜蓿、油菜、甜菜、蒲公英、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、玉米、烟草、向日葵、藜属(Chenopodium)、滨藜属(Atriplex)、菠菜、莙达菜(mangold)、藜麦(quinoa)、羽衣甘蓝、甜菜和草类的叶。优选地,类囊体从菠菜分离和富集。除了其他的类囊体部分,分离的类囊体包含类囊体膜或其部分。分离类囊体的方法已在本文的上文中讨论。
类囊体也可以这样的方式分离和浓缩,使得分离的类囊体的叶绿素含量为每g分离的类囊体约8mg至150mg,例如10-100mg叶绿素。在一些实施方案中,分离的类囊体的叶绿素a/b之比为约2.0至4.0,优选约2.6至3.4,并最优选约2.9至3.4。此外,分离的类囊体中的蛋白质:叶绿素之比可为约3.0至约10.0,优选约2.0至5.0、3.0至5.0、或6.0至8.0。
通常经口给予类囊体以提供其效果。虽然它们可直接给予,它们通常作为例如营养品组合物,例如食品或膳食补充剂,或药用组合物例如药物等组合物的组成部分(integral part)而给予。
如果作为药物给予,药物除了分离的类囊体以外也包括至少一种药学上可接受的辅料,例如载体、稀释剂和/或稳定剂。在此语境中,“药学上可接受”涉及在使用的剂量和浓度下在给药的受试者中不引起任何不希望效果的辅料。此类药学上可接受的辅料在本领域是已知的。根据一个实施方案,如本文公开的药物也可包含其它药学上可接受的辅料,例如防腐剂、抗氧化剂、着色剂等。
根据另一实施方案,分离的类囊体作为食品添加剂向食物中添加,以提供具有如本文所述的影响大脑中的奖赏中枢的能力的食物。与分离的类囊体或其部分类似,此类食物可发现治疗性和非治疗性用途。
根据另一实施方案,分离的类囊体作为成分向膳食补充剂添加,以提供具有如本文所述的影响大脑中的奖赏中枢的能力的膳食补充剂。与分离的类囊体相似,此类膳食补充剂可发现治疗性和非治疗性用途。膳食补充剂可例如为果汁剂(shoot),例如蓝莓剂,或蔬菜汤或剂,例如土豆汤、花椰菜汤、土豆汤或西红柿汤,其中添加了分离的类囊体或其部分。膳食补充剂中的成分为含有对健康提供进一步用处的抗氧化剂、维生素、纤维。
在分离的类囊体作为组合物的组成部分而给予的实施方案中,组合物中类囊体的含量可相当于每g组合物(干重)中1mg至100mg叶绿素的叶绿素含量。优选地,组合物包含每克(干重)约8至约80mg的叶绿素,优选每克(干重)约10至约50mg,例如约10mg至30mg、20mg至40mg、或30mg至40mg的叶绿素含量。此外,组合物的碳水化合物含量可为每100g组合物(干重)约5至约50g碳水化合物含量,优选每100g约10g至40g,例如每100g(干重)15g至30g、20g至30g、或30g至40g。同样,组合物的蛋白质含量可为每100g组合物(干重)约10至约60g蛋白质,优选每100g为约10g至40g,优选每100g(干重)15g至30g、20g至30g、或30g至40g。
根据一个实施方案,组合物为含有包含类囊体的生理可耐受的水包油乳剂的经口药物或营养组合物。在此类乳剂中,类囊体的量可为20至30重量%,例如约25重量%。此外,油含量可为20至30重量%,例如约25重量%。使用的油可为食品级的植物油,例如可食用的菜籽油(也称为芥花子油)、橄榄油、葵花油等。
由于组合物可按各种形式给予,将要给予的类囊体的每日剂量可变化。作为指导性原则,将要给予的组合物的量可按这样的方式选择:剂量相当于哺乳动物每kg体重2.4mg至240mg类囊体的每日剂量。
此外,本发明人最近出乎意料地发现(参见PCT/EP2013/068656)类囊体调节肠道菌群并由此可作为益生元剂(prebiotic agent)起作用。根据一个实施方案,如本文公开的组合物因此进一步包含益生菌。组合物中将要包含的益生菌可为双歧杆菌属(Bifidobacterium),例如婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis),或乳杆菌属(Lactobacillus),例如植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。此外,例如反式低聚半乳糖、菊粉(inulin)、低聚果糖(FOS)、乳果糖、甘露低聚糖(MOS)等益生元剂也可包含在组合物中。
没有进一步阐释,认为本领域技术人员可使用前文的描述,将本发明利用至其最完全程度。因此上述优选的具体实施方案应解释为仅为示例性的,并且不以任何方式对本公开内容进行限制。
虽然上文已参照具体的实施方案描述了本发明,不意图将本发明限定至本文举出的具体形式,而是本发明仅受所附的权利要求限定,并且在所附的权利要求的范围之内除上述具体实施方案以外的其它实施方案,例如不同于上述方案的方案,也同样是可能的。
在权利要求中,术语“包含/包括”并不排除其它元素或步骤的存在。此外,虽然不同的权利要求中可包括单个的特征,这些特征可有利地结合,且不同权利要求中的包含并不暗示特征的组合不可行和/或不利。
此外,单数引用不排除复数。术语“一个(种)”、“一”、“第一”、“第二”等不排除多个。
实施例
下列实施例仅为示例,并且不应以任何方式解释为限制本发明的范围,而是本发明仅受所附的权利要求限定。
实施例1–对可口食物的欲望减少
本研究:
通过本地社区(瑞典隆德)的海报和广告招募38名妇女。标准是年龄为40-65的妇女,BMI在25-33之间,不吸烟且健康;排除标准包括糖尿病、食物过敏、肠易激综合征、食物不耐和近期抗生素使用。受试者不是素食者,并且在最近三个月中没有进行节食。包括的38名妇女的基线特征可见于表1。通过随机选择创建两个试验组。瑞典隆德的伦理委员会批准了本研究。
表1–38名妇女在膳食干预研究之前的基线特征
BMI=体重指数,定义为体重(kg)和体长(米)的平方之间的关系
FFM=非脂肪质量(Fat Free Mass);包括骨、肌肉和器官。
受试者以禁食状态(即整夜无食物或饮料摄入)在研究的早晨7点到达诊所。插入静脉导管供全天反复的血液采样。给予受试者660kcal(60%碳水化合物,28%脂肪和12%蛋白质)的等热量早餐(表2)。
表2–以kcal说明的早餐(第一餐)的各成分热量含量
在她们的早餐之前约5分钟,摄取有或没有5g类囊体补充的50g蓝莓剂。告知受试者在15分钟内食用所有给予的食物。正餐之间不允许饮食。6小时后给予受试者由披萨(Grandiosa Gudfadern,Procordia AB,Sweden)、水和咖啡/茶组成的第二餐,并指示饮食直至满足。第二餐在小隔间中向各受试者逐个提供。给予参与者由三文鱼"pytt ipanna"(Laxpytt,Findus AB,Bjuv,Sweden)组成的第三餐正餐(晚餐),晚上在家中消耗自由选择的量。
血样在早餐前(时间点:0分钟)和此后15、30、45、60、90、120、180、240、300和360分钟时取得。午餐在360分钟的时间点的血液取样后给予。对包括GLP-1在内的若干组分进行分析。
在全天与血样取样相同的时间点回答关于饥饿感觉、饱足感觉和对不同食物欲望的调查问卷(设计为视觉模拟量表,VAS)。
调查问卷也在第二和第三餐之间在午餐后60、120、180和240分钟的时间点回答。
在本膳食研究中使用的类囊体粉由Future-ceuticals,Chicago,IL,USA生产为Appethyl。5克粉末与50g蓝莓汁( Orginal,Procordia AB,Sweden)和2g菜籽油(Zeta rapsolja,DI LUCA&DI LUCA AB,Stockholm,Sweden)混合。对照由50g蓝莓汁和2g菜籽油组成。
血浆GLP-1分析用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(Cat.#EGLP-35K;MilliporeCorp.Billerica,MA,USA)进行。该试剂盒仅分析人血浆中生物活性形式的GLP-1:GLP-1(7-36酰胺)和GLP1(7-37酰胺)。激发波长355nm和发射波长460nm的荧光平板读取仪(FLUOstarOPTIMA 413-101;BMG LABTECH GmbH,Ortenberg,Germany)用于读取样品。根据制造数据,试验间变异系数(CV)在1-13%之间,和试验内变异系数在6-9%之间。
视觉模拟量表(VAS)调查问卷用于评估受试者的饥饿感觉、饱足感觉和对糖、糖/脂肪和盐/脂肪的渴望。在纸上对受试者提问,并告知通过在水平线性量表上写出垂直线来评估其感觉和想法。量表为100mm长,并由感官描述锚定(表3)。
表3 VAS调查问卷中具有锚定短语和得分的问题
此饮食法(即每日摄入5g类囊体)持续3个月。
结果
与类囊体的摄入一起观察到对可口食物欲望的显著降低(参见图1B-D)。对甜食(美味甜食)、对脂肪和甜(巧克力)以及对脂肪和盐(薯条)发生欲望减少。由此得出结论,类囊体能压抑对甜、盐和脂肪的欲望或渴求。在早晨的类囊体剂的消耗后,这种渴求的压抑持续整天。此外,可口食物的喜爱在类囊体处理3个月后进一步减少。
重要地,对饥饿的效果不明显得多(参见图1A)。尽管饥饿,妇女对例如糖果、巧克力或薯条等可口食物的渴望显著较少。因此本发明的效果显然无关于此前的发现:富集、分离的类囊体的摄入可压抑食欲,归结于脂解活性减少(参见WO 2006/132586),并延迟例如葡萄糖等分子的吸收(参见WO 2012/113918)。
不受任何理论限制,似乎机理可能与胰高血糖素样肽(GLP-1)的释放相关,相比于对照组,GLP-1由类囊体显著释放(图2)。类囊体由此导致调节奖赏相关进食行为的激素以有助于预防和治疗肥胖的方向的内源释放。特别地,摄取类囊体的受试者将更倾向选择健康餐食,因为对可口食物的欲望显著降低。此外,过度进食的风险降低。这将带来与肥胖和胰岛素耐受相关的2型糖尿病和心血管疾病的风险降低。
实施例2–对尼古丁的需求减少
众所周知,当参与减重计划时吸烟者通常体验对吸烟的欲望增加,主要是因为尼古丁减低食欲并降低对食物的味觉。出乎意料地,某些已规律服用类囊体剂的吸烟者自发地报告对尼古丁的需求减低。通常,类囊体剂作为减重计划的部分而提供。
由于疏忽,一名吸烟者被包括在实施例1的研究中。已在过去40年中每日吸烟约17支的该妇女报告参与此研究时对吸烟的欲望显著降低。研究结束时她报告对吸烟的欲望又增加了。
另一妇女,通常每日吸烟约23支,报告当她开始规律服用类囊体剂时,她的香烟消耗降低至每日约15支,此外,她报告对吸烟的欲望降低,她相信这是为什么她突然较少吸烟的解释。
一男子,通常每日吸烟15至20支,报告当他开始规律地早晨服用类囊体剂后10天,他的香烟消耗降低至每日小于10支–通常每日约9支。
实施例3–膳食干预期间对可口食物的欲望减少
实施例1中观察到的效果在没有热量限制的情况下取得。然而多数减重计划基于热量限制。由此也研究了在减重研究中通常使用的热量限制期间类囊体对享乐型饥饿的效果。
受试者
通过当地报纸的广告招募当前或最近没有节食的48名中年(40-65岁)非吸烟超重妇女供筛选。排除标准为糖尿病、炎性肠病、甲状腺疾病、食物过敏和BMI超过33。招收30名个体作为研究的参加者。所有30名招收的参加者完成了研究。通过日志、访谈和计步器的每日使用来测定依从性。四名参与者(一名来自对照组,三名来自类囊体组)因为对节食和锻炼规则的不依从而从数据分析中排除。
包括的26名受试者的基线特征列于表1。对照组中的一名参与者由于没有出席而没有包括在饥饿、饱足和对特定食品的欲望的主观评分分析中。
表1.研究中包括的26名妇女的基线特征(平均值±标准差)。组间没有显著差异。
向参与者详细解释研究的过程、目标和要求,并且在筛选前和研究开始前签署书面知情同意书。研究受隆德大学伦理委员会批准,并根据赫尔辛基宣言进行。研究结束后,所有参与者收到2000瑞典克朗(应税)的补偿。
实验研究设计
研究进行并设计为单盲、随机、节食和锻炼干预研究,为期2个月。参与者随机分组,以确保基于体重、BMI、血糖、胰岛素、三酰基甘油酯(TAG)和胆固醇(总胆固醇和LDL)的组内和组间的正态分布。一组通过蓝莓饮料中的类囊体每日接受补充,而另一组充当对照,每日接受没有类囊体的蓝莓饮料。
每两周在早晨的相同时间参与者到诊所以测量体重、机体组成、腰围和臀围,并采集血样。为了对所有的测量优化条件,指示参与者在各试验日前晚上吃标准餐食,并在晚上8点以后避免进一步摄入食物或液体。
参与者在研究期间有总共5次单独的计划内约见。在第一天和最后一天(天数1和56),在人体测量和血样采集后,提供由有或没有类囊体的蓝莓饮料、苹果酸奶、早餐谷物、坚果以及咖啡或茶组成的等热量早餐(2114kJ/505kcal)(表2)。240分钟后,给予由冰冻泰式咖喱餐、豆类沙拉和香蕉组成的等热量外带午餐(2593kJ/630kcal)。在第1和56天全天的给定时间点填写测量饥饿、饱足和对特定食物的欲望的主观参数的VAS调查问卷,而仅在早餐后的最初240分钟期间采集血样。
类囊体
本研究中用的类囊体用如(Emek SC,等人,A large scale method forpreparation of plant thylakoids for use in body weight regulation,PrepBiochem Biotechnol 2010,40(1):13-27)中描述的pH法从幼菠菜叶制备。干燥类囊体浆料以获得类囊体粉末,由Swepharm AB(Sandby,Sweden)制备。100g类囊体包含41.1g蛋白质、14.5g脂肪、36.8g碳水化合物、3.5g盐,以及色素例如3640mg叶绿素、28mg叶黄素、730ug玉米黄素、4760ugβ-胡萝卜素、21ug维生素A、1330ug维生素K、6.07mg维生素E和166ug叶酸。
类囊体组接受与2.8g菜籽油(Zeta,Di Luca&Di Luca AB,Stockholm,Sweden)混合的5.6g类囊体粉末和50g蓝莓汤(original,Procordia Food AB,Sweden)。对照组接受与50g蓝莓汤混合的2.8g菜籽油。有或没有类囊体的蓝莓饮料各自含有209kJ/50kcal对188kJ/45kcal。饮料在每天早餐前服用。
热量限制和节食建议
研究开始前,用Dietist XP(Kostdata,Bromma,Sweden)根据Harris Benedict公式,考虑年龄、体重、身高和假定的每日能量消耗,将参与者的平均每日能量需求计算为8800kJ(~2100kcal)。研究期间,计算的能量摄入减少15E%至~7500kJ/天(~1800kcal/天)。向参与者提供选择的食谱集(3种早餐、29种午餐/晚餐和4种甜品)来从中挑选。研究期间建议的每日能量摄入分成三餐/天:早餐2100kJ(~500kcal),午餐和晚餐各2500kJ(~600kcal)。允许另外的400kJ(~100kcal)用于咖啡/茶中的牛奶和个体调整。餐食之间允许水、咖啡和茶,但不允许另外的食物或小吃。饮食不允许任何加甜饮料。
也指示受试者每日完成60分钟的低/中强度锻炼,例如快走、游泳、基本有氧运动等。
每天参与者在日记中回答关于其餐食选择、健康状况和锻炼的问题。这些数据用于分析对研究指导方针的依从性。
身体分析
体重用电子秤(TANITA WB-100A,class III,Amsterdam,The Netherlands)测量。体脂质量(kg)和躯干脂肪(kg)的组成用生物电阻抗分析仪(Bioelectric ImpedanceAnalyser,TANITA-BC 418MA)测量。腰围、下肋缘和髂嵴之间的中线和臀围用不可拉伸软尺测量至最接近的0.5cm。
调查问卷
构建为VAS(Flint A等人,Reproducibility,power and validity of visualanalogue scales in assessment of appetite sensations in single test mealstudies,Int J Obes Relat Metab Disord 2000,24(1):38-48.)的调查问卷用于测量饥饿感觉、饱足感觉和对特定食品的欲望。图片辅助对特定食品欲望的评估。对于高碳水化合物小吃,展示三明治和甜肉桂面包的图片;对于盐和脂肪,展示薯条和咸花生的图片;对于甜小吃,展示糖果和冰棒的图片;和对于脂肪和糖,展示蛋糕和巧克力的图片。在研究的第一天(天数1)和最后一天(天数56),受试者在早餐前(0min)和15、60、120、180、240(提供午餐前)、270(提供午餐后)、330、390、450和630分钟的时间点回答问题。在调查问卷的首页给予书面指示,并且分别指导各受试者如何填写调查问卷以避免误解。问题之后跟随100mm的线,线用线的各侧上的描述词锚定,见表3。指示受试者放置穿过比例尺的垂直线,由此评定在每个时间点他们的感觉有多强烈。评定打分为“完全不”和各受试者标记之间的mm。
表3.在研究的第一天和最后一天中询问的VAS调查问卷中的问题
统计
效能计算(power calculations)基于此前在人类中关于血糖改变的测验类囊体补充的初步研究。灵敏度为0.80和显著性水平为0.05,效能计算表明,当临床差异设至0.6和受试者内标准差为0.56时,各组中样本量为14。所有血样和身体测量的统计数据分析用R开发核心小组(R Development Core Team)2.15.3版本2011(R Foundation forStatistical Computing,Vienna,Austria)完成。分析以两步进行。首先,通过将时间作为解释变量(5个时间点)和将测定的变量作为响应变量,对各受试者和对13种测定变量的每一种拟合单回归模型。获得的斜率值表示特定个体和变量的变化的拟合率。第二,在如此获得的变化率上,用二样本Hotelling的T2检验将所有13个变量一起处理进行多变量分析。检查正态性假设的偏差并确定为不严重。此外,为了解释的目的,对于13个测定的变量的每一个,通过单变量双样本问题用的t-检验分析两组之间斜率变量的平均差。由于多重试验的影响,从这些个体变量比较获得的p-值应小心处理,并因此仅用于讨论和解释变量中的哪个对组之间的显著性差异贡献最大。
VAS调查问卷的统计分析用Prism,版本6(GraphPad Software,Inc,San Diego,CA,USA)完成。分别在第一天和最后一天,用双侧重复测定方差分析(ANOVA)以处理和时间作为固定因素分析一天中评分的变化。单独的时间点进一步用多重比较试验分析,接着用Fisher的LSD检验分析。曲线下总面积(tAUC)的数值计算用Wilcoxon配对符号秩检验分析,以比较组内在研究的第一天和最后一天之间的差。也用曼-惠特尼t-检验比较组间差。
目标数据对于多数变量表现正态分布,和对于某些变量(HbA1c、Apo B和类囊体组中的体重)表现正态假设的某些变异,但对结果分析并不关键。后者通过再采样研究评估。在图中,数据表达为平均值±SEM,而在表中数据以平均值±SD给出。P值<0.05视为统计学显著,和p值<0.1为有兴趣。
结果
在两个月的严格节食后,所有参与者体重减轻且总体脂减少,在对照组和类囊体处理组之间没有显著差异。
用VAS调查问卷对饥饿的主观评分的分析揭示,与第一天相比,在研究的末尾在类囊体组中饥饿感觉减少(p=0.016,图3A),而在对照组中没有发现饥饿感觉的变化(图3A)。在研究的第一天(F(10,240)=1.6,ns)或研究的最后一天(F(10,210)=0.83,ns),在类囊体组和对照之间没有发现饥饿感觉的差异(图3B和3C)。
与第一天相比,在研究的末尾观察到类囊体组中对巧克力的欲望降低的强烈趋势(p=0.052),但在对照组中没有观察到(p=0.62,图4A),确认是类囊体而非膳食干预降低对巧克力的欲望。第一天和最后一天在处理和对照之间对巧克力欲望的方差分析各自揭示时间和处理之间的显著相互作用(第一天;(F(10,240)=1.9,p<0.05),最后一天(F(10,230)=1.9,p<0.05)。单个时间点的分析示出在第一天午餐前和在最后一天下午在处理组中对巧克力的欲望减少(图4B和4C)。
在任何组中,在研究的全过程中对碳水化合物小吃的欲望没有显著变化(图5A)。然而在对碳水化合物小吃的欲望中,处理的第一天在时间和处理之间有相互作用(F(10,240)=2.1,p<0.05),而在最后一天没有(F10,230)=1.3,ns,图5C)。然而在第一天午餐前和下午,对碳水化合物小吃的欲望减少(图5B)。结果示出类囊体和膳食干预均降低对碳水化合物小吃的欲望。此外,图5B的发现确认实施例1的发现。
没有类囊体补充的副作用被报告。
讨论
与限制饮食组合的两个月的类囊体每日补充导致类囊体处理组和对照组中相似量级的体重减少。体重的总体减少为类囊体组0.65kg/周和对照组0.59kg/周(差异不显著)。
饥饿感觉和对巧克力的欲望在研究的全过程中通过类囊体处理而降低。相反,它们在对照组中没有降低。此外,与对照相比,在类囊体处理组中研究的第一天对巧克力和碳水化合物小吃的欲望以及在最后一天对巧克力的欲望减少。
有趣的是,在第一天(参见图3B)没有发现饥饿感觉(自稳型饥饿)的差异,然而对巧克力(参见图4B)和对碳水化合物小吃(参见图4C)的欲望降低。这与实施例1的发现一致(参见图1)。很明显,类囊体对享乐型饥饿有效果,与其对自稳型饥饿的长期效果不同,确认了本发明的效果。此外,如实施例1和3所知,类囊体能抑制享乐型饥饿,与热量限制无关。
虽然体重降低在两组之间相似,表现出与对照组相比,类囊体处理组中以较少努力达到该体重降低的程度,基于类囊体组中对饥饿和对可口食物欲望的主观评分降低。这提示类囊体甚至在热量限制期间发挥其食欲控制效果,和此效果随着减重也维持。这是类囊体处理的重要性质,因为饥饿在减重时是常见的,并常导致过度进食和体重反弹。
由此,类囊体的摄入减轻减重计划期间与热量限制相关联的一些压力。此外,类囊体的摄入辅助接受更健康的进食行为并降低可口食物的相对摄入。这在保持健康进食行为和避免减重计划后的体重反弹可能是关键的。
由此可得出结论,分离的类囊体能压抑与热量限制无关的饥饿享乐型饥饿。
实施例4–在情绪性进食者中希望和享乐型饥饿的压抑
材料和方法
受试者
通过当地广告招募32名妇女。通过包括评估总体健康、进食行为和对不同食品的主观爱好的调查问卷的筛选过程对志愿者的适格性进行评价。在筛选过程中,排除了6名妇女,并在研究中包括26名妇女。包括标准:妇女年龄40-70岁,正常体重或超重。排除标准:糖尿病、影响食欲的疾病、对研究中提供的食物的食物过敏或不耐受,或在最近3个月期间的节食。22名受试者完成了本研究并被包括在最终的分析中(表1)。
表1–基线特征
a身体组成分析仪(TANITA-BC 418MA,Amsterdam,The Netherlands)。一名受试者因为身体组成分析仪故障而从此分析中排除。
研究设计
此研究为交叉设计的随机、安慰剂对照、双盲、单中心膳食干预研究,在瑞典隆德大学生物医药中心(BMC)进行。各参与者试验两天,由至少1周的清洗期分隔,一天接受绿色植物补充(5g),另一天接受安慰剂。处理或安慰剂的分配为随机,并在试验日之间平衡。
受试者在早晨到达,从22:00起禁食。在试验日遵照如表2所示的计划。在试验日之前或期间不允许酒精或剧烈身体活动。早餐之前,参与者填写构建为视觉模拟量表(VAS)的调查问卷(Flint等人Int J Obes Relat Metab Disord,25,781–792),具有关于饥饿、饱足和对特定食品希望的问题。接着,提供有或没有绿色植物膜(类囊体)补充的蓝莓饮料,接着提供标准高碳水化合物瑞典式早餐。VAS调查问卷在每小时、以及分别在13:00和16:00提供的午餐和随意的小吃自助餐前后填写。在早餐和午餐之间,参与者离开研究地去工作或自由活动,并通过短信被提醒每小时填写VAS调查问卷。午餐后,参与者停留在她们被分配的座位中,并排坐,她们之间有分隔板,均面向窗户。允许她们阅读或在笔记本电脑上工作,直至16:00时在桌上或单独的托盘上提供小吃自助餐。包含关于提供的产品信息的传单伴随自助餐,确保食物的新鲜。它包括制造商名称和包装图片。相同的图片用于VAS调查问卷。在开始食用她们面前的小吃自助餐之前,参与者再一次填写VAS调查问卷。然后允许她们从她们托盘上的产品中自由进食,鼓励遵照她们的欲望并在吃完时要求更多。小吃自助餐占用了她们45min,在此期间不做任何其他事情。此后,她们再次填写VAS调查问卷,此次包括关于她们对她们品尝的产品有多喜欢的问题。最后,她们有机会对她们在试验日期间感觉如何自由发表评论。
表2-试验日计划,天数1和2
效能和样本大小
在此交叉研究中获得0.8的效能所需的参与者数量用较早研究的数据计算。基于这些计算,需要15名受试者来检测饥饿的VAS评分中10mm的差异。此受试者数量也足以检测对希望可口食物评分的差异。根据文献,17名受试者应足以检测500kJ/120kcal的食物摄入的差异。
伦理
此研究受隆德人类研究伦理委员会批准(2006/361)。此试验根据赫尔辛基宣言进行。在试验开始前所有受试者给出书面知情同意书。参与者没有接受任何金钱补偿。
绿色植物膜
用于本研究的绿色植物膜(Appethyl,Greenleaf Medical AB,Stockholm,Sweden)用此前记述的pH-法(Emek等人,Prep Biochem Biotechnol,40,13–27)从幼菠菜叶制备,接着转鼓式干燥(drum drying)。100g绿色植物膜含有26.1g蛋白质、7.24g脂肪、48.7g碳水化合物、27.9mg叶黄素、730μg玉米黄素、3.45mgβ-胡萝卜素、21μg维生素A、1330μg维生素K1、6.07mg维生素E和166μg叶酸。5g绿色植物膜在冷蓝莓饮料中提供,与2.5g菜籽油(Zeta,Di Luca&Di Luca AB,Stockholm,Sweden)和92.5g蓝莓汤(original,Procordia Food AB,Sweden)混合,在处理试验日早餐前即刻提供。在对照试验日,向参与者提供由2.5g菜籽油与92.5g蓝莓汤混合组成的安慰剂饮料。蓝莓饮料含82kcal(有绿色植物膜)和64kcal(没有绿色植物膜)。
正餐
两个试验日的早餐为标准瑞典式高碳水化合物早餐,有酸奶和什锦早餐、一片有黄油的白面包、奶酪和甜椒、咖啡或茶。能量分布为总能量的百分之31.2(E%)的脂肪、15.4E%蛋白质和53.4E%碳水化合物。糖构成22.6E%。两个试验日提供的午餐为一片发酵面团制成、有番茄酱、火腿、洋葱、蘑菇和奶酪的披萨,并提供煮熟的花椰菜和自来水。午饭后的咖啡或茶为任选,但要求受试者在两个试验日选择相同。午餐的能量分布为45.9E%碳水化合物、32.5E%脂肪和21.6E%蛋白质。此外,允许参与者在早餐和午餐之间饮一杯没有糖或甜味剂的咖啡/茶,在午餐后饮一杯咖啡/茶。能量分布的计算用Dietist Net Pro(Kost ochAB,Bromma,Sweden)进行。
小吃自助餐
为小吃自助餐选择一系列畅销小吃、甜食和甜点基于产品调查问卷的回应(表3)。这些产品分为不同的三类:咸、甜以及甜和脂肪小吃。有咸味的小吃包括薯片和咸味混合坚果,有甜味的含糖产品包括两种不同的甜食和橙汁,有甜味含糖和脂肪的产品为牛奶巧克力、黑巧克力、裹着巧克力的太妃糖、巧克力糕点和肉桂面包。各参与者接受在单独的容器中提供的含产品的托盘,在消耗之前和之后称重。量选择为比足够一个人还多,以确保随意消耗。以有限量与小吃一起提供咖啡、茶和水。饮料为任选,但受试者须在两个试验日进食相同。
表3–小吃自助餐的成分,每100g的能量含量
a最初以钠含量表示的盐含量已通过钠值乘以2.5而转化为盐量,如瑞典国家食品局(Livsmedelsverket)推荐。
产品调查问卷
为此研究将产品调查问卷构建为用于在瑞典人群中选择合适产品以测量渴望和小吃摄入的工具。其包含关于瑞典最流行品牌的小吃:薯片、坚果、巧克力、甜食、烘焙甜品、包、果汁和软饮料的特定问题。询问的问题关于回答者消费该可口食物多频繁、在9分制享乐量表(nine point hedonic scale)上她们有多喜爱此产品,和各类中她们偏爱什么产品。
修订的三因素进食调查问卷,18-项,版本2(TFEQ-R18V2)
TFEQ-R18V2是原始三因素进食调查问卷(TFEQ)的修订版,是进食行为研究中广泛使用的自我评价量表。虽然原始TFEQ含有51项,TFEQ-R18V2含18个问题用来测定三种类型的进食行为:情绪性进食、不受控进食和认知约束。本研究中用的调查问卷为瑞典语译文。
VAS调查问卷
构建为视觉模拟量表VAS的调查问卷在试验日期间重复使用(表2),以测定对特定食品的食欲和渴望的感觉(表3)。调查问卷构建为首页上有书面指导的小册子。所有问题后有100-mm水平线,受试者在其上标记她们的回应。线在各末端锚定,在左侧表示最小值:“完全不”,和右侧最大值:“极度”。在一天的最后时间点,增加关于对该特定日品尝的产品的喜爱的问题,以便评价物品的奖赏性质。分析时,对个体食品的评分合并为三种不同种类,并表示为咸、甜以及甜和脂肪小吃(表3)。对于关于所有小吃一起的分析,将所有数值合并且表示为总/所有小吃。
统计
所有统计分析用Prism版本6统计软件(GraphPad Software,Inc,San Diego,CA,USA)完成。配对参数的正态分布和处理与对照条件之间的计算差用d′Agostino&Pearson综合正态检验(ommnibus normality test)计算,通过箱线图和柱状图分析以及平均和中位数值之间的比较确认。由于样本群体小,难以确定正态变化,这是选择非参数试验的原因。VAS评分随时间的变化用双侧重复测定(RM)方差分析进行分析,以便试验时间、处理和时间与处理的相互作用。在单独的时间点的VAS评分分析以及对VAS评分的曲线下总面积(tAUC)的差异、食物摄入和喜爱的评分用Wilcoxon配对符号秩评级检验进行。除非另有说明,文字和图释中给出的p-值用Wilcoxon配对符号秩评级检验分析。
绿色植物膜对饥饿感觉、饱足感觉和对特定食品的欲望和爱好的处理效果分别通过从对照日减去处理日的VAS评分数值而计算,例外是饱足用相反方式计算。对食物摄入的处理效果计算为对照和处理日之间的热量摄入之差。需要对处理效果计算Δ值,以说明配对观察。然后将这些Δ值关联于如TFEQR18-V2调查问卷所测定的进食行为评分,分为三个领域:情绪性进食、不受控进食和认知约束。也在进食行为得分、BMI和体脂百分数之间计算相关性。所有相关性用皮尔森(Pearson)相关系数计算。等于或大于0.3的相关系数(r)和确定系数(R2)视为相当强,并已包括在原稿中。在图和文字中,如果没有另外说明,数据表示为平均值+/-SEM。p值<0.05视为统计学显著,和p值<0.10为有兴趣。
结果
饥饿和饱足的VAS评分
与对照相比,用绿色植物膜处理降低饥饿的主观评分,并整日较低(F(1,21)=6.237,p<0.05,图6A),饥饿的tAUC在对照和处理条件之间降低21%(p<0.05,图6B)。对照和处理之间饥饿评分之差在午餐前和小吃自助餐前最为明显,在早餐开始后的时间点285min和480min达到最高显著(图6A)。
与对照相比,用绿色植物膜处理也增加饱足评分(图6C-D)。在处理条件下饱足得分通常整日较高(F(1,21)=8.745,p<0.01,图6C),饱足的tAUC在处理后增加14%(p<0.01,tAUC,图6D)。对照和处理组之间饱足的显著差异在60和120min时、以及在小吃自助餐前即刻在480min的时间点观察到(图6C)。
希望可口食物的VAS评分
与对照相比,用绿色植物膜处理降低希望所有种类可口食物的主观感觉(图7)。对于所有类型的小吃(咸、甜以及甜和脂肪)和对所有小吃的总希望,VAS评分在处理试验日期间持续较低。
处理对希望咸味小吃评分的效果示于图7A(F(1,21)=6.110,p<0.05)。在对照和处理条件之间,处理使对咸味小吃的希望降低30%(p<0.01,tAUC,图7B)。具体地,与对照相比,在时间点60、120和360分钟,对咸味小吃的欲望在处理组中较低(图7A)。
处理希望甜小吃评分的效果示于图7C(F(1,21)=8.412,p<0.01)。在对照和处理条件之间对甜的希望减少38%(p<0.001,tAUC,图7D)。此外,在希望甜小吃中有时间与处理相互作用的趋势,即时间对VAS评分的影响取决于受试者是否接受处理或安慰剂(F(11,231)=1.803,p=0.05)。与对照相比,在处理组中对甜小吃的欲望在早餐和午餐之间的所有时间点较低,从早餐后的15分钟就已开始。在下午的420分钟的时间点也较低(图7C)。
处理对希望甜和脂肪小吃评分的效果示于图7E(F(1,21)=5.198,p<0.05)。与对照相比,处理组中对甜和脂肪的希望降低36%(p<0.05,tAUC,图7F)。与对照相比,在处理组中对甜和脂肪小吃的欲望在60、120、180分钟的时间点和285分钟即午餐前较低(图7E)。
所有小吃的总希望的方差分析揭示处理的效果(F(1,21)=7.364,p<0.05,图7G)。单独时间点的后续分析示出处理在早餐后的15、60、120、180、285和420分钟降低总希望(p<0.05)。与对照相比,在处理组中对所有小吃的希望共计降低36%(p<0.05,tAUC,图7H)。
从随意小吃自助餐的食物摄入
22名受试者中,每人在两个试验日从小吃自助餐中食用某些东西。与对照相比,用绿色植物膜处理后有咸味食品的热量摄入降低的强烈趋势,中位差值为65kcal(p=0.0547,图8)。处理和对照条件之间,甜或甜和脂肪小吃的摄入或总消耗没有显著差异。
在小吃自助餐消耗后测定的对可口食物的喜爱
仅允许品尝了物品的受试者评定她们对该物品的喜爱。对于将要包括在喜爱得分分析中的各具体食品,受试者须在对照和处理日均品尝并评定她们对产品的喜爱。由于未能正确填写表格,一名个体从分析中排除。与对照日相比,用绿色植物膜处理产生较低的在消耗后对甜的产品的喜爱(p<0.01,图9)。相反,对咸味和对甜和脂肪产品的喜爱在处理和对照日之间没有改变。与对照日相比,处理日对所有小吃的总喜爱没有显著差异(p=0.15,图9)。
用三因素进食调查问卷(TFEQ-R18V2)测定的进食行为
参与者在4分李克特(Likert)量表上对关于表征进食相关行为的声明的18个问题的每一个作出回应。将回应编码在4分量表(1-4)上,较高的值指示较多的行为。三个行为类别每个的平均值为:情绪性进食领域2.27(+/-0.15),认知约束领域2.52(+/-0.15)和不受控进食领域2.26(+/-0.10)。
对希望的处理效果与进食行为得分之间的相关性
对希望甜和脂肪小吃和所有类型小吃的处理效果示出与情绪性进食得分的正相关性,因而整体上较高的情绪性进食行为得分与较大的绿色植物膜对希望可口食物的等级的处理效果相关,以及特别是甜和脂肪食物(分别为p<0.01,皮尔森r,图10A和B)。认知约束和不受控进食领域未能示出处理效果和进食行为得分之间的任何相关性。
分析的其它相关性
不同的进食行为得分和绿色植物膜对饥饿、饱足、食物摄入或喜爱的处理效果之间没有相关性。BMI或体脂百分数和进食行为的得分之间也没有任何相关性,不同进食行为得分之间也没有任何相关性。
没有负面事件或效果被报告。
讨论
本实施例表明早餐前的类囊体摄入在一天中增加饱足的主观评分并减少饥饿和对小吃和甜食渴望的评分。当对进食行为得分关联时,绿色植物膜对希望的处理效果与对所有小吃的情绪性进食正相关,特别针对甜和脂肪食物。类囊体的摄入也减少在消耗后立即评分的对甜的主观喜爱。
此实施例中发现的类囊体促进饱足是全新的发现。这在早餐后60分钟开始,表明增强的早期饱足信号传导。此外,与安慰剂相比,处理组中饱足的评分也在午餐后几小时更高。增强的饱足可通过饱足激素CCK在早期时间点和较晚时间点的分泌增加来解释。
处理也在全天对饥饿评分有减弱效果。与饱足评分相比,饥饿评分的差异到达显著较晚,为早餐后的180分钟,与饱足的60分钟形成对比。在饥饿上的本发现确认了此前用绿色植物膜处理后饥饿评分减少的发现。压抑的饥饿可能与胃饥饿素水平降低和饱足激素CCK和GLP-1的循环水平增加的间接效果相关。饥饿压抑的较晚表现表明通过类囊体促进饱足激素的间接效果。
除了增加饱足和降低饥饿以外,与对照相比,此研究中绿色植物膜处理也降低对所有类型可口小吃的希望;包括咸、甜以及甜和脂肪小吃,以及所有小吃一起。本结果表明用绿色植物膜处理直接压抑享乐型饥饿。
不受任何理论限制,类囊体压抑享受饥饿可能是奖赏相关食欲激素GLP-1的水平改变的效果。
在本研究中,相关性分析表明情绪性进食行为得分高的个体具有更强的绿色植物膜在降低对可口食物希望上的效果,这是全新的发现。情绪性进食在女性中比在男性中更普遍,并与渴望以及甜和脂肪食物的消耗增加相联系,特别是响应应激物和负面情绪。若干研究已示出进食行为类型和BMI之间的相关性对于情绪性进食行为最强,并在超重受试者中更高。因此,影响过度进食、特别是在情绪性进食者中是非常重要的。
在降低喜爱上的发现是重要的,因为甜味的喜爱影响甜味产品的希望。实际上,超重妇女已被示出对甜的喜爱增加。喜爱降低可随时间导致对甜的希望降低。作为结果,降低的希望可减少正餐之间的小吃,并由此减少过度进食。在此研究中,与其它类型的小吃相比,处理将对甜的希望降低至更大的程度。也存在更早的起始。对甜的希望从15分钟起降低,相比于分别从60分钟降低的对咸以及甜和脂肪小吃的希望。这暗示绿色植物膜的急性处理特别克制甜味。此靶向的机理未知。
本实施例示出用绿色植物膜处理减低自稳型饥饿和享乐型饥饿,以及对可口食物的希望和对甜的喜爱。降低希望是重要的,因为希望是享乐进食的重要动机,其对过度消耗和肥胖作出贡献。此外,肥胖和/或节食的个体对享乐型饥饿甚至更易感。因此,降低对可口食物的渴望是必要的,以便既控制食欲、防止体重增加又帮助永久性减肥。绿色植物膜的补充可帮助防止正餐之间的进食,由此防止过度进食和长期防止超重。
Claims (27)
1.分离的类囊体或其部分在人类中降低对可口食物的欲望的用途,其中所述用途包括分离的类囊体或其部分的摄入。
2.根据权利要求1所述的用途,其中所述可口食物具有下列特征的一种或多种:
-血糖指数至少60,例如至少70;
-高糖含量,对于饮料为至少5重量%,和对于其它食物为至少20重量%,例如至少50重量%;
-包含甜味剂;
-至少20重量%的高脂含量和至少20重量%的高糖含量;
-至少20重量%的高脂含量和至少50的血糖指数;和
-至少20重量%的高脂含量和至少1.0重量%的盐含量(NaCl)。
3.根据权利要求2所述的用途,其中所述可口食物具有下列特征的至少一种:
-高糖含量,对于饮料为至少5重量%,和对于其它食物为至少20重量%,例如至少50重量%;和
-至少20%的高脂含量和至少20重量%的高糖含量;
其中所述可口食物中包含的所述糖选自由单糖:葡萄糖、果糖和半乳糖,二糖:蔗糖、麦芽糖和乳糖,及其混合物组成的组。
4.分离的类囊体或其部分在人类中的用途,其中所述用途包括分离的类囊体或其部分的摄入:
-从而减少对吸烟的需求;
-从而减少对尼古丁的需求;
-从而帮助试图戒除使用尼古丁产品,例如戒烟的人群;
-用于吸烟中止;和/或
-从而减少尼古丁产品的使用。
5.根据权利要求1至3任一项和根据权利要求4所述的用途。
6.分离的类囊体或其部分在人类中的用途,其中所述用途包括分离的类囊体或其部分的摄入:
-从而减少对酒精饮料的欲望;
-用于减低酒精饮料的消耗;和/或
-从而降低酒精滥用。
7.根据权利要求1至6任一项所述的用途,其中GLP-1(胰高血糖素样肽-1)的释放通过所述分离的类囊体或其部分的使用而增加。
8.根据权利要求1至7任一项所述的用途,其中可口食物、尼古丁和/或酒精的影响大脑中的奖赏中枢的奖赏效应通过所述分离的类囊体或其部分的使用而减少。
9.根据权利要求1至8任一项所述的用途,其中所述分离的类囊体或其部分已从植物的绿叶或从绿藻中分离;优选所述类囊体或其部分已从苜蓿、油菜、甜菜、蒲公英、拟南芥、玉米、烟草、向日葵、藜属、滨藜属、菠菜、莙达菜、藜麦、羽衣甘蓝、甜菜或草类的叶分离;更优选所述类囊体已从菠菜分离。
10.根据权利要求1至9任一项所述的用途,其中使用的所述分离的类囊体或其部分是营养品组合物的组成部分。
11.根据权利要求10所述的用途,其中所述营养品组合物中所述分离的类囊体的含量相当于每克组合物(干重)约10至约50mg叶绿素的叶绿素含量;
优选所述营养品组合物的碳水化合物含量为每100g营养品组合物(干重)5至50g碳水化合物;和/或所述营养品组合物的蛋白质含量为每100g营养品组合物(干重)10至60g蛋白质。
12.根据权利要求10或11所述的用途,其中所述营养品组合物包括含有分离的类囊体或其部分的生理可耐受的水包油乳剂。
13.根据权利要求10至12任一项所述的用途,其中所述营养品组合物包括益生菌并任选地包括益生元剂。
14.分离的类囊体或其部分的用途,所述用途用于减少可口食物的奖赏效应、例如根据权利要求2或3任一项中所述可口食物的奖赏效应,和任选地减少尼古丁和/或酒精的奖赏效应。
15.根据权利要求14所述的用途,其中所述分离的类囊体或其部分已从植物的绿叶或从绿藻分离;优选所述类囊体或其部分已从苜蓿、油菜、甜菜、蒲公英、拟南芥、玉米、烟草、向日葵、藜属、滨藜属、菠菜、莙达菜、藜麦、羽衣甘蓝、甜菜或草的叶分离;更优选所述类囊体已从菠菜分离。
16.根据权利要求14和15任一项所述的用途,其中使用的所述分离的类囊体或其部分是营养品组合物的组成部分。
17.根据权利要求16所述的用途,其中所述营养品组合物中所述分离的类囊体的含量相当于每克组合物(干重)约10至约50mg叶绿素的叶绿素含量;
优选所述营养品组合物的碳水化合物含量为每100g营养品组合物(干重)5至50g碳水化合物;和/或所述营养品组合物的蛋白质含量为每100g营养品组合物(干重)10至60g蛋白质。
18.根据权利要求16或17所述的用途,其中所述营养品组合物包括含有分离的类囊体或其部分的生理可耐受的水包油乳剂。
19.根据权利要求16至18任一项所述的用途,其中所述营养品组合物包括益生菌并任选地包括益生元剂。
20.根据权利要求14至19任一项所述的用途,其中所述奖赏效应通过增加GLP-1(胰高血糖素样肽-1)的释放而减少。
21.分离的类囊体或其部分用于减少享乐型饥饿的用途。
22.根据权利要求21所述的用途,其中所述分离的类囊体或其部分已从植物的绿叶或从绿藻分离;优选所述类囊体或其部分已从苜蓿、油菜、甜菜、蒲公英、拟南芥、玉米、烟草、向日葵、藜属、滨藜属、菠菜、莙达菜、藜麦、羽衣甘蓝、甜菜或草的叶分离;更优选所述类囊体已从菠菜分离。
23.根据权利要求21和22任一项所述的用途,其中使用的所述分离的类囊体或其部分是营养品组合物的组成部分。
24.根据权利要求23所述的用途,其中所述营养品组合物中所述分离的类囊体的含量相当于每克组合物(干重)约10至约50mg叶绿素的叶绿素含量;
优选所述营养品组合物的碳水化合物含量为每100g营养品组合物(干重)5至50g碳水化合物;和/或所述营养品组合物的蛋白质含量为每100g营养品组合物(干重)10至60g蛋白质。
25.根据权利要求23或24所述的用途,其中所述营养品组合物包括含有分离的类囊体或其部分的生理可耐受的水包油乳剂。
26.根据权利要求23至25任一项所述的用途,其中所述营养品组合物包括益生菌并任选地包括益生元剂。
27.根据权利要求21至26任一项所述的用途,其中享乐型饥饿通过增加GLP-1(胰高血糖素样肽-1)的释放而减少。
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