CN106198821B - 一种检测牛奶中磺胺类抗生素残留的方法 - Google Patents

一种检测牛奶中磺胺类抗生素残留的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种检测牛奶中磺胺类抗生素残留的方法，包括以下步骤：预处理：将牛奶加入离心管中，加入酸溶液和氯化钠，离心，离心后的上清液于鸡心瓶中，旋转蒸发至近干，加入体积比为3:1的乙腈和甲苯混合液，超声溶解，得提取液；层析柱中加入无水硫酸钠后，用体积比为3:1的乙腈和甲苯混合液进行活化，加入提取液，用体积比为3:1的乙腈和甲苯混合液进行淋洗，收集淋洗液于鸡心瓶中备用，将鸡心瓶中的淋洗液旋转蒸发近干，加入甲醇溶解超声后，得预处理溶液；色谱测定步骤和计算步骤；本发明所用的样品量及各种试剂的用量少，对环境危害小，检测速度快，准确率高，操作简单、耗时短。

Description

一种检测牛奶中磺胺类抗生素残留的方法
技术领域
本发明涉及抗生素残留检测技术领域，特别涉及一种检测牛奶中磺胺类抗生素残留的方法。
背景技术
牛奶中抗生素残留问题在世界范围内一直没有被彻底攻克，已成为行业发展以及食品安全的隐患之一。抗生素主要指能抑制或杀死其他微生物的一类化学物质，如青霉素、四环素、金霉素、链霉素、氯霉素、磺胺类药物等。在医学上，抗生素被广泛的应用于预防和治疗多种微生物感染性疾病以及某些癌症。在奶业的源头中，抗生素使用频率很高，特别是治疗牛乳房炎，常常大剂量反复使用。据统计，约有十多种抗生素以一种或多种联合的形式采用粉剂、涂擦剂、注射剂，以及乳导管注入等方式加以应用，导致抗生素残留相当严重，在奶牛饲料中，也含有抗生素添加剂。
牛奶中不允许残留抗生素，主要有两个原因：第一，占人口一定比例的人对抗菌素尤其是青霉素过敏，人们长期饮用或食用抗生素残留的牛奶或奶制品，也就相当于长期低剂量的摄取抗生素，其危害性主要有：①使人体产生耐药性，给今后患病使用抗生素治疗带来不良影响；②抗生素对过敏体质的人会出现过敏反应，危及健康；③破坏人体内正常菌群的平衡状态，使菌群失调，甚至造成二重感染，使重症患者病情难以控制。
第二，发酵奶制品(酸奶和干酪)的生产依赖于乳酸菌的生长，而乳酸菌的生长受抗菌素的强烈抑制，常导致发酵失败。
牛奶中存在的磺胺类抗生素属于痕量物质，发达国家多采用高效液相色谱仪-质谱联用技术进行研究，但该方法成本相对较高，目前对残留兽用磺胺类抗生素的检测研究多在动物性食品领域，在牛奶中的推广使用有一定的局限性；也存在用微生物培养的方法检测牛奶中磺胺类抗生素，但该方法耗时较长，灵敏度也较差。
发明内容
本发明提供了一种检测牛奶中磺胺类抗生素残留的方法，解决现有的方法成本相对较高、检测耗时长的问题。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
一种检测牛奶中磺胺类抗生素残留的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)预处理：将牛奶加入离心管中，加入酸溶液和氯化钠，离心，离心后的上清液于鸡心瓶中，旋转蒸发至近干，加入体积比为3:1的乙腈和甲苯混合液，超声溶解，得提取液；层析柱中加入无水硫酸钠后，用体积比为3:1的乙腈和甲苯混合液进行活化，加入提取液，用体积比为3:1的乙腈和甲苯混合液进行淋洗，收集淋洗液于鸡心瓶中备用，将鸡心瓶中的淋洗液旋转蒸发近干，加入甲醇溶解超声后，得预处理溶液；
(2)色谱测定：测定的色谱条件为：高效液相色谱仪；反相色谱柱；流速：0.6～1.0ml/min；温度：室温；SPD-20A紫外检测器，检测波长270nm；流动相：为0.5％的乙酸溶液：乙腈：0.005～0.03mol/L的盐溶液＝80：35：50，进样量20μl；
(3)计算：取预处理溶液1ml置100ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取磺胺类抗生素对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
其中，优选地，所述盐溶液采用乙酸铵、乙酸钠、草酸铵、草酸钠、氯化铵、亚硫酸铵溶液中的任意一种或多种。
其中，优选地，所述磺胺类抗生素指磺胺甲基嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶和磺胺喹恶啉中的一种。
其中，优选地，所述离心转速是1000～2500r/min，离心时间为5～10min。
其中，优选地，所述酸溶液中的酸为乙酸、磷酸、盐酸、硫酸、硝酸或盐酸乙醇。
其中，优选地，所述酸溶液的体积浓度为1～20％。
本发明的有益效果：
1.本发明在牛奶进入液相检测前进行预处理，该预处理固相萃取效果好，净化后基线稳定，回收率高，又可以避免其它杂质峰的干扰和重叠。
2.本发明利用磺胺类抗生素在高效液相色谱仪紫外检测器270nm波长下检测效果最佳，通过对流动相及各组分配比、流速、温度等条件的优化组合，确定目标药物的最佳检测条件。
3.本发明所用的样品量及各种试剂的用量少，对环境危害小，检测速度快，准确率高，操作简单、耗时短。
具体实施方式
下面对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的内容仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例
本实施例提供一种牛奶中磺胺类抗生素残留的检测方法，本实施例在空白牛奶样中分别加入磺胺甲基嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶和磺胺喹恶啉，制得两个混合奶样，单个奶样中四个药物的浓度相同，一号奶样中每种药物的浓度分别为0.5μg/L，二号奶样中每种药物的浓度分别为2μg/L。
(1)预处理：将上述各牛奶样分别加入离心管中，加入体积浓度为10％乙酸溶液和氯化钠，离心，离心后的上清液于鸡心瓶中，旋转蒸发至近干，加入体积比为3:1的乙腈和甲苯混合液，超声溶解，得提取液；层析柱中加入无水硫酸钠后，用体积比为3:1的乙腈和甲苯混合液进行活化，加入提取液，用体积比为3:1的乙腈和甲苯混合液进行淋洗，收集淋洗液于鸡心瓶中备用，将鸡心瓶中的淋洗液旋转蒸发近干，加入甲醇溶解超声后，得预处理溶液；
(2)色谱测定：测定的色谱条件为：高效液相色谱仪；反相色谱柱；流速：0.6～1.0ml/min；温度：室温；SPD-20A紫外检测器，检测波长270nm；流动相：为0.5％的乙酸溶液：乙腈：0.005～0.03mol/L的草酸钠溶液＝80：35：50，进样量20μl；
(3)计算：取预处理溶液1ml置100ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取磺胺类抗生素对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
四种药物的回收率测试结果如下表所示：
由上述检测结果可见，本发明方法检测效率高，一次可以分离4种磺胺类抗生素；抗生素峰无杂质峰干扰；分析速度快，一次色谱分离过程可在50min完成，可以快速定量检测，另外，采用液相谱仪检测，检测灵敏度高。
在发明人研发过程中，流动相中的盐溶液采用乙酸铵、乙酸钠、草酸铵、草酸钠、氯化铵、亚硫酸铵溶液中的任意一种或多种对检测结果无明显的影响。在预处理过程中，采用乙酸、磷酸、盐酸、硫酸、硝酸或盐酸乙醇溶液对检测结果也无明显的影响。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种检测牛奶中磺胺类抗生素残留的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)预处理：将牛奶加入离心管中，加入酸溶液和氯化钠，离心，离心后的上清液于鸡心瓶中，旋转蒸发至近干，加入体积比为3:1的乙腈和甲苯混合液，超声溶解，得提取液；层析柱中加入无水硫酸钠后，用体积比为3:1的乙腈和甲苯混合液进行活化，加入提取液，用体积比为3:1的乙腈和甲苯混合液进行淋洗，收集淋洗液于鸡心瓶中备用，将鸡心瓶中的淋洗液旋转蒸发近干，加入甲醇溶解超声后，得预处理溶液；所述酸溶液中的酸为乙酸、磷酸、盐酸、硫酸、硝酸或盐酸乙醇；
(2)色谱测定：测定的色谱条件为：高效液相色谱仪；反相色谱柱；流速：0.6～1.0ml/min；温度：室温；SPD-20A紫外检测器，检测波长270nm；流动相为： 0.5％的乙酸溶液：乙腈：0.005～0.03mol/L的盐溶液＝80：35：50，进样量20μl；
(3)计算：取预处理溶液1ml置100ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取磺胺类抗生素对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
2.根据权利要求1所述的一种检测牛奶中磺胺类抗生素残留的方法，其特征在于：所述盐溶液采用乙酸铵、乙酸钠、草酸铵、草酸钠、氯化铵、亚硫酸铵溶液中的任意一种或多种。
3.根据权利要求1所述的一种检测牛奶中磺胺类抗生素残留的方法，其特征在于：所述磺胺类抗生素指磺胺甲基嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶和磺胺喹恶啉中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种检测牛奶中磺胺类抗生素残留的方法，其特征在于：所述离心转速是1000～2500r/min，离心时间为5～10min。
5.根据权利要求1所述的一种检测牛奶中磺胺类抗生素残留的方法，其特征在于：所述酸溶液的体积浓度为1～20％。
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