CN106190861A - 一种人工金蝉花的菌种筛选、制备及生产培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种人工金蝉花的菌种筛选、制备及生产培养方法，包括以下步骤：1）选种；2）液体菌种培养基配方及处理；3）固体培养基配方及处理；4）液体菌种制备；5）接种；6）培养；7）采收；8）除湿；9）烘干和10）装袋。据文献报道，人工生产的金蝉花与野生的金蝉花成分含量基本一致。本发明的人工金蝉花生产方法技术参数和培养基条件等经过多年优化而得，生产要求比较严格，硬件、软件操作要求很高，本发明经过试验验证，生产能够实现并能获取高质量的人工培养物。本发明采用经过验证的生产工艺，培养天数较短，产量高，培养基为市场上常见的大米、小麦或者为小麦、大米的混合物，价格成本较低，可大量进行工业化生产。

Description

一种人工金蝉花的菌种筛选、制备及生产培养方法
技术领域
本发明涉及一种人工金蝉花的菌种筛选、制备及生产培养方法，属于药食两用真菌的人工生产技术领域。
背景技术
蝉花(CordycepsciecadaeShing)也称蝉菌蝉蛹草，属于真菌界、子囊菌门、盘菌亚门、粪壳菌纲、肉座菌目、虫草科、棒束孢属，是一种具有动物和植物特征的奇妙生物根是蝉蛹或山蝉的幼虫体，花是从单个或是2-3个蝉幼虫头部生长出来的，约一寸多长，从顶端开花分枝。据有关的研究提出，蝉花属于生物病态现象，是一种虫菌相依的组合体。秋季来临，蝉钻入土中，逐渐变成蝉蛹，在羽化前被冬虫夏草菌类寄生，当生活备件适宜时，就开始萌发成菌丝体，吸收虫体的营养，最终虫体被菌丝体完全占有而只剩下一个躯壳。万物复苏时节，菌丝体又从营养阶段转化为有性阶段，渐渐从顶端开花分枝，故而得名蝉花。
目前市场的野生金蝉花，有三个特点比较鲜明：一是由于其是虫草的一种，和传统冬虫夏草有一定的类比性，价格基本按照冬虫夏草的价格规律正在进行，最终有可能会成为第二个冬虫夏草，大部分消费者将无法承受价格的昂贵；二是随着开发的升温，野生金蝉花资源会大量减少，将极大限制使用范围；三是随着国家山地的承包制，竹制品的生产以及土壤等环境污染，导致野生金蝉花农药残留与重金属的污染的几率大大增加。为满足市场的需求，为人类健康服务，人工培养金蝉花将具有重要的价值和现实意义。
发明内容
为了克服上述已有技术的不足，本发明的目的就是提供一种人工金蝉花的菌种筛选、制备及生产培养方法，该方法具有生产成本低、生产周期短的特点。
为了实现上述的个目的，本发明采用了以下的技术方案：
一种人工金蝉花的菌种筛选、制备及生产培养方法，包括以下步骤：
1）菌种从莫干山野生金蝉花子实体上取白色孢子粉，显微鉴别长椭圆形或圆形，单胞，壁光滑，无色，透明，多对称，少数弯曲直径3-10微米，常见1-3个油滴，经过2-5次的接种纯化及培养，得到菌株作为菌种，所选取的菌株编号为HZXC0001号；
2）液体菌种培养基配方及处理：土豆150-250g、糖15-25g、琼脂粉15-25g、纯化水700-900g；进行121℃高温灭菌，灭菌时间30-60分钟；
3）固体培养基配方及处理：按照剥壳小麦或大米：纯化水为0.8-1.0:1.3-1.5，进行121℃高温灭菌，灭菌时间30-60分钟，根据小麦蒸煮后的状态适当调整料水比，以小麦局部爆开、含水量适度为准，避免蒸煮后小麦为纯颗粒状；
4）液体菌种制备：将母种在无菌条件下接入液体培养基中，培养2-4天；
5）接种：将培养后的液体菌种接入固体培养基中，接种前液体菌种经过0.5-2分钟磁化处理，菌种液按照小麦量的8-12%的比例接种；
6）培养：接种后暗培养温度控制在15-20℃，光培养控制温度在20-25℃，控制湿度在65-85%，控制培养环境二氧化碳浓度小于1000ppm，光照强度100-300Lx，培养时间为20-30天；
7）采收：孢子粉用旋风除尘器进行收集，收集后直接进行烘干即可，子实体分割后装盘，菌质掰碎后转盘，菌质大小控制2-5cm，培养物的收集即为人工金蝉花获取物，含：孢子粉、子实体、菌质；
8）除湿：将收获后的子实体、菌质放入除湿间，控制湿度30-40%，子实体时间控制在20-48h，培养基及菌丝体控制时间在50-72h；
9）烘干：温度控制在60-80℃，时间控制在15-30h，水分小于8%为止；
10）装袋：将烘干后的子实体装入密封袋中。
作为优选方案，菌种从莫干山野生金蝉花孢子粉中选取，通过2-5次的纯化及培养实验，确定优质的菌种，将挑选出的菌株置于灭菌的萨式培养基斜面上，20-22℃下培养2-4天，待白色菌落长满试管后，作为母种备用4℃保存或永久性保存于液氮罐中。
作为优选方案，液体菌种培养基配方：土豆150-250g、糖15-25g、琼脂粉15-25g、纯化水700-900g；处理方法：进行121℃高温灭菌，灭菌时间30-60分钟，当液体培养基的温度冷却到室温后，在无菌环境下，按照1-3%的量接入母种，在20-22℃下，摇床培养3-5天，待菌丝转成微红棕色后作为液体菌种也备用。
作为优选方案，液体菌种培养基接种前经过0.5-2分钟磁化处理。
作为优选方案，固体培养基配方：按照剥壳小麦或大米：纯化水为0.8-1.0:1.3-1.5，处理方法：进行121℃高温灭菌，灭菌时间30-60分钟，根据小麦蒸煮后的状态适当调整料水比，以小麦局部爆开、含水量适度为准，避免蒸煮后小麦为纯颗粒状。
作为优选方案，接种后暗培养温度控制在15-20℃，光培养控制温度在20-25℃，控制湿度在65-85%，控制培养环境二氧化碳浓度小于1000ppm，光照强度100-300Lx，培养时间为20-30天，培养环境为C级无菌区或者为开启紫外线的普通洁净管理区。
作为优选方案，采收：孢子粉用旋风除尘器进行收集，收集后直接进行50-70℃烘干，子实体在C级无菌区抽风柜下进行分割后装盘，菌质掰碎后转盘，菌质大小控制2-5cm。
作为优选方案，除湿：将收获后的子实体、菌质放入除湿间，开启紫外灭菌灯，控制环境湿度30-40%，除湿机散热口安装于除湿间外部，控制房间温度不高于28℃，子实体时间控制在20-48h，培养基及菌丝体控制时间在50-72h。
作为优选方案，烘干：开启烘箱排风，烘箱温度控制在60-80℃，时间控制在15-30h，水分小于8%为止，孢子粉收集后直接烘干，子实体与菌质除湿后再进行烘干，烘干完成在负压罩下装袋，密封保存于阴凉干燥环境中。
在中国专利201110122468.4中提出了一种蝉拟青霉人工培养的方法及其培养物产物的应用，本发明与其不同之处及优势在于：1）所采取的菌种为莫干山野生金蝉优选出的菌株，公司编号为HZXC0001号；2）明确了母种与生产菌种液培养基的配方；在201110122468.4中未注明母种培养基的配方3）培养基小麦为脱皮小麦，更有利于菌种的生长；4）本发明明确了采收、除湿、烘干、保存的方法；5）本发明的液体菌种液接种前经过磁化处理，可提高子实体产量10-17%。
据文献报道，人工生产的金蝉花与野生的金蝉花成分含量基本一致。本发明的人工金蝉花生产方法技术参数和培养基条件等经过多年优化而得，生产要求比较严格，硬件、软件操作要求很高，本发明经过试验验证，生产能够实现并能获取高质量的人工培养物。
本发明采用莫干山野生蝉花菌种，采用经过验证的生产工艺，培养天数较短，产量高，培养基为市场上常见的大米、小麦或者为小麦、大米的混合物，价格成本较低，可大量进行工业化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术解决方案做进一步说明，这些实施例不能理解为对技术方案的限制。
实施例1
1）菌种从莫干山野生金蝉花孢子粉中选取，以端午节后两周的时间最佳，得到的孢子粉通过3次的纯化及培养实验，确定优质的菌种，将挑选出的菌株置于灭菌的萨式培养基斜面上，20-22℃下培养2-4天，待白色菌落长满试管后，作为母种备用或保存于液氮罐中；
2）液体菌种培养基配方及处理：土豆削皮切片150g，用等量的水煮沸30分钟后，过滤，取滤液、糖15g、琼脂粉15g、纯化水820g；进行121℃高温灭菌，灭菌时间30分钟；
3）固体培养基配方及处理：按照剥壳小麦（或大米）：纯化水水1.0:1.3，进行121℃高温灭菌，灭菌时间30分钟；
4）液体菌种制备：将母种在无菌条件下按照1%的量接入液体培养基中，在20-22℃摇床培养2-4天，以液体摇瓶转色为准；
5）接种：将培养后的液体菌种接入固体培养基中，接种前磁化处理0.5分钟，菌种液按照小麦量的8%的比例接种；
6）培养：接种后暗培养温度控制在15-20℃，光培养控制温度在20-25℃，控制湿度在65-85%，控制培养环境二氧化碳浓度小于1000ppm，光照强度100-300Lx，培养时间为20-30天，当子实体为黄色略有孢子粉时收获；
7）采收：孢子粉用旋风除尘器进行收集，收集后直接进行烘干即可，子实体分割后装盘，菌质掰碎后转盘，菌质大小控制2-5cm，培养物的收集即为人工金蝉花获取物，含：孢子粉、子实体、菌质。
8）除湿：将收获后的子实体、菌质放入除湿间，控制湿度30-40%，子实体时间控制在20-48h，培养基及菌丝体控制时间在50-72h，以子实体水分小于15%，菌质水分小于20%时转入下一步骤；
9）烘干：温度控制在60℃，时间控制在15-30h，当水分小于8%为止；
10）装袋：将烘干后的子实体装入密封袋中，阴凉干燥处保存。
实施例2
1）菌种从莫干山野生金蝉花孢子粉中选取，以端午节后两周的时间最佳，得到的孢子粉通过4次的纯化及培养实验，确定优质的菌种，将挑选出的菌株置于灭菌的萨式培养基斜面上，20-22℃下培养2-4天，待白色菌落长满试管后，作为母种备用或保存于液氮罐中；
2）液体菌种培养基配方及处理：土豆削皮切片200g，用等量的水煮沸30分钟后，过滤，取滤液、糖20g、琼脂粉20g、纯化水760g；进行121℃高温灭菌，灭菌时间30分钟；
3）固体培养基配方及处理：按照剥壳小麦（或大米）：纯化水水1.0:1.2，进行121℃高温灭菌，灭菌时间40分钟；
4）液体菌种制备：将母种在无菌条件下按照2%的量接入液体培养基中，在20-22℃摇床培养2-4天，以液体摇瓶转色为准；
5）接种：将培养后的液体菌种接入固体培养基中，接种前磁化处理1.0分钟，菌种液按照小麦量的10%的比例接种；
6）培养：接种后暗培养温度控制在15-20℃，光培养控制温度在20-25℃，控制湿度在65-85%，控制培养环境二氧化碳浓度小于1000ppm，光照强度100-300Lx，培养时间为20-30天，当子实体为黄色略有孢子粉时收获；
7）采收：孢子粉用旋风除尘器进行收集，收集后直接进行烘干即可，子实体分割后装盘，菌质掰碎后转盘，菌质大小控制2-5cm，培养物的收集即为人工金蝉花获取物，含：孢子粉、子实体、菌质。
8）除湿：将收获后的子实体、菌质放入除湿间，控制湿度30-40%，子实体时间控制在20-48h，培养基及菌丝体控制时间在50-72h，以子实体水分小于15%，菌质水分小于20%时转入下一步骤；
9）烘干：温度控制在70℃，时间控制在15-30h，当水分小于8%为止；
10）装袋：将烘干后的子实体装入密封袋中，阴凉干燥处保存。
实施例3
1）菌种从莫干山野生金蝉花孢子粉中选取，以端午节后两周的时间最佳，得到的孢子粉通过4次的纯化及培养实验，确定优质的菌种，将挑选出的菌株置于灭菌的萨式培养基斜面上，20-22℃下培养2-4天，待白色菌落长满试管后，作为母种备用或保存于液氮罐中；
2）液体菌种培养基配方及处理：土豆削皮切片250g，用等量的水煮沸30分钟后，过滤，取滤液、糖25g、琼脂粉25g、纯化水700g；进行121℃高温灭菌，灭菌时间30分钟；
3）固体培养基配方及处理：按照剥壳小麦（或大米）：纯化水水1.0:1.5，进行121℃高温灭菌，灭菌时间45分钟；
4）液体菌种制备：将母种在无菌条件下按照3%的量接入液体培养基中，在20-22℃摇床培养2-4天，以液体摇瓶转色为准；
5）接种：将培养后的液体菌种接入固体培养基中，接种前磁化处理1.5分钟，菌种液按照小麦量的10%的比例接种；
6）培养：接种后暗培养温度控制在15-20℃，光培养控制温度在20-25℃，控制湿度在65-85%，控制培养环境二氧化碳浓度小于1000ppm，光照强度100-300Lx，培养时间为20-30天，当子实体为黄色略有孢子粉时收获；
7）采收：孢子粉用旋风除尘器进行收集，收集后直接进行烘干即可，子实体分割后装盘，菌质掰碎后转盘，菌质大小控制2-5cm，培养物的收集即为人工金蝉花获取物，含：孢子粉、子实体、菌质。
8）除湿：将收获后的子实体、菌质放入除湿间，控制湿度30-40%，子实体时间控制在20-48h，培养基及菌丝体控制时间在50-72h，以子实体水分小于15%，菌质水分小于20%时转入下一步骤；
9）烘干：温度控制在80℃，时间控制在15-30h，当水分小于8%为止；
10）装袋：将烘干后的子实体装入密封袋中，阴凉干燥处保存。
实施例4
1）菌种从莫干山野生金蝉花孢子粉中选取，以端午节后两周的时间最佳，得到的孢子粉通过5次的纯化及培养实验，确定优质的菌种，将挑选出的菌株置于灭菌的萨式培养基斜面上，20-22℃下培养2-4天，待白色菌落长满试管后，作为母种备用或保存于液氮罐中；
2）液体菌种培养基配方及处理：土豆削皮切片150g，用等量的水煮沸30分钟后，过滤，取滤液、糖25g、琼脂粉25g、纯化水800g；进行121℃高温灭菌，灭菌时间30分钟；
3）固体培养基配方及处理：按照剥壳小麦（或大米）：纯化水水1.0:1.3，进行121℃高温灭菌，灭菌时间40分钟；
4）液体菌种制备：将母种在无菌条件下按照1%的量接入液体培养基中，在20-22℃摇床培养2-4天，以液体摇瓶转色为准；
5）接种：将培养后的液体菌种接入固体培养基中，接种前磁化处理0.5分钟，菌种液按照小麦量的9%的比例接种；
6）培养：接种后暗培养温度控制在15-20℃，光培养控制温度在20-25℃，控制湿度在65-85%，控制培养环境二氧化碳浓度小于1000ppm，光照强度100-300Lx，培养时间为20-30天，当子实体为黄色略有孢子粉时收获；
7）采收：孢子粉用旋风除尘器进行收集，收集后直接进行烘干即可，子实体分割后装盘，菌质掰碎后转盘，菌质大小控制2-5cm，培养物的收集即为人工金蝉花获取物，含：孢子粉、子实体、菌质。
8）除湿：将收获后的子实体、菌质放入除湿间，控制湿度30-40%，子实体时间控制在20-48h，培养基及菌丝体控制时间在50-72h，以子实体水分小于15%，菌质水分小于20%时转入下一步骤；
9）烘干：温度控制在60℃，时间控制在15-30h，当水分小于8%为止；
10）装袋：将烘干后的子实体装入密封袋中，阴凉干燥处保存。
实施例5
1）菌种从莫干山野生金蝉花孢子粉中选取，以端午节后两周的时间最佳，得到的孢子粉通过5次的纯化及培养实验，确定优质的菌种，将挑选出的菌株置于灭菌的萨式培养基斜面上，20-22℃下培养2-4天，待白色菌落长满试管后，作为母种备用或保存于液氮罐中；
2）液体菌种培养基配方及处理：土豆削皮切片200g，用等量的水煮沸30分钟后，过滤，取滤液、糖15g、琼脂粉25g、纯化水760g；进行121℃高温灭菌，灭菌时间35分钟；
3）固体培养基配方及处理：按照剥壳小麦（或大米）：纯化水水0.8:1.0，进行121℃高温灭菌，灭菌时间50分钟；
4）液体菌种制备：将母种在无菌条件下按照2%的量接入液体培养基中，在20-22℃摇床培养2-4天，以液体摇瓶转色为准；
5）接种：将培养后的液体菌种接入固体培养基中，接种前磁化处理1.0分钟，菌种液按照小麦量的8%的比例接种；
6）培养：接种后暗培养温度控制在15-20℃，光培养控制温度在20-25℃，控制湿度在65-85%，控制培养环境二氧化碳浓度小于1000ppm，光照强度100-300Lx，培养时间为20-30天，当子实体为黄色略有孢子粉时收获；
7）采收：孢子粉用旋风除尘器进行收集，收集后直接进行烘干即可，子实体分割后装盘，菌质掰碎后转盘，菌质大小控制2-5cm，培养物的收集即为人工金蝉花获取物，含：孢子粉、子实体、菌质。
8）除湿：将收获后的子实体、菌质放入除湿间，控制湿度30-40%，子实体时间控制在20-48h，培养基及菌丝体控制时间在50-72h，以子实体水分小于15%，菌质水分小于20%时转入下一步骤；
9）烘干：温度控制在65℃，时间控制在15-30h，当水分小于8%为止；
10）装袋：将烘干后的子实体装入密封袋中，阴凉干燥处保存。

Claims (9)

1.一种人工金蝉花的菌种筛选、制备及生产培养方法，其特征在于包括以下步骤：
1）菌种从莫干山野生金蝉花子实体上取白色孢子粉，显微鉴别长椭圆形或圆形，单胞，壁光滑，无色，透明，多对称，少数弯曲直径3-10微米，常见1-3个油滴，经过2-5次的接种纯化及培养，得到菌株作为菌种，所选取的菌株编号为HZXC0001号；
2）液体菌种培养基配方及处理：土豆150-250g、糖15-25g、琼脂粉15-25g、纯化水700-900g；进行121℃高温灭菌，灭菌时间30-60分钟；
3）固体培养基配方及处理：按照剥壳小麦或大米：纯化水为0.8-1.0:1.3-1.5，进行121℃高温灭菌，灭菌时间30-60分钟，根据小麦蒸煮后的状态适当调整料水比，以小麦局部爆开、含水量适度为准，避免蒸煮后小麦为纯颗粒状；
4）液体菌种制备：将母种在无菌条件下接入液体培养基中，培养2-4天；
5）接种：将培养后的液体菌种接入固体培养基中，接种前液体菌种经过0.5-2分钟磁化处理，菌种液按照小麦量的8-12%的比例接种；
6）培养：接种后暗培养温度控制在15-20℃，光培养控制温度在20-25℃，控制湿度在65-85%，控制培养环境二氧化碳浓度小于1000ppm，光照强度100-300Lx，培养时间为20-30天；
7）采收：孢子粉用旋风除尘器进行收集，收集后直接进行烘干即可，子实体分割后装盘，菌质掰碎后转盘，菌质大小控制2-5cm，培养物的收集即为人工金蝉花获取物，含：孢子粉、子实体、菌质；
8）除湿：将收获后的子实体、菌质放入除湿间，控制湿度30-40%，子实体时间控制在20-48h，培养基及菌丝体控制时间在50-72h；
9）烘干：温度控制在60-80℃，时间控制在15-30h，水分小于8%为止；
10）装袋：将烘干后的子实体装入密封袋中。
2.根据权利要求1所述一种人工金蝉花的菌种筛选、制备及生产培养方法，其特征在于，菌种从莫干山野生金蝉花孢子粉中选取，通过2-5次的纯化及培养实验，确定优质的菌种，将挑选出的菌株置于灭菌的萨式培养基斜面上，20-22℃下培养2-4天，待白色菌落长满试管后，作为母种备用4℃保存或永久性保存于液氮罐中。
3.根据权利要求1所述的一种人工金蝉花的菌种筛选、制备及生产培养方法，其特征在于，液体菌种培养基配方：土豆150-250g、糖15-25g、琼脂粉15-25g、纯化水700-900g；处理方法：进行121℃高温灭菌，灭菌时间30-60分钟，当液体培养基的温度冷却到室温后，在无菌环境下，按照1-3%的量接入母种，在20-22℃下，摇床培养3-5天，待菌丝转成微红棕色后作为液体菌种也备用。
4.根据权利要求1所述一种人工金蝉花的菌种筛选、制备及生产培养方法，其特征在于，液体菌种培养基接种前经过0.5-2分钟磁化处理。
5.根据权利要求1所述的一种人工金蝉花的菌种筛选、制备及生产培养方法，其特征在于，固体培养基配方：按照剥壳小麦或大米：纯化水为0.8-1.0:1.3-1.5，处理方法：进行121℃高温灭菌，灭菌时间30-60分钟，根据小麦蒸煮后的状态适当调整料水比，以小麦局部爆开、含水量适度为准，避免蒸煮后小麦为纯颗粒状。
6.根据权利要求1所述一种人工金蝉花的菌种筛选、制备及生产培养方法，其特征在于，接种后暗培养温度控制在15-20℃，光培养控制温度在20-25℃，控制湿度在65-85%，控制培养环境二氧化碳浓度小于1000ppm，光照强度100-300Lx，培养时间为20-30天，培养环境为C级无菌区或者为开启紫外线的普通洁净管理区。
7.根据权利要求1所述的一种人工金蝉花的菌种筛选、制备及生产培养方法，其特征在于，采收：孢子粉用旋风除尘器进行收集，收集后直接进行50-70℃烘干，子实体在C级无菌区抽风柜下进行分割后装盘，菌质掰碎后转盘，菌质大小控制2-5cm。
8.根据权利要求1所述的一种人工金蝉花的菌种筛选、制备及生产培养方法，其特征在于，除湿：将收获后的子实体、菌质放入除湿间，开启紫外灭菌灯，控制环境湿度30-40%，除湿机散热口安装于除湿间外部，控制房间温度不高于28℃，子实体时间控制在20-48h，培养基及菌丝体控制时间在50-72h。
9.根据权利要求1所述的一种人工金蝉花的菌种筛选、制备及生产培养方法，其特征在于，烘干：开启烘箱排风，烘箱温度控制在60-80℃，时间控制在15-30h，水分小于8%为止，孢子粉收集后直接烘干，子实体与菌质除湿后再进行烘干，烘干完成在负压罩下装袋，密封保存于阴凉干燥环境中。
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