CN106172124A - 一种南方地区欧洲鳇的人工繁育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种南方地区欧洲鳇的人工繁育方法，所述方法步骤包括：一、亲鱼挑选与冬化培育；二、催产繁殖与人工授精；三、孵化管理出苗；四、苗种培育。本发明的有益效果是：本发明培育的欧洲鳇苗种受精率、孵化率高(授精率达到95％以上，孵化率达到90％以上)，且具有生长快、适应性广、成活率高、抗逆性强等生长性状优良的特点，具有更高的经济效益，适宜于我国南方地区欧洲鳇的养殖。
Description
技术领域
本发明属于水产养殖技术领域，涉及一种拥有较高产卵率、受精率、孵化率、成活率且经济有效的南方地区欧洲鳇的人工繁育方法。
背景技术
欧洲鳇又称欧鳇、黑海鳇，隶属于鲟形目、鲟科、鳇属，是世界上现存体型最大的淡水鱼类之一，是世界名特优养殖珍品，肉味鲜美、骨软、营养价值高，鱼肉和卵的蛋白含量可高达18％和29％。欧洲鳇产品中价值最高的当属由其鱼卵加工而成的欧洲鳇鱼子酱。是在国际市场上的价格最为昂贵的品种。随着市场对鲟鱼需求量的日益增加，欧洲鳇天然资源不断衰竭，鲟鳇鱼类产量不足全球鲟鳇鱼类需求量25％-30％。
上个世纪中叶开始，国外尤其是俄罗斯开始对欧洲鳇有所研究，包括其生活习性及繁殖习性等，并于近60余年成为俄罗斯等国家鲟鳇鱼类增殖主要对象。但国内欧洲鳇苗种繁育技术研究目前尚处于起步阶段，国内欧洲鳇养殖产量亦非常有限，随着鲟龙科技的欧洲鳇人工养殖的亲鱼群体逐渐成熟，为实现南方地区欧洲鳇全人工繁殖奠定基础。
欧洲鳇属于亚冷水性鱼类，主要栖息在里海、黑海、亚述海等北半球纬度较高的区域，自然条件下会经历5个月以上的低温期(<5℃)发育后进入繁殖期。中国南方地区如浙江属于亚热带季风气候，冬季低温期较短，卵细胞很可能发育不成熟影响繁殖，造成国内尤其是南方地区欧洲鳇苗种资源的匮乏，制约了欧洲鳇养殖产业及其鱼子酱和鱼肉加工高值化利用的发展。
发明内容
本发明的目的是为了解决国内欧洲鳇苗种资源的匮乏，南方地区欧洲鳇繁育困难较大，不能满足市场需求的问题，提供一套拥有较高产卵率、受精率、孵化率、成活率且经济有效的欧洲鳇南方地区全人工繁育方法。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种南方地区欧洲鳇的人工繁育方法，所述方法步骤包括：
一、亲鱼挑选与冬化培育
1.亲鱼挑选：在南方地区，母本选用13+龄欧洲鳇；父本选用11+龄欧洲鳇；雌雄数量比例为♀∶♂＝1.5-2：1，饲养密度15-20kg/m3；
2.冬化培育：亲鱼挑选完成并隔离饲养后，能用于繁殖的亲鱼放入8℃以下的低温池内暂养8-12周后进行催产，饲养密度为步骤1)养殖密度的1/2；
二、催产繁殖与人工授精
1.产前检查；
2.催产繁殖：将亲鱼转移至皮篓中，每天升温1℃，直至水温达到16℃后，进入催产工作；将亲鱼麻醉，称取重量；
(1)注射催产针：采用胸鳍基部腹腔注射或背部肌肉注射两种注射方式；将注射过催产药物的雌鱼放入合适直径的玻璃缸或其它容器内，每缸放2尾；
(2)采集精液和取卵；
3.人工授精；
三、孵化管理出苗：
受精卵入孵化器后调节水温保持15-16℃，受精卵进孵化器6h后，鱼卵消毒；每天用10ppm的福尔马林溶液或双氧水浸泡消毒2次，破膜前停止用药，孵化过程中每天及时清除死卵；在15-16℃的水温中鱼卵经过6d的孵化便可以破膜孵出仔鱼，将仔鱼收集清洗体表卵膜、污泥，转入干净池中暂养3-4h；
四、苗种培育。
作为优选，催产针选择鲤鱼脑垂体注射：雄鱼注射一次，对雌鱼注射两次，第一次剂量为1.0-2.0mg/kg，第二次剂量为5.0-6.0mg/kg，两次注射间隔12小时，雄鱼注射剂量为雌鱼的一半。
作为优选，催产针选择LHRH-A2注射：雄鱼注射一次，雌鱼注射两次，第一次剂量为1.0-2.0μg/kg，第二次剂量为3.0-4.0μg/kg，两次注射间隔12小时，雄鱼注射剂量为雌鱼的一半。
作为优选，冬化培育时，投喂量为体重的0.1-0.2％，饲料中加入饲料重量3-5.2％的β胡萝卜素与饲料重量0.7-1.8％的助剂；采用喷水式自然降温法维持低温水源供应，即利用夜间低温环境降低备用蓄水池水温，白天抽取蓄水池水源注入亲鱼池，以维持冬化水体低温环境。
作为优选，人工授精时，在雌鱼取卵的同时，将精液提温，在16℃水温下提温半个小时，使用一次性注射器抽取精液；在鱼卵受精前先镜检精子活力；鱼卵取出后采用半干法受精，按照1L鱼卵10ml精液1.5L水的比例混合受精，先将优质精液倒入水中再立即倒入鱼卵中用羽毛搅拌受精3-5min，受精完毕静置1-2min，然后漂洗2-3次多余的精液和黏液；将25wt％的滑石粉溶液和同体积的清水倒入盛有受精卵的盆内，缓慢搅动；搅动40分钟后将上层液体倒掉，再重复两次后用清水漂洗干净。
作为优选，仔稚鱼培育初期，放养密度控制在3000-5000尾/m2，发育到鱼苗下沉前放养密度降到2000-3000尾/m2；出膜仔鱼1-7天水丝蚓活饵剁碎后培育7日，培育水温16±0.5℃，日投喂次数为8次；7日后每次投喂时，在水丝蚓内按5-7.5wt.％比例添加配合饲料进行混合投喂，3天后停止添加配合饲料，改活饵与配合饵料交替投喂方式进行仔鱼驯化培育，开始每天投喂配合次数1-2次，活饵6-7次，以后每1-2天减少一次活饵投喂次数，相应增加配合饲料投喂次数活，保持日投喂总数不变；经7-10天即可完成仔鱼的配合饲料驯化培育；幼鱼培育池以架设有遮阴设施的水泥池或玻璃钢池培育为主；鱼苗放养密度每平方米水面可放养3cm左右的鱼苗500-1000尾。
作为优选，助剂由以下重量份数的原料组成：复合氨基酸6-8份、复合维生素12-15份、油茶籽粕改性提取物10-13份与白蚂蚁20-25份。在本技术方案中，在饲料中加入白蚂蚁可以增强亲鱼的免疫力，更为亲鱼提供蛋白质，又可以抗病菌，同时通过油茶籽粕改性提取物，协同提高亲鱼的免疫力与活性，复合维生素的加入使得亲鱼在生长期间保证了各种营养。
作为优选，复合氨基酸由质量比为2:3：1：4的胱氨酸、酪氨酸、谷氨酸、丝氨酸组成；复合维生素由质量比为3:1:4:5的VE、VB2、VB6、VC组成；油茶籽粕改性提取物的制备方法如下：取榨油后的油茶籽粕，研磨成粉，按液固比25mL/g将油茶籽粕添加到浓度为65wt％的乙醇溶液中并搅拌均匀，将乙醇溶液转移至微波提取器中进行加热提取，提取温度为80℃，提取时间为25min，微波功率为1200W；提取后得到粗提液，将粗提液过滤，取过滤液，向过滤液中添加过滤液体积0.3倍的30wt％双氧水溶液，在70℃下加热30min，然后向溶液中添加溶液质量1.2％壳聚糖，在室温下静置4h，离心、过滤得到精提液，将精提液真空干燥后制得油茶籽粕提取物；将油茶籽粕提取物溶于酸性溶液中配得浓度为5wt％、pH为3.5的油茶籽粕提取物酸性溶液，在3h内向油茶籽粕提取物酸性溶液中匀速滴加质量为油茶籽粕提取物1.5倍的亚硒酸钠进行反应，反应温度为75℃；反应结束后经过浓缩、真空干燥制得油茶籽粕改性提取物。
作为优选，仔稚鱼培育期间，每隔2天通入2-8L含体积分数0.006-0.05％臭氧的空气，配合饲料为鲟鱼微粒子开口饵料。
作为优选，母本选用13+龄欧洲鳇，体长160-195cm，体重60-90kg；父本选用11+龄欧洲鳇，体长145-175cm，体重45-70kg。
本发明的有益效果是：本发明培育的欧洲鳇苗种受精率、孵化率高(授精率达到95％以上，孵化率达到90％以上)，且具有生长快、适应性广、成活率高、抗逆性强等生长性状优良的特点，具有更高的经济效益，适宜于我国南方地区欧洲鳇的养殖。
具体实施方式
下面对本发明的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。
实施例1
一种南方地区欧洲鳇的人工繁育方法，所述方法步骤如下：
一、亲鱼挑选与冬化培育
1.亲鱼挑选：在南方地区，水温18℃以下时鉴定雌性亲鱼能否用于繁殖，欧洲鳇亲鱼全人工培育下，母本选用13+龄欧洲鳇，体长160-195cm，体重60-90kg；父本选用11+龄欧洲鳇，体长145-175cm，体重45-70kg；挑选形态、体色正常、个体大、健康无伤的雌雄欧洲鳇亲鱼，将雌雄亲鱼分别放入直径15m的圆形亲鱼培育池内，雌雄数量比例为♀∶♂＝1.5：1；饲养密度15kg/m3。
2.冬化培育：亲鱼挑选完成并隔离饲养后，能用于繁殖的亲鱼放入8℃以下的低温池内暂养8周后进行催产。为延长南方地区水体的低温期，并节约降温成本，采用喷水式自然降温法维持低温水源供应，即利用夜间低温环境降低备用蓄水池水温，白天抽取蓄水池水源注入亲鱼池，以维持冬化水体低温环境。
在此期间放养密度为平时养殖密度的1/2，投喂量为体重的0.1％。饲料要求增加营养成份，提高鱼油和蛋白质含量(蛋白质含量42％)，饲料中加入饲料重量3％的β胡萝卜素与饲料重量0.7％的助剂，降低碳水化合物含量。培育期设专人管理，做好日常记录工作，尽量减少药物使用及人为惊吓与干扰。其中，助剂由以下重量份数的原料组成：复合氨基酸6份、复合维生素12份、油茶籽粕改性提取物10份与白蚂蚁20份。
复合氨基酸由质量比为2:3：1：4的胱氨酸、酪氨酸、谷氨酸、丝氨酸组成；复合维生素由质量比为3:1:4:5的VE、VB2、VB6、VC组成；油茶籽粕改性提取物的制备方法如下：取榨油后的油茶籽粕，研磨成粉，按液固比25mL/g将油茶籽粕添加到浓度为65wt％的乙醇溶液中并搅拌均匀，将乙醇溶液转移至微波提取器中进行加热提取，提取温度为80℃，提取时间为25min，微波功率为1200W；提取后得到粗提液，将粗提液过滤，取过滤液，向过滤液中添加过滤液体积0.3倍的30wt％双氧水溶液，在70℃下加热30min，然后向溶液中添加溶液质量1.2％壳聚糖，在室温下静置4h，离心、过滤得到精提液，将精提液真空干燥后制得油茶籽粕提取物；将油茶籽粕提取物溶于酸性溶液中配得浓度为5wt％、pH为3.5的油茶籽粕提取物酸性溶液，在3h内向油茶籽粕提取物酸性溶液中匀速滴加质量为油茶籽粕提取物1.5倍的亚硒酸钠进行反应，反应温度为75℃；反应结束后经过浓缩、真空干燥制得油茶籽粕改性提取物。
二、催产繁殖与人工授精
1.产前检查：在繁殖计划时间之前伺机安排穿刺检查，根据鱼卵极化指数确定雌鱼能否用于繁殖，预算可用于繁殖的雌鱼数量。通过穿刺并镜检，鉴别雄鱼性腺组织，挑选健康的、性腺组织发育完好的雄鱼。检查繁殖亲鱼鱼卵成熟度时，要将肉眼观察判断升级为必须测量极化指数结合起来，尽量保证所有亲鱼都处于最适催产的成熟期，若成熟度没法保持一致，应在催产剂量上作出相应的调整，成熟度低剂量相应增加。
2.催产繁殖：将亲鱼转移至皮篓中，每天升温1℃，直至水温达到16℃后，进入催产工作。将亲鱼麻醉，称取重量；对亲鱼打标记以便于区分。
(1)注射催产针：采用胸鳍基部腹腔注射注射方式。
鲤鱼脑垂体注射：雄鱼注射一次，对雌鱼注射两次，第一次剂量为1.0mg/kg，第二次剂量为5.0mg/kg，两次注射间隔12小时。雄鱼注射剂量为雌鱼的一半。
将注射过催产药物的雌鱼放入合适直径的玻璃缸或其它容器内，每缸放2尾，便于观察。如果雌鱼注射完最后一针催产针40小时后没能产卵，则将其放回产后培育池。
(2)采集精液和取卵：注射催产药物24小时后，用干燥的封口袋采集雄鱼精液，充氧标记后避光保存在0-4℃的冰箱中备用；雌鱼效应时间前2小时开始观察，在鱼游动时用手摸鱼体腹部，感觉腹部柔软且性腺在游动时，将鱼取出放入麻醉缸内麻醉，麻醉后用清水冲洗生殖孔处，再用干毛巾将水擦干，放置在手术台上，由腹部向生殖孔方向轻轻挤压，使卵从生殖孔流出，用干燥的不锈钢器皿收集鱼卵。
3.人工授精：在雌鱼取卵的同时，适时安排精液提温，在16℃水温下提温半个小时，使用一次性注射器抽取的精液；在鱼卵受精前先镜检精子活力，避免使用活力差的精子。鱼卵取出后采用半干法受精，按照1L鱼卵10ml精液1.5L水的比例混合受精，先将优质精液倒入水中再立即倒入鱼卵中用羽毛搅拌受精3-5min，受精完毕静置1-2min，然后漂洗2-3次多余的精液和黏液，进行人工脱粘。将25％的滑石粉溶液和同体积的清水轻轻倒入盛有受精卵的盆内，用手缓慢搅动，避免滑石粉沉淀。搅动40分钟后将上层液体倒掉，再重复两次后用清水漂洗干净。
三、孵化管理出苗：
鱼卵采用麦氏孵化瓶孵化，受精卵入孵化器后调节水温使其保持在15-16℃，受精卵进孵化器6h后，便可以进行鱼卵消毒处理，预防病菌感染。每天用10ppm的双氧水浸泡消毒2次，破膜前停止用药，孵化过程中每天及时清除死卵，防止败坏水质、引发水霉病的发生。
在15-16℃的水温中鱼卵经过6d的孵化便可以破膜孵出仔鱼，从第一尾仔鱼破膜孵出起4h后是仔鱼孵出高峰期，刚孵出的仔鱼体质较弱，部分躺卧池底，将仔鱼收集清洗体表卵膜、污泥，转入干净池中暂养3-4h便可以游上水面。
四、苗种培育
仔稚鱼培育初期，放养密度控制在3000尾/m2，发育到鱼苗下沉前放养密度降到2000尾/m2；出膜仔鱼1天水丝蚓活饵剁碎后培育7日(圆型玻璃缸水槽2m×0.4m)，培育水温(16±0.5)℃，日投喂次数为8次；7日后每次投喂时，需在水丝蚓内按5wt.％比例添加配合饲料(鲟鱼微粒子开口饵料)进行混合投喂，3天后停止添加配合饲料，改活饵与配合饵料交替投喂方式进行仔鱼驯化培育，开始每天投喂配合次数1-2次，活饵6-7次，以后每1-2天减少一次活饵投喂次数，相应增加配合饲料投喂次数活，保持日投喂总数不变。经7天即可完成仔鱼的配合饲料驯化培育；幼鱼培育池以架设有遮阴设施的水泥池或玻璃钢池培育为主。鱼苗放养密度每平方米水面可放养3cm左右的鱼苗500尾。仔稚鱼培育期间，每隔2天通入2L含体积分数0.006％臭氧的空气。
实施例2
一种南方地区欧洲鳇的人工繁育方法，所述方法步骤如下：
一、亲鱼挑选与冬化培育
1.亲鱼挑选：在南方地区，水温18℃以下时鉴定雌性亲鱼能否用于繁殖，欧洲鳇亲鱼全人工培育下，母本选用13+龄欧洲鳇，体长160-195cm，体重60-90kg；父本选用11+龄欧洲鳇，体长145-175cm，体重45-70kg；挑选形态、体色正常、个体大、健康无伤的雌雄欧洲鳇亲鱼，将雌雄亲鱼分别放入直径15m的圆形亲鱼培育池内，雌雄数量比例为♀∶♂＝1.8：1；饲养密度18kg/m3。
2.冬化培育：亲鱼挑选完成并隔离饲养后，能用于繁殖的亲鱼放入8℃以下的低温池内暂养10周后进行催产。为延长南方地区水体的低温期，并节约降温成本，采用喷水式自然降温法维持低温水源供应，即利用夜间低温环境降低备用蓄水池水温，白天抽取蓄水池水源注入亲鱼池，以维持冬化水体低温环境。
在此期间放养密度为平时养殖密度的1/2，投喂量为体重的0.15％。饲料要求增加营养成份，提高鱼油和蛋白质含量(蛋白质含量43％)，饲料中加入饲料重量4％的β胡萝卜素与饲料重量1.2％的助剂，降低碳水化合物含量。培育期设专人管理，做好日常记录工作，尽量减少药物使用及人为惊吓与干扰。其中，助剂由以下重量份数的原料组成：复合氨基酸7份、复合维生素13份、油茶籽粕改性提取物12份与白蚂蚁23份。
复合氨基酸由质量比为2:3：1：4的胱氨酸、酪氨酸、谷氨酸、丝氨酸组成；复合维生素由质量比为3:1:4:5的VE、VB2、VB6、VC组成，油茶籽粕改性提取物的制备方法如下：取榨油后的油茶籽粕，研磨成粉，按液固比25mL/g将油茶籽粕添加到浓度为65wt％的乙醇溶液中并搅拌均匀，将乙醇溶液转移至微波提取器中进行加热提取，提取温度为80℃，提取时间为25min，微波功率为1200W；提取后得到粗提液，将粗提液过滤，取过滤液，向过滤液中添加过滤液体积0.3倍的30wt％双氧水溶液，在70℃下加热30min，然后向溶液中添加溶液质量1.2％壳聚糖，在室温下静置4h，离心、过滤得到精提液，将精提液真空干燥后制得油茶籽粕提取物；将油茶籽粕提取物溶于酸性溶液中配得浓度为5wt％、pH为3.5的油茶籽粕提取物酸性溶液，在3h内向油茶籽粕提取物酸性溶液中匀速滴加质量为油茶籽粕提取物1.5倍的亚硒酸钠进行反应，反应温度为75℃；反应结束后经过浓缩、真空干燥制得油茶籽粕改性提取物。
二、催产繁殖与人工授精
1.产前检查：在繁殖计划时间之前伺机安排穿刺检查，根据鱼卵极化指数确定雌鱼能否用于繁殖，预算可用于繁殖的雌鱼数量。通过穿刺并镜检，鉴别雄鱼性腺组织，挑选健康的、性腺组织发育完好的雄鱼。检查繁殖亲鱼鱼卵成熟度时，要将肉眼观察判断升级为必须测量极化指数结合起来，尽量保证所有亲鱼都处于最适催产的成熟期，若成熟度没法保持一致，应在催产剂量上作出相应的调整，成熟度低剂量相应增加。
2.催产繁殖：将亲鱼转移至皮篓中，每天升温1℃，直至水温达到16℃后，进入催产工作。将亲鱼麻醉，称取重量；对亲鱼打标记以便于区分。
(1)注射催产针：采用背部肌肉注射方式。
LHRH-A2注射：雄鱼注射一次，雌鱼注射两次，第一次剂量为1.5μg/kg，第二次剂量为3.5μg/kg，两次注射间隔12小时。雄鱼注射剂量为雌鱼的一半。
将注射过催产药物的雌鱼放入合适直径的玻璃缸或其它容器内，每缸放2尾，便于观察。如果雌鱼注射完最后一针催产针40小时后没能产卵，则将其放回产后培育池。
(2)采集精液和取卵：注射催产药物24小时后，用干燥的封口袋采集雄鱼精液，充氧标记后避光保存在0-4℃的冰箱中备用；雌鱼效应时间前2小时开始观察，在鱼游动时用手摸鱼体腹部，感觉腹部柔软且性腺在游动时，将鱼取出放入麻醉缸内麻醉，麻醉后用清水冲洗生殖孔处，再用干毛巾将水擦干，放置在手术台上，由腹部向生殖孔方向轻轻挤压，使卵从生殖孔流出，用干燥的不锈钢器皿收集鱼卵。
3.人工授精：在雌鱼取卵的同时，适时安排精液提温，在16℃水温下提温半个小时，使用一次性注射器抽取的精液；在鱼卵受精前先镜检精子活力，避免使用活力差的精子。鱼卵取出后采用半干法受精，按照1L鱼卵10ml精液1.5L水的比例混合受精，先将优质精液倒入水中再立即倒入鱼卵中用羽毛搅拌受精3-5min，受精完毕静置1-2min，然后漂洗2-3次多余的精液和黏液，进行人工脱粘。将25％的滑石粉溶液和同体积的清水轻轻倒入盛有受精卵的盆内，用手缓慢搅动，避免滑石粉沉淀。搅动40分钟后将上层液体倒掉，再重复两次后用清水漂洗干净。
三、孵化管理出苗：
鱼卵采用麦氏孵化瓶孵化，受精卵入孵化器后调节水温使其保持在15-16℃，受精卵进孵化器6h后，便可以进行鱼卵消毒处理，预防病菌感染。每天用10ppm的福尔马林溶液浸泡消毒2次，破膜前停止用药，孵化过程中每天及时清除死卵，防止败坏水质、引发水霉病的发生。
在15-16℃的水温中鱼卵经过6d的孵化便可以破膜孵出仔鱼，从第一尾仔鱼破膜孵出起4h后是仔鱼孵出高峰期，刚孵出的仔鱼体质较弱，部分躺卧池底，将仔鱼收集清洗体表卵膜、污泥，转入干净池中暂养3-4h便可以游上水面。
四、苗种培育
仔稚鱼培育初期，放养密度控制在4000尾/m2，发育到鱼苗下沉前放养密度降到2500尾/m2；出膜仔鱼4天水丝蚓活饵剁碎后培育7日(圆型玻璃缸水槽2m×0.4m)，培育水温(16±0.5)℃，日投喂次数为8次；7日后每次投喂时，需在水丝蚓内按6wt.％比例添加配合饲料(鲟鱼微粒子开口饵料)进行混合投喂，3天后停止添加配合饲料，改活饵与配合饵料交替投喂方式进行仔鱼驯化培育，开始每天投喂配合次数1-2次，活饵6-7次，以后每1-2天减少一次活饵投喂次数，相应增加配合饲料投喂次数活，保持日投喂总数不变。经8天即可完成仔鱼的配合饲料驯化培育；幼鱼培育池以架设有遮阴设施的水泥池或玻璃钢池培育为主。鱼苗放养密度每平方米水面可放养3cm左右的鱼苗800稚鱼培育期间，每隔2天通入5L含体积分数0.024％臭氧的空气。
实施例3
一种南方地区欧洲鳇的人工繁育方法，所述方法步骤如下：
一、亲鱼挑选与冬化培育
1.亲鱼挑选：在南方地区，水温18℃以下时鉴定雌性亲鱼能否用于繁殖，欧洲鳇亲鱼全人工培育下，母本选用13+龄欧洲鳇，体长160-195cm，体重60-90kg；父本选用11+龄欧洲鳇，体长145-175cm，体重45-70kg；挑选形态、体色正常、个体大、健康无伤的雌雄欧洲鳇亲鱼，将雌雄亲鱼分别放入直径15m的圆形亲鱼培育池内，雌雄数量比例为♀∶♂＝2：1；饲养密度20kg/m3。
2.冬化培育：亲鱼挑选完成并隔离饲养后，能用于繁殖的亲鱼放入8℃以下的低温池内暂养12周后进行催产。为延长南方地区水体的低温期，并节约降温成本，采用喷水式自然降温法维持低温水源供应，即利用夜间低温环境降低备用蓄水池水温，白天抽取蓄水池水源注入亲鱼池，以维持冬化水体低温环境。
在此期间放养密度为平时养殖密度的1/2，投喂量为体重的0.2％。饲料要求增加营养成份，提高鱼油和蛋白质含量(蛋白质含量45％)，饲料中加入饲料重量5.2％的β胡萝卜素与饲料重量1.8％的助剂，降低碳水化合物含量。培育期设专人管理，做好日常记录工作，尽量减少药物使用及人为惊吓与干扰。其中，助剂由以下重量份数的原料组成：复合氨基酸8份、复合维生素15份、油茶籽粕改性提取物13份与白蚂蚁25份。
复合氨基酸由质量比为2:3：1：4的胱氨酸、酪氨酸、谷氨酸、丝氨酸组成；复合维生素由质量比为3:1:4:5的VE、VB2、VB6、VC组成；油茶籽粕改性提取物的制备方法如下：取榨油后的油茶籽粕，研磨成粉，按液固比25mL/g将油茶籽粕添加到浓度为65wt％的乙醇溶液中并搅拌均匀，将乙醇溶液转移至微波提取器中进行加热提取，提取温度为80℃，提取时间为25min，微波功率为1200W；提取后得到粗提液，将粗提液过滤，取过滤液，向过滤液中添加过滤液体积0.3倍的30wt％双氧水溶液，在70℃下加热30min，然后向溶液中添加溶液质量1.2％壳聚糖，在室温下静置4h，离心、过滤得到精提液，将精提液真空干燥后制得油茶籽粕提取物；将油茶籽粕提取物溶于酸性溶液中配得浓度为5wt％、pH为3.5的油茶籽粕提取物酸性溶液，在3h内向油茶籽粕提取物酸性溶液中匀速滴加质量为油茶籽粕提取物1.5倍的亚硒酸钠进行反应，反应温度为75℃；反应结束后经过浓缩、真空干燥制得油茶籽粕改性提取物。
二、催产繁殖与人工授精
1.产前检查：在繁殖计划时间之前伺机安排穿刺检查，根据鱼卵极化指数确定雌鱼能否用于繁殖，预算可用于繁殖的雌鱼数量。通过穿刺并镜检，鉴别雄鱼性腺组织，挑选健康的、性腺组织发育完好的雄鱼。检查繁殖亲鱼鱼卵成熟度时，要将肉眼观察判断升级为必须测量极化指数结合起来，尽量保证所有亲鱼都处于最适催产的成熟期，若成熟度没法保持一致，应在催产剂量上作出相应的调整，成熟度低剂量相应增加。
2.催产繁殖：将亲鱼转移至皮篓中，每天升温1℃，直至水温达到16℃后，进入催产工作。将亲鱼麻醉，称取重量；对亲鱼打标记以便于区分。
(1)注射催产针：采用背部肌肉注射方式。
鲤鱼脑垂体注射：雄鱼注射一次，对雌鱼注射两次，第一次剂量为2.0mg/kg，第二次剂量为6.0mg/kg，两次注射间隔12小时。雄鱼注射剂量为雌鱼的一半。
将注射过催产药物的雌鱼放入合适直径的玻璃缸或其它容器内，每缸放2尾，便于观察。如果雌鱼注射完最后一针催产针40小时后没能产卵，则将其放回产后培育池。
(2)采集精液和取卵：注射催产药物24小时后，用干燥的封口袋采集雄鱼精液，充氧标记后避光保存在0-4℃的冰箱中备用；雌鱼效应时间前2小时开始观察，在鱼游动时用手摸鱼体腹部，感觉腹部柔软且性腺在游动时，将鱼取出放入麻醉缸内麻醉，麻醉后用清水冲洗生殖孔处，再用干毛巾将水擦干，放置在手术台上，由腹部向生殖孔方向轻轻挤压，使卵从生殖孔流出，用干燥的不锈钢器皿收集鱼卵。
3.人工授精：在雌鱼取卵的同时，适时安排精液提温，在16℃水温下提温半个小时，使用一次性注射器抽取的精液；在鱼卵受精前先镜检精子活力，避免使用活力差的精子。鱼卵取出后采用半干法受精，按照1L鱼卵10mL精液1.5L水的比例混合受精，先将优质精液倒入水中再立即倒入鱼卵中用羽毛搅拌受精3-5min，受精完毕静置1-2min，然后漂洗2-3次多余的精液和黏液，进行人工脱粘。将25％的滑石粉溶液和同体积的清水轻轻倒入盛有受精卵的盆内，用手缓慢搅动，避免滑石粉沉淀。搅动40分钟后将上层液体倒掉，再重复两次后用清水漂洗干净。
三、孵化管理出苗：
鱼卵采用麦氏孵化瓶孵化，受精卵入孵化器后调节水温使其保持在15-16℃，受精卵进孵化器6h后，便可以进行鱼卵消毒处理，预防病菌感染。每天用10ppm的福尔马林溶液浸泡消毒2次，破膜前停止用药，孵化过程中每天及时清除死卵，防止败坏水质、引发水霉病的发生。
在15-16℃的水温中鱼卵经过6d的孵化便可以破膜孵出仔鱼，从第一尾仔鱼破膜孵出起4h后是仔鱼孵出高峰期，刚孵出的仔鱼体质较弱，部分躺卧池底，将仔鱼收集清洗体表卵膜、污泥，转入干净池中暂养3-4h便可以游上水面。
四、苗种培育
仔稚鱼培育初期，放养密度控制在5000尾/m2，发育到鱼苗下沉前放养密度降到3000尾/m2；出膜仔鱼7天水丝蚓活饵剁碎后培育7日(圆型玻璃缸水槽2m×0.4m)，培育水温(16±0.5)℃，日投喂次数为8次；7日后每次投喂时，需在水丝蚓内按7.5wt.％比例添加配合饲料(鲟鱼微粒子开口饵料)进行混合投喂，3天后停止添加配合饲料，改活饵与配合饵料交替投喂方式进行仔鱼驯化培育，开始每天投喂配合次数1-2次，活饵6-7次，以后每1-2天减少一次活饵投喂次数，相应增加配合饲料投喂次数活，保持日投喂总数不变。经10天即可完成仔鱼的配合饲料驯化培育；幼鱼培育池以架设有遮阴设施的水泥池或玻璃钢池培育为主。鱼苗放养密度每平方米水面可放养3cm左右的鱼苗1000尾。仔稚鱼培育期间，每隔2天通入8L含体积分数0.05％臭氧的空气。
Claims (10)
1.一种南方地区欧洲鳇的人工繁育方法，其特征在于，所述方法步骤包括：
一、亲鱼挑选与冬化培育
1.亲鱼挑选：在南方地区，母本选用13+龄欧洲鳇；父本选用11+龄欧洲鳇；雌雄数量比例为♀∶♂＝1.5-2：1，饲养密度15-20kg/m3；
2.冬化培育：亲鱼挑选完成并隔离饲养后，能用于繁殖的亲鱼放入8℃以下的低温池内暂养8-12周后进行催产，饲养密度为步骤1)养殖密度的1/2；
二、催产繁殖与人工授精
1.产前检查；
2.催产繁殖：将亲鱼转移至皮篓中，每天升温1℃，直至水温达到16℃后，进入催产工作；将亲鱼麻醉，称取重量；
(1)注射催产针：采用胸鳍基部腹腔注射或背部肌肉注射两种注射方式；将注射过催产药物的雌鱼放入合适直径的玻璃缸或其它容器内，每缸放2尾；
(2)采集精液和取卵；
3.人工授精；
三、孵化管理出苗：
受精卵入孵化器后调节水温保持15-16℃，受精卵进孵化器6h后，鱼卵消毒；每天用10ppm的福尔马林溶液或双氧水浸泡消毒2次，破膜前停止用药，孵化过程中每天及时清除死卵；在15-16℃的水温中鱼卵经过6d的孵化便可以破膜孵出仔鱼，将仔鱼收集清洗体表卵膜、污泥，转入干净池中暂养3-4h；
四、苗种培育。
2.根据权利要求1所述的一种南方地区欧洲鳇的人工繁育方法，其特征在于，催产针选择鲤鱼脑垂体注射：雄鱼注射一次，对雌鱼注射两次，第一次剂量为1.0-2.0mg/kg，第二次剂量为5.0-6.0mg/kg，两次注射间隔12小时，雄鱼注射剂量为雌鱼的一半。
3.根据权利要求1所述的一种南方地区欧洲鳇的人工繁育方法，其特征在于，催产针选择LHRH-A2注射：雄鱼注射一次，雌鱼注射两次，第一次剂量为1.0-2.0μg/kg，第二次剂量为3.0-4.0μg/kg，两次注射间隔12小时，雄鱼注射剂量为雌鱼的一半。
4.根据权利要求1所述的一种南方地区欧洲鳇的人工繁育方法，其特征在于，冬化培育时，投喂量为体重的0.1-0.2％，饲料中加入饲料重量3-5.2％的β胡萝卜素与饲料重量0.7-1.8％的助剂；采用喷水式自然降温法维持低温水源供应，即利用夜间低温环境降低备用蓄水池水温，白天抽取蓄水池水源注入亲鱼池，以维持冬化水体低温环境。
5.根据权利要求1所述的一种南方地区欧洲鳇的人工繁育方法，其特征在于，人工授精时，在雌鱼取卵的同时，将精液提温，在16℃水温下提温半个小时，使用一次性注射器抽取精液；在鱼卵受精前先镜检精子活力；鱼卵取出后采用半干法受精，按照1L鱼卵10ml精液1.5L水的比例混合受精，先将优质精液倒入水中再立即倒入鱼卵中用羽毛搅拌受精3-5min，受精完毕静置1-2min，然后漂洗2-3次多余的精液和黏液；将25wt％的滑石粉溶液和同体积的清水倒入盛有受精卵的盆内，缓慢搅动；搅动40分钟后将上层液体倒掉，再重复两次后用清水漂洗干净。
6.根据权利要求1所述的一种南方地区欧洲鳇的人工繁育方法，其特征在于，仔稚鱼培育初期，放养密度控制在3000-5000尾/m2，发育到鱼苗下沉前放养密度降到2000-3000尾/m2；出膜仔鱼1-7天水丝蚓活饵剁碎后培育7日，培育水温16±0.5℃，日投喂次数为8次；7日后每次投喂时，在水丝蚓内按5-7.5wt.％比例添加配合饲料进行混合投喂，3天后停止添加配合饲料，改活饵与配合饵料交替投喂方式进行仔鱼驯化培育，开始每天投喂配合次数1-2次，活饵6-7次，以后每1-2天减少一次活饵投喂次数，相应增加配合饲料投喂次数活，保持日投喂总数不变；经7-10天即可完成仔鱼的配合饲料驯化培育；幼鱼培育池以架设有遮阴设施的水泥池或玻璃钢池培育为主；鱼苗放养密度每平方米水面可放养3cm左右的鱼苗500-1000尾。
7.根据权利要求4所述的一种南方地区欧洲鳇的人工繁育方法，其特征在于，助剂由以下重量份数的原料组成：复合氨基酸6-8份、复合维生素12-15份、油茶籽粕改性提取物10-13份与白蚂蚁20-25份。
8.根据权利要求7所述的一种南方地区欧洲鳇的人工繁育方法，其特征在于，复合氨基酸由质量比为2:3：1：4的胱氨酸、酪氨酸、谷氨酸、丝氨酸组成；复合维生素由质量比为3:1:4:5的VE、VB2、VB6、VC组成；油茶籽粕改性提取物的制备方法如下：取榨油后的油茶籽粕，研磨成粉，按液固比25mL/g将油茶籽粕添加到浓度为65wt％的乙醇溶液中并搅拌均匀，将乙醇溶液转移至微波提取器中进行加热提取，提取温度为80℃，提取时间为25min，微波功率为1200W；提取后得到粗提液，将粗提液过滤，取过滤液，向过滤液中添加过滤液体积0.3倍的30wt％双氧水溶液，在70℃下加热30min，然后向溶液中添加溶液质量1.2％壳聚糖，在室温下静置4h，离心、过滤得到精提液，将精提液真空干燥后制得油茶籽粕提取物；将油茶籽粕提取物溶于酸性溶液中配得浓度为5wt％、pH为3.5的油茶籽粕提取物酸性溶液，在3h内向油茶籽粕提取物酸性溶液中匀速滴加质量为油茶籽粕提取物1.5倍的亚硒酸钠进行反应，反应温度为75℃；反应结束后经过浓缩、真空干燥制得油茶籽粕改性提取物。
9.根据权利要求6所述的一种南方地区欧洲鳇的人工繁育方法，其特征在于，仔稚鱼培育期间，每隔2天通入2-8L含体积分数0.006-0.05％臭氧的空气，配合饲料为鲟鱼微粒子开口饵料。
10.根据权利要求1所述的一种南方地区欧洲鳇的人工繁育方法，其特征在于，母本选用13+龄欧洲鳇，体长160-195cm，体重60-90kg；父本选用11+龄欧洲鳇，体长145-175cm，体重45-70kg。
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