CN106172117B - 小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法 - Google Patents

小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法 Download PDF

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Abstract

小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法，属于水产养殖海水鱼类苗种繁育技术领域。其包括以下步骤：1）亲本选择与培育；2）人工催产授精：a、人工催产；b、人工挤卵、采精；c、人工干法授精；d、洗卵；3）苗种孵化管理；4）仔稚鱼和幼鱼的培育。通过本发明的方法进行小黄鱼与大黄鱼杂交，能够培育出生长快、品质优良的新品种，并且该新品种的受精率可达到65%以上，孵化率达到92%以上，在生产上具有重要的应用价值，推动了我国水产养殖业的健康发展。

Description

小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法
技术领域
本发明属于水产养殖海水鱼类苗种繁育技术领域，具体涉及小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法。
背景技术
小黄鱼和大黄鱼都属于四大海产，两者肉质细嫩，味道鲜美，深受广大消费者的青睐。但是由于过度捕捞、环境变化等原因，小黄鱼性早熟、日趋小型化现象日益明显；大黄鱼的野生资源极其稀少，其养殖群体品质严重下降，经济效益明显降低。杂交可以使生物的遗传物质从一个群体转移到另一群体，是增加生物变异性的一个重要方法。不同类型的亲本进行杂交可以获得变异性状的重新组合，杂交后代中可能出现双亲优良险状的组合，甚至出现超亲代的优良性状。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法的技术方案。
所述的小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法，其特征在于包括以下步骤：
1）亲本选择与培育
在杂交前一年冬季，选用9月龄左右小黄鱼作为杂交母本，选用2龄以上大黄鱼作为杂交父本，通过控温、控光和营养强化，促进雌雄亲鱼性成熟同步；
2）人工催产授精
a、人工催产：对小黄鱼雌鱼注射催产剂：LRH-A2 0.25ug+HCG100IU/kg鱼体重，对大黄鱼雄鱼注射催产剂：LRH-A3 1.25ug/kg鱼体重；
b、人工挤卵、采精；
c、人工干法授精；
d、洗卵；
3）苗种孵化管理；
4）仔稚鱼和幼鱼的培育。
所述的小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法，其特征在于所述的步骤1）中培育期间投喂以鲜活沙蚕为主的饵料，每公斤饵料含有：维生素C1-3‰、维生素E0.2-0.5‰、复合维生素1‰、DHA1.5%、卵磷脂1.5%、鲜活沙蚕余量；日投喂2次，日投喂量为鱼体体重的1.5%。
所述的小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法，其特征在于所述的步骤1）中培育期间对亲鱼池连续充气、流水培育，换水量300%，定时清池换水，及时清除残饵、排污，水质条件：DO≥6.0mg/L，pH 7.6-8.5，盐度26-28。
所述的小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法，其特征在于所述的步骤1）中培育期间当自然水温达到12℃时，开始对大黄鱼和小黄鱼进行控温，控温方式：每2d水温缓慢升高1℃，达到16℃时，小黄鱼培育池维持此温度不变；大黄鱼亲鱼培育池达到20℃时，维持水温不变，定期观察亲鱼性腺发育情况。
所述的小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法，其特征在于所述的人工挤卵、采精具体为催产后36h后开始每隔2h检查一次，当轻压小黄鱼腹部有卵子流出时开始进行人工挤卵，捞出小黄鱼亲鱼，用干毛巾擦拭生殖孔，手轻轻挤压腹部，用1000mL塑料烧杯收集卵子等待受精；然后捞出大黄鱼雄鱼，同样用干毛巾擦拭生殖孔去除海水，边挤压边用塑料吸管采集精液。
所述的小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法，其特征在于所述的人工干法授精具体为将精液滴入装有卵子的烧杯中，并用玻璃棒轻柔搅拌，使精卵混合均匀，向其中加16±0.5℃清新海水50mL激活精子，用玻璃棒缓慢搅动1-2min后加1000mL水温为16±0.5℃的海水，用玻璃棒搅动30s，受精完成后将烧杯静置5min，分别收集漂浮于上层的受精卵和下层的未受精卵。
所述的小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法，其特征在于所述的苗种孵化管理具体包括：采用孵化桶进行苗种孵化，孵化桶上部为圆柱形，下部为漏斗形，底部充气，容积0.2m3；每桶布卵量为30mL，孵化桶水温16±0.5℃，盐度26-28，DO≥6mg/L，pH 7.8-8.5，光照300-500Lux，每天早、中、晚三次采用虹吸法吸出沉于底部的未孵化受精卵，受精卵经40h孵化达到膜内仔鱼期，此时将受精卵转移到1m3苗种培育桶中进行培育。
所述的小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法，其特征在于所述的苗种孵化管理具体为每个培育桶中投放受精卵20mL，前3天静水培育，培育池初始水深500-600mm，从第4d开始每天加水100mm，至800-900mm，第6日龄时开始换水，每天上午和下午各换水一次，初始换水量为10%，每隔3天增加换水量10%，逐渐增加到100 %；1-15日龄微充气；第16日龄时改为常流水，流水速率为50L/h，充气量增大；仔鱼孵出后第3d开始投喂L型褶皱臂尾轮虫，上下午各一次，投喂密度8-10 ind/mL，同时投喂浓缩小球藻，密度 1.5× 106cells/mL；鱼苗孵化后第7天进行一次清底，此后每隔4天清底一次；12日龄开始增加投喂卤虫无节幼体，卤虫密度1-2ind/mL，轮虫保持5-6 ind/mL，先投喂卤虫，半小时之后再投喂轮虫，日投喂2次；15日龄停止投喂轮虫，开始进行人工配合饲料的驯化，先投喂鱼宝2号饲料，半小时之后再投喂卤虫，卤虫密度3-4ind/mL；20日龄时，对苗种进行一次分苗，每个培育桶苗种数量均保持在1200-1500尾；30日龄之后彻底停喂卤虫，全部投喂鱼宝2号饲料；仔鱼达到40日龄时根据每个培育桶中密度进行适当分桶、分苗，每桶苗种数量800-1000尾；稚鱼达到60日龄时根据每个培育桶中密度进行适当分桶、分苗，每桶苗种数量400-500尾；直至稚鱼体表完全被鳞，然后转入水泥池进行大规格鱼种、成鱼养殖。
所述的小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法，其特征在于所述的精液与卵子配比1mL精液：200mL卵子。
本发明中复合维生素商品名为“水产复合多维”，由武汉华扬天乐动物保健品有限公司生产销售。
本发明中的鱼宝2 号饲料由日本林兼产业株式会社生产销售。
通过本发明的方法进行小黄鱼与大黄鱼杂交，能够培育出生长快、品质优良的新品种，并且该新品种的受精率可达到65%以上，孵化率达到92%以上，在生产上具有重要的应用价值，推动了我国水产养殖业的健康发展。
具体实施方式
以下结合实施例来进一步说明本发明。
实施例：一种小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种的方法，其包括以下步骤：
a亲本选择与培育
在杂交前一年冬季，选用9月龄左右全长20cm以上、体质量50g以上，形态、体色均正常、健康无伤的小黄鱼作为杂交母本，选用2龄以上全长30cm以上、体质量300g以上，形态、体色正常、健康无伤的大黄鱼作为杂交父本，分别放在不同的水泥池中进行强化培育，培育期间投喂以鲜活沙蚕为主的饵料，每公斤饵料含有：维生素C1-3‰、维生素E0.2-0.5‰、复合维生素1‰、DHA1.5%、卵磷脂1.5%和鲜活沙蚕余量。日投喂2次，日投喂量为鱼体体重的1.5%；亲鱼培育期间，亲鱼池中连续充气、流水培育，换水量300%，定时清池换水；及时清除残饵、排污。水质条件：DO≥6.0mg/L，pH 7.6-8.5，盐度26-28。
当自然水温达到12℃时，此时开始对大黄鱼和小黄鱼进行控温；控温方式：每2d水温缓慢升高1℃，达到16℃时，小黄鱼培育池维持此温度不变；大黄鱼亲鱼培育池达到20℃时，维持水温不变，定期观察亲鱼性腺发育情况。
b人工催产授精
包括：（1）人工催产；（2）雌鱼挤卵、雄鱼采精；（3）人工干法授精；（4）洗卵；
经过80d控温、控光和营养强化培育，小黄鱼雌鱼亲鱼性腺发育至四期至五期，外观可观察到雌鱼腹部膨胀饱满，同时，大黄鱼雄鱼性腺也基本成熟。
（1）人工催产：对性腺发育良好的小黄鱼亲鱼进行人工催产，催产剂：LRH –A20.25ug+HCG100IU/kg鱼体重；对大黄鱼雄鱼进行人工催产，催产剂：LRH –A3 1.25ug/kg鱼体重；注射催产剂后将雌雄亲鱼分别放入0.5 m3亲鱼培育桶，小黄鱼每桶20尾；大黄鱼每桶10尾；流水刺激促使发情排卵产精。
（2）人工挤卵、采精：催产后36h后开始每隔2h检查一次，当轻压小黄鱼腹部有卵子流出时说明卵子发育成熟，此时开始进行人工挤卵：捞出小黄鱼亲鱼，用干毛巾擦拭生殖孔，手轻轻挤压腹部，用1000mL塑料烧杯收集卵子等待受精；然后捞出大黄鱼雄鱼，同样用干毛巾擦拭生殖孔去除海水，然后边挤压边用塑料吸管采集精液。
（3）人工干法授精：将精液滴入装有卵子的烧杯中（精液与卵子配比1mL精液：200mL卵子），并用玻璃棒轻柔搅拌，使精卵混合均匀，向其中加16±0.5℃清新海水50mL激活精子，用玻璃棒缓慢搅动1-2min后加1000mL水温为16±0.5℃的海水，用玻璃棒搅动30s左右，受精完成后将烧杯静置5min，分别收集漂浮于上层的受精卵和下层的未受精卵，计算受精率。
（4）洗卵：把收集的优质受精卵倒入筛绢缝制专用洗卵的手抄网中，放入添加了少量聚维酮碘的16±0.5℃海水中进行杀菌，随后用海水清洗3遍，把洗好的受精卵倒入孵化桶中孵化。
c苗种孵化管理：
孵化桶为上部圆柱形，下部漏斗形，底部充气，容积0.2m3；每桶布卵量为30mL，孵化桶水温16±0.5℃，盐度26-28，DO≥6mg/L, pH 7.8-8.5，光照300-500Lux，每天早、中、晚三次采用虹吸法吸出沉于底部的未孵化受精卵，受精卵经40h孵化达到膜内仔鱼期，此时将受精卵转移到1m3苗种培育桶中进行培育。
d仔稚鱼和幼鱼的培育：
每个培育桶中投放受精卵20mL，前3天静水培育，培育池初始水深500-600mm,从第4d开始每天加水100mm，至800-900mm，第6日龄时开始换水，每天上午和下午各换水一次，初始换水量为10%，每隔3天增加换水量10%，逐渐增加到100 %；1-15日龄微充气；第16日龄时改为常流水，流水速率大约为50L/h，充气量增大；仔鱼孵出后第3d开始投喂L型褶皱臂尾轮虫，上下午各一次，投喂密度8-10 ind/mL，同时投喂浓缩小球藻，密度 1.5×106cells/mL。鱼苗孵化后第7天进行一次清底，此后每隔4天清底一次；12日龄开始增加投喂卤虫无节幼体，卤虫密度1-2ind/mL，轮虫保持5-6 ind/mL，先投喂卤虫，半小时之后再投喂轮虫，日投喂2次；15日龄停止投喂轮虫，开始进行人工配合饲料的驯化，先少量投喂鱼宝2号饲料，半小时之后再投喂卤虫，卤虫密度3-4ind/mL；随着苗种长大，卤虫密度逐渐降低，配合饲料投喂量逐渐增加。20日龄时，对苗种进行一次分苗，每个培育桶苗种数量均保持在1200-1500尾。30日龄之后彻底停喂卤虫，全部投喂鱼宝2号饲料，根据苗种生长情况更换颗粒直径较大的饲料进行投喂；仔鱼达到40日龄时根据每个培育桶中密度进行适当分桶、分苗，每桶苗种数量800-1000尾；稚鱼达到60日龄时根据每个培育桶中密度进行适当分桶、分苗，每桶苗种数量400-500尾；直至稚鱼体表完全被鳞，然后转入水泥池进行大规格鱼种、成鱼养殖。
2016年4月20日，在浙江省海洋水产研究所西轩渔业科技岛采用上述方法进行小黄鱼和大黄鱼杂交，2016年4月20日统计受精率为65.3%，2016年4月22日统计孵化率为92.6%。

Claims (1)

1.小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法，其特征在于包括以下步骤：
a亲本选择与培育
在杂交前一年冬季，选用9月龄全长20cm以上、体质量50g以上，形态、体色均正常、健康无伤的小黄鱼作为杂交母本，选用2龄以上全长30cm以上、体质量300g以上，形态、体色正常、健康无伤的大黄鱼作为杂交父本，分别放在不同的水泥池中进行强化培育，培育期间投喂以鲜活沙蚕为主的饵料，每公斤饵料含有：维生素C1-3‰、维生素E0.2-0.5‰、复合维生素1‰、DHA1.5%、卵磷脂1.5%和鲜活沙蚕余量；日投喂2次，日投喂量为鱼体体重的1.5%；亲鱼培育期间，亲鱼池中连续充气、流水培育，换水量300%，定时清池换水；及时清除残饵、排污；水质条件：DO≥6.0mg/L，pH 7.6-8.5，盐度26-28；
当自然水温达到12℃时，此时开始对大黄鱼和小黄鱼进行控温；控温方式：每2d水温缓慢升高1℃，达到16℃时，小黄鱼培育池维持此温度不变；大黄鱼亲鱼培育池达到20℃时，维持水温不变，定期观察亲鱼性腺发育情况；
b人工催产授精：包括：（1）人工催产；（2）雌鱼挤卵、雄鱼采精；（3）人工干法授精；（4）洗卵；
（1）人工催产：对性腺发育良好的小黄鱼亲鱼进行人工催产，催产剂：LRH –A2 0.25ug+HCG100IU/kg鱼体重；对大黄鱼雄鱼进行人工催产，催产剂：LRH –A3 1.25ug/kg鱼体重；注射催产剂后将雌雄亲鱼分别放入0.5 m3亲鱼培育桶，小黄鱼每桶20尾；大黄鱼每桶10尾；流水刺激促使发情排卵产精；
（2）人工挤卵、采精：催产后36h后开始每隔2h检查一次，当轻压小黄鱼腹部有卵子流出时说明卵子发育成熟，此时开始进行人工挤卵：捞出小黄鱼亲鱼，用干毛巾擦拭生殖孔，手轻轻挤压腹部，用1000mL塑料烧杯收集卵子等待受精；然后捞出大黄鱼雄鱼，同样用干毛巾擦拭生殖孔去除海水，然后边挤压边用塑料吸管采集精液；
（3）人工干法授精：将精液滴入装有卵子的烧杯中，精液与卵子配比1mL精液：200mL卵子，并用玻璃棒轻柔搅拌，使精卵混合均匀，向其中加16±0.5℃清新海水50mL激活精子，用玻璃棒缓慢搅动1-2min后加1000mL水温为16±0.5℃的海水，用玻璃棒搅动30s，受精完成后将烧杯静置5min，分别收集漂浮于上层的受精卵和下层的未受精卵，计算受精率；
（4）洗卵：把收集的优质受精卵倒入筛绢缝制专用洗卵的手抄网中，放入添加了少量聚维酮碘的16±0.5℃海水中进行杀菌，随后用海水清洗3遍，把洗好的受精卵倒入孵化桶中孵化；
c苗种孵化管理：
孵化桶为上部圆柱形，下部漏斗形，底部充气，容积0.2m3；每桶布卵量为30mL，孵化桶水温16±0.5℃，盐度26-28，DO≥6mg/L, pH 7.8-8.5，光照300-500Lux，每天早、中、晚三次采用虹吸法吸出沉于底部的未孵化受精卵，受精卵经40h孵化达到膜内仔鱼期，此时将受精卵转移到1m3苗种培育桶中进行培育；
d仔稚鱼和幼鱼的培育：
每个培育桶中投放受精卵20mL，前3天静水培育，培育池初始水深500-600mm,从第4d开始每天加水100mm，至800-900mm，第6日龄时开始换水，每天上午和下午各换水一次，初始换水量为10%，每隔3天增加换水量10%，逐渐增加到100 %；1-15日龄微充气；第16日龄时改为常流水，流水速率为50L/h，充气量增大；仔鱼孵出后第3d开始投喂L型褶皱臂尾轮虫，上下午各一次，投喂密度8-10 ind/mL，同时投喂浓缩小球藻，密度 1.5×106cells/mL；鱼苗孵化后第7天进行一次清底，此后每隔4天清底一次；12日龄开始增加投喂卤虫无节幼体，卤虫无节幼体密度1-2ind/mL，轮虫保持5-6 ind/mL，先投喂卤虫无节幼体，半小时之后再投喂轮虫，日投喂2次；15日龄停止投喂轮虫，开始进行人工配合饲料的驯化，先少量投喂鱼宝2号饲料，半小时之后再投喂卤虫，卤虫密度3-4ind/mL；随着苗种长大，卤虫密度逐渐降低，配合饲料投喂量逐渐增加；20日龄时，对苗种进行一次分苗，每个培育桶苗种数量均保持在1200-1500尾；30日龄之后彻底停喂卤虫，全部投喂鱼宝2号饲料，根据苗种生长情况更换颗粒直径较大的饲料进行投喂；仔鱼达到40日龄时根据每个培育桶中密度进行适当分桶、分苗，每桶苗种数量800-1000尾；稚鱼达到60日龄时根据每个培育桶中密度进行适当分桶、分苗，每桶苗种数量400-500尾；直至稚鱼体表完全被鳞，然后转入水泥池进行大规格鱼种、成鱼养殖。
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