CN110495410A - 一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法 - Google Patents
一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110495410A CN110495410A CN201910751729.5A CN201910751729A CN110495410A CN 110495410 A CN110495410 A CN 110495410A CN 201910751729 A CN201910751729 A CN 201910751729A CN 110495410 A CN110495410 A CN 110495410A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sperm
- yellow croaker
- little yellow
- larimichthys crocea
- propagation process
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000356842 Larimichthys polyactis Species 0.000 title claims abstract description 58
- 241001596950 Larimichthys crocea Species 0.000 title claims abstract description 50
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 claims abstract description 40
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract description 18
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims abstract description 16
- 230000009027 insemination Effects 0.000 claims abstract description 14
- 239000013535 sea water Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 13
- 230000012447 hatching Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims abstract description 6
- 240000004980 Rheum officinale Species 0.000 claims abstract description 4
- 235000008081 Rheum officinale Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 22
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N dimethyl sulfoxide Natural products CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 7
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 7
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000026109 gonad development Effects 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 claims description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 230000032696 parturition Effects 0.000 claims description 5
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 claims description 4
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 4
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 claims description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 238000013019 agitation Methods 0.000 claims description 3
- MTZQAGJQAFMTAQ-UHFFFAOYSA-N benzoic acid ethyl ester Natural products CCOC(=O)C1=CC=CC=C1 MTZQAGJQAFMTAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 3
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 2
- 235000019628 coolness Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000002710 gonadal effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 claims description 2
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 claims 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 claims 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 claims 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 11
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 abstract description 7
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 6
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 3
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 abstract description 2
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 abstract description 2
- 241000212346 Spermolepis Species 0.000 abstract 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 8
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 3
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 150000008052 alkyl sulfonates Chemical class 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000002528 anti-freeze Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000625 blastula Anatomy 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000008144 egg development Effects 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000009400 out breeding Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000019100 sperm motility Effects 0.000 description 1
- 230000009303 sperm storage Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K61/00—Culture of aquatic animals
- A01K61/10—Culture of aquatic animals of fish
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K61/00—Culture of aquatic animals
- A01K61/10—Culture of aquatic animals of fish
- A01K61/17—Hatching, e.g. incubators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0221—Freeze-process protecting agents, i.e. substances protecting cells from effects of the physical process, e.g. cryoprotectants, osmolarity regulators like oncotic agents
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
- Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dentistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，属于水产养殖海水鱼类苗种繁育技术领域。本发明具体包括以下步骤：小黄鱼精子采集，小黄鱼精子加入含有防冻剂的精子稀释液低温冷冻保存，大黄鱼卵子采集，小黄鱼精子解冻，精卵人工授精。通过本发明的方法选取解冻后成活率在60%的精子与大黄鱼卵子杂交，受精率达到67.3%，孵化率86.8%以上。本发明对克服生殖隔离、实现人工杂交、培育新品种和实现规模化苗种繁育均有重要意义。
Description
技术领域
本发明属于水产养殖海水鱼类苗种繁育技术领域，具体涉及一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法。
技术背景
小黄鱼和大黄鱼为同属不同种鱼类，两者的繁殖水温存在一定的差异，前者15℃左右为其适宜繁殖水温，而后者则需要在22℃左右才能进行繁殖，这就导致了两者存在生殖隔离。如果通过温度控制可以使两种鱼在同一时期发育成熟（如公开号为CN 106172117A的中国发明专利），通过人工催产后授精可以获得杂交子代，但是人工控温所需耗费的人力物力成本较高。
发明内容
鉴于现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种在小黄鱼繁殖时期，通过超低温技术实现小黄鱼精子保存，待大黄鱼雌鱼性成熟之后，解冻小黄鱼精子并与其进行人工杂交，从而获得杂交子代的方法。该方法免除了对亲鱼施行人工控温促使性腺发育同步，可以让亲鱼自然发育至性成熟，以获得优质精子和卵子，有效降低了亲鱼培育等的生产成本。
所述一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：
S1、小黄鱼精子采集：4月上旬，水温达到15-16℃时，挑选性腺发育良好的1龄雄性小黄鱼作为杂交父本，待小黄鱼性成熟时，对雄性小黄鱼注射催产剂：LRH-A2 2.5µg/kg鱼体重，采集精子；
S2、小黄鱼精子低温冷冻保存：将人工采集的精子加入至含有防冻剂的精子稀释液中并置于液氮中保存，待用，所述精子稀释液含有以下组分： NaCl 10g/L、KCl 0.6g/L、CaCl2·2H2O 0.2g/L、MgCl2·6H2O 0.15g/L、NaHCO3 0.4g/L、Na2HPO4·2H2O 0.4g/L、柠檬酸钠 0.1 g/L，防冻剂体积含量为20%；
S3、大黄鱼卵子采集：5月中下旬水温达到22-23℃时，选取性腺发育良好的2龄雌性大黄鱼作为杂交母本，待雌性大黄鱼性腺发育成熟后，对雌性大黄鱼注射催产剂LRH-A3 2.5µg/kg鱼体重，采集卵子；
S4、小黄鱼精子解冻：待大黄鱼卵子采集完成后，将冷冻保存的小黄鱼精子进行解冻；
S5、精卵人工授精：取解冻后的小黄鱼精子与大黄鱼卵子进行人工授精。
所述一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，其特征在于：所述S1步骤中小黄鱼精子采集具体为：小黄鱼催产12h之后挑选优质雄性小黄鱼，使用1mg/L 的烷基磺酸盐同位氨基苯甲酸乙酯麻醉3分钟后，用湿润洁净毛巾包裹鱼体，露出生殖孔，吸水纸轻柔擦净生殖孔，轻压腹部，用塑料吸管采集精子，置于2mL冻存管，每管0.5mL，加入2倍体积的4℃预冷的含有防冻剂的精子稀释液，充分颠倒混匀后，室温静置3min。
所述一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，其特征在于：所述S2步骤中防冻剂是二甲基亚砜。
所述一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，其特征在于：所述S2步骤中小黄鱼精子低温冷冻保存具体为：将S2得到含有精子的精子稀释液先置于液氮液面上方8-10cm处10min，再置于液氮液面上方0-1cm处5min后，然后投入液氮中长期保存。
所述一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，其特征在于：所述S3步骤中大黄鱼卵子采集具体为：大黄鱼催产36h之后每隔2h检查一次雌鱼，选取轻压腹部即有卵子流出的雌鱼进行人工挤卵，吸水纸擦干生殖孔及附近区域，轻压腹部促使卵子流出，用1L烧杯收集卵子，每个烧杯收集卵子200mL，薄膜密封，阴凉处放置，备用。
所述一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，其特征在于：所述S4步骤中小黄鱼精子解冻具体为：将冷冻保存的含有精子的精子稀释液从液氮中取出，先置于液氮液面上方2-3cm处静置4-5min，再转入37℃温水中快速解冻30s。
所述一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，其特征在于：所述S5步骤中精卵人工授精具体为：取1 mL解冻的精子加入卵子中玻璃棒轻柔搅拌混匀，再加入洁净海水20mL，搅拌10s之后，烧杯中加海水至满，静置5min，取上浮优质受精卵，转入1m3玻璃钢丝桶中22℃左右海水孵化培育，孵化出膜后的培育方式同正常大黄鱼。
所述一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，其特征在于：所述海水的盐度26.5-28，水温22℃。
本发明的有益效果：
由于雄性小黄鱼个体较小，精子量相对较少，不利于人工授精，本发明配制的精子稀释液，便于进行人工授精，进而提高受精率；
所述精子稀释液加入的二甲基亚砜作为抗冻剂用于保护精子降低精子超低温冷冻期间死亡率；
所述小黄鱼精子低温冷冻保存后，待雌性大黄鱼性成熟之后，解冻小黄鱼精子并与其进行人工杂交，从而获得杂交子代的方法，该方法免除了对亲鱼施行人工控温促使性腺发育同步，可以让亲鱼自然发育至性成熟，以获得优质精子和卵子。
通过本发明的方法选取解冻后成活率在60%的精子与大黄鱼卵子杂交，受精率达到67.3%，孵化率86.8%以上。本发明对克服生殖隔离、实现人工杂交、培育新品种和实现规模化苗种繁育均有重要意义。
具体实施方式
以下结合实施例来进一步说明本发明，但本发明保护范围不局限于所述范围。
实施例1
S1、小黄鱼精子采集
2019年4月上旬，利用在象山港湾水产苗种有限公司培育的1龄雄性小黄鱼40尾，待小黄鱼性成熟时，对雄性小黄鱼注射催产剂：LRH-A2 2.5µg/kg鱼体重，催产12h之后挑选优质雄性小黄鱼，使用1mg/L 的烷基磺酸盐同位氨基苯甲酸乙酯麻醉3分钟后，用湿润洁净毛巾包裹鱼体，露出生殖孔，吸水纸轻柔擦净生殖孔，轻压腹部，用塑料吸管采集精子，置于2mL冻存管，每管0.5mL左右，加入2倍体积的4℃预冷的含有防冻剂的精子稀释液，充分颠倒混匀后室温静置3min，成功获得38尾小黄鱼（体重58.3g-64.5g）的精子，显微镜检测精子活力得知，所有个体精子成活率均在95％以上，全部用于冷冻保存。
S2、小黄鱼精子低温冷冻保存
每个冻存管中存放小黄鱼精子0.5mL，加2倍体积的含有20%体积二甲基亚砜的精子稀释液（精子稀释液含有以下组分： NaCl 10g/L、KCl 0.6g/L、CaCl2·2H2O 0.2g/L、MgCl2·6H2O 0.15g/L、NaHCO3 0.4g/L、Na2HPO4·2H2O 0.4g/L、柠檬酸钠 0.1 g/L），轻轻颠倒混匀后，将得到的含有精子的精子稀释液先置于液氮液面上方8-10cm处10min再置于液氮液面上方0-1cm处5min后，然后投入液氮长期保存，最终成功冷冻38尾小黄鱼的精子共计84管。另外，利用添加有甘油和乙二醇作为防冻剂的精子稀释液（精子稀释液：甘油：乙二醇的体积比=92：7：1）采用同样的操作流程保存精子5管。
S3、大黄鱼卵子采集
2019年5月下旬开始，利用象山港湾水产苗种有限公司培育的性腺发育良好的2龄雌性大黄鱼20尾（体重396.6g-437.4g），通过注射LRH-A3进行人工催产，36h后每隔2h检查卵子发育情况，及时捞出卵子发育成熟的大黄鱼进行人工挤卵，每个烧杯存放卵子量为200mL左右，每个烧杯获得的卵子用封口膜封口，并放置于阴凉处等待人工授精。
S4、小黄鱼精子解冻
获得优质卵子之后，将冷冻保存的含有精子的精子稀释液从液氮中取出，先置于液氮液面上方2-3cm处静置4-5min，再转入37℃温水中快速解冻30s。
分别解冻利用二甲基亚砜与甘油和乙二醇分别作为防冻剂冷冻保存精子5管，比较两者保存精子解冻后成活率，结果列于表1。表中结果显示，利用二甲基亚砜进行精子冷冻保存,解冻成活率高于利用甘油和乙二醇保存后解冻成活率，所以二甲基亚砜的保存效果更好。
表1两种防冻剂的解冻成活率结果
。
S5、精卵人工授精
镜检解冻后精子成活率，取精子成活率在70%以上的精子两管，与一杯200mL的卵子进行人工授精具体为：取1 mL解冻的精子加入卵子中玻璃棒轻柔搅拌混匀，再加入洁净海水20mL，搅拌10s之后，烧杯中加海水至满，静置5min，取上浮优质受精卵，转入1m3玻璃钢丝桶中22℃左右海水孵化培育，孵化出膜后的培育方式同正常大黄鱼。
最终共解冻精子17管，精子解冻后成活率在55%-90%之间，成活率低于70%的精子5管，剩余12管完成了6个烧杯共1200mL卵子的人工授精。
S6、受精卵孵化及受精率计算
人工授精后受精卵在烧杯中静置5-6min，收集上浮优质受精卵，经自然海水清洗、1ppt聚维酮碘溶液冲洗消毒后，置于300L玻璃钢丝桶中孵化，每桶放置受精卵30mL左右，孵化水温控制在22-23℃，桶底微充气，溶氧控制在6.0以上。从不同亲鱼的孵化桶中各取200颗受精卵置于2000L玻璃烧杯中培育，培育5h左右受精卵发育至囊胚期时，显微镜观察并统计受精率，仔鱼出膜后统计仔鱼数量计算孵化率。上浮受精卵百分比、受精率、孵化率统计结果列于下表，通过表2看出受精率达到67.3%，孵化率高达86.8%。
表2受精率及孵化率统计结果
。
Claims (8)
1.一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：
S1、小黄鱼精子采集：4月上旬，水温达到15-16℃时，挑选性腺发育良好的1龄雄性小黄鱼作为杂交父本，待小黄鱼性成熟时，对雄性小黄鱼注射催产剂：LRH-A2 2.5µg/kg鱼体重，采集精子；
S2、小黄鱼精子低温冷冻保存：将人工采集的精子加入至含有防冻剂的精子稀释液中并置于液氮中保存，待用，所述精子稀释液含有以下组分： NaCl 10g/L、KCl 0.6g/L、CaCl2·2H2O 0.2g/L、MgCl2·6H2O 0.15g/L、NaHCO3 0.4g/L、Na2HPO4·2H2O 0.4g/L、柠檬酸钠 0.1 g/L，防冻剂体积含量为20%；
S3、大黄鱼卵子采集：5月中下旬水温达到22-23℃时，选取性腺发育良好的2龄雌性大黄鱼作为杂交母本，待雌性大黄鱼性腺发育成熟后，对雌性大黄鱼注射催产剂LRH-A3 2.5µg/kg鱼体重，采集卵子；
S4、小黄鱼精子解冻：待大黄鱼卵子采集完成后，将冷冻保存的小黄鱼精子进行解冻；
S5、精卵人工授精：取解冻后的小黄鱼精子与大黄鱼卵子进行人工授精。
2.根据权利要求1所述一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，其特征在于：所述S1步骤中小黄鱼精子采集具体为：小黄鱼催产12h后挑选优质雄性小黄鱼，使用1mg/L 的烷基磺酸盐同位氨基苯甲酸乙酯麻醉3分钟后，用湿润洁净毛巾包裹鱼体，露出生殖孔，吸水纸轻柔擦净生殖孔，轻压腹部，用塑料吸管采集精子，置于2mL冻存管，每管0.5mL，加入2倍体积的4℃预冷的含有防冻剂的精子稀释液，充分颠倒混匀后，室温静置3min。
3.根据权利要求1或2所述一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，其特征在于：所述S2步骤中防冻剂是二甲基亚砜。
4.根据权利要求1所述一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，其特征在于：所述S2步骤中小黄鱼精子低温冷冻保存具体为：将S2得到含有精子的精子稀释液先置于液氮液面上方8-10cm处10min，再置于液氮液面上方0-1cm处5min后，然后投入液氮中长期保存。
5.根据权利要求1所述一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，其特征在于：所述S3步骤中大黄鱼卵子采集具体为：大黄鱼催产36h之后每隔2h检查一次雌鱼，选取轻压腹部即有卵子流出的雌鱼进行人工挤卵，吸水纸擦干生殖孔及附近区域，轻压腹部促使卵子流出，用1L烧杯收集卵子，每个烧杯收集卵子200mL，薄膜密封，阴凉处放置，备用。
6.根据权利要求1所述一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，其特征在于：所述S4步骤中小黄鱼精子解冻具体为：将冷冻保存的含有精子的精子稀释液从液氮中取出，先置于液氮液面上方2-3cm处静置4-5min，再转入37℃温水中快速解冻30s。
7.根据权利要求1所述一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，其特征在于：所述S5步骤中精卵人工授精具体为：取1 mL解冻的精子加入卵子中玻璃棒轻柔搅拌混匀，再加入洁净海水20mL，搅拌10s后，烧杯中加海水至满，静置5min，取上浮优质受精卵，转入1m3玻璃钢丝桶中22℃左右海水孵化培育，孵化出膜后的培育方式同正常大黄鱼。
8.根据权利要求7所述一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法，其特征在于：所述海水的盐度26.5-28，水温22℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910751729.5A CN110495410A (zh) | 2019-08-15 | 2019-08-15 | 一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910751729.5A CN110495410A (zh) | 2019-08-15 | 2019-08-15 | 一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110495410A true CN110495410A (zh) | 2019-11-26 |
Family
ID=68587461
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910751729.5A Pending CN110495410A (zh) | 2019-08-15 | 2019-08-15 | 一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110495410A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113215266A (zh) * | 2021-04-14 | 2021-08-06 | 浙江省农业科学院 | 一种快速鉴定大黄鱼与小黄鱼的杂交鱼及其亲本的引物及方法 |
| CN114208730A (zh) * | 2021-12-10 | 2022-03-22 | 宁德师范学院 | 一种保持大黄鱼精子授精性能的冻存及复苏方法及应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030230247A1 (en) * | 2000-10-12 | 2003-12-18 | Marical, Inc. | Methods for raising pre-adult anadromous fish |
| CN102077823A (zh) * | 2010-11-16 | 2011-06-01 | 佛山市生生水产股份有限公司 | 一种斑鳜鱼精液冷冻保存及人工授精的方法 |
| CN105123580A (zh) * | 2015-09-06 | 2015-12-09 | 莱州明波水产有限公司 | 云纹石斑鱼与鞍带石斑鱼的工厂化杂交育苗方法 |
| CN106172117A (zh) * | 2016-07-14 | 2016-12-07 | 浙江省海洋水产研究所 | 小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法 |
-
2019
- 2019-08-15 CN CN201910751729.5A patent/CN110495410A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030230247A1 (en) * | 2000-10-12 | 2003-12-18 | Marical, Inc. | Methods for raising pre-adult anadromous fish |
| CN102077823A (zh) * | 2010-11-16 | 2011-06-01 | 佛山市生生水产股份有限公司 | 一种斑鳜鱼精液冷冻保存及人工授精的方法 |
| CN105123580A (zh) * | 2015-09-06 | 2015-12-09 | 莱州明波水产有限公司 | 云纹石斑鱼与鞍带石斑鱼的工厂化杂交育苗方法 |
| CN106172117A (zh) * | 2016-07-14 | 2016-12-07 | 浙江省海洋水产研究所 | 小黄鱼雌鱼与大黄鱼雄鱼杂交育种方法 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113215266A (zh) * | 2021-04-14 | 2021-08-06 | 浙江省农业科学院 | 一种快速鉴定大黄鱼与小黄鱼的杂交鱼及其亲本的引物及方法 |
| CN114208730A (zh) * | 2021-12-10 | 2022-03-22 | 宁德师范学院 | 一种保持大黄鱼精子授精性能的冻存及复苏方法及应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102077823B (zh) | 一种斑鳜鱼精液冷冻保存及人工授精的方法 | |
| CN1596670A (zh) | 鱼类精子冷冻保存的实用化方法 | |
| CN102106279B (zh) | 一种改良斑鳜生长性状的杂交育种方法 | |
| CN105123580A (zh) | 云纹石斑鱼与鞍带石斑鱼的工厂化杂交育苗方法 | |
| CN110495410A (zh) | 一种小黄鱼冷冻精子与大黄鱼杂交繁殖方法 | |
| CN103461253B (zh) | 黄河裸裂尻鱼人工繁殖方法 | |
| CN103734058B (zh) | 一种提高海湾扇贝孵化率的方法 | |
| CN106417113B (zh) | 鞍带石斑鱼精子冷冻库建立及辅助石斑鱼远缘杂交育种方法 | |
| CN104255599A (zh) | 一种韩墨杂交扇贝的培育方法 | |
| CN110786321A (zh) | 一种金钱鱼精子冷冻保存方法 | |
| CN107683850A (zh) | 一种黄鳝精子超低温冷冻保存液及其冷冻复苏方法 | |
| Blawut et al. | Testicular collections as a technique to increase milt availability in sauger (Sander canadensis) | |
| CN102599094B (zh) | 一种金沙鲈鲤的人工孵化方法 | |
| CN100512638C (zh) | 野生马鲛鱼的人工繁育方法 | |
| CN101167443B (zh) | 银鲳人工授精及孵化方法 | |
| CN100484397C (zh) | 岱衢族大黄鱼与闽粤东族养殖大黄鱼的杂交方法 | |
| CN100435630C (zh) | 鲈鱼冷冻精子诱导半滑舌鳎卵减数雌核发育方法 | |
| CN111869656A (zh) | 一种绿鳍马面鲀精子的超低温冷冻保存方法 | |
| CN101401555A (zh) | 一种鮸状黄姑鱼工厂化苗种培育方法及其专用亲鱼强化剂 | |
| CN102763641A (zh) | 滇池金线鲃精子超低温冷冻保存及复苏方法 | |
| CN116235847A (zh) | 一种低温冷冻保存管和石斑鱼低温冷冻保存方法和应用 | |
| CN100404675C (zh) | 一种生产体细胞克隆猪的方法 | |
| CN110036950B (zh) | 一种海水养殖虹鳟的人工杂交育种方法 | |
| CN102870763A (zh) | 一种红鳍笛鲷精子的冷冻保存方法 | |
| CN103348932B (zh) | 一种夏鲆冻精与牙鲆种间杂交人工授精的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20191126 |