CN106153936A - 一种Bt-Cry1Ab/Ac胶体碳快速检测试纸条 - Google Patents

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吴刚
李均
武玉花
李晓飞
李允静
朱莉
王锐
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Nanjing Ruiqi Biological Technology Co ltd
Oil Crops Research Institute of Chinese Academy of Agriculture Sciences
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Nanjing Ruiqi Biological Technology Co ltd
Oil Crops Research Institute of Chinese Academy of Agriculture Sciences
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Abstract

本发明涉及一种Bt-Cry1Ab/Ac胶体碳快速检测试纸条，包括PVC底板、样品垫、硝酸纤维素膜、质控线、检测线、吸水滤纸，PVC底板一侧设有样品垫，另一侧设有吸水滤纸；样品垫和吸水滤纸之间设有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜右侧卡接在吸水滤纸中；所述硝酸纤维素膜中部设有检测线和质控线，检测线靠近样品垫，还包括胶体碳垫，样品垫右端与胶体碳垫搭接相连，胶体碳垫右侧与硝酸纤维素膜搭接相连。它具备操作简便，迅速，反应灵敏度高，成本低以及便于大规模推广使用的优点。

Description

一种Bt-Cry1Ab/Ac胶体碳快速检测试纸条
技术领域
本发明涉及转基因水稻、玉米、棉花、大豆等作物的谷物散粮及其粗加工产品中的蛋白BT-Cry1Ab/Ac的快速检测方法，属于转基因检测领域。
背景技术
随着各种各样的转基因食品大量涌入市场，转基因食品的安全性日益备受关注，世界各国对转基因食品的安全性存在较大的争议。欧盟，日本等地区已制定相关法规对转基因食品进行严格的管理。因此，快速检测转基因作物/植物中转基因蛋白的方法具有重要的意义。
苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)是一种革兰氏阳性菌，广泛存在于土壤、尘埃、水域、沙漠、植物、昆虫尸体中。二十世纪50年代，人们发现Bt菌的杀虫活性与其伴胞晶体有关，并证实这种伴胞晶体由蛋白质组成(包括Cry1Ab，Cry1C等)，通常被称作杀虫晶体蛋白(insecticidal crystalprotein，ICP)。这种蛋白亦成为如今抗虫转基因作物中最为常用的抗虫蛋白质之一。
目前常用的Bt杀虫晶体蛋白检测方法包括基于DNA的PCR检测方法及基于蛋白质的酶联免疫吸附法。PCR法能够从作物种子开始到作物成熟整个过程中对转基因成分进行精确检测，不受样品的处理方法的影响，但易出现假阳性和假阴性等问题，且因经高度处理过的转基因产品及其衍生物，如植物油、糖或者淀粉等中不含任何DNA成分，因此PCR方法无法实现对此类转基因食品的检测。酶联免疫吸附法可对样本进行批量处理，但其耗时较长，需要专业技术人员，且需特殊的仪器，因此该种检测方法不利于在无相关专业技术用户市场的推广和使用。本发明采用胶体碳免疫层析技术，可实现快速检测，肉眼即可进行判断，无需专业技术人员的便于推广的目的。
发明内容
针对上述情况，本发明提供一种利用胶体碳建立的快速检测转基因作物(水稻、玉米、棉花、大豆等)的谷物散粮及其粗加工产品中的Bt-Cry1Ab/Ac抗虫蛋白的检测试纸条，采用标记了单克隆抗体M03的胶体碳垫与包被了单克隆抗体M02的硝酸纤维素膜(检测线)和包被了羊抗鼠IgG的硝酸纤维素膜(质控线)制成硝酸纤维素膜配合；采用双抗体夹心免疫层析的原理，样本中的抗原在侧向移动的过程中与胶体碳标记的特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物，继续向前方流动和硝酸纤维素膜的检测线上特异性抗体结合形成双抗体夹心复合物进而形成肉眼可见的条带而进行结果的判定，它具备操作简便，迅速，反应灵敏度高，成本低以及便于大规模推广使用的优点。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种Bt-Cry1Ab/Ac胶体碳快速检测试纸条，包括PVC底板、样品垫、硝酸纤维素膜、质控线、检测线、吸水滤纸，PVC底板一侧设有样品垫，另一侧设有吸水滤纸；样品垫和吸水滤纸之间设有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜右侧卡接在吸水滤纸中；所述硝酸纤维素膜中部设有检测线和质控线，检测线靠近样品垫，其特征在于，还包括胶体碳垫，样品垫右端与胶体碳垫搭接相连，胶体碳垫右侧与硝酸纤维素膜搭接相连。
所述胶体碳垫上设有胶体碳标记的单克隆抗体M03涂层。
所述检测线为硝酸纤维素膜上包被了单克隆抗体M02的区域。
所述质控线为硝酸纤维素膜上包被了羊抗鼠IgG的区域。
所述样品垫上设有加样区。
所述样品垫、吸水滤纸和胶体碳垫依次贴附于PVC底板上。
一种Bt-Cry1Ab/Ac胶体碳快速检测试纸条的使用方法，包括以下步骤：
一、样本处理：
a)称取待测谷物样品至带有盖子的反应容器中；
b)利用搅拌机或其它类似设备将谷物打碎成细颗粒状；
c)依据样品总质量加入相应体积的超纯水或去离子水，其中水的体积(毫升)为样品总质量(克)的1.2～2倍；
d)拧紧反应容器的盖子，上下振荡至少30～60秒，确保样品与超纯水或去离子水充分混匀；
e)静置至反应容器中固体物质沉降；
二、样本检测：
a)用吸管吸取反应容器中上清液加入样品杯，直至样品杯中上清液加满至基准线，保证样品杯中的上清液中没有颗粒物；
b)静置30～60秒后，将样品杯中的上清液滴入快速检测试纸条的加样区，即可开始测试；
三、结果判断：
当上清液为阴性(-)时：检测线(T线)不显色；当上清液为阳性(+)时：检测线(T线)显黑色、肉眼可见；当未出现质控线(C线)，可能操作不当或试纸已失效。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试纸重新测试。
优选的，步骤一c)中加入的超纯水或去离子水为样品总质量的1.5倍。
优选的，步骤一d)中振荡时间为30秒。
优选的，步骤二a)进行之前，将反应器中混合液于离心机(日立离心机，CF16RXII)中1000rpm离心5分钟。
优选的，步骤二b)中静置时间为30秒。
本发明的优点是：采用标记了单克隆抗体M03的胶体碳垫与包被了单克隆抗体M02的硝酸纤维素膜(检测线)和包被了羊抗鼠IgG的硝酸纤维素膜(质控线)制成检测试纸条；采用双抗体夹心免疫层析的原理，样本中的抗原在侧向移动的过程中与胶体碳标记的特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物，继续向前方流动和硝酸纤维素膜的检测线上特异性抗体结合形成双抗体夹心复合物进而形成肉眼可见的条带而进行结果的判定，它具备操作简便，迅速，反应灵敏度高，成本低以及便于大规模推广使用的优点。
附图说明
图1为本发明的结构示意图。
在图中：1-PVC底板，2-样品垫，3-硝酸纤维素膜，4-质控线，5-检测线，6-吸水滤纸，7-胶体碳垫，8-加样区。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体图示，进一步阐述本发明。
参见图1，一种Bt-Cry1Ab/Ac胶体碳快速检测试纸条，包括PVC底板、样品垫、硝酸纤维素膜、质控线、检测线、吸水滤纸，PVC底板一侧设有样品垫，另一侧设有吸水滤纸；样品垫和吸水滤纸之间设有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜右侧卡接在吸水滤纸中；所述硝酸纤维素膜中部设有检测线和质控线，检测线靠近样品垫，其特征在于，还包括胶体碳垫，样品垫右端与胶体碳垫搭接相连，胶体碳垫右侧与硝酸纤维素膜搭接相连。
所述胶体碳垫上设有胶体碳标记的单克隆抗体M03涂层。
所述检测线为硝酸纤维素膜上包被了单克隆抗体M02的区域。
所述质控线为硝酸纤维素膜上包被了羊抗鼠IgG的区域。
所述样品垫上设有加样区。
所述样品垫、吸水滤纸和胶体碳垫依次贴附于PVC底板上。
一种Bt-Cry1Ab/Ac胶体碳快速检测试纸条的使用方法，包括以下步骤：
一、样本处理：
a)称取待测谷物样品至带有盖子的反应容器中；
b)利用搅拌机或其它类似设备将谷物打碎成细颗粒状；
c)依据样品总质量加入相应体积的超纯水或去离子水，其中水的体积(毫升)为样品总质量(克)的1.2～2倍；
d)拧紧反应容器的盖子，上下振荡至少30～60秒，确保样品与超纯水或去离子水充分混匀；
e)静置至反应容器中固体物质沉降；
二、样本检测：
a)用吸管吸取反应容器中上清液加入样品杯，直至样品杯中上清液加满至基准线，保证样品杯中的上清液中没有颗粒物；
b)静置30～60秒后，将样品杯中的上清液滴入快速检测试纸条的加样区，即可开始测试；
三、结果判断：
当上清液为阴性(-)时：检测线(T线)不显色；当上清液为阳性(+)时：检测线(T线)显黑色、肉眼可见；当未出现质控线(C线)，可能操作不当或试纸已失效。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试纸重新测试。
优选的，步骤一c)中加入的超纯水或去离子水为样品总质量的1.5倍。
优选的，步骤一d)中振荡时间为30秒。
优选的，步骤二a)进行之前，将反应器中混合液于离心机(日立离心机，CF16RXII)中1000rpm离心5分钟。
优选的，步骤二b)中静置时间为30秒。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明的范围内。本发明要求的保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。

Claims (8)

1.一种Bt-Cry1Ab/Ac胶体碳快速检测试纸条，包括PVC底板、样品垫、硝酸纤维素膜、质控线、检测线、吸水滤纸，PVC底板一侧设有样品垫，另一侧设有吸水滤纸；样品垫和吸水滤纸之间设有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜右侧卡接在吸水滤纸中；所述硝酸纤维素膜中部设有检测线和质控线，检测线靠近样品垫，其特征在于，还包括胶体碳垫，样品垫右端与胶体碳垫搭接相连，胶体碳垫右侧与硝酸纤维素膜搭接相连。
2.根据权利要求1所述的Bt-Cry1Ab/Ac胶体碳快速检测试纸条，其特征在于，所述胶体碳垫上设有胶体碳标记的单克隆抗体M03涂层。
3.根据权利要求1所述的Bt-Cry1Ab/Ac胶体碳快速检测试纸条，其特征在于，所述检测线为硝酸纤维素膜上包被了单克隆抗体M02的区域。
4.根据权利要求1所述的Bt-Cry1Ab/Ac胶体碳快速检测试纸条，其特征在于，所述质控线为硝酸纤维素膜上包被了羊抗鼠IgG的区域。
5.一种Bt-Cry1Ab/Ac胶体碳快速检测试纸条的使用方法，包括以下步骤：
一、样本处理：
a)称取待测谷物样品至带有盖子的反应容器中；
b)利用搅拌机或其它类似设备将谷物打碎成细颗粒状；
c)依据样品总质量加入相应体积的超纯水或去离子水，其中水的体积为样品总质量的1.2～2倍；
d)拧紧反应容器的盖子，上下振荡至少30～60秒，确保样品与超纯水或去离子水充分混匀；
e)静置至反应容器中固体物质沉降；
二、样本检测：
a)用吸管吸取反应容器中上清液加入样品杯，直至样品杯中上清液加满至基准线，保证样品杯中的上清液中没有颗粒物；
b)静置30～60秒后，将样品杯中的上清液滴入快速检测试纸条的加样区，即可开始测试；
三、结果判断：
当上清液为阴性时：检测线不显色；当上清液为阳性时：检测线显黑色、肉眼可见；当未出现质控线时，可能操作不当或试纸已失效；在此情况下，应重新测试。
6.根据权利要求5所述的Bt-Cry1Ab/Ac胶体碳快速检测试纸条的使用方法，其特征在于，步骤一c)中加入的超纯水或去离子水为样品总质量的1.5倍。
7.根据权利要求5所述的Bt-Cry1Ab/Ac胶体碳快速检测试纸条的使用方法，其特征在于，步骤一d)中振荡时间为30秒。
8.根据权利要求5所述的Bt-Cry1Ab/Ac胶体碳快速检测试纸条的使用方法，其特征在于，步骤二b)中静置时间为30秒。
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