CN106153926A - 乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒及其制备方法，乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒包括检测条，所述检测条包括金结合物垫和反应膜，所述金结合物垫包被有胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体，所述反应膜包括检测线和质控线，所述检测线包被有重组乙型脑炎病毒抗原，所述质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。制备该乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒包括反应膜的制备、金结合物垫的制备、切割装配几个步骤。该乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，操作简便，适用广泛，特异性好，灵敏度高。

Description

乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒及其制备方法

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，特别是指一种乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

乙型脑炎是由乙脑病毒引起、由蚊虫传播的一种急性传染病。乙脑病毒属披盖病毒科中黄病毒属，为B组虫媒病毒，呈球形，直径40nm，含单股正链RNA，长约11kb。其RNA基因组编码单个多肽，内有衣壳蛋白(C)与核酸构成的核心，外披以含脂质的囊膜，表面有囊膜糖蛋白(E)刺突，即病毒血凝素，囊膜内尚有内膜蛋白(M)，参与病毒的装配，以及非结构蛋白NS1—NS5。

乙脑主要通过蚊虫叮咬而传播，其中三带喙库蚊是主要传播媒介。人群对乙脑病毒普遍易感，感染后多数呈隐性感染，并获得持久免疫力。发病病例主要集中在10岁以下的儿童，以2-6岁组发病率最高。发病与否，取决于病毒的数量，毒力和机体的免疫功能。感染乙脑病毒的蚊虫叮咬人体后，病毒先在局部组织细胞和淋巴结、以及血管内皮细胞内增殖，不断侵入血流，形成病毒血症。发病后，可引起脑实质广泛病变，以大脑皮质、脑干及基底核的病变最为明显。

其基本病变为：

①血管内皮细胞损害，可见脑膜与脑实质小血管扩张、充血、出血及血栓形成，血管周围套式细胞浸润；

②神经细胞变性坏死，液化溶解后形成大小不等的筛状软化灶；

③局部胶质细胞增生，形成胶质小结。部分患者脑水肿严重，颅内压升高或进一步导致脑疝。

该病的流行区域呈现不断扩大的趋势，有效防控仍然面临严峻的挑战。快速、准确的诊断方法的建立，有利于筛查病毒感染者，可控有效制其传染。

目前对乙型脑炎病毒的检测主要有病毒分离培养、分子生物学检测和血清学诊断等手段。

病毒分离培养法主要是通过采集患者血液和(或)脑脊液标本，从脑炎患者标本中分离到乙脑病毒的诊断方法，主要分为组织细胞培养法和新生乳鼠接种法。此类方法耗时长，实验仪器与操作要求高，不适于广泛使用与快速筛查。

分子生物学检测主要是通过设计乙脑病毒特异性引物，通过聚合酶链式反应或实时荧光定量聚合酶链式反应检测标本中是否存在乙脑病毒特异性核酸，进而诊断是否感染。该方法比病毒分离培养法更加敏感、快速，可直接作出诊断，但也需特定的实验仪器与专业的实验人员操作。

血清学检测主要有补体结合试验、中和试验、血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验等，这些方法都需要在实验室内由专业技术人员操作，并需要荧光显微镜、酶标仪和多种配套试剂，操作步骤较为复杂。

因此，亟需建立操作更加简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高，适于普及并可单份检测，更适合于流行病学调查及现场应用的乙型脑炎病毒快速诊断试剂盒。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，操作简便，适用广泛，特异性好，灵敏度高。

基于上述目的本发明提供的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒包括检测条，所述检测条包括金结合物垫和反应膜，所述金结合物垫包被有胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体，所述反应膜包括检测线和质控线，所述检测线包被有重组乙型脑炎病毒抗原，所述质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。

较佳的，所述重组乙型脑炎病毒抗原是应用基因工程方法重组表达获得，浓度为2.0-10.0mg/mL。

较佳的，制备所述重组乙型脑炎病毒抗原所用的PCR引物为：

5'-CGCTCGAGTTAAGCATGCATTGGTCGCTAA-3'；

5'-CGGAATTCTTTAATCGTTGTCTGGGAATGGGCAATCGTGACA-3'。

较佳的，所述羊抗鼠IgG多克隆抗体浓度为4.0-10.0mg/mL，所述鼠抗人IgG单克隆抗体浓度为2.0-10.0mg/mL。

较佳的，所述乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒还包括样本稀释液，该样本稀释液为磷酸盐缓冲液。

可选的，所述检测条放置于长方形塑料盒中，构成检测卡，该检测卡上设有样品孔和检测孔，所述样品孔与所述检测条的所述样品垫位置对应，所述检测孔对应所述检测条的所述检测线和所述质控线。

基于相同的发明构思，本发明还提供一种制备上述乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒的方法，包括以下步骤：

(1)反应膜的制备：

稀释所述重组乙型脑炎病毒抗原和所述羊抗鼠IgG多克隆抗体，并喷涂至所述反应膜上，分别形成所述检测线与质控线，干燥备用；

(2)金结合物垫的制备：

将所述鼠抗人IgG单克隆抗体与胶体金进行偶联制得胶体金标的记鼠抗人IgG单克隆抗体溶液，调整浓度，并浸泡所述金结合物垫，铺金，干燥备用；

(3)切割装配：将所述反应膜、金结合物垫、粗纤维滤纸、样品垫装配至所述反应板，切割后形成所述检测条。

较佳的，所述胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体的制备方法包括以下步骤：

(1)使用碳酸钾溶液调节胶体金pH值至8.5-9.0；

(2)加入鼠抗人IgG单克隆抗体，搅拌；

(3)加入10％牛血清白蛋白溶液，搅拌；

(4)离心，弃去上清液；

(5)加入胶体金结合物稀释液，即得。

较佳的，所述胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体的制备方法步骤1)中，碳酸钾溶液调节胶体金pH值至8.5。

本试剂盒的原理为：

采用胶体金免疫层析技术原理，在硝酸纤维素膜上的检测线包被基因重组乙型脑炎病毒抗原，在质控线包被羊抗鼠IgG多克隆抗体，在金标垫上包被胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体。用于定性检测全血或血清(浆)样本中的乙型脑炎病毒IgG抗体。

检测阳性样本时，样本中的乙型脑炎病毒IgG抗体可与胶体金标记的鼠 抗人IgG单克隆结合，形成免疫复合物，由于层析作用复合物及样本在硝酸纤维素膜内部向前流动。当复合物经过检测线时与包被的重组乙型脑炎病毒抗原结合，形成“胶体金-鼠抗人IgG单克隆抗体-乙型脑炎病毒IgG-重组乙型脑炎病毒抗原”而凝集显色。剩余的胶体金标记鼠抗人IgG单克隆抗体与指控线包被的羊抗鼠IgG多克隆抗体结合而凝集显色，检测阴性样本时，样本中不含乙型脑炎病毒IgG抗体，致使不能形成免疫复合物，则只能在质控线处显色。

从上面所述可以看出，本发明提供的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒具有快速、简便、不需特殊设备，特异性高，灵敏度好。整个操作时间仅需15-20分钟，适用于疾病的快速诊断，以及现场检测，流行病学调研等。

附图说明

图1为本发明实施例乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒中检测条的结构示意图；

图2为本发明实施例乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒中检测卡的结构示意图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明进一步详细说明。

实施例1：

在本实施例中，所述乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，包括检测条或检测卡、样本稀释液。图1为本发明实施例乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒中检测条的结构示意图，如图1所示，所述检测条包括反应板1，以及依次叠压粘附于所述反应板上1的样品垫2、金结合物垫3、反应膜4、粗纤维滤纸5。

在本实施例中，所述金结合物垫3包被有胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体。作为一个较佳的实施例，所述鼠抗人IgG单克隆抗体标记胶体金前为无色透明液体，浓度为2.0-10.0mg/mL。较佳地，所述鼠抗人IgG单克隆抗体浓度为2mg/mL。用聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)测定，上样量为10μL时，该鼠抗人IgG单克隆抗体显示为重链和轻链各一条带。

在本实施例中，所述反应膜4为硝酸纤维素膜，包括检测线6和质控线 7。

所述检测线6包被有重组乙型脑炎病毒抗原，该重组乙型脑炎病毒抗原包被前其外观为无色透明液体，浓度为2.0-10.0mg/mL。较佳地，所述重组乙型脑炎病毒抗原浓度2.0mg/mL。

重组乙型脑炎病毒抗原制备方法：

(1)用Trizol提取乙型脑炎病毒RNA，经反转录PCR后得到的产物为模板进行PCR扩增。PCR引物如下：

5'-CGCTCGAGTTAAGCATGCATTGGTCGCTAA-3'；

5'-CGGAATTCTTTAATCGTTGTCTGGGAATGGGCAATCGTGACA-3'。

经PCR扩增后，将PCR产物用1.5％琼脂糖凝胶电泳分离。在凝胶成像仪观测下，切下1400bp左右处目的条带。采按照说明书，采用琼脂糖凝胶回收试剂盒(天根生化科技有限公司)对目的片段进行纯化。

(2)回收后的PCR片段克隆入pMD18T载体中，转化感受态细胞，酶切鉴定，并将测序，测序正确后，再次酶切并融入表达载体pET28a，转达表达宿主菌BL21表达。

(3)重组蛋白进行IPTG诱导表达，收集培养的大肠杆菌，经超声波破碎后，采用Ni柱亲和层析方法得到目的蛋白，用SDS-PAGE或其他方法测定，上样量为10μL时，仅55KD显示一条带。

在本实施例中，所述质控线7包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。作为一个较佳的实施例，所述羊抗鼠IgG多克隆抗体包被前为无色透明液体，浓度为4.0-10.0mg/mL。较佳地，所述羊抗鼠IgG多克隆抗体浓度为4mg/mL。

在本实施例中，所述羊抗鼠IgG多克隆抗体、鼠抗人IgG单克隆抗体均购自北京万域美澜科技有限公司。

在本实施例中，所述样本稀释液为20mM PH值为7.4的磷酸盐缓冲液。

图2为本发明实施例乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒中检测卡的结构示意图，如图2所示，作为一个可选的实施例，所述检测条放置于特定的长方形塑料盒中，构成所述检测卡，该检测卡上设有一样品孔8和检测孔9。所述样品孔8用于滴加实验样品，与所述检测条的样品垫2位置对应；检测孔9对应检测条的检测线6和质控线7，通过检测孔9可以观察到所述反应膜4上检测线6和质控线7的变化。

实施例2：乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒的制备方法：

利用重组乙型脑炎病毒抗原包被反应膜4作为检测线；利用羊抗鼠IgG多克隆抗体包被反应膜4作为质控线；标记胶体金的鼠抗人IgG单克隆抗体包被金结合物垫，即得检测条。

(1)反应膜的制备：

用包被稀释液将乙型脑炎病毒抗原稀释至最佳包被浓度1mg/mL；用包被稀释液将羊抗鼠IgG多克隆抗体稀释至最佳包被浓度2mg/mL；用点膜机将两种包被液分别喷到反应膜4上，喷点量为0.1μl/mm，分别形成所述检测线6与质控线7；将已包被的反应膜4于37℃干燥3小时，并于室温保存。所述包被稀释液为0.05M的磷酸盐缓冲液。

(2)金结合物垫的制备：

将鼠抗人IgG单克隆抗体与胶体金进行偶联制得胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体溶液。将胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体溶液调整至最佳浓度10μg/mL，以1.5mL/条，浸泡所述金结合物垫，铺金，37℃干燥3小时，并于室温保存。

其中，胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体的制备步骤如下：

1)用0.1M碳酸钾溶液调节胶体金PH值至8.5-9.0；

2)加入10μg/mL鼠抗人IgG单克隆抗体，搅拌40分钟；

3)再加入10％的牛血清白蛋白至终浓度为1％，搅拌15分钟；

4)12000rpm/min，4℃离心15分钟，小心弃去上清液；

5)加入原体积(原体积以胶体金体积计算)的1/2体积的胶体金结合物稀释液。

其中，所述胶体金结合物稀释液是将磷酸氢二钠5.372g、磷酸二氢钠0.78g、牛血清白蛋白5g、氯化钠8.5g、酪蛋白0.5g溶于1L去离子水中，混匀制备而成。

较佳地，用0.1M碳酸钾溶液调节胶体金PH值至8.5。

(3)切割装配：在内包间内将反应膜、金结合物垫、粗纤维滤纸、样品垫等装配成反应板，再用切割机切成4mm的检测条组装成成品。

实施例3：乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒的检测方法

1.检测前准备：检验前将试剂盒和样本恢复至室温。实验湿度应小于60％，实验温度为18-30℃。

2.样本准备：全血为指尖采血或者采用静脉采血。全血样本采集后不做 保存，即采即用。血清样本按常规方法由静脉采集。血浆样本可采用肝素、柠檬酸钠、EDTA进行处理。血清或血浆样本5天内测定的样本可放置4℃保存。样本放置在-20℃至少可保存3个月。样本避免溶血或反复冻融。混浊或有沉淀的样本应离心或过滤澄清后再检测。

3.检测条检测方法

(1)从原包装铝箔袋中取出检测条，平置于台面上；

(2)取20μL血清或血浆样本，加到检测条指示箭头下端的加样处，再加样本稀释液100μL(约2-3滴)；

(3)15-20分钟内判读结果，20分钟后检验结果无效。

(4)检测结果判定：

阴性：只在质控线位置出现一条红色条带。

阳性：质控线和检测线位置出现两条红色条带。

无效：质控线位置没有出现红色条带

4.检测卡检测方法

(1)从铝箔袋中取出检测卡，放在水平工作台面上平置，并做好样本标记；

(2)取20μL血清、血浆或40ul全血样本，直接加入到加样孔中，再加样本稀释液100μL(约2-3滴)；

(3)15-20分钟内判读结果，20分钟后检验结果无效。

(4)检测结果判定：

阴性：只在质控线位置出现一条红色条带。

阳性：质控线和检测线位置出现两条红色条带。

无效：质控线位置没有出现红色条带。

实施例4：质控血清制备

质控血清制备方法：

1.质控血清的采集

(1)收集血清大于35mL(无明显溶血、黄疸、脂肪血或污染血清)，

(2)60℃加热1小时灭活；

(3)离心、过滤，除去沉淀物；

(4)稀释：需要稀释时，用正常人血清稀释；

(5)更换质控血清时，与欲被替换的原质控血清至少连续对照标定3 次；

(6)分装、标识、保存：用1.5mL离心管分装，1mL/管，共35管，封口，贴签，-20℃冻存。

2.质控血清的鉴定

(1)乙型脑炎病毒IgG抗体阴性血清10份：阴性血清采集于健康献血员的血清，经市售乙型脑炎病毒IgG抗体ELISA试剂盒鉴定为阴性血清，选取10份作为抗体阴性质控血清。

(2)乙型脑炎病毒IgG抗体阳性血清10份：市售乙型脑炎病毒IgG抗体ELISA试剂盒(美国Inbios公司的Japanese Encephalitis IgG ELISA)鉴定为乙型脑炎病毒IgG抗体阳性血清，分析检测结果，选择3份弱阳性血清、4份中阳性血清、3份强阳性血清，共10份，作为抗体阳性质控血清。

(3)最低检出限指控血清：对其中一份弱阳性血清,其s/c值(样本值/C CUT-OFF值)为3.1左右进行系列稀释，当稀释至1：8时仍可检出，该系列血清为最低检出限血清。为保持今后最低检出限血清的一致性，在最低检出限血清原液选择时选择s/c值为3.1左右的弱阳性进行系列稀释，以保持批间一致性。

(4)精密性血清：选择一份乙型脑炎病毒IgG抗体弱阳性血清(s/c值为3.4左右)，作为精密性血清。

实施例5：乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒有效性验证

采用上述方法制备的质控血清检测本发明乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒的有效性：

1.阴阳性符合率检测：

(1)检测10份乙型脑炎病毒IgG抗体阳性指控血清，检测结果均为阳性。说明本发明乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒具有较好的阳性符合率。

(2)检测10份乙型脑炎病毒IgG抗体阴性指控血清，检测结果均为阴性。说明本发明乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒具有较好的阴性符合率。

此外，与同类上市试剂盒对1000例临床标本进行临床对比研究，本试剂盒与同类试剂盒的临床试验总符合率为98％，阳性符合率97.9％，阴性符合率98.1％，本试剂盒与同类试剂盒检测结果无显著性差异。

2.灵敏度检测：

最低检出限指控血清检测，最低检出限血清原液，按1：8稀释后检测， 检测结果为阳性。说明本发明乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒灵敏度较好。

3.精密性检测：

采用10个检测条平行测定精密性血清，各检测条显色速度及强度一致，均一性无差别。说明本发明乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒精密性较好。

4.特异性检测：

采用本发明乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒(胶体金法)检测含内源性干扰物质和潜在交叉反应物质的样本，结果如下：

戊型肝炎病毒IgG抗体、甲型肝炎病毒IgG抗体、乙型肝炎病毒表面抗原抗体、丙型肝炎病毒抗体、梅毒螺旋体抗体、艾滋病毒抗体、肺炎支原体IgG抗体、肺炎衣原体IgG抗体、腺病毒IgG抗体、呼吸道合胞病毒IgG抗体、甲型流感病毒IgG抗体、乙型流感病毒IgG抗体、EV71病毒IgG抗体、麻疹病毒IgG抗体、麻疹病毒IgM抗体、风疹病毒IgG抗体、腮腺炎病毒IgG抗体、A群流脑病毒IgG抗体、百日咳病毒IgG抗体、脊髓灰质炎病毒IgG抗体、抗核抗体、抗线粒体抗体、高浓度非特异性IgM抗体(血清总IgM)阳性样本均不会对本品造成干扰。

5.稳定性检测：

4～30℃保存12个月或37℃条件下保存14天，各项指标仍符以上的要求。说明本发明乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒具有较好的稳定性。

6.其他：

(1)高浓度非特异性IgG抗体(血清总IgG)会与特异性IgG抗体竞争抗体的结合位点使检测灵敏度下降。

(2)样本中血脂含量高于6mmol/L、胆红素含量高于40μmol/L、血红蛋白大于5.0g/L时均会对实验结果产生影响。

本发明乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒具有以下优点：

(1)较高的灵敏性与特异性：本发明乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒的检测线包被基因工程方法重组表达获得乙型脑炎病毒抗原，配合高纯度的鼠抗人IgG单克隆抗体包被胶体金，作为金结合物，可以有效的结合样本中人血清总IgG，排除其他类型抗体对检测的干扰，起到对样本中总IgG抗体的初筛作用。将乙型脑炎病毒IgG抗体弱阳性血清(s/c值为3.1左右)稀释至1：8时仍可检出，说明具有较高的灵敏性；并且仅对乙型脑炎病毒IgG抗 体阳性血清标本呈阳性，而对其他病原体感染的血清标本呈阴性结果，具有良好的特异性。

(2)检测快速简便：本试剂盒检测整体操作仅需15-20分钟，仅需滴加样本至样本垫，等待结果即可。并且无需特定的实验仪器辅助，不需要专业培训，适于临床、居家使用，可快速筛检病人，适于现场普遍筛查、流行病学调查等。

(3)较高的精密性：多个检测条平行检测同一样本，各检测条显色速度及强度一致，均一性无差别，说明具有良好的精密性。

(4)良好的稳定性：4～30℃保存12个月或37℃条件下保存14天，仍符合检测标准。

可见，本发明提供的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒具有快速、简便、不需特殊设备，准确和灵敏度高等特点。整个操作时间仅需15-20分钟。对临床检测具有重要应用价值，并且适合流行病学调查及现场应用。

所属领域的普通技术人员应当理解：以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，包括检测条，所述检测条包括金结合物垫和反应膜，所述金结合物垫包被有胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体，所述反应膜包括检测线和质控线，所述检测线包被有乙型脑炎病毒抗原，所述质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，所述重组乙型脑炎病毒抗原是应用基因工程方法重组表达获得，浓度为2.0-10.0mg/mL。

3.根据权利要求2所述的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，制备所述重组乙型脑炎病毒抗原所用的PCR引物为：

5'-CGCTCGAGTTAAGCATGCATTGGTCGCTAA-3'；

5'-CGGAATTCTTTAATCGTTGTCTGGGAATGGGCAATCGTGACA-3'。

4.根据权利要求1所述的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，所述羊抗鼠IgG多克隆抗体浓度为4.0-10.0mg/mL，所述鼠抗人IgG单克隆抗体浓度为2.0-10.0mg/mL。

5.根据权利要求1所述的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，还包括样本稀释液，该样本稀释液为磷酸盐缓冲液。

6.根据权利要求1至5任意一项所述的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，所述检测条放置于长方形塑料盒中，构成检测卡，该检测卡上设有样品孔和检测孔，所述样品孔与所述检测条的所述样品垫位置对应，所述检测孔对应所述检测条的所述检测线和所述质控线。

7.一种如权利要求1所述的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)反应膜的制备：

稀释所述乙型脑炎病毒抗原和所述羊抗鼠IgG多克隆抗体，并喷涂至所述反应膜上，分别形成所述检测线与质控线，干燥备用；

(2)金结合物垫的制备：

将所述鼠抗人IgG单克隆抗体与胶体金进行偶联制得胶体金标的记鼠抗人IgG单克隆抗体溶液，调整浓度，并浸泡所述金结合物垫，铺金，干燥备用；

(3)切割装配：将所述反应膜、金结合物垫、粗纤维滤纸、样品垫装配至所述反应板，切割后形成所述检测条。

8.根据权利要求7所述的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体的制备方法包括以下步骤：

(1)使用碳酸钾溶液调节胶体金pH值至8.5-9.0；

(2)加入鼠抗人IgG单克隆抗体，搅拌；

(3)加入10％牛血清白蛋白溶液，搅拌；

(4)离心，弃去上清液；

(5)加入胶体金结合物稀释液，即得。

9.根据权利要求8所述的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体的制备方法步骤1)中，碳酸钾溶液调节胶体金pH值至8.5。