CN106148479A - 油脂中微生物的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了一种混合液、混合液在测定油脂中微生物含量中的用途及测定油脂中微生物含量的方法。所述混合液包括:NaCl、吐温‑80、司盘‑80、单硬脂酸甘油酯、甘油以及水。利用本发明的混合液能够准确地测定油脂中微生物含量。
Description
技术领域
本发明涉及食品领域。具体地,本发明涉及油脂中微生物的检测方法。
背景技术
油脂中微生物检验是衡量油脂质量的重要指标之一。目前,主要采用活菌计数法对样品中微生物进行检测。活菌计数法的原理是每个活的微生物在适宜的培养基和生长条件下可以生长形成菌落,通过计数菌落数,以确定微生物含量。
然而,利用活菌计数法对油脂中微生物检测的方法仍有待改进。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题之一。为此,本发明提出了一种混合液、混合液在测定油脂中微生物含量中的用途及测定油脂中微生物含量的方法。由此,利用本发明的混合液及测定油脂中微生物含量的方法能够准确地测定油脂中微生物含量。
需要说明的是,本发明是基于发明人的下列发现而完成的:
利用活菌计数法对微生物检测时,通常需要将样品溶解于无菌生理盐水中。但是,对于非水溶性的油脂而言,无法溶解于无菌生理盐水中,形成均匀的分散系,从而造成检测无法正常进行。
有鉴于此,发明人经过大量实验得到一种混合液,使得待测油脂样品能够溶解于该混合液中,形成均匀的分散系,从而便于后续检测。由此,利用本发明的混合液及测定油脂中微生物含量的方法能够准确地测定油脂中微生物含量。
为此,在本发明的一个方面,本发明提出了一种混合液。根据本发明的实施例,所述混合液包括:NaCl、吐温-80、司盘-80、单硬脂酸甘油酯、甘油以及水。发明人经过大量实验优化得到上述混合液,使得待测油脂样品能够溶解于该混合液中,形成均匀的分散系,从而便于后续检测。由此,利用根据本发明实施例的混合液能够准确地测定油脂中微生物含量。
根据本发明的实施例,上述混合液还可以具有下列附加技术特征:
根据本发明的实施例,基于1L的所述混合液,所述混合液包括:1~10g/L的NaCl;5~15g/L的吐温-80;2~10g/L的司盘-80;1~5g/L的单硬脂酸甘油酯;10~30g/L的甘油;以及余量的水。由此,使得待测油脂样品进一步充分溶解于该混合液中,形成均匀的分散系,从而便于后续检测。
根据本发明的实施例,所述混合液是通过下列方式获得的:将所述NaCl、吐温-80、司盘-80、单硬脂酸甘油酯、甘油以及50~55℃的部分所述水以300~500r/min的转速搅拌15~30min,并用剩余部分所述水进行定容;以及将所述定容后的混合液在200~250bar的压力下进行均质,并将所得到的均质产物在121℃下灭菌30min,以便得到所述混合液。由此,能够得到均匀的混合液。
在本发明的另一方面,本发明提出了前面所描述的混合液在测定油脂中微生物含量中的用途。由此,利用该混合液能够准确地测定油脂中微生物含量。
根据本发明的实施例,所述微生物为乳酸菌,优选双歧杆菌。由此,利用该混合液能够准确地测定油脂中微生物含量。
根据本发明的实施例,所述油脂为食用油,优选食用植物油。由此,利用该混合液能够准确地测定油脂中微生物含量。
在本发明的又一方面,本发明提出了一种测定油脂中微生物含量的方法。根据本发明的实施例,所述方法包括:(1)将前面所描述的混合液与所述油脂进行混合,得到待测液;(2)将所述待测液接种于培养基中,进行培养,并将所述培养后所得到的菌落进行计数;以及(3)基于所述计数的结果,确定所述油脂中微生物含量。由此,利用根据本发明实施例的方法能够准确地测定油脂中微生物含量。
根据本发明的实施例,所述方法进一步包括:在步骤(2)之前,利用所述混合液将所述待测液进行稀释,得到稀释液。由此,以便于后续的菌落计数。
根据本发明的实施例,所述微生物为乳酸菌,优选双歧杆菌。由此,利用根据本发明实施例的方法能够进一步准确地测定油脂中微生物含量。
根据本发明的实施例,所述油脂为食用油,优选食用植物油。由此,利用根据本发明实施例的方法能够进一步准确地测定油脂中微生物含量。
根据本发明的实施例,所述微生物为双歧杆菌,所述培养基为TPY培养基。由此,利用根据本发明实施例的方法能够进一步准确地测定油脂中微生物含量。
根据本发明的实施例,所述培养是在43℃下进行12~48h,优选24h。由此,利用根据本发明实施例的方法能够进一步准确地测定油脂中微生物含量。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出,部分将从下面的描述中变得明显,或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的,仅用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。
本发明提出了一种混合液、混合液在测定油脂中微生物含量中的用途及测定油脂中微生物含量的方法,下面将分别对其进行详细描述。
混合液
在本发明的一个方面,本发明提出了一种混合液。根据本发明的实施例,所述混合液包括:NaCl、吐温-80、司盘-80、单硬脂酸甘油酯、甘油以及水。
利用活菌计数法对微生物检测时,通常需要将样品溶解于无菌生理盐水中。对于非水溶性的油脂而言,无法溶解于无菌生理盐水中,形成均匀的分散系,从而造成检测无法正常进行。进而,发明人进行深入研究发现,通过向盐水中加入表面活性剂、增溶剂和/或乳化剂等物质,以促使油脂溶解于盐水中,形成均匀分散系。当油脂中含有微生物时,微生物将均匀分散于混合液中,以便于后续的菌落计数,保证检测结果的准确性。
进一步地,发明人经过大量实验发现,吐温-80、司盘-80(亦称作span-80)、单硬脂酸甘油酯与甘油的结合能够有效地促进油脂溶解于盐水中,形成均匀的分散系,便于后续检测。同时,吐温-80、司盘-80、单硬脂酸甘油酯与甘油对微生物的生长影响较小,从而能够准确地测定油脂中微生物含量。然而,利用其他表面活性剂、乳化剂等物质的效果不佳,例如出现油脂无法均匀分散于盐水中、抑制微生物生长等现象。
需要说明的是,本发明的混合液不仅可以用于溶解油脂,还可以用于将溶解有油脂的混合液进一步地稀释,以便于后续的菌落计数。
根据本发明的实施例,基于1L的混合液,混合液包括:1~10g/L的NaCl;5~15g/L的吐温-80;2~10g/L的司盘-80;1~5g/L的单硬脂酸甘油酯;10~30g/L的甘油;以及余量的水。发明人发现,混合液中各成分的配比对于油脂的溶解效果及微生物生长情况具有影响。进而,发明人经过大量实验优化得到上述最优配比,在此条件下油脂能够均匀地溶解于盐水中,且对微生物生长影响较小。其他配比的效果不佳,例如出现油脂无法均匀分散于盐水中、抑制微生物生长等现象。
根据本发明的实施例,混合液是通过下列方式获得的:将所述NaCl、吐温-80、司盘-80、单硬脂酸甘油酯、甘油以及50~55℃的部分所述水以300~500r/min的转速搅拌15~30min,并用剩余部分所述水进行定容;以及将所述定容后的混合液在200~250bar的压力下进行均质,并将所得到的均质产物在121℃下灭菌30min,以便得到所述混合液。
发明人发现,用50~55℃的部分水溶解其他组分,能够使各组分快速混匀,然后将定容后的混合液进行均质,进一步使各组分均匀分散,形成均匀的分散系。具体地,通过均质处理的效果明显优于不进行均质处理。此外,均质压力、搅拌转速及时间不在上述范围内,均会影响检测结果。例如,均质压力过大、搅拌转速过大或搅拌时间过长,容易破坏混合液的结构,从而影响油脂的混合效果,无法形成均匀的分散系。由此,根据本发明实施例的混合液能够准确地测定油脂中微生物含量。
需要说明的是,根据本发明的实施例,将混合液组分中的水分为两部分,其中一部分用于与其他组分混合,剩余部分用于定容。
混合液在测定油脂中微生物含量中的用途
在本发明的另一方面,本发明提出了前面所描述的混合液在测定油脂中微生物含量中的用途。利用前面所描述的混合液将油脂混匀,形成均匀的分散系。当油脂中含有微生物时,微生物将均匀分散于混合液中,以便于后续的菌落计数,保证检测结果的准确性。
需要说明的是,本发明对于微生物的种类不作严格限定,只要能够在上述混合液中生长代谢,形成肉眼可见菌落即可。根据本发明的实施例,微生物为乳酸菌,优选双歧杆菌。发明人发现,利用前面所描述的混合液能够准确地测定油脂中的乳酸菌含量,尤其是双歧杆菌。相对于其他微生物,乳酸菌,尤其是双歧杆菌在上述混合液中生长较好,检测结果较准确。
还需要说明的是,本发明对于油脂的来源不作严格限定,只要能够与上述混合液形成均匀分散体系即可,从而便于后续菌落计数。根据本发明的实施例,油脂为食用油,优选食用植物油。发明人发明,利用前面所描述的混合液能够准确地测定食用油中的微生物含量。相对于食用动物油,测定食用植物油中微生物含量的检测结果准确性偏高。与食用油脂相比,含油脂化妆品中的成分相对较复杂,导致其与混合液形成的体系的均匀性相对偏低,使得检测结果的准确性相对偏低。
本领域技术人员能够理解的是,前面针对混合液所描述的特征和优点,同样适用于该混合液在测定油脂中微生物含量中的用途,在此不再赘述。
测定油脂中微生物含量的方法
在本发明的又一方面,本发明提出了一种测定油脂中微生物含量的方法。根据本发明的实施例,该方法包括:
(1)将前面所描述的混合液与油脂进行混合,得到待测液。
在该步骤中,将混合液与油脂进行混合,从而形成均匀的分散系。当油脂中含有微生物时,微生物将均匀分散于混合液中,以便于后续的菌落计数,保证检测结果的准确性。
需要说明的是,本发明对于微生物的种类不作严格限定,只要能够在上述混合液中生长代谢,形成肉眼可见菌落即可。根据本发明的实施例,微生物为乳酸菌,优选双歧杆菌。发明人发现,利用前面所描述的混合液能够准确地测定油脂中的乳酸菌含量,尤其是双歧杆菌。相对于其他微生物,乳酸菌,尤其是双歧杆菌在上述混合液中生长较好,检测结果较准确。
还需要说明的是,本发明对于油脂的来源不作严格限定,只要能够与上述混合液形成均匀分散体系即可,从而便于后续菌落计数。根据本发明的实施例,油脂为食用油,优选食用植物油。发明人发明,利用前面所描述的混合液能够准确地测定食用油中的微生物含量。相对于食用动物油,测定食用植物油中微生物含量的检测结果准确性偏高。与食用油脂相比,含油脂化妆品中的成分相对较复杂,导致其与混合液形成的体系的均匀性相对偏低,使得检测结果的准确性相对偏低。
(2)将待测液接种于培养基中,进行培养,并将培养后所得到的菌落进行计数。
在该步骤中,当油脂中含有微生物,经培养后能够形成肉眼可见的菌落,从而通过计数菌落数以确定微生物含量。
根据本发明的实施例,该方法进一步包括:在步骤(2)之前,利用混合液将待测液进行稀释,得到稀释液。发明人发现,若油脂中的微生物含量过高,直接将待测液进行培养,培养皿上的菌落过多,不易计数,容易造成误差。进而,需要利用混合液将待测液进行稀释,再将所得到的稀释液接种于培养基中,便于后续计数,保证检测结果的准确性。
需要说明的是,本发明对于稀释倍数不作严格限定,可根据实际情况而定。具体地,通过稀释以控制培养皿上的菌落数为30~300个。
需要说明的是,本发明对于培养基的组成不作严格限定,可根据微生物的种类及特性,确定培养基的组成,只要能够使微生物在培养基中生长,形成肉眼可见的菌落即可。根据本发明的实施例,微生物为双歧杆菌,培养基为TPY培养基。根据本发明的具体实施例,TPY培养基包括:10g/L水解酪蛋白;2g/L酵母粉;5g/L植物胨;5g/L葡萄糖;2g/L K2HPO4;0.5g/L MgCl2·6H2O;0.25g/L ZnSO4·7H2O;0.15g/L CaCl2;0.1mg/L FeCl3;0.5g/L L-半胱氨酸;1g/L Tween-80;以及余量水。发明人发现,在此培养基中,双歧杆菌能够正常代谢,且形成的菌落大小适宜,便于计数。从而,保证了检测结果的准确性。
根据本发明的实施例,培养是在43℃下进行12~48h,优选24h。发明人发现,在此条件下,双歧杆菌能够正常代谢,且形成的菌落大小适宜,便于计数。
(3)基于计数的结果,确定油脂中微生物含量。
本领域技术人员能够理解的是,前面针对混合液所描述的特征和优点,同样适用于该测定油脂中微生物含量的方法,在此不再赘述。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解,下面的实施例仅用于说明本发明,而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
双歧杆菌菌粉:购自帝斯曼(中国)有限公司
实施例1
在该实施例中,按照下列方法测定玉米油中双歧杆菌含量:
a、将双歧杆菌菌粉以1%的接种量接种于TPY培养基,43℃培养24h,得到菌悬液,
TPY培养基成分:水解酪蛋白10g/L、酵母粉2g/L、植物胨5g/L、葡萄糖5g/L、K2HPO42g/L、MgCl2·6H2O 0.5g/L、ZnSO4·7H2O 0.25g/L、CaCl2 0.15g/L、FeCl3 0.1mg/L、L-半胱氨酸0.5g/L,以及Tween-80 1g/L,用去离子水定容至1L;
b、将菌悬液与玉米油按照1:100(v/v)的比例混合,得到待测样品;
c、称量去离子水0.9L,加热至50℃,依次加入NaCl 1g/L、Tween-80 5g/L、Span-802g/L、单硬脂酸甘油酯1g/L、甘油10g/L,50~55℃下以300r/min搅拌15min,去离子水定容至1L,220bar均质,121℃灭菌30min,得到混合液;
d、将9mL混合液与1mL待测样品进行混合,并用混合液将混合所得到的溶液分别稀释106倍、107倍、108倍、109倍、1010倍,得到待测样品稀释液;
将9mL生理盐水与1mL菌悬液进行混合,并用生理盐水将混合所得到的溶液分别稀释106倍、107倍、108倍、109倍、1010倍,得到稀释菌悬液;
e、分别取100μL不同稀释倍数的待测样品稀释液及稀释菌悬液涂布于TPY培养基上,每个稀释倍数设置3个平行样,将培养基置于43℃下培养24h,计数菌落数;
f、玉米油中双歧杆菌含量的理论值:通过计数稀释菌悬液形成的菌落数并计算得到。
玉米油中双歧杆菌含量的实测值:通过计数待测样品稀释液形成的菌落数并计算得到。
结果表明,玉米油中双歧杆菌含量的理论值和实测值接近,说明本发明的混合液能够准确地测定油脂中双歧杆菌含量。
实施例2
按照实施例1的方法测定花生油中双歧杆菌含量,区别在于,步骤c的操作如下:
称量去离子水0.9L,加热至55℃,依次加入NaCl 10g/L、Tween-80 15g/L、Span-8010g/L、单硬脂酸甘油酯5g/L、甘油30g/L,50~55℃下以500r/min搅拌30min,去离子水定容至1L,220bar均质,121℃灭菌30min,得到混合液。
结果表明,花生油中双歧杆菌含量的理论值和实测值接近,说明本发明的混合液能够准确地测定油脂中双歧杆菌含量。
实施例3
按照实施例1的方法测定菜籽油中双歧杆菌含量,区别在于,步骤c的操作如下:
称量去离子水0.9L,加热至50℃,依次加入NaCl 9g/L、Tween-80 10g/L、Span-805g/L、单硬脂酸甘油酯3g/L、甘油25g/L,50~55℃下以400r/min搅拌25min,去离子水定容至1L,220bar均质,121℃灭菌30min,得到混合液。
结果表明,菜籽油中双歧杆菌含量的理论值和实测值接近,说明本发明的混合液能够准确地测定油脂中双歧杆菌含量。
实施例4
按照实施例1的方法测定花生油中双歧杆菌含量,区别在于,步骤c的操作如下:
称量去离子水0.9L,加热至55℃,依次加入NaCl 3g/L、Tween-80 7g/L、Span-803g/L、单硬脂酸甘油酯2g/L、甘油20g/L,50~55℃下以400r/min搅拌20min,去离子水定容至1L,220bar均质,121℃灭菌30min,得到混合液。
结果表明,花生油中双歧杆菌含量的理论值和实测值接近,说明本发明的混合液能够准确地测定油脂中双歧杆菌含量。
对比例1
按照实施例3的方法测定菜籽油中双歧杆菌含量,区别在于,混合液中不含Span-80。
结果表明,油脂无法均匀分散于混合液中,导致检测结果中各平行样之间的偏差较大,检测结果准确性较低。
对比例2
按照实施例3的方法测定菜籽油中双歧杆菌含量,区别在于,混合液中不含Tween-80和Span-80。
结果表明,油脂无法均匀分散于混合液中,导致检测结果中各平行样之间的偏差较大,检测结果准确性较低。
对比例3
按照实施例3的方法测定菜籽油中双歧杆菌含量,区别在于,混合液中不含甘油。
结果表明,油脂无法均匀分散于混合液中,导致检测结果中各平行样之间的偏差较大,检测结果准确性较低。
对比例4
按照实施例3的方法测定菜籽油中双歧杆菌含量,区别在于,混合液中含有NaCl10g/L、Tween-80 15g/L、液态石蜡10g/L及去离子水。
结果表明,双歧杆菌含量的理论值显著高于实测值,推测是由于混合液的组成抑制菌体生长,从而导致实际检测结果偏低。
对比例5
按照实施例3的方法测定菜籽油中双歧杆菌含量,区别在于,混合液中Tween-80含量为20g/L。
结果表明,双歧杆菌含量的理论值高于实测值,推测是由于Tween-80含量过高抑制菌体生长,从而导致实际检测结果偏低。
对比例6
按照实施例3的方法测定菜籽油中双歧杆菌含量,区别在于,混合液中甘油含量为5g/L。
结果表明,油脂无法均匀分散于混合液中,导致检测结果中各平行样之间的偏差偏大,检测结果准确性偏低。
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外,在不相互矛盾的情况下,本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例,可以理解的是,上述实施例是示例性的,不能理解为对本发明的限制,本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (10)
1.一种混合液,其特征在于,包括:NaCl、吐温-80、司盘-80、单硬脂酸甘油酯、甘油以及水。
2.根据权利要求1所述的混合液,其特征在于,基于1L的所述混合液,所述混合液包括:
1~10g/L的NaCl;
5~15g/L的吐温-80;
2~10g/L的司盘-80;
1~5g/L的单硬脂酸甘油酯;
10~30g/L的甘油;以及
余量的水。
3.根据权利要求1所述的混合液,其特征在于,所述混合液是通过下列方式获得的:
将所述NaCl、吐温-80、司盘-80、单硬脂酸甘油酯、甘油以及50~55℃的部分所述水以300~500r/min的转速搅拌15~30min,并用剩余部分所述水进行定容;以及
将所述定容后的混合液在200~250bar的压力下进行均质,并将所得到的均质产物在121℃下灭菌30min,以便得到所述混合液。
4.权利要求1~3任一项所述混合液在测定油脂中微生物含量中的用途。
5.根据权利要求4所述用途,其特征在于,所述微生物为乳酸菌,优选双歧杆菌。
6.根据权利要求4所述用途,其特征在于,所述油脂为食用油,优选食用植物油。
7.一种测定油脂中微生物含量的方法,其特征在于,包括:
(1)将权利要求1~3任一项所述混合液与所述油脂进行混合,得到待测液;
(2)将所述待测液接种于培养基中,进行培养,并将所述培养后所得到的菌落进行计数;以及
(3)基于所述计数的结果,确定所述油脂中微生物含量,
优选地,所述方法进一步包括:在步骤(2)之前,
利用所述混合液将所述待测液进行稀释,得到稀释液。
8.根据权利要求7所述方法,其特征在于,所述微生物为乳酸菌,优选双歧杆菌,
任选地,所述油脂为食用油,优选食用植物油。
9.根据权利要求7所述方法,其特征在于,所述微生物为双歧杆菌,所述培养基为TPY培养基。
10.根据权利要求7所述方法,其特征在于,所述培养是在43℃下进行12~48h,优选24h。
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN109136324A (zh) * | 2017-06-28 | 2019-01-04 | 西安市宇驰检测技术有限公司 | 肉制品中微生物的检测的方法以及新型混合液 |
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