CN106148327A - 一种石蜡包埋法抽提生物组织样本dna的试剂盒及其提取方法 - Google Patents

一种石蜡包埋法抽提生物组织样本dna的试剂盒及其提取方法 Download PDF

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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor

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Abstract

本发明公开了一种石蜡包埋法抽提生物组织样本DNA的试剂盒，包括脱蜡溶剂A、缓冲液B、蛋白消化液C以及核酸纯化柱子D以及洗脱液E，所述脱蜡溶剂A包含SDS，NP40，NaCL，缓冲液B包含EDTA，NaCL和SDS。本发明石蜡包埋法抽提生物样本DNA的试剂盒提取的DNA的质量完全达到分子病理检测的要求，且抽提得到的DNA含量高。

Description

一种石蜡包埋法抽提生物组织样本DNA的试剂盒及其提取 方法
技术领域
本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种DNA提取方法，尤其是一种石蜡包埋法抽提生物组织样本DNA的试剂盒及其提取方法。
背景技术
从石蜡包埋组织抽提脱氧核糖核酸是临床病理日常工作，它必须要经过脱蜡、裂解组织、消化蛋白和核糖核酸，最后纯化得到脱氧核糖核酸。目前常用的石蜡样本抽提试剂盒采用的是二甲苯脱蜡，蛋白酶消化蛋白、核糖核酸酶消化核糖核酸，然后利用核酸纯化柱子纯化得到脱氧核糖核酸。这种传统抽提方法得率低，抽提出的脱氧核糖核酸达不到分子病理检测的要求。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种快速和高效，且抽提出的石蜡脱氧核糖核酸含量高，达到分子病理检测要求的试剂盒及其利用试剂盒抽提生物组织样本DNA的方法。
为解决上述技术问题，本发明提供一种石蜡包埋法抽提生物组织样本DNA的试剂盒，包括脱蜡溶剂A、缓冲液B、蛋白消化液C以及核酸纯化柱子D以及洗脱液E。
作为优选，所述脱蜡溶剂A包含SDS，NP40，NaCL，缓冲液B包含EDTA，NaCL和SDS。
本发明还提供一种利用试剂盒抽提生物组织样本DNA的方法,包括如下步骤：1)脱蜡：取10-20微米厚度的石蜡切片3片，加入脱蜡溶剂A，置于90℃水浴锅水浴半小时，室温静置半小时，14000转/分离心15分钟，弃上清液，然后加入70％的乙醇，混匀，再次离心，离心速度14000转/分，离心15分钟，弃上清液；2)消化：向步骤1)的样品中加入200μL缓冲液B和10μL蛋白消化液C，漩涡震荡仪混匀，放入65℃水浴锅2小时，14000转/分离心15分钟，弃上清液；3)去除核糖核酸：向步骤2)中的样品加入2μL浓度为10mg/ml的核糖核酸酶，室温静置半小时；4)纯化：向步骤3)中的溶液加入等体积无水乙醇，漩涡震荡仪混匀，加入核酸纯化柱子D中，12000转/分离心1分钟，弃废液，向柱子中加入90％乙醇，12000转/分离心1分钟，弃废液；再向柱子中加入80％乙醇，12000转/分离心1分钟，弃废液；向柱子中加入70％乙醇，12000转/分离心1分钟，弃废液；14000转/分离心2分钟，向柱子中加入50微升洗脱液E，室温静置15分钟，4000转/分离心1分钟；5)浓度测定：利用Nanodrop和Qubit3.0测定洗脱的脱氧核糖核酸的浓度和质量。
本发明石蜡包埋法抽提生物样本DNA的试剂盒提取的DNA的质量完全达到分子病理检测的要求，且抽提得到的DNA含量高。
具体实施方式
实施例1本发明提供一种石蜡包埋法抽提生物组织样本DNA的试剂盒，包括脱蜡溶剂A、缓冲液B、蛋白消化液C以及核酸纯化柱子D以及洗脱液E，所述脱蜡溶剂A包含SDS，NP40，NaCL，缓冲液B包含EDTA，NaCL和SDS。
本发明还提供一种利用试剂盒抽提生物组织样本DNA的方法,具体包括如下步骤：
1)脱蜡：取10-20微米厚度的石蜡切片3片，加入脱蜡溶剂A，置于90℃水浴锅水浴半小时，室温静置半小时，14000转/分离心15分钟，弃上清液，然后加入70％的乙醇，混匀，再次离心，离心速度14000转/分，离心15分钟，弃上清液；
2)消化：
向步骤1)的样品中加入200μL缓冲液B和10μL蛋白消化液C，漩涡震荡仪混匀，放入65℃水浴锅2小时，14000转/分离心15分钟，弃上清液；
3)去除核糖核酸：
向步骤2)中的样品加入2μL浓度为10mg/ml的核糖核酸酶，室温静置半小时；4)纯化：
向步骤3)中的溶液加入等体积无水乙醇，漩涡震荡仪混匀，加入核酸纯化柱子D中，12000转/分离心1分钟，弃废液，向柱子中加入90％乙醇，12000转/分离心1分钟，弃废液；再向柱子中加入80％乙醇，12000转/分离心1分钟，弃废液；向柱子中加入70％乙醇，12000转/分离心1分钟，弃废液；14000转/分离心2分钟，向柱子中加入50微升洗脱液E，室温静置15分钟，4000转/分离心1分钟；
5)浓度测定：
利用Nanodrop和Qubit3.0测定洗脱的脱氧核糖核酸的浓度和质量。
将采用本发明试剂盒以及抽提方法得到的脱氧核糖核酸的浓度和质量与现有市面上的qiagen的抽提试剂盒抽出的石蜡脱氧核糖核酸比较结果如下：qiagen的抽提试剂盒抽出的石蜡脱氧核糖核酸含量在1-20ng/ul左右，使用本发明试剂盒抽提出的石蜡脱氧核糖核酸含量在100-500ng/ul左右，显著高于目前市场上主流产品qiagen的抽提试剂盒，且提取的DNA的质量完全达到分子病理检测的要求。

Claims (3)

1.一种石蜡包埋法抽提生物组织样本DNA的试剂盒，其特征在于，包括脱蜡溶剂A、缓冲液B、蛋白消化液C以及核酸纯化柱子D以及洗脱液E。
2.根据权利要求1所述的一种石蜡包埋法抽提生物组织样本DNA的试剂盒，其特征在于，所述脱蜡溶剂A包含SDS，NP40，NaCL，缓冲液B包含EDTA，NaCL和SDS。
3.一种利用权利要求1-2所述试剂盒抽提生物组织样本DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)脱蜡：取10-20微米厚度的石蜡切片3片，加入脱蜡溶剂A，置于90℃水浴锅水浴半小时，室温静置半小时，14000转/分离心15分钟，弃上清液，然后加入70％的乙醇，混匀，再次离心，离心速度14000转/分，离心15分钟，弃上清液；
2)消化：
向步骤1)的样品中加入200μL缓冲液B和10μL蛋白消化液C，漩涡震荡仪混匀，放入65℃水浴锅2小时，14000转/分离心15分钟，弃上清液；
3)去除核糖核酸：
向步骤2)中的样品加入2μL浓度为10mg/ml的核糖核酸酶，室温静置半小时；4)纯化：
向步骤3)中的溶液加入等体积无水乙醇，漩涡震荡仪混匀，加入核酸纯化柱子D中，12000转/分离心1分钟，弃废液，向柱子中加入90％乙醇，12000转/分离心1分钟，弃废液；再向柱子中加入80％乙醇，12000转/分离心1分钟，弃废液；向柱子中加入70％乙醇，12000转/分离心1分钟，弃废液；14000转/分离心2分钟，向柱子中加入50微升洗脱液E，室温静置15分钟，4000转/分离心1分钟；
5)浓度测定：
利用Nanodrop和Qubit3.0测定洗脱的脱氧核糖核酸的浓度和质量。
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